CN108283262A - 一种黄曲霉毒素的脱毒剂、其制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黄曲霉毒素的脱毒剂、其制备方法及应用，属于黄曲霉毒素脱除技术领域。本发明的黄曲霉毒素脱毒剂，是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按97～99％∶3～1％的质量比制备而成；所述的植物组分为陈皮10～30g、山苍子10～30g、黄芩10～20g、桃金娘6～10g。本发明的黄曲霉毒素脱毒剂原料天然、绿色安全，对黄曲霉毒素的降解作用温和，能够有效的降解黄曲霉毒素，降解率高达95％以上。
Description
技术领域
本发明属于黄曲霉毒素脱除技术领域，具体涉及一种黄曲霉毒素的脱毒剂、其制备方法及应用。
背景技术
黄曲霉毒素是现今发现的毒性和致癌性最强的天然污染物。它不仅对人类和动物的健康造成极大的危害，而且还带来巨大的经济损失。目前，黄曲霉毒素的脱毒方法研究已成为各国科研工作者的一个热点。生物脱毒法较物理、化学等方法具有安全系数高、特异性强、绿色清洁等独特优势，被视为最具发展前景和潜力的脱毒方法。目前的生物脱除方法存在着脱除不彻底；脱除效率受环境影响大；脱除黄曲霉毒素的同时，营养成分含量也受到影响等问题。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明目的是提供一种安全、高效的黄曲霉毒素脱毒剂。
为了达到上述目的，本发明的技术方案为：
一种黄曲霉毒素的脱毒剂，是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按97～99％∶3～1％的质量比制备而成；
所述的植物组分为陈皮10～30g、山苍子10～30g、黄芩10～20g、桃金娘6～10g。
在上述方案的基础上，是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按98％∶2％的质量比制备而成；
所述的植物组分为陈皮20g、山苍子20g、黄芩15g、桃金娘8g。
在上述方案的基础上，是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按97％∶3％的质量比制备而成；
所述的植物组分为陈皮10g、山苍子10g、黄芩10g、桃金娘6g。
在上述方案的基础上，是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按99％∶1％的质量比制备而成；
所述的植物组分为陈皮30g、山苍子30g、黄芩15g、桃金娘10g。
在上述方案的基础上，所述异步发酵为先加枯草芽孢杆菌菌液进行有氧发酵，再加植物乳杆菌菌液进行厌氧发酵。
在上述方案的基础上，所述枯草芽孢杆菌菌液中菌含量≥108cfu/mL；所述植物乳杆菌菌液中菌含量≥108cfu/mL。
在上述方案的基础上，所述的黄曲霉毒素的脱毒剂的制备方法，步骤为：
(1)将陈皮、山苍子、黄芩、桃金娘粉碎至40目，加8倍重量超纯水，搅拌均匀，100℃蒸汽灭菌15min，冷却至室温；
(2)按10％接种量，向冷却后的物料中加入枯草芽孢杆菌菌液，200rpm，33℃，有氧发酵至枯草芽孢杆菌菌数≥108cfu/mL；
(3)向有氧发酵后的物料中加入重量为1.5％的无菌葡萄糖，按10％接种量，加入植物乳杆菌，厌氧发酵至植物乳杆菌菌数≥108cfu/mL；
(4)向上述发酵液中加入重量份数为漆酶，混合均匀即得。
上述方法制备的黄曲霉毒素脱毒剂在黄曲霉毒素脱毒中的应用。
一种黄曲霉毒素脱毒方法，使用上述方法制备的脱毒剂，步骤为：
向待脱毒样品中加入上述方法制备的脱毒剂，混合均匀后于30℃孵育2h，100℃灭酶处理15min。
在上述方案的基础上，所述黄曲霉毒素脱毒剂的添加量为0.5～3mL/kg。
所述漆酶购自夏盛实业集团有限公司；
所述的植物乳杆菌编号BNCC 336469，购自北京北纳创联生物技术研究院；
所述枯草芽孢杆菌编号BNCC 189983，购自北京北纳创联生物技术研究院。
本发明的有益效果
本发明的黄曲霉毒素脱毒剂原料天然、绿色安全，对黄曲霉毒素的降解作用温和，能够有效的降解黄曲霉毒素，降解率高达95％以上。
本发明的植物组分陈皮、山苍子、黄芩、桃金娘含有多种有效活性成分，不仅可以抑制黄曲霉菌的生长还对黄曲霉毒素具有降解作用；枯草芽孢杆菌与植物乳杆菌的异步发酵过程使植物组分中的有效成分充分释放出来，而且，枯草芽孢杆菌与植物乳杆菌代谢产物对黄曲霉毒素也具有降解作用；漆酶本身具有降解黄曲霉毒素的作用，与本发明的植物组分和发酵菌液协同作用，使黄曲霉毒素的充分降解。
附图说明
图1不同黄曲霉毒素脱毒剂对黄曲霉毒素的降解作用；
图2不同量的黄曲霉毒素脱毒剂对黄曲霉毒素的降解作用。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
菌种的活化
将本发明的植物乳杆菌菌种接种于活化培养基进行培养，培养温度为37℃，时间24h；将活化好的菌种接种于发酵罐中，控制温度37℃～43℃，时间24h～36h，制备发酵液。
所述活化培养基为：MRS培养基，成分为(g/L)：蛋白胨10.0、肉膏10.0、酵母浸粉5.0、葡萄糖20.0、磷酸氢二钾2.0、柠檬酸氢二铵2.0、乙酸钠5.0、硫酸镁0.58、硫酸锰0.28、半胱氨酸0.5、吐温801.0，调pH6.2-6.4。
发酵所用培养基为：MRS培养基，成分同上。
发酵完成后，菌液中菌含量≥108cfu/mL。
所述的植物乳杆菌编号BNCC 336469，购自北京北纳创联生物技术研究院。
将枯草芽孢杆菌菌种接种于活化培养基进行活化培养，培养温度为30℃，时间24h；将活化好的菌种接种于发酵罐中，控制温度30℃～35℃，转速80～150rpm，搅拌培养，通无菌风，通气比为0.8～1.2，时间24h～36h。
所述活化培养基和所述发酵所用培养基为：PBY培养基，成分为(g/L)：蛋白胨10.0、牛肉膏5.0、酵母膏5.0、葡萄糖5.0、氯化钠5.0，调pH 7.0-7.2。
发酵所用培养基为：PBY培养基，成分同上。
发酵完成后，菌液中枯草芽孢杆菌的含量≥108cfu/mL。
所述枯草芽孢杆菌编号BNCC189983，购自北京北纳创联生物技术研究院。
实施例2
一种黄曲霉毒素的脱毒剂，是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按97％∶3％的质量比制备而成；
具体制备方法为：
(1)将陈皮10g、山苍子10g、黄芩10g、桃金娘6g，粉碎至40目，加8倍重量超纯水，搅拌均匀，100℃蒸汽灭菌15min，冷却至室温；
(2)按10％接种量，向冷却后的物料中加入枯草芽孢杆菌菌液，200rpm，33℃，有氧发酵至枯草芽孢杆菌菌数≥108cfu/mL；
(3)向有氧发酵后的物料中加入重量为1.5％的无菌葡萄糖，按10％接种量，加入植物乳杆菌，厌氧发酵至植物乳杆菌菌数≥108cfu/mL；
(4)向上述发酵液中加入重量份数为3％漆酶，混合均匀即得。
实施例3
一种黄曲霉毒素的脱毒剂，是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按98％∶2％的质量比制备而成；
具体制备方法为：
(1)将陈皮20g、山苍子20g、黄芩15g、桃金娘8g，粉碎至40目，加8倍重量超纯水，搅拌均匀，100℃蒸汽灭菌15min，冷却至室温；
(2)按10％接种量，向冷却后的物料中加入枯草芽孢杆菌菌液，200rpm，33℃，有氧发酵至枯草芽孢杆菌菌数≥108cfu/mL；
(3)向有氧发酵后的物料中加入重量为1.5％的无菌葡萄糖，按10％接种量，加入植物乳杆菌，厌氧发酵至植物乳杆菌菌数≥108cfu/mL；
(4)向上述发酵液中加入重量份数为2％漆酶，混合均匀即得。
实施例4
一种黄曲霉毒素的脱毒剂，是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按99％∶1％的质量比制备而成；
具体制备方法为：
(1)将陈皮30g、山苍子30g、黄芩20g、桃金娘10g，粉碎至40目，加8倍重量超纯水，搅拌均匀，100℃蒸汽灭菌15min，冷却至室温；
(2)按10％接种量，向冷却后的物料中加入枯草芽孢杆菌菌液，200rpm，33℃，有氧发酵至枯草芽孢杆菌菌数≥108cfu/mL；
(3)向有氧发酵后的物料中加入重量为1.5％的无菌葡萄糖，按10％接种量，加入植物乳杆菌，厌氧发酵至植物乳杆菌菌数≥108cfu/mL；
(4)向上述发酵液中加入重量份数为1％漆酶，混合均匀即得。
一、效果试验
以下以花生粕为例说明本发明的黄曲霉毒素脱毒剂对黄曲霉毒素去除效果。
1.1试验分组
1.1.1实施例2的黄曲霉毒素脱毒剂；
1.1.2实施例3的黄曲霉毒素脱毒剂；
1.1.3实施例4的黄曲霉毒素脱毒剂；
1.1.4实施例3只进行枯草芽孢杆菌有氧发酵的黄曲霉毒素脱毒剂；
1.1.5实施例3采用水煎方法提取植物有效成分的黄曲霉毒素脱毒剂(所述水煎方式为：加8重量倍的超纯水，浸泡2h，小火煎煮2h，煎煮完成后，冷却过滤即得)；
1.1.6实施例3不含有陈皮、山苍子制备的黄曲霉毒素脱毒剂；
1.1.7漆酶对照组。
1.2试验设计
1.2.1不同黄曲霉毒素脱毒剂对黄曲霉毒素的降解作用
取7kg的未被黄曲霉污染的花生粕(未检测出黄曲霉毒素)，平均分为7份，每份添加黄曲霉毒素100μg，混合均匀；其中第1～3份花生粕分别添加本发明实施例2～4的黄曲霉毒素脱毒剂，分别记为实施例2～4组,添加量为2mL；第4份花生粕添加1.1.4的脱毒剂，第5份花生粕添加1.1.5的脱毒剂，第6份花生粕添加1.1.6的脱毒剂，分别记为对照组1、对照组2、对照组3，添加量为2mL；第7份花生粕仅添加漆酶，添加量为0.04g，记为漆酶组；将上述脱毒剂采用喷雾喷洒方式与花生粕混合均匀；混合均匀后于30℃2h后，100℃灭酶处理15min；处理后采用高效液相色谱检测法测定黄曲霉毒素含量如图1所示。
1.2.2不同量的黄曲霉毒素脱毒剂对黄曲霉毒素的降解作用
取6kg的未被黄曲霉污染的花生粕(未检测出黄曲霉毒素)，平均分为6份，每份添加黄曲霉毒素100μg，混合均匀；向6份花生粕中分别添加实施例3的黄曲霉毒素脱毒剂0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL、3.0mL，采用喷雾喷洒方式与花生粕混合均匀；混合均匀后于30℃2h后，100℃灭酶处理15min；处理后采用高效液相色谱检测法测定黄曲霉毒素含量如图2所示。
1.3试验结果
1.3.1不同黄曲霉毒素脱毒剂对黄曲霉毒素的降解作用
由图1可知，对照组1、2、3和漆酶组的黄曲霉毒素含量显著高于本发明实施例2～4组，这说明本发明实施例2～4的脱毒剂对黄曲霉毒素的降解率效果显著，其中实施例2的脱毒剂对黄曲霉毒素的降解率为91.3％，实施例3的脱毒剂对黄曲霉毒素的降解率为95.1％，实施例4的脱毒剂对黄曲霉毒素的降解率为93.5％，由此可见，本发明实施例3的脱毒剂效果最佳。
1.3.2不同量的黄曲霉毒素脱毒剂对黄曲霉毒素的降解作用
由图2可知，黄曲霉毒素的降解率随着黄曲霉毒素脱毒剂的添加量呈先上升后平稳的趋势，其中，在0.5～1.5mL时呈快速上升趋势，2～3mL时降解率趋于平稳，在添加量为2mL时，降解率为95％。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (10)
1.一种黄曲霉毒素的脱毒剂，其特征在于：是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按97～99％∶3～1％的质量比制备而成；
所述的植物组分为陈皮10～30g、山苍子10～30g、黄芩10～20g、桃金娘6～10g。
2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素的脱毒剂，其特征在于：是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按98％∶2％的质量比制备而成；
所述的植物组分为陈皮20g、山苍子20g、黄芩15g、桃金娘8g。
3.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素的脱毒剂，其特征在于：是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按97％∶3％的质量比制备而成；
所述的植物组分为陈皮10g、山苍子10g、黄芩10g、桃金娘6g。
4.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素的脱毒剂，其特征在于：是由经异步发酵后的植物组分与漆酶按99％∶1％的质量比制备而成；
所述的植物组分为陈皮30g、山苍子30g、黄芩15g、桃金娘10g。
5.根据权利要求1～4任一项所述的黄曲霉毒素的脱毒剂，其特征在于：
所述异步发酵为先加枯草芽孢杆菌菌液进行有氧发酵，再加植物乳杆菌菌液进行厌氧发酵。
6.根据权利要求5所述的黄曲霉毒素的脱毒剂，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌菌液中菌含量≥108CFU/mL；所述植物乳杆菌菌液中菌含量≥108CFU/mL。
7.根据权利要求1～6任一项所述的黄曲霉毒素的脱毒剂的制备方法，其特征在于：步骤为：
(1)将陈皮、山苍子、黄芩、桃金娘粉碎至40目，加8倍重量超纯水，搅拌均匀，100℃蒸汽灭菌15min，冷却至室温；
(2)按10％接种量，向冷却后的物料中加入枯草芽孢杆菌菌液，200rpm，33℃，有氧发酵至枯草芽孢杆菌菌数≥108/mL；
(3)向有氧发酵后的物料中加入重量为1.5％的无菌葡萄糖，按10％接种量，加入植物乳杆菌，厌氧发酵至植物乳杆菌菌数≥108/mL；
(4)向上述发酵液中加入重量份数为漆酶，混合均匀即得。
8.权利要求7所述方法制备的黄曲霉毒素脱毒剂在黄曲霉毒素脱毒中的应用。
9.一种黄曲霉毒素脱毒方法，其特征在于：使用权利要求7方法制备的脱毒剂，步骤为：
向待脱毒样品中加入权利要求7方法制备的脱毒剂，混合均匀后于30℃孵育2h，100℃灭酶处理15min。
10.根据权利要求9所述黄曲霉毒素脱毒方法，其特征在于：所述黄曲霉毒素脱毒剂的添加量为0.5～3mL/kg。
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