CN108587967A - 耐高温耐盐的餐厨垃圾腐熟复合菌剂的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法,将链霉菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌及酿酒酵母菌分别进行种子培养,从而分别对应的得到链霉菌菌丝球悬液、枯草芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液和酿酒酵母菌菌液;将链霉菌菌丝球悬液,接种至固体发酵料中培养,获得固体腐熟菌;将其余3种菌液混合,获得复合菌液;将复合菌液与固体腐熟菌按9~11ml/100g的比例搅拌混匀、再进行低温烘干,最后混入酶制剂,获得腐熟复合菌剂。该复合菌剂能用于腐熟餐厨垃圾。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,具体涉及一种耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法及其应用。
背景技术
有机物料腐熟菌剂,特别是用于餐厨垃圾处理的菌剂,需要克服以下几个难题:
1、复合菌剂各菌种间要形成稳定的微生态体系、且能代谢各种底物,功能全面,因为餐厨垃圾种类复杂,包括有糖类、蛋白质、油脂、纤维素等,如果菌剂功能单一往往适用的范围窄,处理效果不理想。
2、复合菌剂必须能够耐受高盐分,因为餐厨垃圾在处理机舱内腐熟变干的过程中盐分会积累,通常物料含盐量会达到3%~5%,如果无法耐受高盐分菌剂则无法生存和繁殖,处理效果不理想。
3、复合菌剂必须能够耐受高温,因为餐厨垃圾在处理机舱内环境温度会达到60℃~70℃,这样才能杀死有害病菌和虫卵,如果无法耐受高温菌剂则无法生存和繁殖,处理效果不理想。
因此,用于餐厨垃圾物料腐熟的复合菌剂必须同时克服以上三大难题才能达到理想的腐熟效果。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种耐高温、耐盐分、功能全面、降解效率高的餐厨垃圾腐熟复合菌剂的制备方法及其应用。
为解决上述技术问题,本发明提供一种耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法:
选用以下4种菌:链霉菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌及酿酒酵母菌;
所述链霉菌保藏号为CGMCC No.15321、枯草芽孢杆菌保藏号为CGMCC No.15322、解淀粉芽孢杆菌保藏号为CGMCC No.15323;
依次进行以下步骤:
①、种子菌液培养:
将上述4种菌分别进行种子培养(分别活化后进行种子培养),从而分别对应的得链霉菌菌丝球悬液、枯草芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液和酿酒酵母菌菌液;
②、固体腐熟菌制备:
将链霉菌菌丝球悬液,按1ml/9~11g(较佳为1ml/10g)的接种量接种至固体发酵料中,于35~40℃(较佳为37℃)下培养7~10(较佳为7)天,获得固体腐熟菌;
③、复合菌液制备:
将步骤①所得的枯草芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液及酿酒酵母菌菌液按体积比为3~6:3~6:1~2混合,获得复合菌液;
④、酶制剂制备:酶制剂包含纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶;
⑤、腐熟复合菌剂制备:
将步骤③所得复合菌液与步骤②所得固体腐熟菌按9~11ml/100g的比例搅拌混匀、再进行低温(≤35℃)烘干(烘干至含水率≤35%),最后按重量比0.1%~0.3%混入酶制剂,获得腐熟复合菌剂。
作为耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法的改进:
所链霉菌菌丝球悬液的制备方法为:
将活化好的链霉菌接种至高氏1号液体培养基中,于35~40℃、100~200rpm培养2~5天,得到链霉菌一级种子液;再将链霉菌一级种子液按照4.5~5.5%的体积接种量转接至高氏1号液体培养基中,于50~55℃下、100~200rpm培养2~5天,得到链霉菌菌丝球悬液。
注:高氏1号液体培养基配方为:可溶性淀粉20g,KNO3 1g,KH2PO4 0.5g,MgSO40.5g,NaCl 0.5g,FeSO4 0.01g,加水1000mL。
作为耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法的进一步改进:
所述枯草芽孢杆菌的制备方法为:
将活化好的枯草芽孢杆菌接种至改良NA液体培养基中,于35~40℃、100~200rpm培养24~48小时,得到枯草芽孢杆菌一级种子液,再将枯草芽孢杆菌一级种子液按照4.5~5.5%的体积接种量转接至改良NA液体培养基中,于50~55℃、100~200rpm培养24~48小时,得到枯草芽孢杆菌菌液。
注:改良NA培养基配方为:酵母膏3g,蛋白胨5g,葡萄糖2.5g,加水1000mL。
上述菌株的活化,均属于常规技术。
作为耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法的进一步改进:
所述解淀粉芽孢杆菌菌液制备方法为:
将活化好的解淀粉芽孢杆菌接种至LB液体培养基中,于35~40℃、100~200rpm培养24~48小时,得到解淀粉芽孢杆菌一级种子液;再将解淀粉芽孢杆菌一级种子液按照4.5~5.5%的体积接种量转接至LB液体培养基中,于50~55℃、100~200rpm培养24~48小时,得到解淀粉芽孢杆菌菌液。
注:LB培养基配方为:胰蛋白胨10g,酵母浸粉5g,NaCl 10g,加水1000mL。
作为耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法的进一步改进:
所述酿酒酵母菌菌液制备方法为:
将活化好的酿酒酵母菌接种至YPD液体培养基中,于35~40℃、100~200rpm培养12~36小时,得到酿酒酵母菌一级种子液,再将酿酒酵母菌一级种子液按照4.5~5.5%的体积接种量转接至YPD液体培养基中,于35~40℃、100~200rpm培养12~36小时,得到酿酒酵母菌菌液。
注:YPD液体培养基配方为:蛋白胨20g,酵母浸粉10g,葡萄糖20g,加水1000mL。
作为耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法的进一步改进:
所述步骤②中固体发酵料的制备方法为:
先将燕麦:米仁糠:麸皮=3~6:1~3:1~4的重量比混合,然后调节所得混合物的水分含量为28~32%(重量%),灭菌,得固体发酵料;
培养期的第4天起至培养期结束,加水搅拌从而控制反应物料的水分含量为28~32%(重量%)。
作为耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法的进一步改进:
所述步骤④中将酶活力为10000±2000U/g的纤维素酶、10000±2000U/g蛋白酶、18000±3000U/g淀粉酶和10000±2000U/g脂肪酶粉剂按重量比1~4:1~4:1~4:1~2混合均匀,获得酶制剂。
本发明还提供一种利用上述制备方法制备获得的耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂:
所述耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂中链霉菌活菌数达到2.6×108CFU/g~2.5×109CFU/g,枯草芽孢杆菌活菌数达到3.0×108CFU/g~6.3×108CFU/g,解淀粉芽孢杆菌活菌数达到2.2×108CFU/g~4.5×108CFU/g,酿酒酵母活菌数达到2.1×108CFU/g~4.6×108CFU/g。
本发明还提供一种利用上述制备方法制备获得的耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的应用:用于腐熟餐厨垃圾。
注:本发明所涉及的4种菌株的具体保藏信息如下:
链霉菌,保藏名称为:链霉菌Streptomyces sp.,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏号:CGMCC No.15321,保藏日期:2018年01月29日。
枯草芽孢杆菌,保藏名称为:枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏号:CGMCC No.15322,保藏日期:2018年01月29日。
解淀粉芽孢杆菌,保藏名称为:解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏号:CGMCC No.15323,保藏日期:2018年01月29日。
酿酒酵母为常规菌种,例如可购置于中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)编号为1044的酿酒酵母。
与现有技术相比,本发明的技术优势在于:
1、本发明所制备的复合菌剂能够耐受餐厨垃圾预处理过程中的高环境温度(50~70℃),并保持较高活性,缩短物料腐熟过程;
2、本发明所制备的复合菌剂在餐厨垃圾腐熟效果显著,粗纤维降解率均高达85%以上、蛋白降解率均高达85%以上、淀粉降解率均高达80%以上;
3、本发明所制备的复合菌剂耐高温、耐盐分、功能全面、降解效率高,腐熟效果好,能够实现物料无害化、资源化、减量化。
4、本发明所制备的复合菌剂中链霉菌、枯草芽孢杆菌降解纤维素、蛋白能力强,解淀粉芽孢杆菌分解蛋白、淀粉能力强,酿酒酵母代谢糖能力强,因此该复合菌剂对物料的选择范围广,适用能力强。
5、本发明所制备的复合菌剂除活菌外还添加纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等工业酶,更有助于有机物料的分解。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1、耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂,由固体腐熟菌、复合菌液和酶制剂组成,固体腐熟菌由链霉菌(Streptomyces sp.)和固体发酵料组成,固体发酵料为燕麦、米仁糠、麸皮的混合物;复合菌液为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的混合液;酶制剂为纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶及脂肪酶的混合物(上述酶均耐高温)。
本发明耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂(下文中简称为复合菌剂)的制备方法具体包括以下步骤:
(1)、固体腐熟菌制备:
包括以下步骤:
(1.1)、链霉菌菌丝球悬液制备方法:将活化好的链霉菌平板菌种挑取一环接种于(100ml)的高氏1号液体培养基中,于37℃下、150rpm培养3天,得到链霉菌一级种子液,再将链霉菌一级种子液转接至(2000ml)的高氏1号液体培养基中,于50℃下、150rpm培养3天,得到链霉菌菌丝球悬液;
高氏1号液体培养基配方为:可溶性淀粉20g,KNO3 1g,KH2PO4 0.5g,MgSO4 0.5g,NaCl 0.5g,FeSO4 0.01g,加水1000mL。
(1.2)、固体发酵料制备方法:将燕麦、米仁糠和麸皮按照5:3:2比例(重量比)混合均匀,调节水分含量为30%,于121℃蒸汽灭菌1小时,灭菌后搅拌翻动一次,再重新灭菌一次,冷却至室温(25℃)后待用。
(1.3)、固体腐熟剂制备方法:将上述步骤(1.1)所得的链霉菌菌丝球悬液,按体积重量比(v/w)为1ml:10g的接种量接种至上述步骤(1.2)所得的固体发酵料中,于37℃培养7天,培养期间前3天不作搅动,后4天每天搅动并加水一次,控制发酵物料水分含量在30%,此时物料表面长满白色孢子且有浓重的土腥味,即制得固体腐熟剂。
(2)、复合菌液制备:
包括以下步骤:
(2.1)、枯草芽孢杆菌菌液制备方法:将活化好的枯草芽孢杆菌平板菌种挑取一环接种于(100ml)改良NA液体培养基中,于37℃下、180rpm培养36小时,得到枯草芽孢杆菌一级种子液,再将枯草芽孢杆菌一级种子液转接至(2000ml)的改良NA液体培养基中,于50℃下、180rpm培养36小时,得到枯草芽孢杆菌菌液,待用。
改良NA培养基配方为:酵母膏3g,蛋白胨5g,葡萄糖2.5g,加水1000mL。
(2.2)、解淀粉芽孢杆菌菌液制备方法:将活化好的解淀粉芽孢杆菌平板菌种挑取一环接种于(100ml)LB液体培养基中,于37℃下、180rpm培养36小时,得到解淀粉芽孢杆菌一级种子液,再将解淀粉芽孢杆菌一级种子液转接至(2000ml)LB液体培养基中,于50℃下、180rpm培养36小时,得到解淀粉芽孢杆菌菌液,待用。
LB培养基配方为:胰蛋白胨10g,酵母浸粉5g,NaCl 10g,加水1000mL。
(2.3)、酿酒酵母菌菌液制备方法:将活化好的酿酒酵母菌平板菌种挑取一环接种于(100ml)YPD液体培养基中,于37℃下、180rpm培养24小时,得到酿酒酵母菌一级种子液,再将酵母菌一级种子液转接至(2000ml)YPD液体培养基中,于37℃下、180rpm培养24小时,得到酿酒酵母菌菌液,待用。
YPD液体培养基配方为:蛋白胨20g,酵母浸粉10g,葡萄糖20g,加水1000mL。
(2.4)、复合菌液制备方法:将步骤(2.1)所得的枯草芽孢杆菌菌液、步骤(2.2)所得的解淀粉芽孢杆菌菌液及步骤(2.3)所得的酿酒酵母菌菌液按体积比为6:3:1混合,制得复合菌液。
(3)、酶制剂制备:将纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶粉剂按重量比4:2:2:2混合。
上述纤维素酶粉剂例如可购自宁夏盛夏实业集团有限公司,酶活力为10000U/g;
上述蛋白酶粉剂例如可购自宁夏盛夏实业集团有限公司,酶活力为10000U/g;
上述粉淀粉酶剂例如可购自宁夏盛夏实业集团有限公司,酶活力为18000U/g;
上述脂肪酶粉剂例如可购自宁夏盛夏实业集团有限公司,酶活力为10000U/g。
(4)、腐熟复合菌剂制备:将步骤(2.4)所得的复合菌液按10ml/100g(即,10%v/w)比例与步骤(1.3)所得的固体腐熟菌搅拌混匀,于35℃下烘干至水分含量低于35%,再按重量比混入0.2%的酶制剂(即,酶制剂占烘干物重量的0.2%),即得餐厨垃圾腐熟复合菌剂(简称腐熟复合菌剂)。
餐厨垃圾腐熟复合菌剂,链霉菌活菌数达到2.5×109CFU/g,枯草芽孢杆菌活菌数达到6.3×108CFU/g,解淀粉芽孢杆菌活菌数达到2.2×108CFU/g,酿酒酵母活菌数达到2.2×108CFU/g。
实施例2、将实施例1步骤(1.2)燕麦、米仁糠和麸皮按照5:3:2比例混合均匀更改为按体积比3:1:4混合;将步骤(2.4)中枯草芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液及酿酒酵母菌菌液按体积比为6:3:1混合更改为按体积比3:6:1混合;并将步骤(3)中纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶粉剂混合比例为4:2:2:2更改为1:4:4:1,其余等同于实施例1。
实施例3、将实施例1步骤(1.2)燕麦、米仁糠和麸皮按照5:3:2比例混合均匀更改为按体积比4:3:4混合;将步骤(2.4)中枯草芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液及酿酒酵母菌菌液按体积比为6:3:1混合更改为按体积比4:4:2混合;并将步骤(3)中纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶粉剂混合比例为4:2:2:2更改为4:1:1:2,其余等同于实施例1。
对比例1-1、将实施例1步骤(2.4)中枯草芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液及酿酒酵母菌菌液按体积比为6:3:1混合更改为按体积比2:6:2混合;其余等同于实施例1。
对比例1-2、将实施例1步骤(2.4)中枯草芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液及酿酒酵母菌菌液按体积比为6:3:1混合更改为按体积比6:2:2混合;其余等同于实施例1。
对比例1-3、将实施例1步骤(2.4)中枯草芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液及酿酒酵母菌菌液按体积比为6:3:1混合更改为按体积比2:3:5混合;其余等同于实施例1。
对比例1-4、将实施例1步骤(2.4)中枯草芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液及酿酒酵母菌菌液按体积比为6:3:1混合更改为按体积比2:4:4混合;其余等同于实施例1。
对比例2-1、将实施例1中“链霉菌(CGMCC No.15321)”分别改成“链霉菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏号为10513)”、“链霉菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏号为11010)”、“链霉菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏号为11021)”;其余等同于实施例1。
对比例2-2、将实施例1中“枯草芽孢杆菌(CGMCC No.15322)”分别改成“枯草芽孢杆菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏号为21312)”、“枯草芽孢杆菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏号为21367)”、“枯草芽孢杆菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏号为10732)”;其余等同于实施例1。
对比例2-3、将实施例1中“解淀粉芽孢杆菌(CGMCC No.1533)”分别改成“解淀粉芽孢杆菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏号为10025)”、“解淀粉芽孢杆菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏号为20178)”、“解淀粉芽孢杆菌(中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏号为20019)”;其余等同于实施例1。
实验一:
取实施例1制得的餐厨垃圾腐熟复合菌剂,以重量比为3‰接种量接种至以菜叶为主料的餐厨垃圾中,观察菌剂在实际应用中的处理效果。
供试餐厨垃圾为乡村厨余垃圾及菜叶子的混合物(以纤维素、蛋白为主,淀粉类为辅),重量为250公斤,供试餐厨垃圾处理设备由浙江再生资源集团有限公司提供,机器型号为ZJLM-1000A,处理工艺参数设置:机器加热温度50℃(舱内环境温度37℃),维持12小时后升温,设定机器加热温度70℃(舱内环境温度55℃),每搅拌2分钟停5分钟、循环,48小时后出料再进入车间后熟。待预处理完毕出料后(即,48小时后出料)观察供试餐厨垃圾颜色、测定粗纤维降解率、总活菌数,具体数据如表1所示。
将实施例2以及上述所有对比例所得的餐厨垃圾腐熟复合菌分别按照实验一的步骤进行实验,并观察记录供试餐厨垃圾颜色、测定粗纤维降解率和总活菌数,具体数据如表1所示。
表1.餐厨垃圾处理后各项参数
注:空白对照组为上述供试餐厨垃圾不添加餐厨垃圾腐熟复合菌剂,直接按照实验一的步骤进行实验。
由表1可知,实施例1~3粗纤维的降解率均高于85%,实施例3粗纤维降解效果远高于其它对比例,且实施例1~3活菌数也要高于上述所有对比例。本发明中菌剂纤维素分解能力优于其它相似菌株,且菌种能够在50~70℃的温度(即,高温)下于含盐分的厨余垃圾(高盐环境)中存活繁殖。
实验二:
取实施例1中的制得的餐厨垃圾腐熟复合菌剂,以重量比为3‰接种至以肉食、米饭及包子为主料的餐厨垃圾中,观察菌剂在实际应用中的处理效果。
供试餐厨垃圾为某高中食堂早餐和午餐餐后垃圾的混合物(以蛋白、淀粉为主,纤维素为辅),重量为1000公斤,供试餐厨垃圾处理设备由浙江延杭智能科技有限公司提供,机器型号为YHZN-B3000,处理工艺参数设置:机器前12h加热温度65℃,后12h加热温度55℃。待24h处理完毕出料后观察供试餐厨垃圾颜色、活菌数及蛋白降解率、淀粉降解率,具体数据如表2所示。
将实施例1以及上述所有对比例所得的餐厨垃圾腐熟复合菌分别按照实验二的步骤进行实验,测定餐厨垃圾蛋白降解率、淀粉降解率及总活菌数,具体数据如表2所示;
表2.餐厨垃圾腐熟后各项参数
注:空白对照组为上述供试餐厨垃圾不添加餐厨垃圾腐熟复合菌剂,直接按照实验2的步骤进行实验。为了简化工作量,上述对比例2-1~对比例2-3的活菌数未作检测。
由表2可知,实施例1~3蛋白降解率(>85%)、淀粉降解率(>85%)和活菌数均高于其它对比例;本发明中菌剂分解蛋白、淀粉能力优于其它相似菌株,且菌种能够在高温高盐环境中存活繁殖。
对比例3-1、取消将实施例3中酶制剂的使用;其余等同于实施例3。
即,将步骤③所得复合菌液按10%(v/w)比例与步骤②所得固体腐熟菌搅拌混匀、再进行低温(35℃)烘干至水分含量低于35%,所得混合物按照上述实验一和实验二分别进行实验,实验数据如表3所示。
对比例3-2、将实施例3中酶制剂的添加量由重量比“0.2%”更改为“0.4%”;其余等同于实施例3。
对比例3-3、将实施例3酶制剂制备中的纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶粉剂的重量比更改为5:4:3:3,其余均等同于实施例3。
对比例3-4、将实施例3酶制剂制备中纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶粉剂的重量比更改为3:5:5:4,其余均等同于实施例3。
对比例3-5、在酶制剂中增加果胶酶的使用,且纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和果胶酶的重量比为6:10:10:8:7,其余均等同于实施例3。
所得腐熟复合菌剂按照上述实验一和实验二分别进行实验,实验数据如表3所示。
表3
由表3可知,实施例3纤维素、蛋白和淀粉的降解率均明显高于其它对比例。
最后,还需要注意的是,以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然,本发明不限于以上实施例,还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形,均应认为是本发明的保护范围。
Claims (9)
1.耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法,其特征在于:
选用以下4种菌:链霉菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌及酿酒酵母菌;
所述链霉菌保藏号为CGMCC No.15321、枯草芽孢杆菌保藏号为CGMCC No.15322、解淀粉芽孢杆菌保藏号为CGMCC No.15323;
依次进行以下步骤:
①、种子菌液培养:
将上述4种菌分别进行种子培养,从而分别对应的得到链霉菌菌丝球悬液、枯草芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液和酿酒酵母菌菌液;
②、固体腐熟菌制备:
将链霉菌菌丝球悬液,按1ml/9~11g的接种量接种至固体发酵料中,于35~40℃下培养7~10天,获得固体腐熟菌;
③、复合菌液制备:
将步骤①所得的枯草芽孢杆菌菌液、解淀粉芽孢杆菌菌液及酿酒酵母菌菌液按体积比为3~6:3~6:1~2混合,获得复合菌液;
④、酶制剂制备:酶制剂包含纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶;
⑤、腐熟复合菌剂制备:
将步骤③所得复合菌液与步骤②所得固体腐熟菌按9~11ml/100g的比例搅拌混匀、再进行低温烘干,最后按重量比0.1%~0.3%混入酶制剂,获得腐熟复合菌剂。
2.根据权利要求1所述的耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法,其特征在于:
所链霉菌菌丝球悬液的制备方法为:
将链霉菌接种至高氏1号液体培养基中,于35~40℃、100~200rpm培养2~5天,得到链霉菌一级种子液;再将链霉菌一级种子液按照4.5~5.5%的体积接种量转接至高氏1号液体培养基中,于50~55℃下、100~200rpm培养2~5天,得到链霉菌菌丝球悬液。
3.根据权利要求2所述的耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法,其特征在于:
所述枯草芽孢杆菌的制备方法为:
将枯草芽孢杆菌接种至改良NA液体培养基中,于35~40℃、100~200rpm培养24~48小时,得到枯草芽孢杆菌一级种子液,再将枯草芽孢杆菌一级种子液按照4.5~5.5%的体积接种量转接至改良NA液体培养基中,于50~55℃、100~200rpm培养24~48小时,得到枯草芽孢杆菌菌液。
4.根据权利要求3所述的耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法,其特征在于:
所述解淀粉芽孢杆菌菌液制备方法为:
将解淀粉芽孢杆菌接种至LB液体培养基中,于35~40℃、100~200rpm培养24~48小时,得到解淀粉芽孢杆菌一级种子液;再将解淀粉芽孢杆菌一级种子液按照4.5~5.5%的体积接种量转接至LB液体培养基中,于50~55℃、100~200rpm培养24~48小时,得到解淀粉芽孢杆菌菌液。
5.根据权利要求4所述的耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法,其特征在于:
所述酿酒酵母菌菌液制备方法为:
将酿酒酵母菌接种至YPD液体培养基中,于35~40℃、100~200rpm培养12~36小时,得到酿酒酵母菌一级种子液,再将酿酒酵母菌一级种子液按照4.5~5.5%的体积接种量转接至YPD液体培养基中,于35~40℃、100~200rpm培养12~36小时,得到酿酒酵母菌菌液。
6.根据权利要求1~5任一所述的耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法,其特征在于:
所述步骤②中固体发酵料的制备方法为:先将燕麦:米仁糠:麸皮=3~6:1~3:1~4的重量比混合,然后调节所得混合物的水分含量为28~32%,灭菌,得固体发酵料;
培养期的第4天起至培养期结束,加水搅拌从而控制反应物料的水分含量为28~32%。
7.根据权利要求6所述的耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的制备方法,其特征在于:
所述步骤④中将酶活力为10000±2000U/g的纤维素酶、10000±2000U/g蛋白酶、18000±3000U/g淀粉酶和10000±2000U/g脂肪酶粉剂按重量比1~4:1~4:1~4:1~2混合均匀,获得酶制剂。
8.利用权利要求1~7任一所述的方法制备获得的耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂,其特征在于:
所述耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂中链霉菌活菌数为2.6×108CFU/g~2.5×109CFU/g,枯草芽孢杆菌活菌数为3.0×108CFU/g~6.3×108CFU/g,解淀粉芽孢杆菌活菌数为2.2×108CFU/g~4.5×108CFU/g,酿酒酵母活菌数为2.1×108CFU/g~4.6×108CFU/g。
9.如权利要求1~8任一所述的耐高温耐盐的餐厨腐熟复合菌剂的应用,其特征在于:用于腐熟餐厨垃圾。
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