CN103146617A - 一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用 - Google Patents
一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103146617A CN103146617A CN201310086488XA CN201310086488A CN103146617A CN 103146617 A CN103146617 A CN 103146617A CN 201310086488X A CN201310086488X A CN 201310086488XA CN 201310086488 A CN201310086488 A CN 201310086488A CN 103146617 A CN103146617 A CN 103146617A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus subtilis
- subtilis
- juwei001
- soil
- follows
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 title claims abstract description 24
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 title claims abstract description 20
- 238000012136 culture method Methods 0.000 title abstract 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 18
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 17
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 13
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 13
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims description 12
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 8
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 claims description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 claims description 6
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 claims description 6
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 claims description 6
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 6
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 5
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 3
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 3
- 239000013530 defoamer Substances 0.000 claims description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000003895 organic fertilizer Substances 0.000 claims description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 abstract description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002786 root growth Effects 0.000 abstract description 2
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 abstract 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 abstract 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 abstract 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 abstract 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 abstract 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 241000726221 Gemma Species 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 4
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- WFJIVOKAWHGMBH-UHFFFAOYSA-N 4-hexylbenzene-1,3-diol Chemical compound CCCCCCC1=CC=C(O)C=C1O WFJIVOKAWHGMBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-mannose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-LECHCGJUSA-N alpha-D-xylose Chemical compound O[C@@H]1CO[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-LECHCGJUSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-QMKXCQHVSA-N alpha-L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1CO[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-QMKXCQHVSA-N 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000004016 soil organic matter Substances 0.000 description 2
- 238000009633 stab culture Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960003487 xylose Drugs 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 244000241235 Citrullus lanatus Species 0.000 description 1
- 235000012828 Citrullus lanatus var citroides Nutrition 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 241000223224 Fusarium oxysporum f. cucumerinum Species 0.000 description 1
- 241000508192 Fusarium oxysporum f. sp. niveum Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 1
- 241000082085 Verticillium <Phyllachorales> Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 229940084434 fungoid Drugs 0.000 description 1
- 150000002475 indoles Chemical class 0.000 description 1
- 108010090785 inulinase Proteins 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JUWEI001已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC NO.7034，保藏时间为2012年12月24日。本发明还涉及该枯草芽孢杆菌的培养方法与应用。本发明筛选的枯草芽孢杆菌JUWEI001抗逆性强，在生长过程中可产生丰富的具有高活力和植物病害防治功能的生理活性物质，具有促进土壤有机质分解，提高土壤控肥能力和土壤酶活性，改善土壤中微生物菌群结构，促进植物根系生长，抑制有害真菌、细菌、病毒和菌原体等作用。
Description
技术领域
本发明涉及一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用，属于微生物技术领域。
背景技术
枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种，单个细胞，0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖。
目前对枯草芽孢杆菌的研究报道非常多。如中国专利文献CN1554744A(申请号200310104195.6)公开了一种枯草芽孢杆菌菌株,将其命名为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)B9601-Y2,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日:2003年6月18日，保藏号:CGMCC No.0954。该枯草芽孢杆菌B9601-Y2,可用于防治植物不同类型病害及食用菌污染,并能有效地促进植物生长和生根，对许多土传植物病原物具有较好的控制作用、兼顾月季切花保鲜作用,能耐贮藏、抗逆性好,重新施入环境中也不会导致环境污染。
中国专利文献CN102517235A（申请号201110443948.0）公开了枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)CH-001，已于2011年4月8日保藏于中国典型培养物保藏中心。保藏编号为：CCTCCNO：M2011111。该菌株具有广谱降解角蛋白的特性，产酶活性高，稳定性好。不仅能产生高活性角蛋白酶，同时可降解胶原蛋白，对金黄色葡萄球菌等致病菌有拮抗作用，具有益生菌特性，适用于动物蛋白饲料添加剂、角蛋白酶发酵生产等。
中国专利文献CN102515891A（申请号201210003711.5）公开了一种微生物肥料，包含下列比例的微生物发酵液：光合细菌、乳酸菌、放线菌、康宁木霉菌、枯草芽孢杆菌发酵液体积比为1∶0.8～1∶1.2～1.4：0.6～0.8:1～1.2。该发明制备的肥料，可以提高肥料的利用效率，并且还能够起到防治植物枯死、病害的作用。
因此研究枯草芽孢杆菌新菌株对于开发新的微生物肥料具有重要意义。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JUWEI001及培养方法与应用。
本发明技术方案如下：
一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）JUWEI001已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC NO.7034，保藏时间为2012年12月24日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）JUWEI001为革兰氏阳性菌，细胞杆状，0.8～1.0×1.2～1.8μm，30～35℃培养24～48h可形成大量芽孢，无伴胞晶体，芽孢大小为0.7～0.9×1.0～1.5μm，不膨大，长圆形或圆柱形；在营养琼脂上30～35℃培养1～3d可大量形成菌落，呈污白色，粗糙有皱褶，不透明，不闪光，蔓延，边缘不规则；在肉汤培养基中30～35℃培养24～48h，可在液面形成菌膜，液体内部浑浊；营养琼脂穿刺培养时菌体在表面生长，底部不生长；接触酶反应、甲基红实验、VP实验均呈阳性，氧化酶反应与厌氧培养实验呈阴性，可发酵葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖，可利用柠檬酸盐、液化明胶、水解淀粉与酪素，硝酸盐还原反应阳性。
上述枯草芽孢杆菌JUWEI001的培养方法，步骤如下：
①将枯草芽孢杆菌JUWEI001接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基，在35℃～39℃条件下，培养45～50h；
②挑取菌体接种于玉米粉液体培养基，培养温度35℃～39℃，180～200rpm，培养时间22～26h，制得枯草芽孢杆菌培养液；
③以1～5%（w/w）的接种量将步骤②制得的枯草芽孢杆菌JUWEI培养液接种于玉米粉发酵培养基中，发酵条件为：35～38℃，罐压：0.05Mpa，通风0.8～1vvm，搅拌速度180～200rpm，培养时间为2～3天，即得。
根据本发明优选的，所述步骤①中的牛肉膏蛋白胨培养基每百毫升组分如下：牛肉膏0.3g、蛋白胨1g、氯化钠0.5g、琼脂2g、pH7.0～7.2；
根据本发明优选的，所述步骤②中的玉米粉液体培养基每百毫升组分如下：玉米粉1.5g，豆粕粉0.9g，磷酸氢二钠0.4g，磷酸二氢钾0.03g，MgSO40.1%，pH6.8～7.0；
根据本发明优选的，所述步骤③中的玉米粉发酵培养基，组分如下，均为重量百分比：玉米粉2.00%（w/w），豆粕粉7.00%（w/w），磷酸氢二钠0.40%（w/w），磷酸二氢钾0.03%（w/w），MgSO40.1%（w/w），消泡剂0.02～0.05%（w/w），pH6.8～7.0。
上述试剂如无特别说明，均为本领域常规市售产品。
上述枯草芽孢杆菌JUWEI001在制备微生物有机肥中的应用。
有益效果
本发明筛选的枯草芽孢杆菌JUWEI001抗逆性强，在生长过程中可产生丰富的具有高活力和植物病害防治功能的生理活性物质，具有促进土壤有机质分解，提高土壤控肥能力和土壤酶活性，改善土壤中微生物菌群结构，促进植物根系生长，抑制有害真菌、细菌、病毒和菌原体等作用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明所保护范围不限于此。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JUWEI001已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC NO.7034，保藏时间为2012年12月24日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
实施例1
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JUWEI001已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC NO.7034，保藏时间为2012年12月24日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
上述枯草芽孢杆菌JUWEI001由植株根际土壤中分离出的枯草芽孢杆菌原始菌株，经过紫外线诱变（1×107个/ml的菌悬液放于直径9cm的培养皿内，紫外灯预热20min，将培养皿至于磁力搅拌器上并使培养皿在20W紫外灯垂直距离30cm左右，照射150S）筛选出生长速度快、β-甘露聚糖酶、β葡聚糖酶、蛋白酶和抑菌活性较高的菌株经过平板试验、拮抗试验，筛选出生长速度快、产酶能力高、抑菌活性较强的菌株。
枯草芽孢杆菌JUWEI001为革兰氏阳性菌，细胞杆状，0.8～1.0×1.2～1.8μm，30～35℃培养24～48h可形成大量芽孢，无伴胞晶体，芽孢大小为0.7～0.9×1.0～1.5μm，不膨大，长圆形或圆柱形；在营养琼脂上30～35℃培养1～3d可大量形成菌落，呈污白色，粗糙有皱褶，不透明，不闪光，蔓延，边缘不规则；在肉汤培养基中30～35℃培养24～48h，可在液面形成菌膜，液体内部浑浊；营养琼脂穿刺培养时菌体在表面生长，底部不生长；接触酶反应、甲基红实验、VP实验均呈阳性，氧化酶反应与厌氧培养实验呈阴性，可发酵葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖，可利用柠檬酸盐、液化明胶、水解淀粉与酪素，硝酸盐还原反应阳性。
将筛选出的该菌株连续转接10代，其优良性状遗传稳定。
原始菌株和突变菌株摇瓶培养24h后，发酵液（8000r/min，离心20min）中的β-甘露聚糖酶、β-葡聚糖酶、蛋白酶活性，结果如表1所示。由表1可知，突变株（枯草芽孢杆菌JUWEI001）在生长过程中比原始菌株具有更强的促进土壤有机质分解，提高土壤控肥能力和土壤酶活性的效果。
盆栽实验中枯草芽孢杆菌JUWEI001对黄瓜黄萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum）、西瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.niveum）的防治效果如表1所示。
表1枯草芽孢杆菌诱变结果
实施例2
枯草芽孢杆菌JUWEI001的培养方法，步骤如下：
①将枯草芽孢杆菌JUWEI001接种于牛肉膏蛋白胨培养基，在温度35℃℃条件下，培养50h；
②挑取菌体接种于玉米粉液体培养基，培养温度39℃，200rpm，培养时间22h，制得枯草芽孢杆菌培养液；
③以1～5wt%的接种量将步骤②制得的枯草芽孢杆菌培养液接种于玉米粉发酵培养基中，发酵条件为：温度40℃，罐压：0.05Mpa，通风1vvm，搅拌速度200rpm，培养时间为2天，即得。
所述步骤①中的牛肉膏蛋白胨培养基每百毫升组分如下：牛肉膏0.3g、蛋白胨1g、氯化钠0.5g、琼脂2g、pH7.0；
所述步骤②中的玉米粉液体培养基每百毫升组分如下：玉米粉1.5g，豆粕粉0.9g，磷酸氢二钠0.4g，磷酸二氢钾0.03g，MgSO40.1%，pH7.0；
所述步骤③中的玉米粉发酵培养基，组分如下，均为重量百分比：玉米粉2.00%（w/w），豆粕粉7.00%（w/w），磷酸氢二钠0.40%（w/w），磷酸二氢钾0.03%（w/w），MgSO40.1%（w/w），消泡剂0.05%（w/w）（商品名：th085泡敌，购自天津市冠前化工经销部），pH6.8。
经检测，有效菌体浓度为3×109个/ml。
Claims (6)
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JUWEI001已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC NO.7034，保藏时间为2012年12月24日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
2.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌JUWEI001的培养方法，其特征在于，步骤如下：
①将枯草芽孢杆菌JUWEI001接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基，在35℃～39℃条件下，培养45～50h；
②挑取菌体接种于玉米粉液体培养基，培养温度35℃～39℃，180～200rpm，培养时间22～26h，制得枯草芽孢杆菌培养液；
③以1～5%（w/w）的接种量将步骤②制得的枯草芽孢杆菌JUWEI培养液接种于玉米粉发酵培养基中，发酵条件为：35～38℃，罐压：0.05Mpa，通风0.8～1vvm，搅拌速度180～200rpm，培养时间为2～3天，即得。
3.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤①中的牛肉膏蛋白胨培养基每百毫升组分如下：牛肉膏0.3g、蛋白胨1g、氯化钠0.5g、琼脂2g、pH7.0～7.2。
4.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤②中的玉米粉液体培养基每百毫升组分如下：玉米粉1.5g，豆粕粉0.9g，磷酸氢二钠0.4g，磷酸二氢钾0.03g，MgSO40.1%，pH6.8～7.0。
5.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤③中的玉米粉发酵培养基，组分如下，均为重量百分比：玉米粉2.00%（w/w），豆粕粉7.00%（w/w），磷酸氢二钠0.40%（w/w），磷酸二氢钾0.03%（w/w），MgSO40.1%（w/w），消泡剂0.02～0.05%（w/w），pH6.8～7.0。
6.权利要求1所述枯草芽孢杆菌JUWEI001在制备微生物有机肥中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310086488XA CN103146617A (zh) | 2013-03-18 | 2013-03-18 | 一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310086488XA CN103146617A (zh) | 2013-03-18 | 2013-03-18 | 一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103146617A true CN103146617A (zh) | 2013-06-12 |
Family
ID=48544940
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310086488XA Pending CN103146617A (zh) | 2013-03-18 | 2013-03-18 | 一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103146617A (zh) |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103798087A (zh) * | 2014-03-04 | 2014-05-21 | 黑龙江省科学院微生物研究所 | 一种黑木耳木霉病害的防治方法 |
| CN105481489A (zh) * | 2015-12-29 | 2016-04-13 | 广东植物龙生物技术有限公司 | 一种枯草芽胞杆菌生物菌肥及其制备方法 |
| CN106148245A (zh) * | 2016-08-30 | 2016-11-23 | 林州中农颖泰生物肽有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌发酵培养基 |
| CN107118984A (zh) * | 2017-05-09 | 2017-09-01 | 山东省农业科学院生物技术研究中心 | 一种角蛋白降解菌的发酵罐发酵工艺及其在生猪脱毛中的应用 |
| CN108911820A (zh) * | 2018-08-14 | 2018-11-30 | 潍坊市信得生物科技有限公司 | 一种微生物水剂肥料及其制作方法 |
| CN110408557A (zh) * | 2019-06-17 | 2019-11-05 | 常州大学 | 一种提高土壤磷酸酶活性的枯草芽孢杆菌及其制备方法 |
| CN110591943A (zh) * | 2019-09-05 | 2019-12-20 | 武汉轻工大学 | 一株高产复合酶枯草芽孢杆菌,组合物及其应用 |
| CN110937955A (zh) * | 2019-12-04 | 2020-03-31 | 山东捷利尔生物工程科技有限公司 | 一种预防作物病毒性的生物肥料及其制备方法和应用 |
| CN111172073A (zh) * | 2020-01-19 | 2020-05-19 | 河南省中威春雨植物营养有限公司 | 一株枯草芽孢杆菌菌株及其在植物生长中应用 |
| CN111424026A (zh) * | 2020-04-22 | 2020-07-17 | 江南大学 | 一种生产角蛋白酶的方法 |
| CN112391311A (zh) * | 2020-11-16 | 2021-02-23 | 青岛普罗百世生物科技有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌及其对土壤养分含量和酶活性的影响 |
| CN112794771A (zh) * | 2021-01-13 | 2021-05-14 | 南宁市拜欧生物工程有限责任公司 | 基于米粉加工废弃物的菌酶缓释肥料增效剂及其制备方法 |
| CN113149769A (zh) * | 2021-05-20 | 2021-07-23 | 河南柏裕植物免疫科技有限公司 | 一种防治西红柿病毒病的微生物复合肥及其制备方法 |
| CN113755361A (zh) * | 2021-06-16 | 2021-12-07 | 中益方特(北京)环保科技有限公司 | 一种餐厨垃圾连续高效转化的微生物菌剂制备及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102391876A (zh) * | 2011-09-29 | 2012-03-28 | 山东靠山生物科技有限公司 | 一种复合生物土壤改良剂及其应用 |
| CN102428966A (zh) * | 2011-09-29 | 2012-05-02 | 山东靠山生物科技有限公司 | 一种作物病害防治复合生物制剂及其应用 |
-
2013
- 2013-03-18 CN CN201310086488XA patent/CN103146617A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102391876A (zh) * | 2011-09-29 | 2012-03-28 | 山东靠山生物科技有限公司 | 一种复合生物土壤改良剂及其应用 |
| CN102428966A (zh) * | 2011-09-29 | 2012-05-02 | 山东靠山生物科技有限公司 | 一种作物病害防治复合生物制剂及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 刘美艳等: "《牛肉酱纤溶酶产生菌发酵条件的优化》", 《江苏农业科学》, no. 6, 31 December 2006 (2006-12-31), pages 365 - 367 * |
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103798087A (zh) * | 2014-03-04 | 2014-05-21 | 黑龙江省科学院微生物研究所 | 一种黑木耳木霉病害的防治方法 |
| CN105481489A (zh) * | 2015-12-29 | 2016-04-13 | 广东植物龙生物技术有限公司 | 一种枯草芽胞杆菌生物菌肥及其制备方法 |
| CN106148245A (zh) * | 2016-08-30 | 2016-11-23 | 林州中农颖泰生物肽有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌发酵培养基 |
| CN107118984A (zh) * | 2017-05-09 | 2017-09-01 | 山东省农业科学院生物技术研究中心 | 一种角蛋白降解菌的发酵罐发酵工艺及其在生猪脱毛中的应用 |
| CN108911820A (zh) * | 2018-08-14 | 2018-11-30 | 潍坊市信得生物科技有限公司 | 一种微生物水剂肥料及其制作方法 |
| CN110408557A (zh) * | 2019-06-17 | 2019-11-05 | 常州大学 | 一种提高土壤磷酸酶活性的枯草芽孢杆菌及其制备方法 |
| CN110591943B (zh) * | 2019-09-05 | 2021-12-17 | 武汉轻工大学 | 一株产复合酶枯草芽孢杆菌,组合物及其应用 |
| CN110591943A (zh) * | 2019-09-05 | 2019-12-20 | 武汉轻工大学 | 一株高产复合酶枯草芽孢杆菌,组合物及其应用 |
| CN110937955A (zh) * | 2019-12-04 | 2020-03-31 | 山东捷利尔生物工程科技有限公司 | 一种预防作物病毒性的生物肥料及其制备方法和应用 |
| CN111172073A (zh) * | 2020-01-19 | 2020-05-19 | 河南省中威春雨植物营养有限公司 | 一株枯草芽孢杆菌菌株及其在植物生长中应用 |
| CN111172073B (zh) * | 2020-01-19 | 2023-06-30 | 河南省中威春雨植物营养有限公司 | 一株枯草芽孢杆菌菌株及其在植物生长中应用 |
| CN111424026A (zh) * | 2020-04-22 | 2020-07-17 | 江南大学 | 一种生产角蛋白酶的方法 |
| CN112391311A (zh) * | 2020-11-16 | 2021-02-23 | 青岛普罗百世生物科技有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌及其对土壤养分含量和酶活性的影响 |
| CN112794771A (zh) * | 2021-01-13 | 2021-05-14 | 南宁市拜欧生物工程有限责任公司 | 基于米粉加工废弃物的菌酶缓释肥料增效剂及其制备方法 |
| CN113149769A (zh) * | 2021-05-20 | 2021-07-23 | 河南柏裕植物免疫科技有限公司 | 一种防治西红柿病毒病的微生物复合肥及其制备方法 |
| CN113755361A (zh) * | 2021-06-16 | 2021-12-07 | 中益方特(北京)环保科技有限公司 | 一种餐厨垃圾连续高效转化的微生物菌剂制备及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103146617A (zh) | 一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用 | |
| US11898140B2 (en) | Hyperthermophilic aerobic fermentation inoculant prepared by using municipal sewage sludge and its method | |
| CN106754484B (zh) | 一株豌豆根瘤菌及其发酵培养方法与应用 | |
| US20220009852A1 (en) | Bacillus subtilis bs40-4 strain and method for composting organic wastes by using the same | |
| CN103555624B (zh) | 一株固氮地衣芽孢杆菌及其用途 | |
| CN106244504B (zh) | 具有降解有机磷和抑菌作用的枯草芽孢杆菌及其菌剂 | |
| CN108018233A (zh) | 一株暹罗芽孢杆菌及其微生物菌剂的制备与应用 | |
| CN105950495B (zh) | 一株甲基营养型芽胞杆菌及其在畜禽养殖废水处理中的应用 | |
| CN114574383A (zh) | 高效厨余垃圾降解复合微生物菌剂及其制备方法与应用 | |
| CN105950516B (zh) | 一株降解无机磷、拮抗杨树腐烂病菌的细菌菌株及其应用 | |
| CN104509683A (zh) | 一种竹笋壳复合发酵制作黄贮饲料的方法 | |
| CN110042072A (zh) | 一种降解黄曲霉毒素b1的菌株及其应用 | |
| CN113481111A (zh) | 一种高效生物秸秆发酵菌剂及其制备方法 | |
| CN114317322B (zh) | 一种耐温耐酸碱菌株、筛选方法、菌剂及应用 | |
| CN106916756A (zh) | 真菌菌株，微生物菌剂，秸秆土壤修复剂及其应用 | |
| CN103992958B (zh) | 一株水稻秸秆降解真菌拟康宁木霉zjc-1及其菌剂 | |
| CN114921356A (zh) | 家用型厨余垃圾好氧堆肥复合微生物菌剂及其制备方法 | |
| CN105176885A (zh) | 一株枯草芽孢杆菌及其在降解有机磷农药中的应用 | |
| CN106222107B (zh) | 一株来自猪场废弃物的极端嗜热细菌 | |
| CN104774788B (zh) | 垃圾堆肥中草坪耐盐强化复合微生物菌群的制备方法及应用 | |
| CN118064296A (zh) | 一种抑制平菇细菌性病害的复合菌剂 | |
| CN103131642B (zh) | 一株绿色木霉及培养方法与应用 | |
| CN106434455B (zh) | 具有降解有机磷和抑菌作用的解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN110452859A (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌b4216及其应用 | |
| CN113308412B (zh) | 一种蜡样芽孢杆菌和马铃薯茎叶降解及原位腐熟还田工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130612 |