CN106978342A - 一种高效诱导沉香结香的复合微生物菌剂的制备方法 - Google Patents

一种高效诱导沉香结香的复合微生物菌剂的制备方法 Download PDF

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朱恩灿
杨丽
陈金艳
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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Abstract

本发明公开了一种高效诱导沉香结香的复合微生物菌剂的制备方法。其特征在于，按照流程先后分为：复合微生物菌群的提取、富集培养、离心收集、真空冷冻干燥、沉香结香、以浸染能力综合分析挑选制备。本发明的复合微生物菌群能够高效诱导沉香属植物在接菌处产生沉香，并且成功解决目前单一真菌诱导产生的沉香产量低、品质差、不能满足市场需求量等问题。

Description

一种高效诱导沉香结香的复合微生物菌剂的制备方法
技术领域
本发明涉及一种高效诱导沉香结香的复合微生物菌剂，属于生物技术领域。
背景技术
沉香又叫沉水香，是沉香属植物在生长过程中遭遇外力入侵或被某种病毒或细菌所侵染，令沉香属植物本身产生一种抗体，以抵抗外来的侵略，该抗体凝结于沉香属植物木质部内形成的一种特异产品，即沉香树脂。沉香属植物在健康的情况下是无法产生沉香的。沉香属植物即使受伤或被入侵后通常也要积累数年才能形成沉香，而且产出率非常低，远远不能够满足当前的市场需求。为此人们采取了各种人为地结香方法，以提高结香的成功率及沉香的产量。
但是目前所有结香方法的效果都不是很理想，结香效率低，时间长；沉香的品质不高，产率低，而且大量的沉香树被破坏。因此，如何充分提高结香效率，缓解沉香供需矛盾成为当前生产上的关键问题。
发明内容
本发明的目的是为解决当前沉香结香产量低、品质差、不能满足市场需求等问题，提供一种高效诱导沉香结香的复合微生物菌剂。具体制备步骤如下：
(1) 菌种采集：采集自不同地区、不同地貌自然环境下生长的白木香结香部位的复合微生物菌群；
(2) 富集培养：将采集的不同的微生物复合菌群接种在液体富集培养基上150rpm，33℃，培养10d；
(3) 扩大培养：按照5%的接种量，将富集培养基中的菌液接种到基础培养基中150rpm，33℃，进行扩繁；
(4) 复合微生物菌剂制备：将上述菌液离心10000rpm，10min收集菌体去掉上清液，添加保护剂，-20℃冷冻24h，真空干燥；
(5) 沉香结香：将真空冷冻干燥好的复合微生物菌剂通过凿洞法接种到5年龄健康白木香树上；
(6) 侵染能力综合分析：结香后观察记录各个实验组复合微生物菌群的浸出物含量、浸染面积、定殖率来检验沉香的品质及其产量，选择最佳的复合微生物菌群作为最佳目标。
本发明的优点是：复合微生物菌群取自白木香，接种到白木香，容易在白木香树干上定植、侵染，因此诱导结香的成功率高。能够成功解决目前单一真菌诱导产生的沉香产量低、品质差、不能满足市场需求量等问题。
具体实施方式
复合微生物菌剂的制备：
(1) 菌种采集：采集自不同地区、不同地貌自然环境下生长的白木香结香部位的复合微生物菌群；
(2) 富集培养：将采集的不同的微生物复合菌群接种在液体富集培养基上150rpm，33℃，培养10d；
(3) 扩大培养：按照5%的接种量，将富集培养基中的菌液接种到基础培养基中150rpm，33℃，进行扩繁；
(4) 复合微生物菌剂制备：将上述菌液离心10000rpm，10min收集菌体去掉上清液，添加保护剂，-20℃冷冻24h，真空干燥。
复合微生物菌剂在白木香树上的结香检验：
(1) 沉香结香：将真空冷冻干燥好的复合微生物菌剂通过凿洞法接种到5年龄健康白木香树上；具体实施步骤如下：选定生长健康，苗龄5年以上，胸径≥15cm的白木香树；在白木香树的逆风方向，自上而下，每隔30~50cm处，用锯、凿等工具，按照垂直或者45°角对树干的方向开一香门，深度约为树干胸径的1/3，口宽2~3公分；然后将复合微生物菌剂涂满洞口，用塑料薄膜密封；
(2) 侵染能力综合分析：结香后观察记录各个实验组复合微生物菌群的浸出物含量、浸染面积、定殖率来检验沉香的品质及其产量，选择最佳的复合微生物菌群作为最佳目标。白木香树结菌后一个月洞口就会观察到颜色变深，若未发生变化表示接种失败，可刮去洞口表面重新接种。分别观察测定结菌后0、1、3、6、9、12个月各项指标。所述的浸染物含量的测定用GC-MS分析法分析化合物的差异性，通过各类化合物含量的分析来进一步判断沉香的品质；所述的浸染面积的测定用圆周面积法计算；定殖率按照浸染组织/接种组织的占比来计算。通过综合浸染能力分析可以更好地挑选出优势菌种，促进高效诱导沉香结香的品质。
上述实施案例和说明书中的描述只是对本发明的原理和最佳实施例，在不脱离本发明精神和范围下，本发明还会有各种改进和变化，这些改进和变化都落入要求保护的本发明范围内。

Claims (6)

1.一种高效诱导沉香结香的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，按流程先后分为：复合微生物菌群的提取、富集培养、离心收集、真空冷冻干燥、沉香结香、以侵染能力综合分析挑选制备。
2.如权利要求1所述的复合微生物菌群的制备方法，其特征在于，所述的复合微生物菌群采集自不同地区、不同地貌自然环境下生长的白木香结香部位的复合微生物菌群。
3.如权利要求1所述的复合微生物菌群的制备方法，其特征在于，所述的富集培养、扩大培养为液体培养基培养，只是为了扩繁，不改变菌群的结构、性质。
4.如权利要求1所述的复合微生物菌群的制备方法，其特征在于，所述的沉香结香是将真空冷冻干燥好的复合微生物菌剂通过凿洞法接种到5年龄健康白木香树上。
5.如权利要求1所述的复合微生物菌群的制备方法，其特征在于，所述的侵染能力综合分析是结香后观察记录各个实验组复合微生物菌群的浸出物含量、浸染面积、定殖率来检验沉香的品质及其产量，选择最佳的复合微生物菌群作为最佳目标。
6.根据权利要求1、2、3、4或5所述方法生产制得一种高效诱导白木香树结香复合微生物菌剂。
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