CN103896662B - 一种适合苇蘑生长的液态培养基及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种适合苇蘑的液态培养基及其应用,属于食用菌加工技术领域。本发明通过对苇蘑菌种的液体培养基的筛选及优化，获得了一种适合苇蘑生长的液体培养基配方，苇蘑在此培养基中4天即可达到较高的菌体量及足够的菌丝球数。本发明公开的适合苇蘑生长的液态培养基，具有组分少，配备简单，成本低的特点。同时，可为后期进行人工栽培研究提供充足的二级菌种，有利于人工栽培的研发。

Description

一种适合苇蘑生长的液态培养基及其应用

技术领域

本发明涉及一种适合苇蘑生长的液态培养基及其应用,属于食用菌加工技术领域。

技术背景

天津市宁河县七里海地区芦苇地产一种蘑菇叫苇蘑。每当盛夏溽暑绵雨过后，芦林苇海中多年败叶腐草厚积，形成难得的底质、湿度、温度和光照，苇蘑便蒸郁而生。人们采集后，或鲜食，或晒干食用，味道极其鲜美，远胜于其它蘑菇。发明人从野生环境采集了苇蘑子实体后，通过形态特征和DNA测序对其进行了鉴定，确定其为蜡伞科（Hygrophoropsidaceae）、拟蜡伞属（Hygrophoropsis）蘑菇。发明人经子实体组织分离获得了原始菌种，并进行了菌种保藏，目前关于此蘑菇菌种无相关专利报道，文献报道也仅限于本组科研人员。

苇蘑具有特有的鲜香及营养价值，但由于野生苇蘑数量稀少，使得市场是苇蘑价格高昂，并且未见苇蘑相关的开发产品。目前苇蘑的人工栽培还未有成功的报道，原因在于苇蘑的生长环境很难在实验室模拟，并且人们对苇蘑生长所需的营养成分也不是很清楚。发明人以从野生菌株中分离并保藏的苇蘑为原始菌种（杨红澎，黄亮，班立桐等，天津七里海野生苇蘑科属研究，天津农业科学，2013，19（5）：51-52），从液体培养角度来快速获得苇蘑菌丝，使得人们对苇蘑生长所需的养分了解有了突破口，开启了苇蘑研究的新视角，为后期苇蘑人工栽培提供了重要的种质资源。通过对培养基中的残糖分析，菌丝中转化了较多的糖分，对于后期的营养保健品的开发也提供了一定的依据。

发明内容

本发明提供了一种适合苇蘑快速生长的液态培养基及其应用，采取的技术方案如下：

一种适合苇蘑生长的液体培养基组成如下：

葡萄糖10-15g，乳糖5-15g，酵母膏4-6g，维生素B₁5-15mg，水1000mL。

一种上述培养基的使用方法，步骤如下：

1）分装：将上述配制好的液体培养基，分装至三角瓶中密封；

2）灭菌：将步骤1）密封的三角瓶灭菌，获得灭菌培养基；

3）接种：将活化处理后的一级斜面母种，接入到冷却后的步骤2）所得的灭菌培养基中，获得接种培养基；

4）培养：将步骤3）所得接种培养基置于130-200rpm的摇床中震荡培养，培养后获得二级菌种。

步骤1）中所述分装至三角瓶，是将50-100mL培养基装入到250mL三角瓶中。

步骤2）中所述灭菌，灭菌温度为112-115℃，灭菌时间为10-15min。

步骤3）中所述接种，接种量为每瓶2-3块0.5-1.0cm²的菌块。

步骤4）中所述培养，培养温度为20-28℃，培养时间4d。

所述方法的具体步骤如下：

1）分装：将配制好的液态培养基按每瓶50-100mL的装量装入250mL三角瓶中，塞上八层纱布，绑上牛皮纸密封；

2）灭菌，将步骤1）所得密封三角瓶在112-115℃下，灭菌10-15min，获得灭菌培养基；

1）接种：将经过活化处理的一级斜面母种接入到冷却后的灭菌培养基中，接种量为每瓶2-3块0.5-1.0cm²的菌块，获得接种培养基；

4）培养：将步骤3）所得接种培养基置于130-200rpm的摇床中震荡培养，在20-28℃下培养4-6天，获得二级菌种。

本发明的有益效果：目前还没有苇蘑人工栽培的报道，本发明通过对苇蘑菌种的液体培养基的筛选及优化，获得了一种适合苇蘑快速生长的液体培养基配方。本发明提供的液体培养基具有成分简单，成本低，配备简单，并且培养时间短，适合产业化推广。苇蘑在本发明的培养基中4天即可达到较高的菌体量及足够的菌球数，可为后期进行人工栽培提供充足的二级菌种，有利于人工栽培研究的推进。

附图说明

图1为按本发明配方配制的液体培养基培养苇蘑4天时的摇瓶图片。

图2为本发明的液体培养基与常用土豆培养基培养效果对比。

具体实施方式

本发明提供了一种适合苇蘑快速生长的液态培养基及其应用,属于食用菌加工技术领域。本发明通过对苇蘑菌种液体培养基的筛选及优化，获得了一种适合苇蘑快速生长的液体培养基配方，苇蘑在此培养基中4天即可达到较高的菌体量，可为后期进行人工栽培提供充足的二级菌种，有利于人工栽培研究的推进。下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受实施例的限制。

实施例1初始配方的筛选

为初步确定苇蘑培养基的配方，选取了四组初始配方，并按照这四种配方培养苇蘑，从而为进一步优化配方奠定基础。

初始培养基配方如下：

A:葡萄糖20g，磷酸氢二钾0.1g，蛋白胨2g，硫酸镁0.5g，酵母膏1g，磷酸二氢钾0.4g，水1000mL，pH自然。

B:葡萄糖10g，乳糖10g，酵母膏4g，维生素B₁10mg，水1000mL，pH自然。

C:大豆粉30g，磷酸氢二钾1g，蛋白胨3g，酵母膏1g，磷酸二氢钾0.5g，VB₁3mg，水1000mL，pH自然。

D:土豆汁200g，VB₁15mg，草炭土600g，水1000mL，pH自然。

对四种培养基进行了初筛，6天后得出结果如下：

表1不同培养基配方培养苇蘑后的相关参数测定结果

通过四种培养基配方筛选的预试验，发现四种配方的培养基经6天苇蘑的培养后，残糖量相差不大，而配方B培养出的苇蘑菌丝球数量最多，且小而密实，有利于后期菌种的进一步转接培养或保藏；配方B和其他配方相比，在相同培养时间内培养出的苇蘑的菌丝干重最大，可见此配方有利于苇蘑的快速生长繁殖，可用于后面的培养基组分优化。

实施例2配方优化

为了最优的培养基配方，本发明设计了正交试验进行主要添加物的浓度配比优化，结果如下：

表2培养基中成分因素水平表

表3L₉3⁴试验结果表

由表3可知，影响菌丝球数的因素主次顺序为酵母膏，葡萄糖，乳糖，各因素的最优水平分别是A₃B₂C₂，即葡萄糖15g/L，乳糖10g/L，酵母膏6g/L；影响菌丝干重的因素主次顺序为葡萄糖，酵母膏，乳糖，各因素的最优水平分别是和以菌丝球数值分析的结果一致。菌丝球数量决定了子实体的萌发点，在后期进行人工栽培时可重点考虑酵母膏的添加量；菌丝干重可增加液体培养菌体的产量，在进行液体发酵保健品的开发角度可重点考虑葡萄糖的添加量。

本发明进行了3种较优配方的实例试验，结果表4。从表4可以看出各配方的残糖量差不多，可见苇蘑的糖分转化能力较高；而因素水平在A₃B₂C₂，同时在添加维生素B₁10mg，水1000mL，pH自然的培养基配方下，25℃摇床150rpm培养4天即可获得较多的菌丝球数及较高的菌丝干重,比常见的蘑菇菌种液体培养的常规时间7天缩短了3天。

表4较优配方下的苇蘑液体培养结果

图1为按本发明配方配制的液体培养基培养苇蘑4天时的摇瓶图片。从图中可见菌丝球数此时已达足够多的数量。图2为本发明的液体培养基与常用土豆培养基培养效果的对比。其中左瓶为按本发明配方配制的液体培养基培养苇蘑4天时的摇瓶图片，右瓶为常用的土豆培养基培养苇蘑7天时的摇瓶图片。由图可见按本发明方案实施的苇蘑生长摇瓶中菌丝球数小而密集，有利于后期接入固体栽培料中实现多点萌发；常规培养基配方培养的苇蘑在7天时方收集到少量的菌丝，且菌丝球偏大。

Claims (7)

1.一种适合苇蘑生长的液体培养基，其特征在于，组成如下：

葡萄糖10-15g，乳糖5-15g，酵母膏4-6g，维生素B₁5-15mg，水1000mL。

2.一种培养苇蘑的方法，其特征在于，步骤如下：

1）分装：将配制好的权利要求1所述培养基，分装至三角瓶中密封；

2）灭菌：将步骤1）密封的三角瓶灭菌，获得灭菌培养基；

3）接种：将活化处理后的一级斜面母种，接入到冷却后的灭菌培养基中，获得接种培养基；

4）培养：将步骤3）所得接种培养基在摇床中震荡培养，培养后获得二级菌种。

3.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤1）中所述分装至三角瓶，是将50-100mL培养基装入到250mL三角瓶中。

4.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤2）中所述灭菌，灭菌温度为112-115℃，灭菌时间为10-15min。

5.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤3）中所述接种，接种量为每瓶2-3块0.5-1.0cm²的菌块。

6.权利要求2所述方法，其特征在于，步骤4）中所述培养，培养温度为20-28℃，培养时间4天。

7.权利要求2所述方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）分装：将配制好的液态培养基按每瓶50-100mL的装量装入250mL三角瓶中，塞上八层纱布，绑上牛皮纸密封；

2）灭菌，将步骤1）所得密封三角瓶在112-115℃下，灭菌10-15min，获得灭菌培养基；

3）接种：将经过活化处理的一级斜面母种接入到冷却后的灭菌培养基中，接种量为每瓶2-3块0.5-1.0cm²的菌块，获得接种培养基；

4）培养：将步骤3）所得接种培养基置于130-200rpm的摇床中震荡培养，在20-28℃下培养4天，获得二级菌种。