CN103896662B - 一种适合苇蘑生长的液态培养基及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种适合苇蘑的液态培养基及其应用,属于食用菌加工技术领域。本发明通过对苇蘑菌种的液体培养基的筛选及优化,获得了一种适合苇蘑生长的液体培养基配方,苇蘑在此培养基中4天即可达到较高的菌体量及足够的菌丝球数。本发明公开的适合苇蘑生长的液态培养基,具有组分少,配备简单,成本低的特点。同时,可为后期进行人工栽培研究提供充足的二级菌种,有利于人工栽培的研发。

Description

一种适合苇蘑生长的液态培养基及其应用
技术领域
本发明涉及一种适合苇蘑生长的液态培养基及其应用,属于食用菌加工技术领域。
技术背景
天津市宁河县七里海地区芦苇地产一种蘑菇叫苇蘑。每当盛夏溽暑绵雨过后,芦林苇海中多年败叶腐草厚积,形成难得的底质、湿度、温度和光照,苇蘑便蒸郁而生。人们采集后,或鲜食,或晒干食用,味道极其鲜美,远胜于其它蘑菇。发明人从野生环境采集了苇蘑子实体后,通过形态特征和DNA测序对其进行了鉴定,确定其为蜡伞科(Hygrophoropsidaceae)、拟蜡伞属(Hygrophoropsis)蘑菇。发明人经子实体组织分离获得了原始菌种,并进行了菌种保藏,目前关于此蘑菇菌种无相关专利报道,文献报道也仅限于本组科研人员。
苇蘑具有特有的鲜香及营养价值,但由于野生苇蘑数量稀少,使得市场是苇蘑价格高昂,并且未见苇蘑相关的开发产品。目前苇蘑的人工栽培还未有成功的报道,原因在于苇蘑的生长环境很难在实验室模拟,并且人们对苇蘑生长所需的营养成分也不是很清楚。发明人以从野生菌株中分离并保藏的苇蘑为原始菌种(杨红澎,黄亮,班立桐等,天津七里海野生苇蘑科属研究,天津农业科学,2013,19(5):51-52),从液体培养角度来快速获得苇蘑菌丝,使得人们对苇蘑生长所需的养分了解有了突破口,开启了苇蘑研究的新视角,为后期苇蘑人工栽培提供了重要的种质资源。通过对培养基中的残糖分析,菌丝中转化了较多的糖分,对于后期的营养保健品的开发也提供了一定的依据。
发明内容
本发明提供了一种适合苇蘑快速生长的液态培养基及其应用,采取的技术方案如下:
一种适合苇蘑生长的液体培养基组成如下:
葡萄糖10-15g,乳糖5-15g,酵母膏4-6g,维生素B15-15mg,水1000mL。
一种上述培养基的使用方法,步骤如下:
1)分装:将上述配制好的液体培养基,分装至三角瓶中密封;
2)灭菌:将步骤1)密封的三角瓶灭菌,获得灭菌培养基;
3)接种:将活化处理后的一级斜面母种,接入到冷却后的步骤2)所得的灭菌培养基中,获得接种培养基;
4)培养:将步骤3)所得接种培养基置于130-200rpm的摇床中震荡培养,培养后获得二级菌种。
步骤1)中所述分装至三角瓶,是将50-100mL培养基装入到250mL三角瓶中。
步骤2)中所述灭菌,灭菌温度为112-115℃,灭菌时间为10-15min。
步骤3)中所述接种,接种量为每瓶2-3块0.5-1.0cm2的菌块。
步骤4)中所述培养,培养温度为20-28℃,培养时间4d。
所述方法的具体步骤如下:
1)分装:将配制好的液态培养基按每瓶50-100mL的装量装入250mL三角瓶中,塞上八层纱布,绑上牛皮纸密封;
2)灭菌,将步骤1)所得密封三角瓶在112-115℃下,灭菌10-15min,获得灭菌培养基;
1)接种:将经过活化处理的一级斜面母种接入到冷却后的灭菌培养基中,接种量为每瓶2-3块0.5-1.0cm2的菌块,获得接种培养基;
4)培养:将步骤3)所得接种培养基置于130-200rpm的摇床中震荡培养,在20-28℃下培养4-6天,获得二级菌种。
本发明的有益效果:目前还没有苇蘑人工栽培的报道,本发明通过对苇蘑菌种的液体培养基的筛选及优化,获得了一种适合苇蘑快速生长的液体培养基配方。本发明提供的液体培养基具有成分简单,成本低,配备简单,并且培养时间短,适合产业化推广。苇蘑在本发明的培养基中4天即可达到较高的菌体量及足够的菌球数,可为后期进行人工栽培提供充足的二级菌种,有利于人工栽培研究的推进。
附图说明
图1为按本发明配方配制的液体培养基培养苇蘑4天时的摇瓶图片。
图2为本发明的液体培养基与常用土豆培养基培养效果对比。
具体实施方式
本发明提供了一种适合苇蘑快速生长的液态培养基及其应用,属于食用菌加工技术领域。本发明通过对苇蘑菌种液体培养基的筛选及优化,获得了一种适合苇蘑快速生长的液体培养基配方,苇蘑在此培养基中4天即可达到较高的菌体量,可为后期进行人工栽培提供充足的二级菌种,有利于人工栽培研究的推进。下面结合具体实施例对本发明做进一步说明,但本发明不受实施例的限制。
实施例1初始配方的筛选
为初步确定苇蘑培养基的配方,选取了四组初始配方,并按照这四种配方培养苇蘑,从而为进一步优化配方奠定基础。
初始培养基配方如下:
A:葡萄糖20g,磷酸氢二钾0.1g,蛋白胨2g,硫酸镁0.5g,酵母膏1g,磷酸二氢钾0.4g,水1000mL,pH自然。
B:葡萄糖10g,乳糖10g,酵母膏4g,维生素B110mg,水1000mL,pH自然。
C:大豆粉30g,磷酸氢二钾1g,蛋白胨3g,酵母膏1g,磷酸二氢钾0.5g,VB13mg,水1000mL,pH自然。
D:土豆汁200g,VB115mg,草炭土600g,水1000mL,pH自然。
对四种培养基进行了初筛,6天后得出结果如下:
表1不同培养基配方培养苇蘑后的相关参数测定结果
通过四种培养基配方筛选的预试验,发现四种配方的培养基经6天苇蘑的培养后,残糖量相差不大,而配方B培养出的苇蘑菌丝球数量最多,且小而密实,有利于后期菌种的进一步转接培养或保藏;配方B和其他配方相比,在相同培养时间内培养出的苇蘑的菌丝干重最大,可见此配方有利于苇蘑的快速生长繁殖,可用于后面的培养基组分优化。
实施例2配方优化
为了最优的培养基配方,本发明设计了正交试验进行主要添加物的浓度配比优化,结果如下:
表2培养基中成分因素水平表
表3L934试验结果表
由表3可知,影响菌丝球数的因素主次顺序为酵母膏,葡萄糖,乳糖,各因素的最优水平分别是A3B2C2,即葡萄糖15g/L,乳糖10g/L,酵母膏6g/L;影响菌丝干重的因素主次顺序为葡萄糖,酵母膏,乳糖,各因素的最优水平分别是和以菌丝球数值分析的结果一致。菌丝球数量决定了子实体的萌发点,在后期进行人工栽培时可重点考虑酵母膏的添加量;菌丝干重可增加液体培养菌体的产量,在进行液体发酵保健品的开发角度可重点考虑葡萄糖的添加量。
本发明进行了3种较优配方的实例试验,结果表4。从表4可以看出各配方的残糖量差不多,可见苇蘑的糖分转化能力较高;而因素水平在A3B2C2,同时在添加维生素B110mg,水1000mL,pH自然的培养基配方下,25℃摇床150rpm培养4天即可获得较多的菌丝球数及较高的菌丝干重,比常见的蘑菇菌种液体培养的常规时间7天缩短了3天。
表4较优配方下的苇蘑液体培养结果
图1为按本发明配方配制的液体培养基培养苇蘑4天时的摇瓶图片。从图中可见菌丝球数此时已达足够多的数量。图2为本发明的液体培养基与常用土豆培养基培养效果的对比。其中左瓶为按本发明配方配制的液体培养基培养苇蘑4天时的摇瓶图片,右瓶为常用的土豆培养基培养苇蘑7天时的摇瓶图片。由图可见按本发明方案实施的苇蘑生长摇瓶中菌丝球数小而密集,有利于后期接入固体栽培料中实现多点萌发;常规培养基配方培养的苇蘑在7天时方收集到少量的菌丝,且菌丝球偏大。

Claims (7)

1.一种适合苇蘑生长的液体培养基,其特征在于,组成如下:
葡萄糖10-15g,乳糖5-15g,酵母膏4-6g,维生素B15-15mg,水1000mL。
2.一种培养苇蘑的方法,其特征在于,步骤如下:
1)分装:将配制好的权利要求1所述培养基,分装至三角瓶中密封;
2)灭菌:将步骤1)密封的三角瓶灭菌,获得灭菌培养基;
3)接种:将活化处理后的一级斜面母种,接入到冷却后的灭菌培养基中,获得接种培养基;
4)培养:将步骤3)所得接种培养基在摇床中震荡培养,培养后获得二级菌种。
3.权利要求2所述方法,其特征在于,步骤1)中所述分装至三角瓶,是将50-100mL培养基装入到250mL三角瓶中。
4.权利要求2所述方法,其特征在于,步骤2)中所述灭菌,灭菌温度为112-115℃,灭菌时间为10-15min。
5.权利要求2所述方法,其特征在于,步骤3)中所述接种,接种量为每瓶2-3块0.5-1.0cm2的菌块。
6.权利要求2所述方法,其特征在于,步骤4)中所述培养,培养温度为20-28℃,培养时间4天。
7.权利要求2所述方法,其特征在于,具体步骤如下:
1)分装:将配制好的液态培养基按每瓶50-100mL的装量装入250mL三角瓶中,塞上八层纱布,绑上牛皮纸密封;
2)灭菌,将步骤1)所得密封三角瓶在112-115℃下,灭菌10-15min,获得灭菌培养基;
3)接种:将经过活化处理的一级斜面母种接入到冷却后的灭菌培养基中,接种量为每瓶2-3块0.5-1.0cm2的菌块,获得接种培养基;
4)培养:将步骤3)所得接种培养基置于130-200rpm的摇床中震荡培养,在20-28℃下培养4天,获得二级菌种。
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