CN106929442B - 一株喹诺酮类抗生素降解菌及其应用 - Google Patents

一株喹诺酮类抗生素降解菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一株喹诺酮类抗生素降解菌及其应用，属于环境污染物生物处理技术领域。该降解菌是从畜禽粪便中驯化、纯化得到的，名称为苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)JOB，于2016年12月21日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC NO：60132。本发明将降解菌制成菌悬液或固定化菌剂，能够有效去除水体、土壤等不同环境介质中的喹诺酮类抗生素污染，与物理吸附、化学降解等方法相比具有高效、节能和环保等优点。尤其是利用包埋剂将菌体固定，延长菌体寿命，菌剂作用效果佳，适应环境能力强。

Description

一株喹诺酮类抗生素降解菌及其应用
技术领域
本发明属于环境污染物生物处理技术领域，尤其涉及一株喹诺酮类抗生素降解菌及其应用。
背景技术
人类在畜牧养殖和医疗中大量使用各种抗生素，特别是我国已经成为抗生素滥用大国。抗生素在生物体内停留时间短、代谢效率低，有60～90％的抗生素以药物原形或其代谢物随粪尿排出。目前大多数养殖场粪尿和医院废水处理率较低，导致大量含有抗生素的废水、畜禽粪便和垃圾堆肥的渗滤液以粪肥或污灌形式直接进入土壤，导致抗生素在土壤环境中普遍被检出。抗生素不断进入土壤环境，被土壤颗粒吸附并累积，土壤成为抗生素最主要的一个“汇”。喹诺酮类抗生素是一类人工合成的广谱类抗菌药物，是喹诺酮的哌嗪基派生物。其广泛应用于人类、动物疾病以及动物生长促进剂。目前使用较多的是第三代产品，主要包括诺氟沙星、依诺沙星、恩诺沙星、环丙沙星、洛美沙星、氧氟沙星等。环境中喹诺酮类抗生素主要来源于人体或动物用药残留以及制药废水排放。近年来相继报道在土壤、城市污水、地表水、饮用水、以及动植物食品中检出喹诺酮类抗生素。如何有效去除环境中喹诺酮类抗生素残留已成为当下亟待解决的重要环境问题。
抗生素进入环境中，主要通过光解、水解等非生物降解和生物降解。非生物降解抗生素过程缓慢，大多中间产物具有生物毒性，去除效果不明显，很难从根本上解决抗生素污染问题。微生物降解是去除环境中抗生素污染的重要方式。近几年，对于喹诺酮类抗生素去除方法以传统物理化学方法研究较为广泛，如化学氧化、催化氧化、物理吸附等。生物降解作为去除环境中污染物的一种有效手段，在国内外被广泛地研究和应用。微生物降解是去除土壤中抗生素污染的重要方式，已引起国内外学者的广泛关注。关于微生物对抗生素降解的研究主要有喹诺酮类抗生素环丙沙星和诺氟沙星、四环素类抗生素、头孢类抗生素以及磺胺类抗生素等。主要的抗生素降解菌主要包括四环素降解酵母菌(Trichosporonmycotoxinivorans XPY-10)、无丙二酸柠檬酸杆菌(Citrobacter amalonaticus)、缺陷短波单胞菌(Brevundimonas diminuta)；泰乐菌素降解菌越南伯克霍尔德菌(Burkholderiavietnamiensis)；阿维菌素降解菌嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)和苍白杆菌属(Ochrobactrum haematophilum AW1-12)；磺胺甲恶唑降解菌黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)。但是，迄今为止国内外对喹诺酮类抗生素降解菌的报道还比较少，实际应用技术也不够完善，尚不能解决环境中喹诺酮抗生素污染的问题。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一株喹诺酮类抗生素降解菌。旨在解决环境中喹诺酮类抗生素污染问题。
本发明的另一目的在于提供上述喹诺酮类抗生素降解菌的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
本发明提供一株喹诺酮类抗生素降解菌，菌种命名为Ochrobactrum sp.JOB，是从畜禽粪便中驯化、纯化得到的。
所述的苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)JOB的保藏信息：保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏日期：2016年12月21日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号：GDMCC NO：60132。
所述的喹诺酮类抗生素降解菌的筛选方法，包括如下步骤：
第一步：喹诺酮类抗生素降解菌的驯化：
驯化共分为3个阶段，采集的粪肥样品，加入至含有初始浓度为1～5mg/L喹诺酮类抗生素和初始浓度为0.1～1.0g/L酵母提取物的无机盐培养基中，于25～30℃、120～150r/min的摇床避光培养后，以1～5％的接种量接入到相同的培养基中，按照一定梯度调整喹诺酮类抗生素和酵母提取物的浓度进行驯化，其中喹诺酮类抗生素浓度梯度从初始浓度逐步升高，每次升高1％，终浓度为20～25mg/L，酵母提取物浓度从初始浓度逐步降低，每次降低0.5％，终浓度为0.01～0.05g/L；第一阶段驯化完毕得到的菌群ECI；将第一阶段得到的菌群ECI以1～5％的接种量接种至碳源为氨基酸混合物、维生素混合物以及腺嘌呤的无机盐培养基中；驯化方式与第一阶段相同，得到的菌群ECII；第三阶段驯化将得到的菌群ECII以1～5％的接种量接种至碳源为氨基酸混合物的无机盐培养基中，驯化方式同第一阶段，得到喹诺酮类抗生素降解菌群ECIII。在每一阶段驯化结束后测定各类抗生素的残留浓度。
所述的无机盐培养基(g·L-1)：K2HPO4 5.8，KH2PO4 4.5，(NH4)2SO4 2.0，MgCl20.16，CaCl2 0.02，Na2MoO4·2H2O 0.0024，KNO3 0.0012，FeCl3 0.0018，MnCl2·2H2O0.0015，pH 7.0。
所述的喹诺酮类抗生素为萘啶酸、吡哌酸、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、洛美沙星或洛美沙星等；优选为环丙沙星；
第二阶段中，所述的氨基酸混合物是苯丙氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和苏氨酸，终浓度均为5～20mg·L-1。
所述的维生素混合物是VB6、VB1、VB2、VB12、生物素、叶酸、烟酸和对氨基苯甲酸；其中，VB6的终浓度为5～10mg·L-1；其余的终浓度均为1～5mg·L-1。
所述的腺嘌呤的终浓度为1～8mg·L-1；
第三阶段中，所述的氨基酸混合物是苯丙氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和苏氨酸，终浓度均为5～15mg·L-1。
第二步：喹诺酮类抗生素降解单菌的纯化：
取菌群ECIII的基础培养基发酵液均匀涂抹于基础培养基平板上，待菌落长出；挑取不同菌落，反复进行划线分离，直至得到单菌落；最终分离获得一株细菌，编号为JOB。
所述的基础培养基的成分(g·L-1)：胰蛋白胨10.0，酵母提取物5.0，NaCl为10.0，pH 7.5。
第三步：菌株鉴定：
菌株的生理生化及形态鉴定：革兰氏染色阴性，有鞭毛，杆菌；
菌株的16S rDNA鉴定：提取细菌总DNA，用细菌16S rDNA通用引物对该菌基因组进行PCR扩增。PCR产物经测序后，将测序结果与GenBank中已报道的16S rDNA序列同源性比对，并选取若干菌种做进化树分析。本发明分离纯化得到的菌株JOB的16S rDNA与苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)同源性最高。因此，本发明筛选获得的菌株鉴定为苍白杆菌属，命名为Ochrobactrum sp.JOB。
一种喹诺酮类抗生素降解菌生物菌剂，将喹诺酮类抗生素降解菌Ochrobactrumsp.JOB活化后制备成。
所述的喹诺酮类抗生素降解菌生物菌剂为菌悬液或固定化菌剂；
所述的喹诺酮类抗生素降解菌菌悬液的制备主要包括：Ochrobactrum sp.JOB菌种活化后，接种于基础培养基中，于28～35℃、100～150r/min的恒温振荡器培养20～24h后，由基础培养基接种扩大培养；将扩大培养后的菌液，在3500～6000r/min的转速下离心3～5min后，弃去上清液，菌体用磷酸缓冲液洗涤1～3次，配制成OD600nm为0.5～1.5的菌悬液。
所述的喹诺酮类抗生素降解菌固定化菌剂所用的包埋剂，包括海藻酸钠、卡拉胶、琼脂糖和聚乙烯醇等中的至少一种；
所述的喹诺酮类抗生素降解菌固定化菌剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将经过培养的喹诺酮类抗生素降解菌Ochrobactrum sp.JOB与冷却后的包埋剂溶液混合，降解菌与包埋剂的体积比为1:4～1:2；
(2)静置2～8h后滤出固定化为微生物颗粒，用生理盐水洗净，得到固定化菌剂，放置4℃冰箱保存，备用。
步骤(1)中所述的包埋剂溶液中最终包埋剂的浓度为1％～15％(w/v)；
优选的，包埋剂为海藻酸钠时，终浓度为1％～5％(w/v)；
包埋剂为聚乙烯醇时，终浓度为5％～15％(w/v)；
所述的喹诺酮类抗生素降解菌在受喹诺酮类抗生素污染水环境或土壤的微生物修复中的应用。
对于受喹诺酮类抗生素污染的水环境，利用菌悬液或固定化菌剂直接加入水体介质中，搅拌均匀后并通气；
对于受喹诺酮类抗生素污染的土壤环境，则利用菌悬液加入土壤介质中，搅拌均匀，并通气。
本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果：
本发明生物法降解喹诺酮类抗生素的菌种及应用方法，能够有效去除水体、土壤等不同环境介质中的喹诺酮类抗生素污染，与物理吸附、化学降解等方法相比具有高效、节能和环保等优点。尤其是利用包埋剂将菌体固定，延长菌体寿命，菌剂作用效果佳，适应环境能力强。
附图说明
图1是Ochrobactrum sp.JOB的驯化过程图。
图2是Ochrobactrum sp.JOB的透射电子显微镜成像图。
图3是Ochrobactrum sp.JOB的16S rDNA的系统发育树。
图4是Ochrobactrum sp.JOB对CIP降解曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的简单修改和替换，均属于本发明的范围；若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1：喹诺酮类抗生素降解菌的分离与鉴定：
无机盐培养基(g·L-1)：K2HPO4为5.8，KH2PO4为4.5，(NH4)2SO4为2.0，MgCl2为0.16，CaCl2为0.02，Na2MoO4·2H2O为0.0024，KNO3为0.0012，FeCl3为0.0018，MnCl2·2H2O为0.0015，pH 7.0。
基础培养基(g·L-1)：胰蛋白胨10.0，酵母提取物5.0，NaCl为10.0，pH 7.5；培养基使用前先在121℃下高温灭菌20min。
喹诺酮类抗生素降解菌群的驯化：
驯化共分为3个阶段(如图1)，首先将100mL的无机盐培养基装于250mL的三角瓶中，于121℃高温灭菌20min，冷却后，在无菌条件下加入喹诺酮类抗生素环丙沙星储备液和酵母提取物，使其最终浓度分别为5mg/L和1.0g/L，同时，加入采集的粪肥样品(采集于广州某大型畜禽养殖场)5g，于30℃、150r/min的摇床避光培养7d后，以1％(v/v)的接种量接入到相同的培养基中，按照一定梯度调整喹诺酮类抗生素和酵母提取物的浓度进行驯化，其中喹诺酮类浓度梯度为5、10、15、20mg/L，酵母提取物浓度为1.0、0.5、0.3、0.2、0.1g/L。第一阶段驯化完毕得到的菌群ECI。将第一阶段得到的菌群以1％(v/v)的接种量接种至碳源为氨基酸混合物、维生素混合物以及腺嘌呤的无机盐培养基中。驯化方式与第一阶段相同，得到的菌群ECII。第三阶段驯化将得到的菌群ECII以1％(v/v)的接种量接种至碳源为氨基酸混合物的无机盐培养基中，驯化方式同第一阶段，最终得到菌群ECIII。
第二阶段中，所述的氨基酸混合物是苯丙氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和苏氨酸，终浓度均为5～20mg·L-1。
所述的维生素混合物是VB6、VB1、VB2、VB12、生物素、叶酸、烟酸和对氨基苯甲酸；其中，VB6的终浓度为5～10mg·L-1；其余的终浓度均为1～5mg·L-1。
所述的腺嘌呤的终浓度为1～8mg·L-1；
第三阶段中，所述的氨基酸混合物是苯丙氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸和苏氨酸，终浓度均为5～15mg·L-1。
喹诺酮类抗生素降解单菌的纯化：
取0.2mL菌群ECIII的基础培养基发酵液均匀涂抹于基础培养基平板上，培养一段时间待菌落长出。挑取不同菌落，反复进行划线分离，直至得到单菌落。最终分离获得一株细菌，编号为JOB。
透射电子显微镜样品的制备与观察：取纯化后的菌体按下述程序进行固定、脱水和包埋：2.5％磷酸缓冲戊二醛固定液固定72h；0.1mol/L磷酸缓冲液冲洗3次，每次10min；1％锇酸固定2h；0.1mol/L磷酸缓冲液冲洗3次，每次10min；50％乙醇脱水15min；70％乙醇脱水15min；90％乙醇脱水15min；90％丙酮：90％乙醇(1：1)脱水15min；90％丙酮脱水15min；100％丙酮脱水3次，每次10min；100％丙酮：包埋剂(1：1)包埋2h；纯包埋剂包埋2h；包埋后样品40℃烘箱12h，60℃聚合48h。包埋样品超薄切片后利用透射电子显微镜成像观察。透射电子显微镜下可以观察到该菌体呈杆状，有鞭毛(见图2)。
菌株的生理生化鉴定指标包括甲基红试验(M.R)、吲哚实验、接触酶鉴定、糖发酵试验。具体实验结果见表1。
菌株的16S rDNA鉴定：提取细菌总DNA，用细菌16S rDNA通用引物对该菌基因组进行PCR扩增。PCR产物经测序后，将测序结果与GenBank中已报道的16S rDNA序列同源性比对，并选取若干菌种做进化树分析。如图3所示，本发明分离纯化得到的菌株JOB的16S rDNA与苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)同源性最高。因此，本发明筛选获得的菌株鉴定为苍白杆菌属，命名为Ochrobactrum sp.JOB。
表1
实验名称 结果
革兰氏染色 G<sup>-</sup>
接触酶实验 +
吲哚实验 -
甲基红实验 +
葡萄糖发酵实验 -
乳糖发酵实验 -
注释：“+”表示阳性；“-”表示阴性。
Ochrobactrum sp.JOB的16S rDNA序列如SEQ ID NO：1所示：(1283bp)
AGCCGCCCGCTTGGGGAGCGGCAGAGCGGTGAGATACGCGTGGGAATCATCCATTTGCTACGGAACAACAGAAGGAAACGACCGCTAATACCGTATGCGCCCTTTGGGGGAAAGGATTTATCGGCAAATGATGAGCCCGCGTTGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGAACCATAGCTGGTCTGAGAGGATCATCAGCCACACTCGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGCGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATAGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGGCCTAGGGTTGTAAAGCTCATTCACCGGTGAAGATATTGACGGTAACCGGAGAAGAAGCGCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCGCGCGTAATACGAAGCCGGCTAGCGTTGTTCGGATTTACTGGGCGTATAGCGCACGTAGGCGGACTTTTAAGTCAGGGGTGAATTCCCGGGGCTCAACCGCGCAACTGCCTTTGATACTGGAAGTCTAGAGTATGGTAGAGGTGAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAATTTCGTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGAGTGGTCCATTACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGCGGAGCAAACAGCATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGTTAGCCGTCGGGGAGTTTACTCTCGGTGGCGCAAGCTAACGCATTTAACATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAATCTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCAGAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAAATCGAAGCAACGCGCAGTACCTTACCAGCCCTTGACATACCGGTCGCGGACACAGAGATGTGTCTTTCAGTTGGGCTGGACCGGATACAGGTGCTGCATGGCAGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCGGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCTTAGTTGCCAGCATTGAGTTGGGCACTCTAAGGGGACTGCCGGTGATAAGCCGAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGGCGGCTGCTGGCACGAAGTTAGCCGGGGCTTCTTCTCCGGTTACCGTCATTATCTTCACCGGTGAAAGAGCTTTACAACCCTAGGGCCTTCATCACTCACGCGGCATGGCTGGATCAGGCTTGCGCCCATTGTCCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGT。
实施例2：Ochrobactrum sp.JOB对喹诺酮类抗生素环丙沙星(CIP)降解能力的初步研究
种子菌悬液的制备：
将菌体接种于基础培养基中，于30℃、120r/min的恒温振荡器培养24h后，由基础培养基接种扩大培养。取扩大培养一定时间后的菌液，在6000r/min的转速下离心5min后，弃去上清液，菌体用磷酸缓冲液洗涤3次，配制成OD600nm为1.0的菌悬液，进行后续实验。为稀释平板计数的方法定量菌悬液的菌落形成单位(CFU/mL)。
降解菌株对降解能力的定量分析
本实验培养基为CIP无机盐培养基，通过在无机盐培养基中加入CIP和外加碳源酵母提取物，投加浓度分别为10mg/L和1g/L。对照组仅由无机盐培养基和CIP组成，无任何外加碳源。用氢氧化钠或盐酸调节培养基pH为7.1～7.3，分别投加5mL菌悬液后放入恒温振荡箱中避光培养。保持恒温振荡箱的温度和振荡速率分别为30℃和120r/min，每隔24h取样测定CIP浓度。
CIP残留浓度的测定
将待测菌液以4℃、8000r/min的条件离心15min后，将上清液通过0.45μm滤膜过滤，然后过HLB固相萃取小柱净化富集。用3mL洗脱液洗脱小柱。洗脱液在40℃水浴下用氮气吹至近干，用色谱甲醇-高纯水(60:40，V/V)定容至1mL，溶液过0.22μm膜，然后采用高效液相色谱进行定量检测分析。检测器为荧光检测器；ODS-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm，Waters)；激发波长280nm，发射波长450nm；进样量20μL；流动相：乙腈-0.067mol/L磷酸溶液(15:85，V/V)；流速：1.0mL/min。
结果如图4显示，所述菌株Ochrobactrum sp.JOB能够利用CIP作为共代谢碳源生长繁殖，并将CIP矿化。
实施例3
制备OD600nm为0.8～1.0的菌悬液，加入受喹诺酮类抗生素污染的水体中，菌悬液所占比例1％～5％(v/v)不断搅拌或通气，加速喹诺酮类抗生素去除效率。
实施例4
制备OD600nm为0.8～1.0的菌悬液，加入受喹诺酮类抗生素污染的土壤中，菌悬液加入量2％～8％(v/w)，搅拌均匀，并通气，加速喹诺酮类抗生素去除效率。
实施例5
用去离子水溶解海藻酸钠制备溶胶，然后加入0.5～2％的氯化钙溶液造粒，制成浓度为1％～5％(w/v)的包埋剂溶液，用生理盐水洗净，与活化培养后的喹诺酮类抗生素降解制成固定化菌剂，使包埋剂与降解菌的体积比为4:1。将固定化菌剂加入水体中，加入量为2％～10％，不断搅拌，加速水环境中喹诺酮类抗生素去除。
实施例6
取一定量的聚乙烯醇，溶于一定量的去离子水中作为包埋剂，使聚乙烯醇最终的浓度为5％～15％(w/v)，将聚乙烯醇与喹诺酮类抗生素降解菌混合，使降解菌：包埋剂溶液的体积比为1:2～1:4，将聚乙烯醇与微生物混合液滴入饱和硼酸溶液，进行凝胶化反应，静置2～8h后滤出固定化微生物颗粒。然后将固定化微生物颗粒转移到NaH2PO4(0.5～1M)溶液中，静置2～4h后滤出固定化微生物颗粒，去除表面水分，然后按照2～10％(w/v)水体中，不断搅拌，加速喹诺酮类抗生素去除。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 暨南大学
<120> 一株喹诺酮类抗生素降解菌及其应用
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1283
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Ochrobactrum sp. JOB的16S rDNA序列
<400> 1
agccgcccgc ttggggagcg gcagagcggt gagatacgcg tgggaatcat ccatttgcta 60
cggaacaaca gaaggaaacg accgctaata ccgtatgcgc cctttggggg aaaggattta 120
tcggcaaatg atgagcccgc gttggattag ctagttggtg gggtaaaggc ctaccaaggc 180
gacgaaccat agctggtctg agaggatcat cagccacact cggactgaga cacggcccag 240
actcctacgc ggaggcagca gtggggaata ttggacaata gggcgcaagc ctgatccagc 300
catgccgcgt gagtgatgaa gggcctaggg ttgtaaagct cattcaccgg tgaagatatt 360
gacggtaacc ggagaagaag cgccggctaa cttcgtgcca gcagcgcgcg taatacgaag 420
ccggctagcg ttgttcggat ttactgggcg tatagcgcac gtaggcggac ttttaagtca 480
ggggtgaatt cccggggctc aaccgcgcaa ctgcctttga tactggaagt ctagagtatg 540
gtagaggtga gtggaattcc gagtgtagag gtgaatttcg tagatattcg gaggaacacc 600
agtggcgaag gcggctgagt ggtccattac tgacgctgag gtgcgaaagc gtgcggagca 660
aacagcatta gataccctgg tagtccacgc cgtaaacgat gaatgttagc cgtcggggag 720
tttactctcg gtggcgcaag ctaacgcatt taacattccg cctggggagt acggtcgcaa 780
gattaaatct caaaggaatt gacgggggcc cgcagaagcg gtggagcatg tggtttaaat 840
cgaagcaacg cgcagtacct taccagccct tgacataccg gtcgcggaca cagagatgtg 900
tctttcagtt gggctggacc ggatacaggt gctgcatggc agtcgtcagc tcgtgtcgtg 960
agatgttggg ttaagtccgg caacgagcgc aaccctcgcc cttagttgcc agcattgagt 1020
tgggcactct aaggggactg ccggtgataa gccgagagga aggtggggat gacgtcaagt 1080
cctcatggcc cttacgggct gggctacaca cgtgctacaa tgggcggctg ctggcacgaa 1140
gttagccggg gcttcttctc cggttaccgt cattatcttc accggtgaaa gagctttaca 1200
accctagggc cttcatcact cacgcggcat ggctggatca ggcttgcgcc cattgtccaa 1260
tattccccac tgctgcctcc cgt 1283

Claims (9)

1.一株喹诺酮类抗生素降解菌，其特征在于：名称为苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)JOB，于2016年12月21日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC NO：60132；
所述的喹诺酮类抗生素为环丙沙星。
2.一种喹诺酮类抗生素降解菌生物菌剂，其特征在于：将权利要求1所述的喹诺酮类抗生素降解菌活化后制备成；该生物菌剂喹诺酮类抗生素降解菌中还包括碳源酵母提取物。
3.根据权利要求2所述的喹诺酮类抗生素降解菌生物菌剂，其特征在于：
所述的喹诺酮类抗生素降解菌生物菌剂为菌悬液或固定化菌剂。
4.根据权利要求3所述的喹诺酮类抗生素降解菌生物菌剂，其特征在于：
所述的喹诺酮类抗生素降解菌菌悬液的制备主要包括：Ochrobactrum sp.JOB菌种活化后，接种于基础培养基中，于28～35℃、100～150r/min的恒温振荡器培养20～24h后，由基础培养基接种扩大培养；将扩大培养后的菌液，在3500～6000r/min的转速下离心3～5min后，弃去上清液，菌体用磷酸缓冲液洗涤1～3次，配制成OD600nm为0.5～1.5的菌悬液。
5.根据权利要求3所述的喹诺酮类抗生素降解菌生物菌剂，其特征在于：
所述的喹诺酮类抗生素降解菌固定化菌剂所用的包埋剂，包括海藻酸钠、卡拉胶、琼脂糖和聚乙烯醇中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的喹诺酮类抗生素降解菌生物菌剂，其特征在于：
所述的喹诺酮类抗生素降解菌固定化菌剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将经过培养的喹诺酮类抗生素降解菌与冷却后的包埋剂溶液混合，降解菌与包埋剂的体积比为1:4～1:2；
(2)静置2～8h后滤出固定化为微生物颗粒，用生理盐水洗净，得到固定化菌剂，放置4℃保存，备用；
步骤(1)中所述的包埋剂溶液中最终包埋剂的浓度为1％～15％。
7.权利要求1所述的喹诺酮类抗生素降解菌与碳源酵母提取物联合在受喹诺酮类抗生素污染水环境或土壤的微生物修复中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：对于受喹诺酮类抗生素污染的水环境，利用菌悬液或固定化菌剂直接加入水体介质中，搅拌均匀后并通气。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：对于受喹诺酮类抗生素污染的土壤环境，则利用菌悬液加入土壤介质中，搅拌均匀，并通气。
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