CN113862174B - 一株抗生素降解菌及其在土壤污染修复中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于环境污染物生物处理技术领域，具体的说涉及一株抗生素(土霉素和/或恩诺沙星)降解菌及其在土壤污染修复中的应用。菌株为哈特草螺菌(Herbaspirillum huttiense)HHS1于2021年07月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No:22975。本发明菌株可应用于制备降解土霉素和恩诺沙星抗生素菌剂中，有利于丰富四环素类及喹诺酮类抗生素降解菌的菌种资源库。本发明将降解菌制成菌悬液，能够有效地去除水体和土壤等不同环境介质中的土霉素与恩诺沙星。该方法与物理吸附、化学氧化等方法相比具有高效、节能和环保等优点，为四环素类抗生素及喹诺酮类抗生素污染的治理提供有效的生物降解方法。

Description

一株抗生素降解菌及其在土壤污染修复中的应用

技术领域

本发明属于环境污染物生物处理技术领域，具体的说涉及一株抗生素 (土霉素和/或恩诺沙星)降解菌及其在土壤污染修复中的应用。

背景技术

抗生素为经细菌、真菌等微生物或化学作用产生的一系列抗病原体或其他生物活性的物质。抗生素可通过抑制蛋白质、细胞壁、叶酸等合成以及抑制DNA复制和转录等方式对自然环境中的生物造成威胁。大部分兽用抗生素无法被畜禽机体吸收，而通过粪尿排出体外，不仅污染土壤，还会污染水体，甚至对使用粪肥生长的植物造成破坏和损伤。大量的土霉素以及恩诺沙星通过人体或动物体内排出、制药污水排放、固废堆放等途径最终进入土壤系统，导致大量农耕用田中的土霉素和恩诺沙星检测含量过高。而土霉素与恩诺沙星具有较强的生物活性以及生物降解的特点，因此土壤中的高含量土霉素和恩诺沙星形成了直接或潜在污染，在日常生活中对生态环境以及人体健康造成不利影响。

农田抗生素污染土壤修复方法主要为植物修复、微生物修复法、光电催化法、高级氧化法等。由于光电催化降解、高级氧化降解等方式专一性差、成本高、易产生二次污染，生物降解如植物修复及微生物修复技术受到广泛关注。其中，微生物修复技术则是利用微生物对污染物进行分解。其成本低、效果好，无二次污染，对土壤微环境影响小，因此应用微生物修复技术前景广阔；但是能够实现更广的去除效果是目前继续解决的。

发明内容

为克服现有技术不足，本发明的首要目的在于提出一株抗生素(土霉素和/或恩诺沙星)降解菌。

本发明的又一目的在于提供所述降解菌在土壤修复中的应用。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一株抗生素降解菌，菌株为哈特草螺菌(Herbaspirillum huttiense) HHS1于2021年07月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC No: 22975。

一种所述菌株的应用，所述菌株在土壤污染修复中的应用。

所述菌株在降解污染土壤中抗生素中的应用。

所述抗生素为土霉素和/或恩诺沙星。

一种土壤污染修复菌剂，所述菌剂含所述菌株。

所述菌剂含有该菌株的培养液、培养液浓缩物或培养菌悬液。

所述菌剂培养液为将所述草螺菌菌株HHS1置于LB液体培养基中培养至对数生长期，即获得培养液；培养液离心收集沉淀，沉淀经无菌生理盐水重悬至OD₆₀₀为0.8～1.2的菌悬液。

一种所述菌剂的应用，述菌剂在降解污染土壤中抗生素的应用。

一种所述菌剂的使用方法，将所述菌剂施加至待处理污染土壤中，菌剂的OD₆₀₀＝1.0时，按5～10wt％的接种量施加入待处理污染土壤中。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明从含有抗生素污染的原位畜禽养殖土壤中筛选分离得到一株具有土霉素和恩诺沙星抗生素降解活性的菌株，该菌经分子鉴定为 Herbaspirillum huttiense菌。该菌具有降解土霉素和恩诺沙星的功能，有利于丰富四环素类和喹诺酮类抗生素降解菌的菌种资源库，为四环素类和恩诺沙星类抗生素污染的治理提供有效的生物降解方法。该菌株的适应能力强，耐低温，可以实现在微生物适应的低温环境对土霉素和恩诺沙星进行降解。

附图说明

图1为本发明实施例提供的HHS1菌株降解水体中土霉素和恩诺沙星的 LC-MS定量检测结果图。

图2为本发明实施例提供的HHS1菌株在低温环境下(15℃)降解土壤中土霉素和恩诺沙星的LC-MS定量检测结果图。

图3为本发明实施例提供的HHS1菌株在常温环境下(25℃)降解土壤中土霉素和恩诺沙星的LC-MS定量检测结果图。

图4为本发明实施例提供的HHS1菌株在常温环境下(35℃)降解土壤中土霉素和恩诺沙星的LC-MS定量检测结果图。

图5为本发明实施例提供的HHS1菌株在常温环境下(35℃)降解土壤中土霉素LC-MS定量检测结果图。

图6为本发明实施例提供的HHS1菌株在常温环境下(35℃)降解土壤中恩诺沙星LC-MS定量检测结果图。

图7为本发明实施例提供的HHS1菌株在常温环境下(35℃)存在重金属Cr及Cd时，土霉素和恩诺沙星LC-MS定量检测结果图。

具体实施方式

以下结合实例对本发明的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本发明，并不局限于本发明。

实施例1 土霉素和恩诺沙星抗生素降解菌的分离与筛选

本发明中草螺菌HHS1菌种由含有重金属-抗生素污染的畜禽养殖场地土壤中筛选、驯化得到，具体步骤如下：

A、用土霉素筛选畜禽养殖污染土壤中的耐抗生素菌种：

驯化过程为：采集被畜禽养殖场产生的动物粪便堆放的污染土壤样品，在了解土壤样品中的初始土霉素浓度后，将样品在将其加入至含有土霉素的无机盐培养基中进行梯度驯化，培养基中土霉素的浓度逐步升高，依次浓度分别为50μg/kg、100μg/kg、200μg/kg、500μg/kg、1mg/kg、2mg/kg)，每个浓度下在15℃、150r/min于摇床中避光培养7d，定期观察培养基中菌液状态，培养基中液体由透明变浑浊，则表明菌液生长良好；

选择在上述梯度驯化土霉素的浓度为2mg/L下筛得的耐受土霉素的混合菌转接到含有2mg/L土霉素的固体无机盐培养基上，15℃避光培养，共转接6次；以使土霉素降解菌占据生长优势。

将上述获得混合菌接种到含有1mg/L土霉素的无机盐培养基中，15℃， 150r/min避光培养，于0天和3天取样过0.22μm滤膜后上LC-MS测定其降解效果；经降解实验可知，3天后土霉素的去除效率可达54.20％。将所得混合菌接种至含有2mg/L的液体无机盐培养基中，培养至OD₆₀₀为1.0，经无菌生理盐水重悬，最终获得耐受且可降解土霉素的混合微生物菌悬液。

B、将上述驯化后获得混合微生物菌悬液用接种环分别接种于固体LB 培养基、固体无机盐培养基以及固体马铃薯培养基上进行划线培养；上述三种培养基在使用时均保证含有2mg/L的土霉素；在不同培养基下于15℃、避光培养，每隔五天对生长出来的微生物进行一次转接，重复六次，使得各培养基中菌株得以分离、纯化，最终获得单一菌株；

C、将分离纯化的每一单一菌株接种到含有1mg/L的土霉素抗生素为唯一碳源的无机盐培养基中进行降解实验，考察单一菌株对无机盐培养基中土霉素的降解能力，最终，选择单一菌株中对抗生素降解效果最高的微生物HHS1。

所得纯化后单菌株为Herbaspirillum huttiense菌，命名为HHS1，于 2021年07月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏编号为：CGMCC No:22975。

上述获得菌株经过DNA提取，PCR扩增，序列测序及序列比对，菌株 HHS1的16srDNA序列与草螺菌Herbaspirillum huttiense同源性达99.93％以上，亲缘关系最近，鉴定为草螺菌，简称为HHS1。

筛选用各培养基成分：

无机盐培养基(g/L)：((NH₄)₂SO₄为1、KH₂PO₄为1、K₂HPO₄为1、 NaCl为0.5、FeCl₃6H₂O为0.05、CaCl₂为0.02，无水葡萄糖为10，调pH＝7.0)

基础培养基(g/L)：酵母粉为5，蛋白胨为10，NaCl为10；培养基使用前现在121℃下高温灭菌20min。

马铃薯培养基：200g切块的新鲜马铃薯与加热炉上煮沸20min后，滤去土豆块后向上清液加入20g葡萄糖，定容至1L。

无机盐固体培养基(g/L)：((NH₄)₂SO₄为1、KH₂PO₄为1、K₂HPO₄为1、NaCl为0.5、FeCl₃6H₂O为0.05、CaCl₂为0.02，无水葡萄糖为10，调pH＝7.0)，15-20g琼脂粉加热煮沸。

LB培养基(g/L)：酵母粉为5，蛋白胨为10，NaCl为10；15-20g琼脂粉加热煮沸。

马铃薯固体培养基：200g切块的新鲜马铃薯与加热炉上煮沸20min 后，滤去土豆块后向上清液加入20g葡萄糖，定容至1L。15-20g琼脂粉加热煮沸。

培养基使用前在115℃(含葡萄糖)/121℃(不含葡萄糖)下高温灭菌 30min。

16s rDNA序列为：

TGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCATGCCTTACACATGCAAGTCGAACGGCAGCATAGGA GCTTGCTCCTGATGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATATATCGGAACGTGCCCTAGAGTGGG GGATAACTAGTCGAAAGACTAGCTAATACCGCATACGATCTACGGATGAAAGTGGGGGATCGCA AGACCTCATGCTCCTGGAGCGGCCGATATCTGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAAGCCTACCAA GGCAACGATCAGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCA GACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGGGCAACCCTGATCCAGCAATG CCGCGTGAGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCTCTTTTGTCAGGGAAGAAACGGTAGTAG CGAATAACTATTACTAATGACGGTACCTGAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCC GCGGTAATACGTAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGT TGTGTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAATTGCATTTGAGACTGCACGGCTA GAGTGTGTCAGAGGGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGATATGTGGAGGAA TACCGATGGCGAAGGCAGCCCCCTGGGATAACACTGACGCTCATGCACGAAAGCGTGGGGAGC AAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCTACTAGTTGTCGGGTCTTAAT TGACTTGGTAACGCAGCTAACGCGTGAAGTAGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAA ACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAACG CGAAAAACCTTACCTACCCTTGACATGGATGGAATCCCGAAGAGATTTGGGAGTGCTCGAAAG AGAACCATCACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTC CCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGCTACGAAAGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGT GACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGGGTAGGGCTTCAC ACGTCATACAATGGTACATACAGAGGGCCGCCAACCCGCGAGGGGGAGCTAATCCCAGAAAGT GTATCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCG GATCAGCATGTCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAG CGGGTTTTACCAGAAGTGGGTAGCCTAACCGCAAGGAGGGCGCTCACCACGGTAGGATTCGTG ACTGGGGTGAAGTCGTA

对上述筛选获得菌株HSS1对土霉素降解能力测试方法为：将纯化后的不同单一菌株根据其性质分别接种于LB、PDA及无机盐培养基中，并于 15℃恒温培养24h至OD₆₀₀为1.0，通过8000rpm离心将菌种与培养基分离，再将菌种均匀溶解于无菌盐水中制成菌悬液，且保持接种液OD₆₀₀为1.0。将接种液接种至2mg/L的土霉素无机盐培养基中，接种量为2％，置于15℃恒温培养箱避光培养，摇床转速为150rpm/min，定时取样检测无机盐培养基中土霉素的残留量，每组处理设置三个平行，根据监测结果可知，在3d 内对土霉素的降解效果最好的单一菌株达100％(参见图1)。

该菌株进一步分析对恩诺沙星的降解效果

将菌悬液加入含有1mg/L恩诺沙星的无机盐培养基中，接种量为2％，置于15℃恒温培养箱避光培养，摇床转速为150rpm/min，定时取样检测无机盐培养基中恩诺沙星的残留量，在3d时测定其对恩诺沙星的降解效果达 58.27％。结果见图1。

结果表明：该菌株对土霉素具有良好的降解效果，同时对恩诺沙星也具有耐受性和降解效果。相较于一般的降解菌株，该菌株可以同时实现对土霉素和恩诺沙星的降解。最终，将该菌株作为目标菌株进行鉴定。

实施例2:

菌剂的制备：将上述获得单一菌株HHS1于无菌的无机盐液体培养基中进行活化，活化后按2wt％的接种量接种于液体LB培养基中并置于15℃恒温培养箱培养至对数期，然后使用无菌生理盐水将菌种冲洗制成OD₆₀₀为1.0的菌悬液即为菌剂。

利用上述获得降解菌剂对低温土壤环境中(15℃)土霉素和恩诺沙星修复试验：

供试土壤取自辽宁省鞍山市某畜禽养殖场地的污染土壤，其质地为壤沙土，pH为7.20，土霉素和恩诺沙星的含量分别为331μg/kg和228μg/kg，过1mm筛；取100g土壤向其中接种5％微生物菌剂，置于15℃恒温环境下培养一个月。土霉素和恩诺沙星污染土壤修复试验设置两种处理：

处理1:对照处理：对照处理1原始土壤(不加菌)0天；对照处理2 原始土壤(不加菌)静置30天；

处理2:菌剂处理(菌剂接种量占土壤的5％(w:w))。

每种处理设定三次平行，分别于0天，30天取土壤样品对土霉素及恩诺沙星的残留量进行分析。整个实验过程中保证土壤含水量为20％。实验结果表明：HHS1菌株可耐受土霉素和恩诺沙星，且对土霉素和恩诺沙星具有一定的降解活性。菌悬液在30天对土霉素和恩诺沙星的降解效果较0天分别下降了41.81％和26.05％。结果见图2。

实施例3:

利用上述获得降解菌剂对常温土壤环境中(25℃)土霉素和恩诺沙星修复试验：

供试土壤取自辽宁省鞍山市某畜禽养殖场地的污染土壤，其质地为壤沙土，pH为7.20，土霉素和恩诺沙星的含量分别为330μg/kg和228μg/kg，过1mm筛；取100g土壤向其中接种5％微生物菌剂，置于25℃恒温环境下培养一个月。土霉素和恩诺沙星污染土壤修复试验设置两种处理：

处理1:对照处理：对照处理1原始土壤(不加菌)0天；对照处理2 原始土壤(不加菌)静置30天；

处理2:菌剂处理(实施例2记载菌剂)(菌剂接种量占土壤的5％(w:w))。

每种处理设定三次平行，分别于0天，30天取土壤样品对土霉素及恩诺沙星的残留量进行分析。整个实验过程中保证土壤含水量为20％。实验结果表明：HHS1菌株可耐受土霉素和恩诺沙星，且对土霉素和恩诺沙星具有一定的降解活性。菌悬液在30天对土霉素和恩诺沙星的降解效果分别达到14.47％和33.88％。结果见图3。

实施例4

利用上述获得降解菌剂对常温土壤环境中(35℃)土霉素和恩诺沙星修复试验：

供试土壤取自辽宁省鞍山市某畜禽养殖场地的污染土壤，其质地为壤沙土，pH为7.20，土霉素和恩诺沙星的含量分别为330μg/kg和225μg/kg，过1mm筛；取100g土壤向其中接种5％微生物菌剂，置于35℃恒温环境下培养一个月。土霉素和恩诺沙星污染土壤修复试验设置两种处理：

处理1:对照处理：对照处理1原始土壤(不加菌)0天；对照处理2 原始土壤(不加菌)静置30天；

处理2:菌剂处理(实施例2记载菌剂)(菌剂接种量占土壤的5％(w:w))。

每种处理设定三次平行，分别于0天，30天取土壤样品对土霉素及恩诺沙星的残留量进行分析。整个实验过程中保证土壤含水量为20％。实验结果表明：HHS1菌株可耐受土霉素和恩诺沙星，且对土霉素和恩诺沙星具有一定的降解活性。菌悬液在30天较0天对土霉素和恩诺沙星的降解效果分别达到58.18％和62.72％。结果见图4。结合实施例2-4结果可知：不同温度下HHS1菌剂对土霉素和恩诺沙星均具有一定降解效果，其中35℃下二者降解效果最优。

实施例5:

菌剂的制备：将上述获得单一菌株HHS1于无菌的无机盐液体培养基中进行活化，活化后按2wt％的接种量接种于液体LB培养基中并置于15℃恒温培养箱培养至对数期，然后使用无菌生理盐水将菌种冲洗制成OD₆₀₀为1.0的菌悬液即为菌剂。

利用上述获得降解菌剂对常温土壤环境中(35℃)土霉素修复试验：

供试土壤取自辽宁省海城市某畜禽养殖场地的污染土壤，其质地为壤土，pH为6.42，土霉素含量为128μg/kg，过1mm筛；取100g土壤向其中接种5wt％微生物菌剂，置于35℃恒温环境下培养一个月。土霉素污染土壤修复试验设置两种处理：

处理1:对照处理：对照处理1原始土壤(不加菌)0天；对照处理2 原始土壤(不加菌)静置30天；

处理2:菌剂处理(菌剂接种量占土壤5％(w:w))。

每种处理设定三次平行，分别于0天，30天取土壤样品对土霉素及恩诺沙星的残留量进行分析。整个实验过程中保证土壤含水量为20％。结果见图6，实验结果表明：HHS1菌株可耐受土霉素，且对土霉素具有一定的降解活性。菌悬液在30天对土霉素的降解效果达到45.5％。结果见图5。

实施例6:

利用HHS1菌剂对常温土壤环境下(35℃)恩诺沙星的修复试验：

供试土壤取自辽宁省岫岩满族自治县某畜禽养殖场地的污染土壤，其质地为壤沙土，pH为7.62，恩诺沙星的含量为436μg/kg，过1mm筛；取 100g土壤向其中接种5wt％微生物菌剂，置于35℃恒温环境下培养一个月。恩诺沙星污染土壤修复试验设置两种处理：

处理1:对照处理：对照处理1原始土壤(不加菌)0天；对照处理2 原始土壤(不加菌)静置30天；

处理2:菌剂处理(实施例5制备菌剂)(菌剂接种量占土壤5％(w:w))。

每种处理设定三次平行，分别于0天，30天取土壤样品对恩诺沙星的残留量进行分析。整个实验过程中保证土壤含水量为20％。结果见图7，实验结果表明：HHS1菌株可耐受土霉素和恩诺沙星，且对恩诺沙星具有一定的降解活性。菌悬液在30天恩诺沙星的降解效果达到38.9％。结果见图6。

根据实施例5-6可知：该菌株在恩诺沙星或土霉素的环境下降解效果依旧良好。不同土壤环境下菌株效果显著。

实施例7:土壤中重金属离子Cr²⁺、Cd²⁺存在对HHS1菌剂修复恩诺沙星污染土壤具有微弱影响

菌剂的制备：将上述获得单一菌株HHS1于无菌的无机盐液体培养基中进行活化，活化后按2wt％的接种量接种于液体LB培养基中并置于35℃恒温培养箱150r/min培养至对数期，然后使用无菌生理盐水将菌种冲洗制成OD₆₀₀为1.0的菌悬液即为菌剂。

供试土壤取自辽宁省沈阳市某畜禽养殖场地的污染土壤，其质地为壤沙土，pH为7.03，土霉素和恩诺沙星的含量分别为330μg/kg和220μg/kg，土壤含有较高含量的重金属Cr和Cd。其重金属总量达130和0.56mg/kg。土壤试验前过1mm筛；取100g土壤向其中接种5％微生物菌液，置于35℃恒温环境下培养一个月。土霉素和恩诺沙星污染土壤修复试验设置两种处理：

处理1:对照处理：对照处理1原始土壤(不加菌)0天；对照处理2 原始土壤(不加菌)静置30天；

处理2:菌剂处理(接种量5％(w:w))。

每种处理设定三次平行，分别于0天，30天取土壤样品对土霉素及恩诺沙星的残留量进行分析。整个实验过程中保证土壤含水量为20％。参考实施例1并于实施例4和实施例5进行对比，含有高浓度的Cr和Cd环境下土霉素和恩诺沙星降解效果不明显，微生物菌仍可使土霉素和恩诺沙星的含量降低至100μg/kg以下。可见重金属离子Cr⁶⁺和Cd²⁺的存在不会对 HHS1修复恩诺沙星污染土壤产生影响，证实HHS1菌悬液具有较好的环境适应能力。结果见图7。

综上所述，本发明提供的菌悬液是一种具有较高抗毒性，对目标抗生素耐受性强，具有良好降解效果的微生物。本发明筛选的游离单菌可在几小时内迅速生长至对数期，繁殖速度快，适应能力强，从而能够高效降解土壤中的土霉素和恩诺沙星抗生素。生物降解产物毒性小，速度快，不会造成二次污染，价格低廉，值得推广。

序列表

<110> 中国科学院沈阳应用生态研究所

<120> 一株抗生素降解菌及其在土壤污染修复中的应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1471

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

tggctcagat tgaacgctgg cggcatgcct tacacatgca agtcgaacgg cagcatagga 60

gcttgctcct gatggcgagt ggcgaacggg tgagtaatat atcggaacgt gccctagagt 120

gggggataac tagtcgaaag actagctaat accgcatacg atctacggat gaaagtgggg 180

gatcgcaaga cctcatgctc ctggagcggc cgatatctga ttagctagtt ggtggggtaa 240

aagcctacca aggcaacgat cagtagctgg tctgagagga cgaccagcca cactgggact 300

gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtgggga attttggaca atgggggcaa 360

ccctgatcca gcaatgccgc gtgagtgaag aaggccttcg ggttgtaaag ctcttttgtc 420

agggaagaaa cggtagtagc gaataactat tactaatgac ggtacctgaa gaataagcac 480

cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtagggt gcaagcgtta atcggaatta 540

ctgggcgtaa agcgtgcgca ggcggttgtg taagtcagat gtgaaatccc cgggctcaac 600

ctgggaattg catttgagac tgcacggcta gagtgtgtca gaggggggta gaattccacg 660

tgtagcagtg aaatgcgtag atatgtggag gaataccgat ggcgaaggca gccccctggg 720

ataacactga cgctcatgca cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat accctggtag 780

tccacgccct aaacgatgtc tactagttgt cgggtcttaa ttgacttggt aacgcagcta 840

acgcgtgaag tagaccgcct ggggagtacg gtcgcaagat taaaactcaa aggaattgac 900

ggggacccgc acaagcggtg gatgatgtgg attaattcga tgcaacgcga aaaaccttac 960

ctacccttga catggatgga atcccgaaga gatttgggag tgctcgaaag agaaccatca 1020

cacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 1080

cgagcgcaac ccttgtcatt agttgctacg aaagggcact ctaatgagac tgccggtgac 1140

aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaag tcctcatggc ccttatgggt agggcttcac 1200

acgtcataca atggtacata cagagggccg ccaacccgcg agggggagct aatcccagaa 1260

agtgtatcgt agtccggatt ggagtctgca actcgactcc atgaagttgg aatcgctagt 1320

aatcgcggat cagcatgtcg cggtgaatac gttcccgggt cttgtacaca ccgcccgtca 1380

caccatggga gcgggtttta ccagaagtgg gtagcctaac cgcaaggagg gcgctcacca 1440

cggtaggatt cgtgactggg gtgaagtcgt a 1471

Claims (7)

1.一株抗生素降解菌，其特征在于：菌株为哈特草螺菌（Herbaspirillum huttiense）HHS1，于2021年07月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC No: 22975。

2.一种权利要求1所述菌株的应用，其特征在于：

所述菌株在降解污染土壤中抗生素中的应用；

所述抗生素为土霉素和/或恩诺沙星。

3.一种土壤污染修复菌剂，其特征在于：所述菌剂含权利要求1所述菌株。

4.按权利要求3所述土壤污染修复菌剂，其特征在于：所述菌剂含有该菌株的培养液、培养液浓缩物或培养菌悬液。

5.按权利要求4所述土壤污染修复菌剂，其特征在于：所述培养液为将所述哈特草螺菌菌株HHS1置于LB液体培养基中培养至对数生长期，即获得培养液；培养液离心收集沉淀，沉淀经无菌生理盐水重悬至OD₆₀₀为0.8～1.2的菌悬液。

6.一种权利要求3所述菌剂的应用，其特征在于：所述菌剂在降解污染土壤中抗生素的应用；所述抗生素为土霉素和/或恩诺沙星。

7.一种权利要求3所述菌剂的使用方法，其特征在于：将所述菌剂施加至待处理污染土壤中，菌剂的OD₆₀₀=1.0时，按5～10wt%的接种量施加入待处理污染土壤中；所述抗生素为土霉素和/或恩诺沙星。

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