CN106893000A - 一种白芨胶提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种白芨胶提取方法，该方法经过浸泡‑切片‑热水回流提取‑酶解‑脱色‑离心‑醇沉‑大孔吸附‑离子交换吸附‑脱水干燥步骤，显著提升白芨胶的提取率和纯度，提取过程中未接触其他有机溶剂，提取工艺相对简单，可操作性强，能实现大规模生产，产品为无臭无味粉末，纯度高，能广泛用于食品生产加工、医药及日化产品领域。
Description
技术领域
本发明属于医药化工领域，具体涉及到一种白芨胶提取工艺。
背景技术
白芨（Bletilla striata），属多年生草本球根植物（块根），中医认为白芨味苦、甘而涩，性微寒，入肺经。具有止血、消肿的功能，可治疗生疮出血、痈疽肿毒、溃疡、手足皲裂。《渭南本草》谓其“治痛伤肺气，补肺虚，止咳嗽，消肺疹咳血，收敛肺气”。白芨的主要成分是白芨胶，主要成分是葡萄甘露聚糖的大量水溶性的多糖，广泛用于食品加工、医药及日化产品领域。白芨胶具有调节身体代谢，调节细胞中生长因子的含量，能增强血小板第三因子活性，显著缩短凝血时间及凝血酶原形成时间，抑制纤维蛋白溶酶活性，对局部出血有很好的治疗效果；同时白芨胶还具有抗溃疡作用，并可治疗胃及十二指肠溃疡。由于白芨有高度钻性，可在胃内形成胶状膜，从而促使溃疡面愈合；其次白芨胶还具有消炎抗菌的功效，白芨中的有益成分对葡萄球菌及链球菌有抑菌作用，可在局部形成一保护膜，能控制及防止胃部感染；再次白芨胶还可以作为辅料添加到药品中，延长主药的停滞时间，降低药物的毒性。
近年来对白芨多糖介入治疗肝癌进行了系统的实验，并在临床应用研究中证实白芨多糖具有阻断肝癌供血动脉及其侧枝循环的功效，能有效抑制肝癌的生长和复发。白芨多糖是一种安全、有效的抗癌药物和肝动脉栓塞剂，运用于动物实验治疗肝癌时，其疗效优于免疫反应调节剂、抗血管生成药物以及传统的单纯ＴＡＣＥ治疗。钱骏等研究发现，将白芨多糖作为肝动脉栓塞剂，并结合化疗药和肝动脉结扎术能明显抑制肝细胞癌的生长，白芨多糖的介入治疗肝癌具有其优越性和广阔的发展前途。此外，相关研究还表明，在治疗溃疡型结肠炎、手术中止血、急性上消化道大出血以及促进伤口皮肤愈合等方面，白芨多糖也有着广阔的应用空间。作为一种天然高分子材料，白芨多糖是极有发展前途的生物敷料材料，具有良好的生物相容性和生物可降解性。彭锐研究发现，以明胶和白芨胶为支架材料，把中药提取物复合到其中，通过冷冻干燥法制备海绵状多孔材料，空隙分布均匀，互相连通，用于培养小鼠成纤维细胞，能够使细胞更好地黏附生长。
由于科技的发展白芨的功能逐步透明化，白芨市场需求也日渐扩大，近年来我国大部分地区的野生白芨遭到过度采挖，导致其野生自然资源急剧减少，濒临灭绝，被国家列为重点保护的野生药用植物之一。而增加白芨的市场供应方法一则是增加白芨的种植面积，加大植物组织培养力度，二则是增加白芨药用功效成分的利用效率。本发明是基于后者开展的系列研究。目前白芨的提取工艺大多是粗放的水提醇沉法，提取效率不高，提取物纯度不高，应用范围相对较窄。为了加大白芨生物资源开发，开展白芨的有效功效成分提取等深加工项目，增加药物提取效率和利用率，增加药用资源的副增加值，变得很有意义。
发明内容
本发明提供了一种白芨胶提取方法，主要包括浸泡-切片-热水回流提取-浓缩-酶解-脱色-离心-醇沉-大孔吸附-离子交换吸附-脱水干燥等工艺步骤，经大量的平行对比试验和正交试验，最终确定白芨胶的最佳提取参数，工艺具体包含以下步骤：
（1）取白芨用40-55℃温热水进行浸泡，水料质量比为4-7:1，浸泡时间3-5小时，浸泡之后切片，备用；
（2）按照质量比1:12-20的比例，在白芨片中加入纯化水，先用180W-250W超声波处理15-25min，再进行加热回流提取，回流提取时间30-60min，回流提取温度80-90℃，回流提取结束后分离渣液，渣料重复回流提取2-3次；
（3）合并回流提取液，浓缩至比重为1.03-1.10止；
（4）待浓缩液冷却到40-55℃时，加入浓缩物质量0.8-2.0%的酶制剂进行水解，水解时间40-60min，然后加入浓缩物质量0.3-0.5%的活性炭进行吸附脱色脱药味，处理时间20-35min，最后离心分离收集上清液；
（5）按体积比1:5-8的比例，在上清液中加入无水乙醇，醇沉18-26h后，离心收取沉淀，沉淀用无水乙醇洗涤2-3次；
（6）洗涤后的沉淀加入蒸馏水溶解，溶液依次经过大孔吸附树脂和离子交换树脂处理，过柱后收集滤液；
（7）滤液浓缩干燥，即得白芨胶。
所述切片厚度为1.5-3mm。
所述酶制剂为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、羧基肽酶、氨基肽酶中一种或任意比几种。
所述大孔吸附树脂为DB-8、DB-301、HPD-100或NKA-9。
所述离子交换树脂为DEAE-01、DEAE-52、DEAE-cellulose（二乙氨基乙基纤维素）或CL-6B。
本发明白芨胶的分离提取纯化精制工艺，步步相扣，旨在提高白芨中药材的提取率和提取物的纯度；白芨的主要功效成分是白芨胶，白芨胶是一种葡萄甘露聚糖，水溶性极强，所以采用热水回流法主提，为了提升提取的有效回收率，进行了大量的平行试验和正交试验分析，最终得出提取时物料的要求，提取温度、提取时间、提取次数等最佳参数。对干的白芨浸泡后切片再超声，破坏植物细胞，有利于药用有效成分的溶出；提取物中含有大量的淀粉、蛋白质等杂质，采用酶法处理，酶水解除去蛋白质；用活性炭处理解决了白芨粗提取物有颜色而且有强烈中药味的劣势；最后通过大孔吸附树脂和离子交换树脂，进一步除去少量的蛋白质和矿物离子，最终产品为无臭无味，不溶于乙醇的粉末，提取物纯度较高，可以大量用在食品精加工、医药和化妆品领域，本发明方法减少了杂质，保证了产品功效的稳定性，其本发明方法简单，易操作，适于工业化生产和市场推广应用。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容。
实施例1：
（1）取干白芨用40℃温热水进行浸泡，水料质量比为4:1，浸泡5小时后进行切片，切片厚度为2mm，备用；
（2）按照质量比为1:12的比例，在白芨片中加入纯化水，先用200w超声波处理22min，再进行加热回流提取，回流提取时间50min，回流提取温度85℃，回流结束后分离渣液，渣料重复回流提取3次；
（3）合并回流提取液，浓缩至比重为1.03止；
（4）待浓缩液温度冷却到45℃时，加入浓缩物质量1.0%酶制剂(胰蛋白酶+羧肽酶，质量比1:1)进行水解，水解时间50min，然后加入浓缩物质量0.3%的活性炭进行吸附脱色脱药味，处理时间25min，最后离心分离收集上清液；
（5）按体积比1:6的比例，在上清液中加入无水乙醇，醇沉18h，离心收取沉淀，对沉淀用无水乙醇洗涤3次；
（6）洗涤后的沉淀加入蒸馏水进行溶解，依次经过大孔吸附树脂（NKA-9）和离子交换树脂（CL-6B），过柱后收集滤液；
（7）滤液浓缩干燥，即得白芨胶。
对提取的白芨胶采用苯酚-硫酸总糖测定法和3,5-二硝基水杨酸比色还原糖测定法进行多糖含量测定，测得白芨胶的提取率为23.5%，白芨胶的纯度达到95.21%；将白芨胶配成1%的水溶液进行鉴别鉴定，白芨多糖胶溶液可以直接进行Feling反应，不产生沉淀，但经盐酸或硫酸处理后能够发生阳性反应；说明提取的白芨多糖纯度较高，杂质含量较少，可以应用在食品添加剂及医用材料方面。
实施例2
（1）取干白芨用50℃温热水进行浸泡，水料质量比为6:1，浸泡4小时后进行切片，切片厚度为3mm，备用；
（2）按照质量比为1:18的比例，在白芨片中加入纯化水，先用180W超声波处理18min，再进行加热回流提取，回流提取时间45min，回流提取温度88℃，回流结束后分离渣液，渣料重复回流提取3次；
（3）合并回流提取液，浓缩至比重为1.05止；
（4）待浓缩液温度冷却到45℃时，加入浓缩物质量1.2%酶制剂(胰蛋白酶)进行水解，水解时间55min，再加入浓缩物质量0.4%的活性炭进行吸附脱色脱药味，处理时间20min，然后进行离心分离收取上清液；
（5）按体积比1:5的比例，在上清液中加入无水乙醇，醇沉24h，离心收取沉淀，对沉淀用无水乙醇洗涤2次；
（6）洗涤后的沉淀加入蒸馏水进行溶解，依次经过大孔吸附树脂（HPD-100）和离子交换树脂（DEAE-cellulose），过柱后收集滤液；
（7）滤液浓缩干燥，即得白芨胶。
对提取的白芨胶采用苯酚-硫酸总糖测定法和3,5-二硝基水杨酸比色还原糖测定法进行多糖含量测定，测得白芨胶的提取率为24.7%，白芨胶的纯度达到93.3%。白及胶配成1%的水溶液进行鉴别鉴定, 精制白芨多糖胶溶液直接进行Feling反应，不产生沉淀，但经盐酸或硫酸处理后能够发生阳性反应。
实施例3
（1）取干白芨用46℃温热水进行浸泡，水料质量比为4.5:1，浸泡4.5小时后进行切片，切片厚度为1.5mm，备用；
（2）按照质量比为1:16的比例，在白芨片中加入纯化水，先用250W超声波处理15min，再进行加热回流提取，回流提取时间60min，回流提取温度85℃，回流结束后分离渣液，渣料重复回流提取3次；
（3）合并回流提取液，浓缩至比重为1.09止；
（4）待浓缩液温度冷却到55℃时，加入浓缩物质量1.5%酶制剂(木瓜蛋白酶+氨肽酶，质量比2:1)进行水解，水解时间55min，然后加入浓缩物质量0.4%的活性炭进行吸附脱色脱药味，处理时间30min，然后进行离心分离收取上清液；
（5）按体积比1:7的比例，在上清液中加入无水乙醇，醇沉22h，离心收取沉淀，对沉淀用无水乙醇洗涤3次；
（6）洗涤后的沉淀加入蒸馏水进行溶解，依次经过大孔吸附树脂（DB-8）和离子交换树脂（DEAE-01），过柱后收集滤液；
（7）滤液浓缩干燥，即得白芨胶。
对提取的白芨胶采用苯酚-硫酸总糖测定法和3,5-二硝基水杨酸比色还原糖测定法进行多糖含量测定，测得白芨胶的提取率为23.0%，白芨胶的纯度达到94.05%。白及胶配成1%的水溶液进行鉴别鉴定, 精制白芨多糖胶溶液直接进行Feling反应，不产生沉淀，但经盐酸或硫酸处理后能够发生阳性反应。
Claims (5)
1.一种白芨胶提取方法，其特征在于，包含以下步骤：
（1）取白芨用40-55℃温热水进行浸泡，水料质量比为4-7:1，浸泡3-5小时后切片，备用；
（2）按照质量比1:12-20的比例，在白芨片中加入纯化水，先用180W-250W超声波处理15-25min，再进行加热回流提取，回流提取时间30-60min，回流提取温度80-90℃，回流提取结束后分离渣液，渣料重复回流提取2-3次；
（3）合并回流提取液，浓缩至比重为1.03-1.10止；
（4）待浓缩液冷却到40-55℃时，加入浓缩物质量0.8-2.0%的酶制剂进行水解，水解时间40-60min，然后加入浓缩物质量0.3-0.5%的活性炭进行吸附脱色脱药味，处理时间20-35min，最后离心分离收集上清液；
（5）按体积比1:5-8的比例，在上清液中加入无水乙醇，醇沉18-26h后，离心收取沉淀，沉淀用无水乙醇洗涤2-3次；
（6）洗涤后的沉淀加入蒸馏水溶解，溶液依次经过大孔吸附树脂和离子交换树脂处理，过柱后收集滤液；
（7）滤液浓缩干燥，即得白芨胶。
2.根据权利要求1所述的白芨胶提取方法，其特征在于：切片厚度为1.5-3mm。
3.根据权利要求1所述的白芨胶提取方法，其特征在于：酶制剂为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、羧基肽酶、氨基肽酶中一种或几种。
4.根据权利要求1所述的白芨胶提取方法，其特征在于：大孔吸附树脂为DB-8、DB-301、HPD-100或NKA-9。
5.根据权利要求1所述的白芨胶提取方法，其特征在于：离子交换树脂为DEAE-01、DEAE-52、DEAE-cellulose或CL-6B。
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