CN106866812A - 一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法 - Google Patents
一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106866812A CN106866812A CN201710106475.2A CN201710106475A CN106866812A CN 106866812 A CN106866812 A CN 106866812A CN 201710106475 A CN201710106475 A CN 201710106475A CN 106866812 A CN106866812 A CN 106866812A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- urine
- follicle
- fsh
- diatomite
- stimulating hormone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 title claims abstract description 67
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 32
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 claims abstract description 74
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 claims abstract description 74
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 claims abstract description 74
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 claims abstract description 33
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 claims abstract description 31
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical group CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 20
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 18
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims description 12
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims description 12
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 8
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 4
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 abstract description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 12
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 12
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 6
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 6
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000002394 ovarian follicle Anatomy 0.000 description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 2
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 2
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000029219 regulation of pH Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- ZDRRIRUAESZNIH-BZGUUIOASA-N (2s)-1-[(4r,7s,10s,13s,16s,19r)-19-amino-7-(2-amino-2-oxoethyl)-13-[(2s)-butan-2-yl]-10-[(1r)-1-hydroxyethyl]-16-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carbonyl]-n-[(2s)-1-[(2-amino-2-oxoethyl)amino]- Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)[C@@H](C)O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZDRRIRUAESZNIH-BZGUUIOASA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical group CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000027877 Disorders of Sex Development Diseases 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010057021 Menotropins Proteins 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 108010047196 Urofollitropin Proteins 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000007233 catalytic pyrolysis Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 229940001501 fibrinolysin Drugs 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000005611 hermaphroditism Diseases 0.000 description 1
- 230000010196 hermaphroditism Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 210000002570 interstitial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001592 luteinising effect Effects 0.000 description 1
- 230000001294 luteotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 230000001072 progestational effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000013327 true hermaphroditism Diseases 0.000 description 1
- 229960004371 urofollitropin Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6456—Plasminogen activators
- C12N9/6462—Plasminogen activators u-Plasminogen activator (3.4.21.73), i.e. urokinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g.hCG [human chorionic gonadotropin]; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21073—Serine endopeptidases (3.4.21) u-Plasminogen activator (3.4.21.73), i.e. urokinase
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法,包括如下步骤:(1)将尿液浓缩后调节pH至10‑11;(2)向步骤(1)所得溶液中加入硅藻土后过滤,所得硅藻土滤渣经处理得到较高纯度的尿激酶粗品;(3)将步骤(2)过滤后的滤液调节pH至5‑6,然后将促卵泡激素和黄体生成素进行沉淀,加入硅藻土处理后得到促卵泡激素和黄体生成素粗品。本发明的提取方法可以同时从妇女尿液中提取尿激酶,促卵泡激素和黄体生成素等尿蛋白,实现了经济效益和环境保护的双重目的。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,具体涉及一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法。
背景技术
促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone,FSH,亦称为卵泡刺激素)是一种由脑垂体合成并分泌的激素,属于糖基化蛋白质激素,因最早发现其对女性卵泡成熟的刺激作用而得名。后来的研究表明,促卵泡激素在男女两性体内都是很重要的激素之一,调控着发育、生长、青春期性成熟、以及生殖相关的一系列生理过程。促卵泡激素和黄体化激素在生殖相关的生理过程中协同发挥着至关重要的作用。
黄体生成素又称促黄体素(Luteotropic hormone,LH),垂体前叶嗜碱性细胞所分泌的激素,为糖蛋白,分子量约30000,由a和b两个亚基肽链以共价键结合而成。在有促卵泡激素存在下,与其协同作用,刺激卵巢雌激素分泌,使卵泡成熟与排卵,使破裂卵泡形成黄体并分泌雌激素和孕激素,刺激睾丸间质细胞发育并促进其分泌睾酮,故又称间质细胞促进素。
尿激酶(Urokinase,UK)为从健康人尿中分离的,或从人肾组织培养中获得的一种酶蛋白,由分子量分别为33000(LMW-tcu-PA)和54000(HMW-tcu-PA)两部分组成。尿激酶直接作用于内源性纤维蛋白溶解系统,能催化裂解纤溶酶原成纤溶酶,后者不仅能降解纤维蛋白凝块,亦能降解血循环中的纤维蛋白原、凝血因子Ⅴ和凝血因子Ⅷ等,从而发挥溶栓作用。尿激酶对新形成的血栓起效快、效果好;还能提高血管ADP酶活性,抑制ADP诱导的血小板聚集,预防血栓形成。尿激酶在静脉滴注后,患者体内纤溶酶活性明显提高;停药几小时后,纤溶酶活性恢复原水平。
妇女尿液尤其是绝经妇女尿液中含有较高含量尿蛋白,如促卵泡激素,黄体生成素以及尿激酶等。传统的提取生产工艺中,只从绝经妇女尿液中提取促卵泡激素或/和黄体生成素粗品,再经深加工制成尿促性素或尿促卵泡素等原料药用于治疗不孕不育症,如CN102464713A、CN 1262278A、CN 1415628A等中公开的方法。然而上述方法中其中大量的尿激酶等其他蛋白质均作为杂质而存在于废尿液中,既浪费了经济效益又污染环境。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题,本发明的目的是提供一种从妇女尿液尤其是绝经妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法。本发明的提取方法可以同时从妇女尿液中提取尿激酶,促卵泡激素和黄体生成素等尿蛋白,实现了经济效益和环境保护的双重目的。
为达上述目的,本发明采用如下技术手段:
一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法,包括如下步骤:
(1)将尿液浓缩后调节pH至10-11,例如为10.2、10.5、10.8等;该步骤中浓缩是为了除去尿液中的无机盐和大部分水;且由于尿激酶等蛋白质属于碱性蛋白,其等电点大约在10-11之间,因此会从溶液中沉淀出来,而酸性的促卵泡激素和黄体生成素均存在于溶液中;可见该pH范围可以更好地使尿激酶等属于碱性的蛋白质完全分离出来;
(2)向步骤(1)所得溶液中加入硅藻土后过滤,所得硅藻土滤渣经处理得到较高纯度的尿激酶粗品;所得硅藻土滤渣中含有大量尿激酶粗品,加入硅藻土则有利于将尿激酶过滤出来;
(3)将步骤(2)过滤后的滤液调节pH至5-6,例如为5.3、5.6、5.9等,然后将促卵泡激素和黄体生成素等酸性蛋白进行沉淀,加入硅藻土处理后得到促卵泡激素和黄体生成素粗品。该步骤中的pH范围可以更好地使促卵泡激素和黄体生成素完全分离出来。
本发明的方法利用蛋白质等电点不同将妇女尿液中不同蛋白质进行分离,首先将尿液过滤、浓缩,然后调节pH至强碱性使碱性蛋白质如尿激酶等沉淀,过滤;然后调节pH至酸性使卵泡刺激素和黄体生成素等蛋白沉淀,得到尿激酶和卵泡刺激素和黄体生成素等粗品,且均满足粗品质量标准。如果步骤(1)、(3)中的pH调节值不在本发明的范围内,则尿激酶与其他杂蛋白无法分开,无法完成本发明的工艺。
本发明通过技术革新,在传统的从尿液中提取促卵泡激素和黄体生成素的同时,通过超滤浓缩,pH调节等技术手段,从尿中提取尿激酶,既实现了废尿的回收利用,又提高了经济效益。
作为优选,步骤(1)中所述尿液为绝经妇女尿液。
优选地,将尿液浓缩之前除去尿液中不溶性物质和可见杂质。
优选地,将尿液经密闭过滤机预过滤除去其中不溶性物质和可见杂质。
优选地,所述浓缩为浓缩至原体积的1/50-1/200,例如为1/60、1/66、1/75、1/90、1/110、1/130、1/150、1/175、1/185、1/196等,优选为1/100。
优选地,所述浓缩为超滤浓缩,优选在超滤浓缩罐中进行。
优选地,调节pH通过加入氢氧化钠溶液进行。
优选地,所述氢氧化钠溶液的质量浓度为10-40%,例如为13%、16%、19%、23%、27%、33%、38%等,优选为20%。
作为优选,步骤(2)中加入硅藻土后搅拌,优选搅拌10分钟以上,例如为13分钟、19分钟、25分钟、33分钟、40分钟、50分钟等,进一步优选搅拌30分钟。
优选地,所述处理为将硅藻土滤渣溶解,经乙醇沉淀,脱水,干燥。
作为优选,步骤(3)中所述调节通过加入冰醋酸进行。
优选地,将促卵泡激素和黄体生成素进行沉淀通过加入有机溶剂进行。
优选地,所述有机溶剂为乙醇或/和丙酮。
优选地,加入硅藻土后搅拌、抽滤,再经脱水、干燥等工艺得到促卵泡激素和黄体生成素粗品。
优选地,所述搅拌的时间为10分钟以上,优选为30分钟。
作为优选,本发明所述的方法包括以下步骤:
(1)将收集的新鲜尿液经密闭过滤机预过滤除去其中不溶性物质和可见杂质,打入超滤浓缩罐;
(2)将尿液进行超滤浓缩,以除去尿液中的无机盐和大部分水,浓缩至原体积的1/100;
(3)将超滤浓缩后的浓缩尿打入反应罐,用20%氢氧化钠溶液调节溶液pH为10-11,由于尿激酶等蛋白质属于碱性蛋白,其等电点在10-11之间,因此会从溶液中沉淀出来,而酸性的促卵泡激素和黄体生成素均存在于溶液中;
(4)向溶液中加入硅藻土,搅拌30分钟后进行过滤,滤液打入另一反应罐,硅藻土滤渣中含有大量尿激酶粗品,再经溶解,乙醇沉淀,脱水,干燥等工艺步骤得到较高纯度的尿激酶粗品;
(5)向过滤后的滤液中加入冰醋酸调节pH为5-6,再加入乙醇或丙酮将促卵泡激素和黄体生成素等酸性蛋白进行沉淀,加入硅藻土搅拌30分钟后进行抽滤,再经脱水、干燥等工艺步骤得到促卵泡激素和黄体生成素粗品。所得产品均可以很好地满足粗产品质量标准。
本发明提供的从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法,通过超滤,pH调节等工艺步骤,从妇女尿液尤其是绝经妇女尿液中提取了尿激酶,促卵泡激素和黄体生成素等尿蛋白,且均满足粗品质量标准,实现了经济效益和环境保护的双重目的。
具体实施方式
为便于理解本发明,本发明列举实施例如下。本领域技术人员应该明了,所述实施例仅仅用于帮助理解本发明,不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法,包括如下步骤:
(1)将收集的新鲜绝经妇女尿液约20000L经密闭过滤机预过滤除去其中不溶性物质和可见杂质,打入超滤浓缩罐;
(2)超滤浓缩至约200L;
(3)将超滤浓缩后的浓缩尿打入反应罐,用20%氢氧化钠溶液调节溶液pH为10-11,向溶液中加入硅藻土,搅拌30分钟后过滤,滤液打入另一反应罐,回收硅藻土滤渣。经乙醇脱水,干燥得尿激酶粗品120g;
(4)向过滤后的滤液中加入冰醋酸调节pH为5-6,再加入乙醇或丙酮将促卵泡激素和黄体生成素等酸性蛋白进行沉淀,加入硅藻土搅拌30分钟后进行抽滤,再经脱水、干燥得粗品3450g。
经检测,尿激酶粗品比活为65000IU/mg蛋白质,促卵泡激素免疫效价为0.56IU/mg,均满足粗品质量标准。
实施例2
一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法,包括如下步骤:
(1)将收集的新鲜绝经妇女尿液约20000L经密闭过滤机预过滤除去其中不溶性物质和可见杂质,打入超滤浓缩罐;
(2)超滤浓缩至约400L;
(3)将超滤浓缩后的浓缩尿打入反应罐,用40%氢氧化钠溶液调节溶液pH为10.0,向溶液中加入硅藻土,搅拌10分钟后过滤,滤液打入另一反应罐,回收硅藻土滤渣,经乙醇脱水,干燥得尿激酶粗品119g;
(4)向过滤后的滤液中加入冰醋酸调节pH为5.0,再加入乙醇或丙酮将促卵泡激素和黄体生成素等酸性蛋白进行沉淀,加入硅藻土搅拌20分钟后进行抽滤,再经脱水、干燥得粗品3445g。
经检测,尿激酶粗品比活为68000IU/mg蛋白质,促卵泡激素免疫效价为0.57IU/mg,均满足粗品质量标准。
实施例3
一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法,包括如下步骤:
(1)将收集的新鲜绝经妇女尿液约20000L经密闭过滤机预过滤除去其中不溶性物质和可见杂质,打入超滤浓缩罐;
(2)超滤浓缩至约100L;
(3)将超滤浓缩后的浓缩尿打入反应罐,用10%氢氧化钠溶液调节溶液pH为11.0,向溶液中加入硅藻土,搅拌20分钟后过滤,滤液打入另一反应罐,回收硅藻土滤渣,经乙醇脱水,干燥得尿激酶粗品121g;
(4)向过滤后的滤液中加入冰醋酸调节pH为6.0,再加入乙醇或丙酮将促卵泡激素和黄体生成素等酸性蛋白进行沉淀,加入硅藻土搅拌40分钟后进行抽滤,再经脱水、干燥得粗品3452g。
经检测,尿激酶粗品比活为67000IU/mg蛋白质,促卵泡激素免疫效价为0.58IU/mg,均满足粗品质量标准。
实施例4
一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法,包括如下步骤:
(1)将收集的新鲜绝经妇女尿液约20000L经密闭过滤机预过滤除去其中不溶性物质和可见杂质,打入超滤浓缩罐;
(2)超滤浓缩至约300L;
(3)将超滤浓缩后的浓缩尿打入反应罐,用30%氢氧化钠溶液调节溶液pH为10.5,向溶液中加入硅藻土,搅拌40分钟后过滤,滤液打入另一反应罐,回收硅藻土滤渣,经乙醇脱水,干燥得尿激酶粗品122g;
(4)向过滤后的滤液中加入冰醋酸调节pH为5.5,再加入乙醇或丙酮将促卵泡激素和黄体生成素等酸性蛋白进行沉淀,加入硅藻土搅拌10分钟后进行抽滤,再经脱水、干燥得粗品3455g。
经检测,尿激酶粗品比活为63000IU/mg蛋白质,促卵泡激素免疫效价为0.55IU/mg,均满足粗品质量标准。
对比例1
操作条件同实施例2中的,除了步骤(3)中的pH调节为9.5,步骤(4)中的pH调节为4.5。
经检测,尿激酶粗品比活为12100IU/mg蛋白质,促卵泡激素免疫效价为0.08IU/mg,均无法满足粗品质量标准。
对比例2
操作条件同实施例3中的,除了步骤(3)中的pH调节为11.5,步骤(4)中的pH调节为6.5。
经检测,尿激酶粗品比活为9800IU/mg蛋白质,促卵泡激素免疫效价为0.06IU/mg,均无法满足粗品质量标准。
对比例3
操作条件同实施例4中的,除了步骤(3)中的pH调节为11.5。
经检测,尿激酶粗品比活为14000IU/mg蛋白质,促卵泡激素免疫效价为0.09IU/mg,均无法满足粗品质量标准。
对比例4
操作条件同实施例4中的,除了步骤(4)中的pH调节为4。
经检测,尿激酶粗品比活为63500IU/mg蛋白质,促卵泡激素免疫效价为0.05IU/mg,促卵泡激素免疫效价无法满足粗品质量标准。
显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法,包括如下步骤:
(1)将尿液浓缩后调节pH至10-11;
(2)向步骤(1)所得溶液中加入硅藻土后过滤,所得硅藻土滤渣经处理得到较高纯度的尿激酶粗品;
(3)将步骤(2)过滤后的滤液调节pH至5-6,然后将促卵泡激素和黄体生成素进行沉淀,加入硅藻土处理后得到促卵泡激素和黄体生成素粗品。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中所述尿液为绝经妇女尿液。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,步骤(1)中将尿液浓缩之前除去尿液中不溶性物质和可见杂质;
优选地,将尿液经密闭过滤机预过滤除去其中不溶性物质和可见杂质。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法,其特征在于,步骤(1)中所述浓缩为浓缩至原体积的1/50-1/200,优选为1/100;
优选地,所述浓缩为超滤浓缩,优选在超滤浓缩罐中进行。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法,其特征在于,步骤(1)中调节pH通过加入氢氧化钠溶液进行;
优选地,所述氢氧化钠溶液的质量浓度为10-40%,优选为20%。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法,其特征在于,步骤(2)中加入硅藻土后搅拌,优选搅拌10分钟以上,进一步优选搅拌30分钟。
7.根据权利要求1-6任一项所述的方法,其特征在于,步骤(2)中所述处理为将硅藻土滤渣溶解,经乙醇沉淀,脱水,干燥。
8.根据权利要求1-7任一项所述的方法,其特征在于,步骤(3)中所述调节通过加入冰醋酸进行。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法,其特征在于,步骤(3)中将促卵泡激素和黄体生成素进行沉淀通过加入有机溶剂进行;
优选地,所述有机溶剂为乙醇或/和丙酮。
10.根据权利要求1-9任一项所述的方法,其特征在于,步骤(3)中加入硅藻土后搅拌、抽滤,再经脱水、干燥得到促卵泡激素和黄体生成素粗品;
优选地,所述搅拌的时间为10分钟以上,优选为30分钟。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710106475.2A CN106866812B (zh) | 2017-02-27 | 2017-02-27 | 一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710106475.2A CN106866812B (zh) | 2017-02-27 | 2017-02-27 | 一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106866812A true CN106866812A (zh) | 2017-06-20 |
CN106866812B CN106866812B (zh) | 2021-07-06 |
Family
ID=59167721
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710106475.2A Active CN106866812B (zh) | 2017-02-27 | 2017-02-27 | 一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106866812B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111087443A (zh) * | 2018-10-23 | 2020-05-01 | 北京聚德方辉科技有限公司 | 一种从尿液中提取多种尿蛋白的方法 |
CN112022859A (zh) * | 2020-09-17 | 2020-12-04 | 深圳市宸果材料科技有限公司 | 一种基于透皮吸收的黄体酮材料 |
Citations (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS51112590A (en) * | 1975-03-28 | 1976-10-05 | Fujiwa Kako Kk | Process for collecting human urokinase |
US4048014A (en) * | 1975-07-16 | 1977-09-13 | Hitachi Chemical Company, Ltd. | Method for obtaining urokinase |
JPS5820191A (ja) * | 1981-07-29 | 1983-02-05 | Green Cross Corp:The | ウロキナ−ゼの製造方法 |
US4381346A (en) * | 1979-11-13 | 1983-04-26 | Huasin Syed S | Isolation of plasminogen activators useful as therapeutic and diagnostic agents |
CN1414019A (zh) * | 2002-08-14 | 2003-04-30 | 上海天伟生物制药有限公司 | 一种生产高纯度的绝经后尿促性腺素的方法 |
CN1415628A (zh) * | 2002-08-14 | 2003-05-07 | 上海天伟生物制药有限公司 | 一种提取人尿黄体生成素的方法 |
CN101555278A (zh) * | 2009-05-09 | 2009-10-14 | 山东众山生物科技有限公司 | 一种尿促卵泡素的提取方法 |
CN103074319A (zh) * | 2013-01-18 | 2013-05-01 | 扬州艾迪生物科技有限公司 | 一种尿激酶与人尿胰蛋白酶抑制剂的分离方法 |
CN104530217A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-04-22 | 青岛康原药业有限公司 | 从绝经妇女尿中提取尿促卵泡素的方法 |
CN104961821A (zh) * | 2014-07-28 | 2015-10-07 | 厦门欧瑞捷生物科技有限公司 | 一种从人尿中提取促性腺激素的方法 |
CN105238771A (zh) * | 2015-10-23 | 2016-01-13 | 张昭 | 从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法 |
CN105238772A (zh) * | 2015-11-16 | 2016-01-13 | 江苏尤里卡生物科技有限公司 | 一种尿激酶分离纯化方法 |
CN105732797A (zh) * | 2016-04-18 | 2016-07-06 | 山东众山生物科技有限公司 | 一种尿促性腺激素的纯化方法 |
-
2017
- 2017-02-27 CN CN201710106475.2A patent/CN106866812B/zh active Active
Patent Citations (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS51112590A (en) * | 1975-03-28 | 1976-10-05 | Fujiwa Kako Kk | Process for collecting human urokinase |
US4048014A (en) * | 1975-07-16 | 1977-09-13 | Hitachi Chemical Company, Ltd. | Method for obtaining urokinase |
US4381346A (en) * | 1979-11-13 | 1983-04-26 | Huasin Syed S | Isolation of plasminogen activators useful as therapeutic and diagnostic agents |
JPS5820191A (ja) * | 1981-07-29 | 1983-02-05 | Green Cross Corp:The | ウロキナ−ゼの製造方法 |
CN1414019A (zh) * | 2002-08-14 | 2003-04-30 | 上海天伟生物制药有限公司 | 一种生产高纯度的绝经后尿促性腺素的方法 |
CN1415628A (zh) * | 2002-08-14 | 2003-05-07 | 上海天伟生物制药有限公司 | 一种提取人尿黄体生成素的方法 |
CN101555278A (zh) * | 2009-05-09 | 2009-10-14 | 山东众山生物科技有限公司 | 一种尿促卵泡素的提取方法 |
CN103074319A (zh) * | 2013-01-18 | 2013-05-01 | 扬州艾迪生物科技有限公司 | 一种尿激酶与人尿胰蛋白酶抑制剂的分离方法 |
CN104961821A (zh) * | 2014-07-28 | 2015-10-07 | 厦门欧瑞捷生物科技有限公司 | 一种从人尿中提取促性腺激素的方法 |
CN104530217A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-04-22 | 青岛康原药业有限公司 | 从绝经妇女尿中提取尿促卵泡素的方法 |
CN105238771A (zh) * | 2015-10-23 | 2016-01-13 | 张昭 | 从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法 |
CN105238772A (zh) * | 2015-11-16 | 2016-01-13 | 江苏尤里卡生物科技有限公司 | 一种尿激酶分离纯化方法 |
CN105732797A (zh) * | 2016-04-18 | 2016-07-06 | 山东众山生物科技有限公司 | 一种尿促性腺激素的纯化方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
WILFRID F. WHITE 等: "The Isolation and Characterization of Plasminogen Activators (Urokinase) from Human Urine", 《BIOCHEMISTRY》 * |
李岩: "从人尿中提取尿激酶的新方法", 《食品与发酵科技》 * |
杨宇翔: "国产硅藻土吸附尿激酶机理的研究", 《化学学报》 * |
王友同 等: "《生物制品的技术开拓》", 31 March 1987, 中国食品出版社 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111087443A (zh) * | 2018-10-23 | 2020-05-01 | 北京聚德方辉科技有限公司 | 一种从尿液中提取多种尿蛋白的方法 |
CN112022859A (zh) * | 2020-09-17 | 2020-12-04 | 深圳市宸果材料科技有限公司 | 一种基于透皮吸收的黄体酮材料 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106866812B (zh) | 2021-07-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101447123B1 (ko) | 헤파린의 추출 방법 | |
CN101979532B (zh) | 一种综合利用猪血的方法 | |
CN105420325B (zh) | 一种胎盘多肽的制备方法 | |
CN102286590A (zh) | 一种海蜇降压肽的制备方法 | |
CN103756005A (zh) | 一种复合胶原海绵及其制备方法 | |
CN107188990A (zh) | 鲟鱼骨中提取硫酸软骨素的方法 | |
CN105315360A (zh) | 一种同时制备高纯人凝血因子viii及人纤维蛋白原的方法 | |
CN103060296A (zh) | 从动物胰脏中提取胰蛋白酶的方法 | |
CN106866812A (zh) | 一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法 | |
CN105131109A (zh) | 一种胶原蛋白的提取方法 | |
CN106360718A (zh) | 一种芦荟凝胶的提取工艺 | |
CN101225101A (zh) | 一种促肝细胞生长素溶液制备工艺 | |
CN106496363A (zh) | 一种肝素钠的高效制备工艺 | |
JPH0577681B2 (zh) | ||
CN103074319B (zh) | 一种尿激酶与人尿胰蛋白酶抑制剂的分离方法 | |
CN104945495A (zh) | 从猪血中分离纯化纤维连接蛋白的生产工艺 | |
CN108753872B (zh) | 一种莲子多糖高收率的提取方法 | |
CN105524964A (zh) | 一种银耳胶原蛋白肽的提取方法 | |
CN102973526B (zh) | 人抗凝血酶制剂冷冻干燥过程中的保护剂 | |
CN113402634A (zh) | 一种提高硫酸软骨素澄清度工艺 | |
CN101759803A (zh) | 水蛭素的生理盐水-聚乙二醇双水相提取法 | |
CN108887588B (zh) | 一种利用酶法制备羊骨粉的方法 | |
DE2047317A1 (de) | Enzyme | |
CN105821025A (zh) | 一种凝血酶的提取方法 | |
RU2009101954A (ru) | Способ сбора и переработки крови в гидролизованный белок с использованием крови убитого животного для получения гидролизованного белка крови |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |