CN105238772A - 一种尿激酶分离纯化方法 - Google Patents

一种尿激酶分离纯化方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种尿激酶分离纯化方法，其特征在于，其包含如下步骤，1）尿激酶的分离2）尿激酶的分离纯化所述的步骤1）具体包括以下步骤：a）男性尿液，在10℃以下，调节pH8.5，静置2小时，弃去沉淀，得上清液；b）取上清液，调pH5.0-5.5酸化，得酸化尿，通过硅藻土柱进行吸附；c）5℃冷水洗柱，以1%氨水和氯化钠进行洗脱，得洗脱液；d）洗脱液用饱和硫酸铵和4%氨水盐析，得尿激酶粗品；e）向沉淀中加入一定量的氨水，使沉淀中的尿激酶充分解离，得尿激酶溶液。

Description

一种尿激酶分离纯化方法
技术领域
本发明属于天然产物分离提取领域，具体涉及一种尿激酶的尿激酶分离方法。
背景技术
尿激酶为从健康人尿中分离的，或从人肾组织培养中获得的一种酶蛋白。尿激酶是溶血栓药物，但它并不直接用于血块本身，而是首先激活体内的纤溶酶脘，成为有活性的纤溶酶，纤溶酶作用于纤维蛋白酶凝块，使其分解成可溶性多碳。尿激酶在冻干状态下可稳定数年，1mg/ml的无菌溶液可以在冰箱中保存数月，在盐浓度低于0.03MNaCl时稳定性下降，在极低的盐浓度时，随着酶的失活产生沉淀，人血蛋白或明胶可防止酶的表面变性作用。
尿激酶通常以两种分子形式存在，即分子量36000和54000，尿激酶作为一种活性物质，在纯化过程中要注意防止失活。大分子量的尿激酶活性较小分子量尿激酶活性强得多，提高比活，一是要去除杂蛋白，二是要除去小分子量尿激酶。尿激酶精品中不能含有热原物质，若检验出热原物质，要作除热原处理。中国药典2005年以前测定注射剂中的热原。内毒素是热源的一种，其是革兰氏阴性细菌细胞壁中的脂多糖。脂多糖对宿主有毒性。自2005年之后药典规定，尿激酶注射剂中内毒素不得超过1EU/万尿激酶单位。内毒素不是蛋白质，其非常耐热，其分子量在10万左右，膜过滤方式无法将内毒素与尿激酶分离。采用活性炭吸附，尿激酶也会被吸附，是产率大大降低。在100℃的高温下加热1小时也不会被破坏，只有在160℃的温度下加热2到4个小时，或用强碱、强酸或强氧化剂加温煮沸30分钟才能破坏它的生物活性，而上述条件下，尿激酶必然导致失活，在尿激酶的纯化中上述方法均不可行。
发明内容
为了解决分离尿激酶中内毒素的问题，保证尿激酶用于注射制剂时，所含有的内毒素能达到国家标准，本发明提供一种温和的，低污染纯化尿激酶的方法，本发明提供一种尿激酶分离纯化方法，其特征在于，其包含如下步骤
1）尿激酶的分离
2）尿激酶的纯化
所述的步骤1）具体包括以下步骤：
a）男性尿液，在10℃以下，调节pH8.5，静置2小时，弃去沉淀，得上清液；
b）取上清液，调pH5.0-5.5酸化，得酸化尿，通过硅藻土柱进行吸附；
c）5℃冷水洗柱，以1%氨水和氯化钠进行洗脱，得洗脱液；
d）洗脱液用饱和硫酸铵和4%氨水盐析，得尿激酶粗品；
e）向沉淀中加入一定量的氨水，使沉淀中的尿激酶充分解离，得尿激酶溶液；
所述的步骤2包括以下步骤：
A)装柱，将凝胶介质混悬，取适量的凝胶装填于层析柱中，用3~5倍柱体积的水或缓冲液洗涤凝胶；装柱；
B）平衡介质，用5~10倍柱体积的样品缓冲液平衡凝胶柱；
C）上样，将尿激酶溶液通过凝胶柱；
D）收集样品流出液，收集洗脱液与流出液合并，即为去内毒素的尿激酶。
优选地，
在步骤A）前还包括以下步骤，
A1）再生介质，用6倍柱体积的1%脱氧胆酸钠洗涤凝胶介质，然后用8倍柱体积水洗涤凝胶介质；
A2）凝胶介质预处理，称凝胶介质，混悬于蒸馏水，1小时后倾去上层细粒，按每克凝胶介质加0.5NNaOH溶液15ml的比例，将凝胶介质浸泡于0.5NNaOH溶液中，搅匀，静置30分钟，抽滤，蒸馏水抽洗至pH呈中性；再以0.5NHCl溶液同上操作过程处理，最后以0.5NNaOH溶液再处理一次，处理完后，将凝胶介质浸泡于0.1MpH7.4磷酸盐缓冲液中过夜。
进一步优选地，
D）步骤后还包括以下步骤：
F）样品保存，尿激酶立即冻干或是加50%丙三醇保存于-10℃以下；
G）样品检测，样品进行内毒素检测试验，内毒素应小于1EU/万尿激酶单位。
优选地，
平衡介质步骤中使用pH为8的0.02M磷酸盐缓冲液，平衡时流速为1BV/h。
优选地，
C）上样，将尿激酶溶液通过凝胶柱；所述的尿激酶浓度地不大于8.1万IU/ml。
优选地，
所述步骤C）上样中的上样量与柱体积的比为1-3:1，上样步骤中流速小于1BV/h。
所述步骤C）尿激酶溶液pH为7~8.5，优选为7.5-8。
所述的B）平衡介质中所述缓冲液为pH=8.0的0.02M磷酸盐缓冲液，平衡时流速为1BV/h。
更进一步优选地，
所述的凝胶填料为PolymyxinB-Agarose即多粘菌素B亲和介质、阴离子交换剂：DEAE-SephadexA-25、DEAE-SephadexA-50、QAE-SephadexA-25、QAE-SephadexA-50、DEAE-纤维素，TEAE-纤维素，离子交换树脂：AmberlitIRC-938，AmberlitIRA-911。
本发明的尿激酶分离纯化方法避免使用强酸强碱，能有效分离内毒素，同时保证尿激酶不被破坏，分离效果能达到药典标准要求，收率在97%以上。
具体实施方式
实施例1尿激酶粗品的制备
a）男性尿液，在10℃以下，调节pH8.5，静置2小时，弃去沉淀，得上清液；
b）取上清液，调pH5.0-5.5酸化，得酸化尿，通过硅藻土柱进行吸附；
c）5℃冷水洗柱，以1%氨水和氯化钠进行洗脱，得洗脱液；
d）洗脱液用饱和硫酸铵和4%氨水盐析，得尿激酶粗品；
e）向沉淀中加入一定量的氨水，使沉淀中的尿激酶充分解离，得尿激酶溶液；
实施例2
1）再生介质，用6倍柱体积的1%脱氧胆酸钠洗涤QAE-Sephadex凝胶介质，然后用8倍柱体积水洗涤凝胶介质；
2）凝胶介质预处理，称凝胶介质，混悬于蒸馏水，1小时后倾去上层细粒，按每克凝胶介质加0.5NNaOH溶液15ml的比例，将凝胶介质浸泡于0.5NNaOH溶液中，搅匀，静置30分钟，抽滤，蒸馏水抽洗至pH呈中性；再以0.5NHCl溶液同上操作过程处理，最后以0.5NNaOH溶液再处理一次，处理完后，将凝胶介质浸泡于0.1MpH7.4磷酸盐缓冲液中过夜；
3）装柱，将凝胶介质混悬，取适量的凝胶装填于层析柱中，用3~5倍柱体积的水或缓冲液洗涤凝胶；装柱；
4）平衡介质，用5~10倍柱体积的样品pH为8的0.02M磷酸盐缓冲液平衡凝胶柱，平衡时流速为1BV/h；
5）上样，将步骤e）得到的尿激酶溶液通过凝胶柱，所述的尿激酶溶液配置成浓度为6.1万IU/ml，pH为7.5的溶液，上样量与柱体积的比为1:1，流速小于1BV/h，
6）收集样品流出液，收集洗脱液与流出液合并，即为去内毒素的尿激酶；
7）样品保存，尿激酶立即冻干或是加50%丙三醇保存于-10℃以下；
8）样品检测，尿激酶样品进行内毒素检测试验，内毒素应小于1EU/万尿激酶单位。
实施例3
1）再生介质，用6倍柱体积的1%脱氧胆酸钠洗涤DEAE-Sephadex凝胶介质，然后用8倍柱体积水洗涤凝胶介质；
2）凝胶介质预处理，称凝胶介质，混悬于蒸馏水，1小时后倾去上层细粒，按每克凝胶介质加0.5NNaOH溶液15ml的比例，将凝胶介质浸泡于0.5NNaOH溶液中，搅匀，静置30分钟，抽滤，蒸馏水抽洗至pH呈中性；再以0.5NHCl溶液同上操作过程处理，最后以0.5NNaOH溶液再处理一次，处理完后，将凝胶介质浸泡于0.1MpH7.4磷酸盐缓冲液中过夜。
3）装柱，将凝胶介质混悬，取适量的凝胶装填于层析柱中，用3~5倍柱体积的水或缓冲液洗涤凝胶；装柱；
4）平衡介质，用5~10倍柱体积的样品缓冲液平衡凝胶柱
5）上样，将尿激酶溶液通过凝胶柱，所述的尿激酶浓度为7.1万IU/ml，尿激酶溶液pH为8，上样量与柱体积的比为1:2，流速小于1BV/h；
6）收集样品流出液，收集洗脱液与流出液合并，即为去内毒素的尿激酶；
7）样品保存，尿激酶样品立即冻干或是加50%丙三醇保存于-10℃以下；
8）样品检测，样品进行内毒素检测试验，内毒素应小于1EU/万尿激酶单位。
实施例4
1）再生介质，用6倍柱体积的1%脱氧胆酸钠洗涤DEAE-Sephadex凝胶介质，然后用8倍柱体积水洗涤凝胶介质；
2）凝胶介质预处理，称凝胶介质，混悬于蒸馏水，1小时后倾去上层细粒，按每克凝胶介质加0.5NNaOH溶液15ml的比例，将凝胶介质浸泡于0.5NNaOH溶液中，搅匀，静置30分钟，抽滤，蒸馏水抽洗至pH呈中性；再以0.5NHCl溶液同上操作过程处理，最后以0.5NNaOH溶液再处理一次，处理完后，将凝胶介质浸泡于0.1MpH7.4磷酸盐缓冲液中过夜。
3）装柱，将凝胶介质混悬，取适量的凝胶装填于层析柱中，用3~5倍柱体积的水或缓冲液洗涤凝胶；装柱；
4）平衡介质，用5~10倍柱体积的样品缓冲液平衡凝胶柱
5）上样，将尿激酶溶液通过凝胶柱，所述的尿激酶浓度为6.1万IU/ml，尿激酶溶液pH为8.0，上样量与柱体积的比为1:1，流速小于1BV/h；
6）收集样品流出液，收集洗脱液与流出液合并，即为去内毒素的尿激酶；
7）样品保存，尿激酶立即冻干或是加50%丙三醇保存于-10℃以下；
8）样品检测，尿激酶样品进行内毒素检测试验，内毒素应小于1EU/万尿激酶单位。
实施例5
1）再生介质，用6倍柱体积的1%脱氧胆酸钠洗涤DEAE-Sephadex凝胶介质，然后用8倍柱体积水洗涤凝胶介质；
2）凝胶介质预处理，称凝胶介质，混悬于蒸馏水，1小时后倾去上层细粒，按每克凝胶介质加0.5NNaOH溶液15ml的比例，将凝胶介质浸泡于0.5NNaOH溶液中，搅匀，静置30分钟，抽滤，蒸馏水抽洗至pH呈中性；再以0.5NHCl溶液同上操作过程处理，最后以0.5NNaOH溶液再处理一次，处理完后，将凝胶介质浸泡于0.1MpH7.4磷酸盐缓冲液中过夜。
3）装柱，将凝胶介质混悬，取适量的凝胶装填于层析柱中，用3~5倍柱体积的水或缓冲液洗涤凝胶；装柱；
4）平衡介质，用5~10倍柱体积的样品缓冲液平衡凝胶柱
5）上样，将尿激酶溶液通过凝胶柱，所述的尿激酶浓度为8.1万IU/ml，尿激酶溶液pH为8.5，上样量与柱体积的比为1:3，流速小于1BV/h；
6）收集样品流出液，收集洗脱液与流出液合并，即为去内毒素的尿激酶；
7）样品保存，尿激酶立即冻干或是加50%丙三醇保存于-10℃以下；
8）样品检测，样品进行内毒素检测试验，内毒素应小于1EU/万尿激酶单位。
试验例1、考察上样液pH值对尿激酶的吸附情况和对内毒素的去除情况。
柱平衡液pH为8.0的0.02M磷酸盐缓冲液，平衡时流速为1BV/h。量取尿激酶粗品，测得酶活性为611320IU/ml的样液，5份，每份2ml分别电导调节为8-11ms范围，调节pH为6.51，7.00，7.5，8.0，8.5，体积为20ml，过平衡好的装有DEAE-Sephadex柱子，固定流速为1BV/h，收集流出液体约0.5BV以后的流出液，测定流出液的酶活性和细菌内毒素。
DEAE上样条件的数据
综合实验结果表明上样液pH值条件为7.5-8.0范围时尿激酶活性的损耗最小，且去除内毒素的效果很好。
2、上样尿激酶浓度考察
取酶活性为611320IU/ml尿激酶粗品溶液等分后，每份注射用水配置成不同酶浓度的样液，总效价是一致的，其含有的内毒素也是相同的，取样液4份，每份2ml，依次稀释5倍、7.5倍、10倍、20倍，同时电导调节在8-11ms范围，调节pH为8，过处理好的装有DEAE-Sephadex的柱子，固定流速为1BV/h，收集开始加入上样液体后流出液体约0.5BV后的流出液，测定流出液的酶活性和细菌内毒素。
DEAE上样尿激酶浓度的考察数据
上面数据表明，在流速为1BV/h时，当尿激酶的浓度达到12万IU/ml时，20mlDEAEBio-sepFF填料对内毒素的吸附能力明显降低，未达到药典规定的标准，而尿激酶的浓度在8.1万IU/ml以下时，尿激酶的内毒素含量都能达到要求。
3、上样量考察
量取酶活性为611320IU/ml的样液30ml，电导调节在8-11ms范围，同时调节pH值到8.0，量取20、40、60、80、100ml稀释后的溶液，分别通过5根处理好平衡好的柱体积为20ml的DEAE柱，分别用20、40、60、80、100ml的亲和层析溶液上样，收集开始加入上样液体后流出液体约0.5BV后的过柱液，测定过柱液的酶活性和细菌内毒素。
从上表可以看出，20ml的DEAE填料，在pH为8，流速为1BV/h的条件下完全可满足60ml的尿激酶溶液（理论效价为61132IU/ml）的需求，得到的流出液为内毒素符合规定的，且回收率可达97.3%。
试验例2
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种尿激酶分离纯化方法，其特征在于，其包含如下步骤
1）尿激酶的分离
2）尿激酶的纯化
所述的步骤1）具体包括以下步骤：
a）男性尿液，在10℃以下，调节pH8.5，静置2小时，弃去沉淀，得上清液；
b）取上清液，调pH5.0-5.5酸化，得酸化尿，通过硅藻土柱进行吸附；
c）5℃冷水洗柱，以1%氨水和氯化钠进行洗脱，得洗脱液；
d）洗脱液用饱和硫酸铵和4%氨水盐析，得尿激酶粗品；
e）向沉淀中加入一定量的氨水，使沉淀中的尿激酶充分解离，得尿激酶溶液。
2.根据权利要求1所述的尿激酶分离纯化方法，其特征在于，
所述的步骤2包括以下步骤：
A)装柱，将凝胶介质混悬，取适量的凝胶装填于层析柱中，用3~5倍柱体积的水或缓冲液洗涤凝胶；装柱；
B）平衡介质，用5~10倍柱体积的样品缓冲液平衡凝胶柱；
C）上样，将尿激酶溶液通过凝胶柱；
D）收集样品流出液，收集洗脱液与流出液合并，即为去内毒素的尿激酶。
3.根据权利要求1所述的尿激酶分离纯化方法，其特征在于，
在步骤A）前还包括以下步骤，
A1）再生介质，用6倍柱体积的1%脱氧胆酸钠洗涤凝胶介质，然后用8倍柱体积水洗涤凝胶介质；
A2）凝胶介质预处理，称凝胶介质，混悬于蒸馏水，1小时后倾去上层细粒，按每克凝胶介质加0.5NNaOH溶液15ml的比例，将凝胶介质浸泡于0.5NNaOH溶液中，搅匀，静置30分钟，抽滤，蒸馏水抽洗至pH呈中性；再以0.5NHCl溶液同上操作过程处理，最后以0.5NNaOH溶液再处理一次，处理完后，将凝胶介质浸泡于0.1MpH7.4磷酸盐缓冲液中过夜。
4.根据权利要求1所述的尿激酶分离纯化方法，其特征在于，
D）步骤后还包括以下步骤：
F）样品保存，尿激酶立即冻干或是加50%丙三醇保存于-10℃以下；
G）样品检测，样品进行内毒素检测试验，内毒素应小于1EU/万尿激酶单位。
5.根据权利要求1所述的尿激酶分离纯化方法，其特征在于，
平衡介质步骤中使用pH为8的0.02M磷酸盐缓冲液，平衡时流速为1BV/h。
6.根据权利要求1所述的尿激酶分离纯化方法，其特征在于，
C）上样，将尿激酶溶液通过凝胶柱；所述的尿激酶浓度不大于8.1万IU/ml。
7.根据权利要求1所述的尿激酶分离纯化方法，其特征在于，
所述步骤C）上样中的上样量与柱体积的比为1-3:1，上样步骤中流速小于1BV/h。
8.根据权利要求1所述的尿激酶分离纯化方法，其特征在于，所述步骤C）尿激酶溶液pH为7~8.5，优选为7.5-8。
9.根据权利要求1所述的尿激酶分离纯化方法，其特征在于，所述的B）平衡介质中所述缓冲液为pH=8.0的0.02M磷酸盐缓冲液，平衡时流速为1BV/h。
10.根据权利要求1所述的尿激酶分离纯化方法，其特征在于，所述的凝胶填料为PolymyxinB-Agarose即多粘菌素B亲和介质、阴离子交换剂：DEAE-SephadexA-25、DEAE-SephadexA-50、QAE-SephadexA-25、QAE-SephadexA-50、DEAE-纤维素，TEAE-纤维素，离子交换树脂：AmberlitIRC-938，AmberlitIRA-911。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106866812A (zh) * 2017-02-27 2017-06-20 日照岚山生化制品有限公司 一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法
CN106929497A (zh) * 2017-05-05 2017-07-07 江苏尤里卡生物科技有限公司 一种尿激酶的分离纯化方法
CN110894495A (zh) * 2019-12-24 2020-03-20 江苏尤里卡生物科技有限公司 一种尿激酶的制备方法及其冻干粉
CN111778232A (zh) * 2020-07-10 2020-10-16 江苏尤里卡生物科技有限公司 一种人尿激酶原料精制过程中去除内毒素的方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS4810232B1 (zh) * 1970-09-04 1973-04-02
CN103060294B (zh) * 2012-12-28 2014-04-23 青岛九龙生物医药有限公司 一种能够去除热原及病毒的尿激酶的制备方法
CN103074319B (zh) * 2013-01-18 2014-06-11 扬州艾迪生物科技有限公司 一种尿激酶与人尿胰蛋白酶抑制剂的分离方法

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106866812A (zh) * 2017-02-27 2017-06-20 日照岚山生化制品有限公司 一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法
CN106929497A (zh) * 2017-05-05 2017-07-07 江苏尤里卡生物科技有限公司 一种尿激酶的分离纯化方法
CN106929497B (zh) * 2017-05-05 2018-04-17 江苏尤里卡生物科技有限公司 一种尿激酶的分离纯化方法
CN110894495A (zh) * 2019-12-24 2020-03-20 江苏尤里卡生物科技有限公司 一种尿激酶的制备方法及其冻干粉
CN110894495B (zh) * 2019-12-24 2020-07-31 江苏尤里卡生物科技有限公司 一种尿激酶的制备方法及其冻干粉
CN111778232A (zh) * 2020-07-10 2020-10-16 江苏尤里卡生物科技有限公司 一种人尿激酶原料精制过程中去除内毒素的方法
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