CN106841497B - 用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及检测方法 - Google Patents

用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106841497B
CN106841497B CN201710042388.5A CN201710042388A CN106841497B CN 106841497 B CN106841497 B CN 106841497B CN 201710042388 A CN201710042388 A CN 201710042388A CN 106841497 B CN106841497 B CN 106841497B
Authority
CN
China
Prior art keywords
solution
polypeptide
donkey
glue
reference substance
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710042388.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106841497A (zh
Inventor
段小波
郭尚伟
郝向慧
徐云鹏
王静
王玉娇
石永坚
周祥山
藏香银
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dong E E Jiao Co Ltd
Original Assignee
Dong E E Jiao Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dong E E Jiao Co Ltd filed Critical Dong E E Jiao Co Ltd
Priority to CN201710042388.5A priority Critical patent/CN106841497B/zh
Publication of CN106841497A publication Critical patent/CN106841497A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106841497B publication Critical patent/CN106841497B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/89—Inverse chromatography

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及检测方法。所述组合物由多肽I、多肽II、多肽III以及对照品检测基质组成，所述多肽I的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示，多肽II的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示，多肽III的氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示，对照品检测基质为鱼皮胶。通过多肽I的检测值减去多肽II的检测值，并利用多肽III的检测值来修正检测偏差，从而实现对龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的检测。该方法具有含量检测准确、操作简单的优点，在龟甲胶、鹿角胶、阿胶的真伪鉴别方面具有广泛的应用前景。

Description

用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量 的组合物、试剂盒及检测方法
技术领域
本发明涉及一种用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物及试剂盒，还包括使用该组合物或试剂盒进行龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量检测的方法，本发明属于医药与食品检测技术领域。
背景技术
阿胶作为一种传统名贵中药，已有数千年的食用历史，具有补血滋阴，润燥，止血的功效。中国药典规定，阿胶为马科动物驴Equus asinus L.的干燥皮或鲜皮经煎煮、浓缩制成的固体胶。纯正的阿胶必需来自百分百的驴皮，方能保证产品的功效。从原料生物分类学上看，驴属于奇蹄目马科驴属，包括非洲野驴、藏野驴、中亚野驴、家驴等品种。其中中国饲养的家驴包括关中驴、德州驴、广灵驴、佳米驴、泌阳驴、淮阳驴、庆阳驴、华北驴、新疆驴、西南驴等众多地方品种。由于驴的畜牧价值不断下降，而其经济价值却未见提高，驴的数量在世界范围内急剧下降，驴皮的供应也逐年紧张，价格不断上涨。市场上出现了很多不法分子，在生产阿胶时，部分甚至全部用各种其他动物皮包括马皮、骡皮、牛皮、猪皮等来取代驴皮进行熬制，有的甚至直接掺入工业明胶。这些伪品的存在严重干扰了市场正常秩序，损害消费者利益，影响正规产品的信誉。
阿胶、龟甲胶、鹿角胶等胶类中药一般经长时间高温蒸煮浓缩而成，主要成分非常相近且不同厂家的生产工艺存有差异，采用红外、近红外、X-衍射、HPLC等方法对阿胶、龟甲胶、鹿角胶进行真伪鉴别常存在判断不准确、缺乏足够说服力等。目前已报道的鉴别阿胶真伪比较权威的方法主要是DNA分子鉴定方法和检测特征性肽段的液质联用方法。已报道的这两种方法都无法对阿胶、龟甲胶、鹿角胶等胶类中药中驴皮源成分进行比较准确的定量检测，因为选择的专属性成分往往随工艺变化而变化，不能相对稳定，而且对驴皮源性成分检测基本都没有排除马皮源性成分，因此虽宣称为驴皮源成分，实则为驴与马共有。
因此，目前迫切需要提出一种能够快速、准确检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的方法，进而实现对阿胶产品的真伪鉴别。
发明内容
本发明的一个目的在于，提供快速、准确检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物。
本发明的再一个目的在于，提供用于快速、准确检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的试剂盒。
本发明的另一个目的在于，提供快速、准确检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的检测方法。
为了实现上述目的，本发明采用了以下技术手段：
本发明的一种用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物，其由多肽I、多肽II、多肽III以及对照品检测基质组成，其中，所述多肽I的氨基酸序列为Gly-Glu-Pro-Gly-Pro-Thr-Gly-Leu-Pro-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Arg(SEQ ID NO.1所示)，多肽II的氨基酸序列为His-Gly-His-Arg(SEQ ID NO.2所示)，多肽III的氨基酸序列为Gly-Val-Val-Gly-Leu-Pro-Gly-Gln-Arg(SEQ ID NO.3所示)，对照品检测基质为鱼皮胶。
含有所述组合物的检测试剂盒也在本发明的保护范围之内。
进一步的，本发明还提出了使用所述的组合物或试剂盒检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的方法，包括如下步骤：
1)对照品溶液的制备：
对照品检测基质粉碎后，称取一定量的对照品检测基质于量瓶中，加入NH4HCO3溶液，超声使样品完全溶解，得到基质溶液，用配制得到的基质溶液溶解称量好的多肽I、多肽II和多肽III，摇匀，得到对照品母液，采用分步稀释的方法，以基质溶液为溶剂，将对照品母液稀释500-105倍，微孔滤膜过滤，续滤液中加胰蛋白酶溶液，酶解；
2)待检测样品溶液的制备：
取待测胶样品于量瓶中，加NH4HCO3溶液溶解，微孔滤膜过滤，续滤液加胰蛋白酶酶解；
3)将对照品溶液、待检测样品溶液分别放入液质联用仪选择m/z717.8→996.5、725.4，m/z253.8→312.2、369.2，m/z442.0→726.4、570.3作为检测离子对进行MRM扫描，其中选择m/z717.8→996.5、m/z253.8→312.2、m/z442.0→726.4分别作为多肽I、多肽II和多肽III的定量离子对，待检测阿胶样品中多肽I的含量记为M1、多肽II的含量记为M2、多肽III的含量记为M3；
4)按下式计算出样品中驴皮源成分的含量：
样品中驴皮源成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％。
在本发明中，优选的，所述的NH4HCO3溶液为1％(w/w)pH8.0的NH4HCO3溶液。
在本发明中，优选的，所述的对照品溶液的制备包括以下步骤：
1)基质溶液的制备：对照品检测基质粉碎后，称取0.50g的对照品检测基质于250ml量瓶中，加少量1％(w/w)pH8.0的NH4HCO3溶液，超声使样品完全溶解，用1％(w/w)pH8.0的NH4HCO3溶液稀释至刻度，摇匀；
2)称取多肽I 28.0mg、多肽II 9.9mg和多肽III 17.2mg于25ml量瓶中，用步骤1)配制的基质溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；
3)对照品溶液的制备：采用分步稀释的方法，以基质溶液为溶剂，分别将对照品母液稀释500-105倍，微孔滤膜过滤，精密量取续滤液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒温酶解12h。
在本发明中，优选的，步骤2)中所述的待检测样品溶液的制备包括以下步骤：取0.05g待测胶样品于25ml量瓶中，加少量1％(w/w)pH8.0的NH4HCO3溶液，超声使样品完全溶解，用1％(w/w)pH8.0的NH4HCO3溶液稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，精密量取续滤液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒温酶解12h。
在本发明中，优选的，步骤3)中液质联用仪检测的液相条件为：C18反相色谱柱，流动相A为含有0.1％(v/v)甲酸的水溶液，流动相B为含有0.1％(v/v)甲酸的乙腈溶液，流速0.3ml/min；梯度洗脱：0→20min，流动相A 100％→25％，流动相B 0％→75％。质谱条件：电喷雾正离子模式(ESI+)进行多反应监测。
更进一步的，本发明还提出了所述的组合物或试剂盒在检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量中的应用。
其中，优选的，所述的伪品胶包括马皮胶、黄明胶、猪皮胶、羊皮胶。
采用本发明的方法，能够快速、准确地检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分的含量。
直接对驴皮源成分进行准确的含量检测，首先要找出能标志驴皮源成分且在不同生产工艺的纯品阿胶中含量相对稳定的物质，尤其要去除与驴亲缘关系较近的马、骡等的伪品成分；其次胶类中药中的成分非常复杂，检测时信号不稳定，因此该物质要满足在检测时具有较高的信号响应、较低的噪音及其他物质干扰，还应考虑检测信号的稳定性；第三需要设立合适的对照品等。对此，本发明通过选取驴皮源性特征性多肽，并采用多肽I的检测值减去多肽II的检测值，并利用多肽III的检测值来修正检测偏差，从而实现对龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分的含量检测。实验证明，采用本发明的方法，能够准确地检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分的含量，且操作简单，在阿胶产品质量监控领域将具有广泛的应用前景。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步的详细描述，其中：
图1是对照品溶液MRM扫描模式下选择离子对m/z717.8→996.5、m/z253.8→312.2、m/z442.0→726.4监测的质谱图；
图2是各种纯品胶MRM扫描模式下选择离子对m/z717.8→996.5、m/z253.8→312.2、m/z442.0→726.4监测的质谱图。
具体实施方式
以下将参照附图，对本发明的优选实例进行详细描述。优选实例中没有注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或制造厂商所建议的条件进行。
实施例1纯品胶的检测
1、材料和试剂
材料：各种纯品胶，包括阿胶、马皮胶、黄明胶、猪皮胶、羊皮胶，龟甲胶、鹿角胶、鱼皮胶(对照品检测基质)，分别用驴皮、马皮、牛皮、猪皮、羊皮、龟甲、鹿角以及鱼皮煎煮、浓缩、干燥后获得。
多肽I(SEQ ID NO.1所示)、多肽II(SEQ ID NO.2所示)、多肽III(SEQ IDNO.3所示)，交由生物公司合成。
试剂：碳酸氢铵(分析纯)、胰蛋白酶(序列纯)。
2、检测方法
1)基质溶液的制备：称取0.50g对照品检测基质于250ml量瓶中，加少量1％NH4HCO3溶液(pH8.0)，超声使样品完全溶解，用1％NH4HCO3溶液(pH8.0)稀释至刻度，摇匀。
2)对照品母液的制备：称取多肽I 28.0mg、多肽II 9.9mg和多肽III 17.2mg于25ml量瓶中，用步骤1)配制的基质溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。
3)对照品溶液的制备：采用分步稀释的方法，以基质溶液为溶剂，将对照品母液稀释1000倍，微孔滤膜过滤，精密量取续滤液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒温酶解12h。
4)待检测纯品胶样品溶液的制备：取0.05g待测纯品胶样品于25ml量瓶中，加少量1％NH4HCO3溶液(pH8.0)，超声使样品完全溶解，用1％NH4HCO3溶液(pH8.0)稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，精密量取续滤液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒温酶解12h。
5)分别取对照品溶液、待检测纯品胶样品溶液各5μl放入液质联用仪进行检测。液相条件：C18反相色谱柱(2.1mm×100mm，1.8μm)，流动相A为0.1％甲酸的水溶液，流动相B为0.1％甲酸的乙腈溶液，流速0.3ml/min；梯度洗脱：0→5min，流动相A 100％→10％，流动相B 0％→90％；5→25min，流动相A 10％→25％，流动相B 90％→75％。质谱条件：电喷雾正离子模式(ESI+)进行多反应监测，选择m/z717.8→996.5、725.4，m/z253.8→312.2、369.2，m/z442.0→726.4、570.3作为检测离子对进行MRM扫描，其中选择m/z717.8→996.5、m/z253.8→312.2、m/z442.0→726.4分别作为多肽I、多肽II和多肽III的定量离子对。
6)计算出样品中阿胶的含量：
图1是对照品溶液MRM扫描模式下选择离子对m/z717.8→996.5、m/z253.8→312.2、m/z442.0→726.4监测的质谱图；图2是各种纯品胶MRM扫描模式下选择离子对m/z717.8→996.5、m/z253.8→312.2、m/z442.0→726.4监测的质谱图。
通过将对照品与纯品胶的质谱图峰面积比对，计算出纯品胶中多肽I、多肽II和多肽III的含量，待检测阿胶样品中多肽I的含量记为M1、多肽II的含量记为M2、多肽III的含量记为M3，然后，按下式计算出各样品中驴皮源性成分的含量：
样品中驴皮源成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％
阿胶中驴皮源性成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％＝(0.8812/1433.6–0/252.8)×882/0.5421×100％＝100.01％≈100％
马皮胶中驴皮源性成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％＝(0.8769/1433.6–0.1516/252.8)×882/0.5452×100％＝1.94％≈0％
黄明胶中驴皮源性成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％＝(0/1433.6–0/252.8)×882/0.5432×100％＝0％
猪皮胶中驴皮源性成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％＝(0/1433.6–0/252.8)×882/0.5467×100％＝0％
羊皮胶中驴皮源性成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％＝(0/1433.6–0/252.8)×882/0.5515×100％＝0％
龟甲胶中驴皮源性成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％＝(0/1433.6–0/252.8)×882/0.5478×100％＝0％
鹿角胶中驴皮源性成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％＝(0/1433.6–0/252.8)×882/0.5489×100％＝0％
上述计算结果表明：阿胶中驴皮源成分的含量100％，马皮胶、黄明胶、猪皮胶、羊皮胶、龟甲胶和鹿角胶中驴皮源成分的含量为0％。这与实际情况相符，表明该方法能检测驴皮源成分含量。
实施例2混合胶样品的检测
1、材料和试剂
材料：混合胶样品由实施例1中的龟甲胶以及鹿角胶纯品胶样品分别加入不同质量的阿胶制成，包括含15％(w/w)阿胶的龟甲胶、含30％(w/w)阿胶的龟甲胶、含30％(w/w)阿胶的鹿角胶，分别作为样品1-3。
多肽I(SEQ ID NO.1所示)、多肽II(SEQ ID NO.2所示)、多肽III(SEQ IDNO.3所示)，交由生物公司合成。
鱼皮胶(对照品检测基质)按照实施例1所述方法制备。
试剂：碳酸氢铵(分析纯)、胰蛋白酶(序列纯)。
2、检测方法
1)基质溶液的制备：称取0.50g对照品检测基质于250ml量瓶中，加少量1％NH4HCO3溶液(pH8.0)，超声使样品完全溶解，用1％NH4HCO3溶液(pH8.0)稀释至刻度，摇匀。
2)对照品母液的制备：称取多肽I 28.0mg、多肽II 9.9mg和多肽III 17.2mg于25ml量瓶中，用上述配制的基质溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。
3)对照品溶液的制备：采用分步稀释的方法，以基质溶液为溶剂，分别将对照品母液稀释500倍、1000倍、2000倍、4000倍、8000倍、10000倍，微孔滤膜过滤，精密量取续滤液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒温酶解12h。
4)待检测混合胶样品溶液的制备：取0.05g待测混合胶样品于25ml量瓶中，加少量1％NH4HCO3溶液(pH8.0)，超声使样品完全溶解，用1％NH4HCO3溶液(pH8.0)稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，精密量取续滤液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒温酶解12h。
5)分别取对照品溶液、待检测混合胶样品溶液各5μl放入液质联用仪进行检测。液相条件：C18反相色谱柱(2.1mm×100mm，1.8μm)，流动相A为0.1％甲酸的水溶液，流动相B为0.1％甲酸的乙腈溶液，流速0.3ml/min；梯度洗脱：0→5min，流动相A 100％→10％，流动相B 0％→90％；5→25min，流动相A 10％→25％，流动相B 90％→75％。质谱条件：电喷雾正离子模式(ESI+)进行多反应监测，选择m/z717.8→996.5、725.4，m/z253.8→312.2、369.2，m/z442.0→726.4、570.3作为检测离子对进行MRM扫描，其中选择m/z717.8→996.5、m/z253.8→312.2、m/z442.0→726.4分别作为多肽I、多肽II和多肽III的定量离子对。
6)计算出样品中驴皮源成分的含量：
以对照品溶液的各多肽的含量为纵坐标、峰面积为横坐标进行标准曲线的绘制，各多肽的线性相关系数R≥0.995，由此计算出混合胶中多肽I、多肽II和多肽III的含量，待检测阿胶样品中多肽I的含量记为M1、多肽II的含量记为M2、多肽III的含量记为M3，然后，按下式计算出各样品中驴皮源性成分的含量：
驴皮源成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％
样品1中驴皮源性成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％＝(0.1318/1433.6–0/252.8)×882/0.5432×100％＝14.93％
样品2中驴皮源性成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％＝(0.2652/1433.6–0/252.8)×882/0.5508×100％＝29.62％
样品3中驴皮源性成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％(0.2644/1433.6–0/252.8)×882/0.5425×100％＝29.98％
上述计算结果表明：含15％阿胶的龟甲胶中驴皮源成分含量14.93％、含30％阿胶的龟甲胶中驴皮源成分含量29.62％、含30％阿胶的鹿角胶中驴皮源成分含量29.98％。这与实际情况相符，表明该方法能准确检测阿胶、龟甲胶、鹿角胶中驴皮源成分的含量。
综上所述，利用本发明公开的三个多肽以及对照品检测基质，采用液质联用仪，能准确检测阿胶、龟甲胶、鹿角胶中驴皮源成分的含量。
需要说明的是，以上实施例仅用以说明发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域技术人员对本发明作的各种改动或修改而不背离本发明的精神与范围，这些等价形式同样落在本发明的范围内。
序列表
<110> 东阿阿胶股份有限公司
<120> 用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及检测方法
<130> KLPI161262
<160> 3
<170> PatentIn 3.5
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 多肽I
<400> 1
Gly Glu Pro Gly Pro Thr Gly Leu Pro Gly Pro Hyp Gly Glu Arg
<210> 2
<211> 4
<212> PRT
<213> 多肽II
<400> 2
His Gly His Arg
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 多肽III
<400> 3
Gly Val Val Gly Leu Pro Gly Gln Arg

Claims (5)

1.一种检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)对照品溶液的制备：
对照品检测基质粉碎后，称取一定量的对照品检测基质于量瓶中，加入NH4HCO3溶液，超声使样品完全溶解，得到基质溶液，用配制得到的基质溶液溶解称量好的多肽I、多肽II和多肽III，摇匀，得到对照品母液，采用分步稀释的方法，以基质溶液为溶剂，将对照品母液稀释500-105倍，微孔滤膜过滤，续滤液中加胰蛋白酶溶液，酶解；
其中，所述多肽I的氨基酸序列为Gly-Glu-Pro-Gly-Pro-Thr-Gly-Leu-Pro-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Arg，多肽II的氨基酸序列为His-Gly-His-Arg，多肽III的氨基酸序列为Gly-Val-Val-Gly-Leu-Pro-Gly-Gln-Arg，对照品检测基质为鱼皮胶；
2)待检测样品溶液的制备：
取待测胶样品于量瓶中，加NH4HCO3溶液溶解，微孔滤膜过滤，续滤液加胰蛋白酶酶解；
3)将对照品溶液、待检测样品溶液分别放入液质联用仪选择m/z717.8→996.5、725.4，m/z253.8→312.2、369.2，m/z442.0→726.4、570.3作为检测离子对进行MRM扫描，其中选择m/z717.8→996.5、m/z253.8→312.2、m/z442.0→726.4分别作为多肽I、多肽II和多肽III的定量离子对，待检测阿胶样品中多肽I的含量记为M1、多肽II的含量记为M2、多肽III的含量记为M3；
4)按下式计算出样品中驴皮源成分的含量：
样品中驴皮源成分的含量(％)＝(M1/1433.6–M2/252.8)×882/M3×100％。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的NH4HCO3溶液为1％w/w pH8.0的NH4HCO3溶液。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的对照品溶液的制备包括以下步骤：
1)基质溶液的制备：对照品检测基质粉碎后，称取0.50g的对照品检测基质于250ml量瓶中，加少量1％w/w pH8.0的NH4HCO3溶液，超声使样品完全溶解，用1％w/w pH8.0的NH4HCO3溶液稀释至刻度，摇匀；
2)称取多肽I 28.0mg、多肽II 9.9mg和多肽III 17.2mg于25ml量瓶中，用步骤1)配制的基质溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；
3)对照品溶液的制备：采用分步稀释的方法，以基质溶液为溶剂，分别将对照品母液稀释500-105倍，微孔滤膜过滤，精密量取续滤液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒温酶解12h。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述的待检测样品溶液的制备包括以下步骤：取0.05g待测胶样品于25ml量瓶中，加少量1％w/w pH8.0的NH4HCO3溶液，超声使样品完全溶解，用1％w/w pH8.0的NH4HCO3溶液稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，精密量取续滤液100μl加2mg/ml的胰蛋白酶溶液10μl，37℃恒温酶解12h。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中液质联用仪检测的液相条件为：C18反相色谱柱，流动相A为含有0.1％v/v甲酸的水溶液，流动相B为含有0.1％v/v甲酸的乙腈溶液，流速0.3ml/min；梯度洗脱：0→20min，流动相A 100％→25％，流动相B 0％→75％；质谱条件：电喷雾正离子模式(ESI+)进行多反应监测。
CN201710042388.5A 2017-01-20 2017-01-20 用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及检测方法 Active CN106841497B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710042388.5A CN106841497B (zh) 2017-01-20 2017-01-20 用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710042388.5A CN106841497B (zh) 2017-01-20 2017-01-20 用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106841497A CN106841497A (zh) 2017-06-13
CN106841497B true CN106841497B (zh) 2018-08-07

Family

ID=59119909

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710042388.5A Active CN106841497B (zh) 2017-01-20 2017-01-20 用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106841497B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110530999A (zh) * 2019-09-18 2019-12-03 山东省食品药品检验研究院 一种驯鹿角的真伪鉴别方法
CN112098579B (zh) * 2020-09-01 2021-11-23 南京中医药大学 一种区分鹿皮胶或鹿角胶的特征肽段及其检测方法
CN114354772B (zh) * 2020-10-12 2023-10-24 广东一方制药有限公司 用于鳖甲和龟甲检测的特征多肽组合的筛选方法和应用
CN113880916B (zh) * 2021-08-19 2023-06-30 青海瑞肽生物科技有限公司 一种牦牛皮抗氧化多肽及其制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007136436A2 (en) * 2006-02-15 2007-11-29 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of The Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention Detection of anthrax pathogenicity factors
CN103630634A (zh) * 2013-10-30 2014-03-12 山东东阿阿胶股份有限公司 一种龟甲胶、鹿角胶及其制品的检测物及其检测方法
CN105301165A (zh) * 2015-10-09 2016-02-03 东阿阿胶股份有限公司 一种驴特征性多肽及其在检测驴皮源性成分中的应用
CN105842375A (zh) * 2016-03-29 2016-08-10 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 一组鉴别阿胶及其制品中驴源性成分的多肽
CN105950717A (zh) * 2016-04-28 2016-09-21 山东省农业科学院生物技术研究中心 一种阿胶胶液半成品或成品中驴、牛源性成分的定量检测方法、组合物及试剂盒

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007136436A2 (en) * 2006-02-15 2007-11-29 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of The Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention Detection of anthrax pathogenicity factors
CN103630634A (zh) * 2013-10-30 2014-03-12 山东东阿阿胶股份有限公司 一种龟甲胶、鹿角胶及其制品的检测物及其检测方法
CN105301165A (zh) * 2015-10-09 2016-02-03 东阿阿胶股份有限公司 一种驴特征性多肽及其在检测驴皮源性成分中的应用
CN105842375A (zh) * 2016-03-29 2016-08-10 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 一组鉴别阿胶及其制品中驴源性成分的多肽
CN105950717A (zh) * 2016-04-28 2016-09-21 山东省农业科学院生物技术研究中心 一种阿胶胶液半成品或成品中驴、牛源性成分的定量检测方法、组合物及试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Mass spectrometric detection of marker peptides in tryptic digests of gelatin: A new method to differentiate between bovine and porcine gelatin;Guifeng Zhang et al.;《Food Hydrocolloids》;20091231;第23卷;2001-2007页 *
特征肽段检测技术用于胶类药材专属性鉴别方法研究;程显隆 等;《中国药学杂志》;20150131;第50卷;104-108页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106841497A (zh) 2017-06-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106841497B (zh) 用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及检测方法
CN105301165B (zh) 一种驴特征性多肽及其在检测驴皮源性成分中的应用
CN106872591B (zh) 一种用于阿胶真伪鉴定的组合物、试剂盒及其检测方法
CN104345107B (zh) 一种乳或乳制品中牛乳血清白蛋白定量检测试剂盒
Pirini et al. Capillary gas chromatographic determination of free amino acids in honey as a means of discrimination between different botanical sources
CN105273061A (zh) 一种动物胶中的共有多肽及其在检测中的应用
CN106770825B (zh) 一种用于检测动物胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及其检测方法
CN106749598A (zh) 一种用于检测羊奶粉中牛奶粉掺假比例的特征肽组合及方法
CN112213401A (zh) 一种阿胶及其制品的驴源性特征肽及其阿胶及其制品的鉴别方法
CN109280077A (zh) 一种鉴别阿胶及含阿胶制品中猪皮源性成分的多肽
CN109142598A (zh) 一组驴源性特征肽和一种鉴定阿胶或阿胶制品的方法
CN110736802B (zh) 一种液相色谱串联质谱定量检测意蜂蜜中α-葡萄糖苷酶的方法
CN106841437B (zh) 用于检测阿胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及其检测方法
CN108828108A (zh) 同时检测含胶类药材制品中多种动物源性成分的方法
CN110824083B (zh) 一种驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用
CN109187783A (zh) 鹿胶特征肽及鉴定待测样品中是否包含鹿胶的方法
CN103630634A (zh) 一种龟甲胶、鹿角胶及其制品的检测物及其检测方法
CN104749274B (zh) 一种鉴别真假酿造酱油的方法
CN106872614B (zh) 用于检测复方阿胶制剂中阿胶含量的组合物、试剂盒及其检测方法
CN108169342A (zh) 含乳饮料中纽甜含量的检测方法
CN106770766B (zh) 一种用于检测胶类中药及其复方制剂中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及其检测方法
CN113804806A (zh) 燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法
CN106680398B (zh) 一种用于检测阿胶糕中阿胶含量的组合物及其检测方法
CN106706783B (zh) 一种用于阿胶及其复方制剂真伪鉴定的组合物、试剂盒及其检测方法
CN111289661B (zh) 一种液相色谱串联质谱检测蜂蜜中意蜂和中蜂α-淀粉酶的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant