CN108169342A - 含乳饮料中纽甜含量的检测方法 - Google Patents

含乳饮料中纽甜含量的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提出了一种含乳饮料中纽甜含量的检测方法。所述方法包括：取所述含乳饮料与提取液进行混合，以便得到第一混合液，其中，所述提取液的pH值为4.3～4.7；将所述第一混合液、亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液进行混合，以便获得第二混合液；调节所述第二混合液的pH值至4.3～4.7，并将所得到的混合液进行离心，收集上清液；以及利用液相色谱对所述上清液进行检测，并基于检测结果确定所述含乳饮料中纽甜含量。本发明的含乳饮料中纽甜含量的检测方法能够准确地测定出含乳饮料中的纽甜含量，且检测时间较短。

Description

含乳饮料中纽甜含量的检测方法
技术领域
本发明涉及食品领域。具体地，本发明涉及含乳饮料中纽甜含量的检测方法。
背景技术
纽甜，化学名称为N-[N-(3,3-二甲基丁基)-L-α-天冬氨酰]-L-苯丙氨酸-1-甲酯，是白色结晶粉末，含约4.5％的结晶水，是一种功能性甜味剂。具有纯正的甜味，甜味协和，没有其他强力甜味剂常带的苦味和金属味，在瞬时高温的条件下保持稳定。
然而，目前含乳饮料中纽甜含量的检测方法仍有待改进。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出了一种含乳饮料中纽甜含量的检测方法。本发明的含乳饮料中纽甜含量的检测方法能够准确地测定出含乳饮料中的纽甜含量，且检测时间较短。
需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：
食品中纽甜的检测方法主要为GB/T23378-2009中高效液相色谱法进行检测，该方法使用SPE固相萃取柱过滤杂质，存在检验成本较高、分析时间较长、效率低、保留时间不稳定很难定性、方法稳定性差、准确度低等不足的地方。
有鉴于此，发明人经过大量实验发现，利用亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液沉淀蛋白来替代SPE固相萃取柱，并通过调节沉淀蛋白后溶液的pH值，使其与提取纽甜的试剂的pH值一致，从而确保目标峰的出峰时间一致，提高检测结果的稳定性。由此，根据本发明实施例的含乳饮料中纽甜含量的检测方法能够准确地测定出含乳饮料中的纽甜含量，且检测时间较短。
为此，本发明提出了一种含乳饮料中纽甜含量的检测方法。根据本发明的实施例，取所述含乳饮料与提取液进行混合，以便得到第一混合液，其中，所述提取液的pH值为4.3～4.7；将所述第一混合液、亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液进行混合，以便获得第二混合液；调节所述第二混合液的pH值至4.3～4.7，并将所得到的混合液进行离心，收集上清液；以及利用液相色谱对所述上清液进行检测，并基于检测结果确定所述含乳饮料中纽甜含量。
发明人发现，利用蛋白沉淀剂沉淀蛋白，以取代SPE固相萃取柱，不仅能够有效地除去蛋白质，防止其对后续检测造成影响，还可以降低检测成本。进而，发明人经过大量实验发现，亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液沉淀蛋白的效果较佳，且对于检测不会造成影响，对环境破坏较小。然而，其他蛋白沉淀剂的效果不佳，有些沉淀剂挥发性较高，破坏环境，例如三氯乙酸、冰乙酸；有些沉淀剂沉淀蛋白的过程中，同时会沉淀少量纽甜，导致检测结果偏低，例如硫酸铵、硫酸镁等。
此外，发明人发现，沉淀蛋白后的溶液的pH值会影响后续检测时目标峰的出峰时间，不适宜的pH值会造成出峰时间不稳定，批次间出峰时间不同，容易造成误判。进而，发明人发现，将第二混合液的pH值与提取液的pH值控制为相同或相近，能够保证目标峰的出峰时间一致。
进一步地，发明人发现，通过调节第二混合液的pH值至4.3～4.7时，不仅能够有效地提取纽甜，还可以使得目标峰的出峰时间较短，从而缩短检测时间。
由此，根据本发明实施例的含乳饮料中纽甜含量的检测方法能够准确地测定出含乳饮料中的纽甜含量，且检测时间较短。
根据本发明的实施例，上述含乳饮料中纽甜含量的检测方法还可以具有下列附加技术特征：
根据本发明的实施例，所述提取液为含有甲酸和三乙胺的溶液。由此，能够有效地提取出纽甜。
根据本发明的实施例，所述亚铁氰化钾溶液的浓度为92g/L，所述乙酸锌溶液的浓度为182g/L。发明人经过大量实验得到上述浓度，在此条件下能够有效地沉淀蛋白，防止其对后续检测造成影响。若亚铁氰化钾或乙酸锌溶液浓度过高，样液较粘稠，不易调节pH值；若浓度过低，无法充分沉淀蛋白，从而对后续检测造成影响。
根据本发明的实施例，基于10mL所述含乳饮料，所述亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液的用量均为0.5mL。发明人经过大量实验得到上述亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液用量，在此条件下能够有效地沉淀蛋白，防止其对后续检测造成影响。若亚铁氰化钾或乙酸锌溶液用量过高，样液较粘稠，不易调节pH值；若用量过低，无法充分沉淀蛋白，从而对后续检测造成影响。
根据本发明的实施例，利用甲酸调节所述第二混合液的pH值至4.3～4.7。甲酸是酸性较强的有机酸并且提取液中含有甲酸，所以采用甲酸调节pH值既可以使反应体系的体积变化较小，还可以进一步提取纽甜，从而提高检测结果的准确性。
根据本发明的实施例，所述液相色谱的检测条件如下：色谱柱为Venusil ASB C18色谱柱；检测波长为218nm；柱温为30℃；进样量为20μL；以及流动相为含有乙腈溶液和辛烷磺酸钠溶液的混合液，其中，所述辛烷磺酸钠溶液的pH值为3.1～3.3，按照下列条件进行梯度洗脱：
时间(min) 乙腈溶液％ 辛烷磺酸钠溶液％
0.00 25.00 75.00
8.00 25.00 75.00
20.00 35.00 65.00
22.00 100.00 0.00
24.00 100.00 0.00
24.01 25.00 75.00
35.00 25.00 75.00
发明人意外地发现，流动相的pH值会影响目标峰的出峰时间。进而，发明人经过大量实验发现，当辛烷磺酸钠溶液的pH值为3.1～3.3，能够有效地缩短目标峰的出峰时间。
根据本发明的实施例，所述离心是在5000r/min的转速下进行5分钟。发明人发现，在此条件下能够有效地除去蛋白质，从而防止其对后续检测造成干扰。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种含乳饮料中纽甜含量的检测方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：1)称取10g含乳饮料于25ml容量瓶中，加入10ml提取液混匀，超声提取15min，取出冷却到室温，得到第一混合液，其中所述提取液为含有0.8mL/1000mL甲酸和2.5mL/1000mL三乙胺的溶液，pH值为4.5±0.2；2)向所述第一混合液中加入0.5ml 92g/L亚铁氰化钾溶液和0.5ml 182g/L乙酸锌溶液，混匀，得到第二混合液；3)利用甲酸调节所述第二混合液的pH值至4.5±0.2，并将所得到的混合液置于50ml离心管中，5000r/min的转速离心5min，收集上清液；4)制备不同浓度标准品溶液；以及5)利用液相色谱分别对所述上清液和不同浓度标准品溶液进行测定，绘制纽甜浓度—峰面积标准曲线，再将所述上清液测得的峰面积代入所述标准曲线中，计算得到所述含乳饮料中纽甜含量，其中，所述液相色谱的检测条件如下：色谱柱为Venusil ASB C18色谱柱；检测波长为218nm；柱温为30℃；进样量为20μL；以及流动相为含有乙腈溶液和辛烷磺酸钠溶液的混合液，其中，所述辛烷磺酸钠溶液的pH值为3.1～3.3，按照下列条件进行梯度洗脱：
时间(min) 乙腈溶液％ 辛烷磺酸钠溶液％
0.00 25.00 75.00
8.00 25.00 75.00
20.00 35.00 65.00
22.00 100.00 0.00
24.00 100.00 0.00
24.01 25.00 75.00
35.00 25.00 75.00
由此，根据本发明实施例的含乳饮料中纽甜含量的检测方法能够准确地测定出含乳饮料中的纽甜含量，且检测时间较短。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
在该实施例中，按照下列方法测定含乳饮料中纽甜含量：
1、试剂及溶液
乙腈：色谱纯；
甲醇：色谱纯；
辛烷磺酸钠：色谱纯；
甲酸：色谱纯；
三乙胺：色谱纯；
磷酸：色谱纯；
亚铁氰化钾：分析纯；
乙酸锌：分析纯；
纽甜标准品：纯度>99％；
提取液：分别吸取0.8ml甲酸和2.5ml三乙胺，加水定容值1000ml；pH值为4.5±0.2；
离子对缓冲液：称取2.0g辛烷磺酸钠用水溶解，用磷酸调PH值3.2±0.1定容到1000ml；
纽甜标准储备液：称取0.1g标准品，用混合提取液溶解定容到100ml容量瓶中，此溶液浓度为1.0mg/ml。
纽甜标准中间液：从储备液中吸取1.00ml，用混合提取液溶解定容到100ml容量瓶中，此溶液浓度为10.0μg/ml。
2、检测过程
1)称取10g样品于25ml容量瓶中，加入10ml混合提取液混匀，超声提取15min，取出冷却到室温，得到第一混合液。
2)向第一混合液中加入0.5ml92g/L亚铁氰化钾溶液和0.5ml 182g/L乙酸锌溶液，混匀，得到第二混合液。
3)调节第二混合液的pH值至4.5±0.2，并将所得到的混合液置于50ml离心管中，5000r/min的转速离心5min，收集上清液。
4)标准曲线的配置：从标准中间液中吸取0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.6ml、3.2ml，分别用混合提取液定容10ml容量瓶中，曲线溶液浓度分别为0.2μg/ml、0.4μg/ml、0.8μg/ml、1.6μg/ml和3.2μg/ml，得到不同浓度标准品溶液。
5)利用液相色谱分别对上清液和不同浓度标准品溶液进行测定，绘制纽甜浓度—峰面积标准曲线，再将上清液测得的峰面积代入标准曲线，计算得到含乳饮料中纽甜含量。
3、仪器参考条件
色谱柱：Venusil ASB C18 4.6×250mm,5um色谱柱；
检测波长218nm；
柱温箱温度30℃；
进样量20μl，
流动相为含有乙腈溶液和辛烷磺酸钠溶液的混合液，其中，辛烷磺酸钠溶液的pH值为3.1～3.3，按照下列条件进行梯度洗脱：
时间(min) 乙腈溶液％ 辛烷磺酸钠溶液％
0.00 25.00 75.00
8.00 25.00 75.00
20.00 35.00 65.00
22.00 100.00 0.00
24.00 100.00 0.00
24.01 25.00 75.00
35.00 25.00 75.00
对比例1
按照GB/T23378-2009方法(下面简称国标方法)测定含乳饮料中纽甜含量的检测方法，结果如表1所示。可以看出，两者的检测结果差别不大，但是实施例1的精密度偏高。主要原因可能是通过沉淀蛋白解析一些被蛋白所吸附的纽甜。此外，国标方法的检测时间为18min～20min，而实施例1方法的检测时间为9min～11min，明显短于国标方法，从而提高了检测效率。
表1国标法和实施例1方法检测结果
序号 国标方法(mg/kg) 实施例1(mg/kg)
1 1.19 1.20
2 1.20 1.21
3 1.18 1.17
4 1.12 1.16
5 1.10 1.13
6 1.22 1.15
7 1.13 1.17
8 1.17 1.18
9 1.19 1.19
10 1.20 1.22
11 1.11 1.21
12 1.09 1.17
13 1.14 1.20
14 1.18 1.23
15 1.16 1.15
16 1.11 1.16
17 1.15 1.18
18 1.21 1.20
19 1.20 1.19
20 1.13 1.16
平均值 1.16 1.18
RSD％ 3.48％ 2.21％
对比例2
按照实施例1的方法测定含乳饮料中纽甜含量，区别在于，将0.5mL亚铁氰化钾溶液和0.5mL乙酸锌溶液替换为6g硫酸铵，结果如表2。可以看出，对比例2的结果明显低于实施例1，对比例2的结果偏低原因可能是蛋白沉淀不完全或同时部分纽甜也被沉淀。此外对比例2的保留时间稳定性比较差。
表2实施例1和对比例2方法检测结果
对比例3
按照实施例1的方法测定含乳饮料中纽甜含量，区别在于，调节第二混合液的pH值至4.0和5.0。
发明人发现，调节第二混合液的pH值至4.0和5.0时样品中目标峰的保留时间和标准品中的目标峰保留时间不一致，导致无法准确定性。此外，如表3所示，pH值4.0和5.0时检测结果明显偏低，精密度也比较差。
表3不同PH值时检测结果
对比例4
按照实施例1的方法测定含乳饮料中纽甜含量，区别在于，辛烷磺酸钠溶液的pH值为2.1～2.2。
结果表明，对检测结果的准确性影响不大，但是目标峰的出峰时间过长，降低了检测效率。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (8)

1.一种含乳饮料中纽甜含量的检测方法，其特征在于，包括：
(1)称取10g含乳饮料于25ml容量瓶中，加入10ml提取液混匀，超声提取15min，取出冷却到室温，得到第一混合液，其中所述提取液为含有0.8mL/1000mL甲酸和2.5mL/1000mL三乙胺的溶液，pH值为4.5±0.2；
(2)向所述第一混合液中加入0.5ml 92g/L亚铁氰化钾溶液和0.5ml 182g/L乙酸锌溶液，混匀，得到第二混合液；
(3)利用甲酸调节所述第二混合液的pH值至4.5±0.2，并将所得到的混合液置于50ml离心管中，5000r/min的转速离心5min，收集上清液；
(4)制备不同浓度标准品溶液；以及
(5)利用液相色谱分别对所述上清液和不同浓度标准品溶液进行测定，绘制纽甜浓度—峰面积标准曲线，再将所述上清液测得的峰面积代入所述标准曲线中，计算得到所述含乳饮料中纽甜含量，
其中，所述液相色谱的检测条件如下：
色谱柱为Venusil ASB C18色谱柱；
检测波长为218nm；
柱温为30℃；
进样量为20μL；以及
流动相为含有乙腈溶液和辛烷磺酸钠溶液的混合液，其中，所述辛烷磺酸钠溶液的pH值为3.1～3.3，按照下列条件进行梯度洗脱：
2.一种含乳饮料中纽甜含量的检测方法，其特征在于，包括：
取所述含乳饮料与提取液进行混合，以便得到第一混合液，其中，所述提取液的pH值为4.3～4.7；
将所述第一混合液、亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液进行混合，以便获得第二混合液；
调节所述第二混合液的pH值至4.3～4.7，并将所得到的混合液进行离心，收集上清液；以及
利用液相色谱对所述上清液进行检测，并基于检测结果确定所述含乳饮料中纽甜含量。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述提取液为含有甲酸和三乙胺的溶液。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述亚铁氰化钾溶液的浓度为92g/L，所述乙酸锌溶液的浓度为182g/L。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，基于10mL所述含乳饮料，所述亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液的用量均为0.5mL。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，利用甲酸调节所述第二混合液的pH值至4.3～4.7。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的检测条件如下：
色谱柱为Venusil ASB C18色谱柱；
检测波长为218nm；
柱温为30℃；
进样量为20μL；以及
流动相为含有乙腈溶液和辛烷磺酸钠溶液的混合液，其中，所述辛烷磺酸钠溶液的pH值为3.1～3.3，按照下列条件进行梯度洗脱：
8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述离心是在5000r/min的转速下进行5分钟。
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