CN110824083B - 一种驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用 - Google Patents

一种驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110824083B
CN110824083B CN201911077133.8A CN201911077133A CN110824083B CN 110824083 B CN110824083 B CN 110824083B CN 201911077133 A CN201911077133 A CN 201911077133A CN 110824083 B CN110824083 B CN 110824083B
Authority
CN
China
Prior art keywords
donkey
glue
gly
hide gelatin
bone glue
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201911077133.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110824083A (zh
Inventor
郭尚伟
段小波
周祥山
田守生
徐云鹏
王雨华
王玉娇
史兆松
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dong E E Jiao Co Ltd
Original Assignee
Dong E E Jiao Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dong E E Jiao Co Ltd filed Critical Dong E E Jiao Co Ltd
Priority to CN201911077133.8A priority Critical patent/CN110824083B/zh
Publication of CN110824083A publication Critical patent/CN110824083A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110824083B publication Critical patent/CN110824083B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
    • G01N2030/8818—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials involving amino acids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用。所述的驴骨胶特征性多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，该多肽为驴骨胶特有，而阿胶、黄明胶、猪皮胶等动物皮胶则不含。通过液质联用仪对该多肽进行检测，实现了对动物皮胶及其制品中驴骨胶成分的快速鉴别检测，而且还可以对驴骨胶成分进行准确定量。本发明的方法特征性强，灵敏度高，操作简单，为检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分的检测提供了有效技术手段。

Description

一种驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成 分中的应用
技术领域
本发明涉一种驴骨胶特征性多肽及其应用，还涉及动物皮胶及其制品中驴骨胶成分的检测方法，本发明属于医药与食品检测技术领域。
背景技术
动物胶为由动物的皮、骨等熬制而成胶类物质，在食品、保健品和药品中有着广泛的应用。动物皮胶常见的包括阿胶、黄明胶、猪皮胶等，在临床应用上各有特点，需用规定原料熬制，比如阿胶由驴皮熬制、黄明胶由牛皮熬制等，否则将视为伪品。因各种胶外观非常相似，而且价格差别很大，因此除了各种胶容易混淆外，市场上还出现了造假、制假的不法分子。以阿胶为例，在生产阿胶时，部分用其他动物皮包括马皮、牛皮、猪皮等，也有用驴骨来取代驴皮进行假阿胶的熬制，从而谋取非法利益。
随着质谱检测技术的发展，逐渐产生了动物皮类样品中驴、马、牛、猪、羊源性成分的检测方法，它们都是基于不同动物的Ⅰ型胶原蛋白中氨基酸序列的不同，寻找特征性多肽进行检测。但是对于动物皮胶与骨胶的鉴别区分仍存在很大困难，比如阿胶与驴骨胶，它们的成分相近，Ⅰ型胶原蛋白序列相同，因此无法采用以前的方法进行鉴别区分。
因此，迫切需要提出一种能够快速、准确检测动物皮胶及其制品中驴骨胶含量的方法，进而实现对动物皮胶及其制品，尤其是阿胶产品的真伪鉴别。
发明内容
本发明的主要目的就是针对以上存在的问题，提供一种驴骨胶特征性多肽，并建立针对动物皮胶及其制品中驴骨胶成分的检测方法，该方法操作简单，灵敏度高，不但能鉴定是否含有驴骨胶成分，而且还能准确定量。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
首先，本发明提出了一种驴骨胶特征性多肽，所述的驴骨胶特征性多肽的氨基酸序列为Gly-Glu-Hyp-Gly-Gly-Ala-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Arg(SEQ ID NO.1所示，其中Xaa＝Hyp)。
进一步的，本发明还提出了所述的驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用。
其中，优选的，本发明通过液质联用仪对所述的骨胶特征性多肽进行检测，进而来判定动物皮胶及其制品中是否含有驴骨胶成分。
更进一步的，本发明还提出了一种检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分的方法，当检测样品为动物皮胶时，包括以下步骤：
将待测的动物皮胶用胰蛋白酶进行酶切处理后，取酶解液注入液质联用仪，采用二级质谱模式，选择m/z683.7(双电荷)→590.5，m/z683.7(双电荷)→628.5，m/z683.7(双电荷)→826.4作为检测离子对进行MRM检测，对照品为驴骨胶纯品或是以待检测的阴性样品为基质，通过加入上述的驴骨胶特征性多肽制备而成；如果检测出的该离子的保留时间与对照品一致，而且其子离子与对照品的子离子一致，则所述样品中含有驴骨胶成分，其含量可根据对照品的峰面积计算。
当检测样品为动物皮胶制品时，包括以下步骤：
将待测的动物皮胶制品经蛋白提纯后，用胰蛋白酶进行酶切处理，取酶解液注入液质联用仪，采用二级质谱模式，选择m/z683.7(双电荷)→590.5，m/z683.7(双电荷)→628.5，m/z683.7(双电荷)→826.4作为检测离子对进行MRM检测，对照品为驴骨胶纯品或是以待检测的阴性样品为基质，通过加入上述的驴骨胶特征性多肽制备而成；如果检测出的该离子的保留时间与对照品一致，而且其子离子与对照品的子离子一致，则所述样品中含有驴骨胶成分，其含量可根据对照品的峰面积计算。
其中，优选的，将待测的动物皮胶用胰蛋白酶进行酶切处理的具体操作步骤为：取0.05g待测动物皮胶样品于25ml量瓶中，用1％w/v NH4HCO3溶液(pH8.0)溶解并定容，过0.22μm微孔滤膜，精密量取续滤液300μl，加2mg/ml的胰蛋白酶溶液30μl，37℃恒温酶解过夜，获得酶解液。
其中，优选的，动物皮胶制品进行蛋白提纯以及酶切处理的具体操作为：取0.5g待测动物皮胶制品于50ml量瓶中，加适量水，超声使样品溶解完全，用水定容至刻度，取5ml加入5ml的30％v/v的三氯乙酸溶液，4℃静置30min，然后5000rpm离心5min，弃清液，沉淀物中加5ml丙酮，振荡5min，5000rpm离心5min，弃清液，沉淀物在室温下干燥15min，移入25ml量瓶中，用1％w/vNH4HCO3溶液(pH8.0)溶解并定容，过0.22μm微孔滤膜，精密量取续滤液300μl，加2mg/ml的胰蛋白酶溶液30μl，37℃恒温酶解过夜，获得酶解液。
其中，优选的，液质联用仪的检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1％v/v甲酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱：0～25min，A 95％→80％，B5％→20％。流速为0.3ml/min。以质谱仪作为检测器，电喷雾离子源(ESI+)。
其中，优选的，所述动物皮胶包括阿胶、黄明胶、猪皮胶。
其中，优选的，所述动物皮胶制品包括由动物皮胶制成的食品、保健品或药品。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
本发明提出了一种驴骨胶特征性多肽(Gly-Glu-Hyp-Gly-Gly-Ala-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Arg)，该多肽为驴骨胶特有，而阿胶、黄明胶、猪皮胶等动物皮胶则不含，基于该驴骨胶特征性多肽，本发明选择m/z683.7(双电荷)→590.5，m/z683.7(双电荷)→628.5，m/z683.7(双电荷)→826.4作为检测离子对，其中选择m/z683.7→590.5作为定量离子对，通过液质联用仪对该多肽进行检测，实现了对动物皮胶及其制品中驴骨胶成分的快速鉴别检测，而且还可以对驴骨胶成分进行准确定量。本发明的方法特征性强，灵敏度高，操作简单，为检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分的检测提供了有效技术手段。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步的详细描述，其中：
图1是四种纯品胶MRM扫描模式下选择离子对m/z683.7→590.5，628.5，826.4监测的质谱图；
图2是加入5％驴骨胶的混合胶MRM扫描模式下选择离子对m/z683.7→590.5，628.5，826.4监测的质谱图；
图3是不同浓度驴骨胶的混合胶MRM扫描模式下选择离子对m/z683.7→590.5监测的质谱图；
图4是阿胶制品(以阿胶补血膏为例)在MRM扫描模式下选择离子对m/z683.7→590.5，628.5，826.4监测的质谱图。
具体实施方式
以下将参照附图，对本发明的优选实例进行详细描述。优选实例中没有注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或制造厂商所建议的条件进行。
实施例1
1材料和试剂
待测样品：各种纯品胶，包括驴骨胶、阿胶、黄明胶、猪皮胶，分别用驴骨、驴皮、牛皮、猪皮煎煮获得。
试剂：碳酸氢铵(分析纯)、胰蛋白酶(序列纯，购自中国药品生物制品检定研究院)。
2检测方法
取0.05g待测样品于25ml量瓶中，用1％w/vNH4HCO3溶液(pH8.0)溶解并定容，过0.22μm微孔滤膜，精密量取续滤液300μl，加2mg/ml的胰蛋白酶溶液30μl，37℃恒温酶解过夜，获得酶解液。
取5μl酶解溶液放入液质联用仪检测。液相条件：C18反相色谱柱(2.1mm×100mm，1.8μm)，流动相A为0.1％v/v甲酸溶液，流动相B为乙腈，流速0.3ml/min；梯度洗脱：0～25min，A 95％→80％，B 5％→20％。质谱条件：电喷雾离子源(ESI+)，多反应监测(MRM)，选择m/z683.7(双电荷)→590.5，m/z683.7(双电荷)→628.5，m/z683.7(双电荷)→826.4作为检测离子对。
结果见图1，9.7min处只有驴骨胶中检出相应的离子峰，其他均没有检出，可见该法能够特异性检测驴骨胶成分，而与其他动物皮胶成分包括阿胶、黄明胶、猪皮胶进行区分。
实施例2
1材料和试剂
待测样品：混合胶样品由实施例1中的纯品胶样品分别加入5％w/w驴骨胶制成，包括含5％w/w驴骨胶的阿胶、含5％w/w驴骨胶的黄明胶、5％w/w驴骨胶的猪皮胶。
试剂：碳酸氢铵(分析纯)、胰蛋白酶(序列纯，购自中国药品生物制品检定研究院)。
2检测方法
取0.05g待测样品于25ml量瓶中，用1％w/vNH4HCO3溶液(pH8.0)溶解并定容，过0.22μm微孔滤膜，精密量取续滤液300μl，加2mg/ml的胰蛋白酶溶液30μl，37℃恒温酶解过夜，获得酶解液。
取5μl酶解溶液放入液质联用仪检测。液相条件：C18反相色谱柱(2.1mm×100mm，1.8μm)，流动相A为0.1％v/v甲酸溶液，流动相B为乙腈，流速0.3ml/min；梯度洗脱：0～25min，A 95％→80％，B 5％→20％。质谱条件：电喷雾离子源(ESI+)，多反应监测(MRM)，选择m/z683.7(双电荷)→590.5，m/z683.7(双电荷)→628.5，m/z683.7(双电荷)→826.4作为检测离子对。
结果见图2，9.7min处加入5％w/w驴骨胶的混合胶样品中均检出相应的离子峰，而实施例1中的纯品阿胶、黄明胶、猪皮胶中均没有检出相应的离子峰。可见该法能够特异性检测混入驴骨胶成分的动物皮胶。
实施例3
1材料和试剂
动物胶样品：驴骨胶、阿胶分别用驴骨、驴皮煎煮获得。
混合胶样品：含5％w/w驴骨胶的阿胶、10％w/w驴骨胶的阿胶、20％w/w驴骨胶的阿胶、40％w/w驴骨胶的阿胶，由上述纯品胶精确混合制成。
试剂：碳酸氢铵(分析纯)、胰蛋白酶(序列纯，购自中国药品生物制品检定研究院)。
2检测方法
取0.05g待测样品于25ml量瓶中，用1％w/vNH4HCO3溶液(pH8.0)溶解并定容，过0.22μm微孔滤膜，精密量取续滤液300μl，加2mg/ml的胰蛋白酶溶液30μl，37℃恒温酶解过夜，获得酶解液。
取5μl酶解溶液放入液质联用仪检测。液相条件：C18反相色谱柱(2.1mm×100mm，1.8μm)，流动相A为0.1％甲酸溶液，流动相B为乙腈，流速0.3ml/min；梯度洗脱：0～25min，A95％→80％，B 5％→20％。质谱条件：电喷雾离子源(ESI+)，多反应监测(MRM)，选择m/z683.7(双电荷)→590.5，m/z683.7(双电荷)→628.5，m/z683.7(双电荷)→826.4作为检测离子对，其中选择m/z683.7→590.5作为定量离子对。
图3为提取m/z683.7→590.5的质谱图，由9.7min处的峰面积(AA)对驴骨胶的百分含量绘制标准曲线，线性方程y＝907819x+19561(y为峰面积，x为百分含量)，系数R2＝0.999，线性良好。可见该法能够特异性检测驴骨胶成分，而且可准确对驴骨胶成分进行定量。
实施例4
1材料和试剂
待测样品：驴骨胶、阿胶补血膏(东阿阿胶股份有限公司)、加入驴骨胶的阿胶补血膏
试剂：三氯乙酸(分析纯)、丙酮(分析纯)、碳酸氢铵(分析纯)、胰蛋白酶(序列纯，购自中国药品生物制品检定研究院)。
2检测方法
取0.5g待测样品于50ml量瓶中，加适量水，超声使样品溶解完全，用水定容至刻度，取5ml加入5ml的30％v/v的三氯乙酸溶液，4℃静置30min，然后5000rpm离心5min，弃清液，沉淀物中加5ml丙酮，振荡5min，5000rpm离心5min，弃清液，沉淀物在室温下干燥15min，移入25ml量瓶中，用1％w/vNH4HCO3溶液(pH8.0)溶解并定容，过0.22μm微孔滤膜，精密量取续滤液300μl，加2mg/ml的胰蛋白酶溶液30μl，37℃恒温酶解过夜，获得酶解液。
取5μl酶解溶液放入液质联用仪检测。液相条件：C18反相色谱柱(2.1mm×100mm，1.8μm)，流动相A为0.1％v/v甲酸溶液，流动相B为乙腈，流速0.3ml/min；梯度洗脱：0～25min，A 95％→80％，B 5％→20％。质谱条件：电喷雾离子源(ESI+)，多反应监测(MRM)，选择m/z683.7(双电荷)→590.5，m/z683.7(双电荷)→628.5，m/z683.7(双电荷)→826.4作为检测离子对，其中选择m/z683.7→590.5作为定量离子对。
结果见图4，9.7min处只有驴骨胶和加入驴骨胶的阿胶补血膏中检出相应的离子峰，其他没有检出，可见该法能够特异性检测阿胶制品中的驴骨胶成分，而与其他动物皮胶包括阿胶、黄明胶、猪皮胶进行区分。
综上所述，本发明基于驴骨胶特征性多肽Gly-Glu-Hyp-Gly-Gly-Ala-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Arg，选择m/z683.7(双电荷)→590.5，m/z683.7(双电荷)→628.5，m/z683.7(双电荷)→826.4作为检测离子对，其中选择m/z683.7→590.5作为定量离子对，采用胰蛋白酶酶切、液质联用仪对动物皮胶及其制品进行检测，不但能准确对动物皮胶及其制品与驴骨胶进行鉴别区分，而且还可以对驴骨胶成分进行准确定量。
需要说明的是，以上实施例仅用以说明发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域技术人员对本发明作的各种改动或修改而不背离本发明的精神与范围，这些等价形式同样落在本发明的范围内。
序列表
<110> 东阿阿胶股份有限公司
<120> 一种驴骨胶特征性多肽及其在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用
<130> KLPI190750
<160> 1
<170> PatentIn 3.5
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> Equus asinus
<400> 1
Gly Glu Xaa Gly Gly Ala Gly Pro Val Gly Pro Xaa Gly Glu Arg 15

Claims (6)

1.驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用，所述的驴骨胶特征性多肽的氨基酸序列为Gly-Glu-Hyp-Gly-Gly-Ala-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Arg，所述的动物皮胶为阿胶、黄明胶及/或猪皮胶。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，通过液质联用仪对所述的驴骨胶特征性多肽进行检测，进而来判定动物皮胶及其制品中是否含有驴骨胶成分。
3.一种检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分的方法，其特征在于，当检测样品为动物皮胶时，包括以下步骤：
将待测的动物皮胶用胰蛋白酶进行酶切处理后，取酶解液注入液质联用仪，采用二级质谱模式，选择m/z683.7→590.5，m/z683.7→628.5，m/z683.7→826.4作为检测离子对，其中，m/z683.7为双电荷，选择m/z683.7→590.5作为定量离子对进行MRM检测，对照品为驴骨胶纯品或是以待检测的阴性样品为基质，通过加入驴骨胶特征性多肽制备而成，所述的驴骨胶特征性多肽的氨基酸序列为Gly-Glu-Hyp-Gly-Gly-Ala-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Hyp-Gly-Glu-Arg；如果检测出的该离子的保留时间与对照品一致，而且其子离子与对照品的子离子一致，则所述样品中含有驴骨胶成分，其含量根据对照品的峰面积计算；
当检测样品为动物皮胶制品时，包括以下步骤：
将待测的动物皮胶制品经蛋白提纯后，用胰蛋白酶进行酶切处理，取酶解液注入液质联用仪，采用二级质谱模式，选择m/z683.7→590.5，m/z683.7→628.5，m/z683.7→826.4作为检测离子对，其中，m/z683.7为双电荷，选择m/z683.7→590.5作为定量离子对进行MRM检测，对照品为驴骨胶纯品或是以待检测的阴性样品为基质，通过加入权利要求1所述的驴骨胶特征性多肽制备而成；如果检测出的该离子的保留时间与对照品一致，而且其子离子与对照品的子离子一致，则所述样品中含有驴骨胶成分，其含量根据对照品的峰面积计算；
其中，所述的动物皮胶为阿胶、黄明胶及/或猪皮胶；
其中，液质联用仪的检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1％v/v甲酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱：0～25min，A 95％→80％，B 5％→20％，流速为0.3ml/min，以质谱仪作为检测器，电喷雾离子源ESI+。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，将待测的动物皮胶用胰蛋白酶进行酶切处理的具体操作步骤为：取0.05g待测动物皮胶样品于25ml量瓶中，用pH8.0的1％w/vNH4HCO3溶液溶解并定容，过0.22μm微孔滤膜，精密量取续滤液300μl，加2mg/ml的胰蛋白酶溶液30μl，37℃恒温酶解过夜，获得酶解液。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，动物皮胶制品进行蛋白提纯以及酶切处理的具体操作为：取0.5g待测动物皮胶制品于50ml量瓶中，加适量水，超声使样品溶解完全，用水定容至刻度，取5ml加入5ml的30％v/v的三氯乙酸溶液，4℃静置30min，然后5000rpm离心5min，弃清液，沉淀物中加5ml丙酮，振荡5min，5000rpm离心5min，弃清液，沉淀物在室温下干燥15min，移入25ml量瓶中，用pH8.0的1％w/vNH4HCO3溶液溶解并定容，过0.22μm微孔滤膜，精密量取续滤液300μl，加2mg/ml的胰蛋白酶溶液30μl，37℃恒温酶解过夜，获得酶解液。
6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述动物皮胶制品包括由动物皮胶制成的食品、保健品或药品。
CN201911077133.8A 2019-11-06 2019-11-06 一种驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用 Active CN110824083B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911077133.8A CN110824083B (zh) 2019-11-06 2019-11-06 一种驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911077133.8A CN110824083B (zh) 2019-11-06 2019-11-06 一种驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110824083A CN110824083A (zh) 2020-02-21
CN110824083B true CN110824083B (zh) 2022-04-12

Family

ID=69552898

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911077133.8A Active CN110824083B (zh) 2019-11-06 2019-11-06 一种驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110824083B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112098577B (zh) * 2020-09-01 2022-03-11 南京中医药大学 一种胶类药材的检测方法
CN112098578B (zh) * 2020-09-01 2021-11-23 南京中医药大学 一种可区分鹿角胶和鹿皮胶的特征肽段及其检测方法
CN115015409A (zh) * 2022-05-23 2022-09-06 山东省食品药品检验研究院 一种阿胶多肽lcms特征图谱的建立方法及其质量评价方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5994099A (en) * 1997-12-31 1999-11-30 The University Of Wyoming Extremely elastic spider silk protein and DNA coding therefor
EP1905843A1 (en) * 2006-09-29 2008-04-02 Vlaamse Instelling voor Technologisch Onderzoek Method for determining the allergic potential of a compound
CN102188692B (zh) * 2011-04-29 2012-08-08 俞嘉林 一种骨肽组合物及其制剂、制备方法和应用
CN105301165B (zh) * 2015-10-09 2018-01-12 东阿阿胶股份有限公司 一种驴特征性多肽及其在检测驴皮源性成分中的应用
CN106589063B (zh) * 2016-12-13 2020-06-19 山东省食品药品检验研究院 一组驴源性特征肽及其在驴皮和阿胶胶定性检测中的应用流程
CN106770825B (zh) * 2016-12-22 2019-12-03 东阿阿胶股份有限公司 一种用于检测动物胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及其检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN110824083A (zh) 2020-02-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110824083B (zh) 一种驴骨胶特征性多肽在检测动物皮胶及其制品中驴骨胶成分中的应用
CN105301165B (zh) 一种驴特征性多肽及其在检测驴皮源性成分中的应用
Tanco et al. Characterization of the substrate specificity of human carboxypeptidase A4 and implications for a role in extracellular peptide processing
CN111239302B (zh) 一种利用蛋白质内切酶切割胶原蛋白获得专属性肽段的方法和应用
CN104280468B (zh) 一种胶类中药及其制品中马种和骡种源性成分的检测方法
CN109187783B (zh) 鹿胶特征肽及鉴定待测样品中是否包含鹿胶的方法
CN112213401A (zh) 一种阿胶及其制品的驴源性特征肽及其阿胶及其制品的鉴别方法
CN103630620B (zh) 一种胶类中药及其制品中鹿源性成分的检测方法
CN112048000B (zh) 一种水牛角特征肽段及其检测方法
CN112782291A (zh) 一种阿胶及其制剂中驴源性成分的鉴定方法
CN112098577B (zh) 一种胶类药材的检测方法
CN108828108A (zh) 同时检测含胶类药材制品中多种动物源性成分的方法
JP4563764B2 (ja) ペプチドの定量方法
Cai et al. A quantitative strategy of ultrasound-assisted digestion combined UPLC-MS/MS for rapid identifying species-specific peptide markers in the application of food gelatin authentication
CN110018249A (zh) 一种定性定量分析非酶糖基化血浆白蛋白的方法
CN113896770B (zh) 一种鳖甲特征肽段及其检测方法
CN106872591B (zh) 一种用于阿胶真伪鉴定的组合物、试剂盒及其检测方法
CN106841497A (zh) 用于检测龟甲胶、鹿角胶、阿胶及其伪品胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及检测方法
CN114113381B (zh) 一种舒氏海龙特征多肽及其应用和鉴别舒适海龙的方法
CN106770825B (zh) 一种用于检测动物胶中驴皮源成分含量的组合物、试剂盒及其检测方法
Zhu et al. Determination of porcine derived components in gelatin and gelatin-containing foods by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
RU2748540C1 (ru) Способ детектирования вируса SARS-CoV-2 методом масс-спектрометрии
CN110498838B (zh) 用于fpgs和ggh蛋白表达量检测的特征性肽段及其应用
CN115572322A (zh) 一种麋鹿角特征肽段及其检测方法
CN110568195B (zh) 胶质母细胞瘤相关的尿液蛋白标志物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant