CN106795523A - 制备莱鲍迪苷i的方法以及用途 - Google Patents

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Abstract

在此描述了制备莱鲍迪苷I、包括高度纯化的莱鲍迪苷I的方法。这些方法利用将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的生物催化剂。还提供了包含莱鲍迪苷I的组合物和消费品，包括甜味剂组合物和风味增强组合物。

Description

制备莱鲍迪苷I的方法以及用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2014年8月19日提交的美国专利申请号62/039,344的优先权的权益，该专利申请通过引用以其全文结合于此。
技术领域
本发明涉及一种用于制备莱鲍迪苷I的生物催化方法。本发明还涉及莱鲍迪苷I作为甜味剂、甜味增强剂和/或风味增强剂的用途。
发明背景
高强度甜味剂具有比蔗糖甜味水平高许多倍的甜味水平。它们基本上无热量，并且普遍用于饮食和低热量产品中，包括食品和饮料。高强度甜味剂不引发升糖反应，从而使得它们适合用于针对糖尿病患者和有兴趣控制其碳水化合物摄入的其他人群的产品中。
甜菊醇糖苷是一类在甜叶菊(Stevia rebaudiana Bertoni)(原产于南美某些地区的菊科(Asteraceae(Compositae))的多年生灌木)叶中发现的化合物。它们的结构特征在于单个碱，甜菊醇，差异在于位置C13和C19上碳水化合物残基的存在。它们在甜叶菊的叶子中积累，构成大约10％-20％的总干重。基于干基，在甜叶菊的叶中发现的4种主要糖苷通常包括甜菊苷(stevioside)(9.1％)、莱鲍迪苷A(3.8％)、莱鲍迪苷C(0.6％-1.0％)和杜克苷A(dulcoside A)(0.3％)。
森田化学工业有限公司(Morita Kagaku Kogyo Co.，Ltd)的WO2010/03911披露了在某些甜菊品种的叶中发现少量的莱鲍迪苷I。WO2010/03911没有描述分离的莱鲍迪苷I或含有高浓度莱鲍迪苷I的任何组合物的任何感官性质。
因此，仍然需要用于制备和纯化莱鲍迪苷I的简单、有效和经济的方法，特别是当这些方法以商业规模可用时。
发明内容
本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的生物催化方法，该方法包括使包含莱鲍迪苷A的起始组合物与能够将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的生物催化剂接触。
在一个实施例中，生物催化剂是UDP-糖基转移酶(UGT)。适合的UGT包括但不限于UGT76G1或其变体，其中该变体包含与UGT76G1至少约75％的氨基酸序列一致性。
在一个具体的实施例中，UGT76G1变体含有一个或多个点突变，与在相同条件下使用未突变的UGT76G1相比，发现这些点突变将莱鲍迪苷A至莱鲍迪苷A和/或莱鲍迪苷D至莱鲍迪苷M的转化率提高了至少约5％。适合的突变包括但不限于Q266E、P272A、R334K、G348P、L379G、S42A、F46I、I190L、S274G、I295M、K303G、F314S、K316R、K393R、V394I、I407V、N409K、N409R、Q425E、Q432E、S447A、S456L、I46L、I295M、S119A、S274G、K334R、F314S、K303G、K316R、K393R、I190L、Q425E、Q432E、N138G、V394I、F182L、V407I、A272P、V264C、E449D和A352G。
在优选的实施例中，UGT76G1变体选自下组，该组由以下各项组成：UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
生物催化剂可以以任何形式提供，例如像纯形式、粗裂解物或全细胞悬液。在另一个替代实施例中，该生物催化剂以微生物提供。
起始组合物可以是纯形式的莱鲍迪苷A、甜菊醇糖苷混合物或甜叶菊提取物。在一个实施例中，起始组合物是含有按重量计至少约1％莱鲍迪苷A的甜菊醇糖苷混合物或甜叶菊提取物。
本发明的方法提供了包含按重量计至少约1％莱鲍迪苷I的莱鲍迪苷I组合物。
该方法典型地在培养基中进行。因此，该方法可以进一步包括从培养基中分离莱鲍迪苷I组合物以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。该方法还可以进一步包括纯化步骤，其中将分离的莱鲍迪苷I组合物纯化以提供包含按重量计至少约80％莱鲍迪苷I的高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。在一个实施例中，将分离的莱鲍迪苷I组合物纯化以提供纯莱鲍迪苷I，即按重量计>99％。
本发明还提供纯莱鲍迪苷I。
本发明还提供了包含莱鲍迪苷I的组合物。在一个实施例中，本发明是包含按重量计从约1％至约99％的量的莱鲍迪苷I的组合物。在一个实施例中，本发明是包含按重量计至少约80％的莱鲍迪苷I的高度纯化的莱鲍迪苷A组合物。
本发明还包括使用莱鲍迪苷I作为甜味剂、风味增强剂或甜味增强剂的方法。
本发明还扩展到包含莱鲍迪苷I的甜味剂组合物、风味增强组合物和甜味增强组合物。
还提供了包含莱鲍迪苷I的消费品和包含莱鲍迪苷I的组合物。示例性消费品包括药物组合物、可食用凝胶混合物或组合物、牙科组合物、甜食、调味组合物、口香糖组合物、谷物组合物、烤焙食品、乳制品、以及桌面(tabletop)甜味剂组合物、饮料或饮料产品。
附图的简要说明
附图被包括在内以提供对本发明的进一步理解。这些附图展示了本发明的实施例，并且与说明书一起用来解释本发明的实施例的原理。
图1示出了莱鲍迪苷I的生物催化生产。
图2示出了使用酶UGT76G1从甜菊苷生物催化生产莱鲍迪苷A，以及伴随的通过蔗糖合酶进行UDP至UDP-葡萄糖的再循环。
图3示出了UGT76G1催化的甜菊苷到莱鲍迪苷A的转化。
图4示出了UGT76G1-R1-F12催化的莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的反应特征曲线。
图5示出了用于将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的UGT突变体的活性。
图6示出了纯化前的莱鲍迪苷I的HPLC迹线。
图7示出了在4℃下在水中在400ppm的莱鲍迪苷I与莱鲍迪苷M的感官属性。
详细说明
制备莱鲍迪苷I的方法
本发明提供了一种通过使包含莱鲍迪苷A的起始组合物与能够将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的生物催化剂接触用于制备莱鲍迪苷I组合物的生物催化方法。莱鲍迪苷I组合物可任选地进一步加工以提供高度纯化的莱鲍迪苷I或甚至纯莱鲍迪苷I。
如本文所用，“起始组合物”是指包含莱鲍迪苷A的任何组合物。通常，起始组合物是水溶液。
起始组合物可以是纯化的莱鲍迪苷A、甜菊醇糖苷混合物或甜叶菊提取物。含有莱鲍迪苷A的甜菊醇糖苷混合物和甜叶菊提取物、以及高度纯化的莱鲍迪苷A可从各种供应商商购，或可通过文献中提供的方法容易地制备。例如，可口可乐公司(Coca-Cola Company)的美国专利号8,791,253(其内容通过引用全部并入本文)提供了获得纯度大于95％的莱鲍迪苷A的方法。
在一个实施例中，该起始组合物是纯化的莱鲍迪苷A，即按重量计>99％。
在另一个实施例中，该起始组合物是一种甜菊醇糖苷混合物。甜菊醇糖苷混合物的身份没有特别限制并且可以包括天然存在的甜菊醇糖苷，例如，甜菊单糖苷、甜菊双糖苷、甜叶悬钩子苷、杜克苷B、杜克苷A、莱鲍迪苷B、莱鲍迪苷G、甜菊苷、莱鲍迪苷C、莱鲍迪苷F、莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷I、莱鲍迪苷E、莱鲍迪苷H、莱鲍迪苷L、莱鲍迪苷K、莱鲍迪苷J、莱鲍迪苷M、莱鲍迪苷M2、莱鲍迪苷D、莱鲍迪苷D2、莱鲍迪苷N、莱鲍迪苷O；合成甜菊醇糖苷，例如酶促糖基化甜菊醇糖苷及其组合。
在一些实施例中，该起始组合物是甜菊醇糖苷混合物或甜叶菊提取物，该甜菊醇糖苷混合物或甜叶菊提取物包含按重量计约1％或更高，例如像约20％或更高、约30％或更高、约40％或更高、约50％或更高、约60％或更高、约70％或更高、约80％或更高或约90％或更高的量的莱鲍迪苷A。
在一个具体实施例中，该起始组合物是包含按重量计约50％或更高的量的莱鲍迪苷A的甜菊醇糖苷混合物或甜叶菊提取物。
在另一个具体实施例中，该起始组合物是包含按重量计约80％或更高的量的莱鲍迪苷A的甜菊醇糖苷混合物或甜叶菊提取物。
在还另一个具体实施例中，该起始组合物是包含按重量计约90％或更高的量的莱鲍迪苷A的甜菊醇糖苷混合物或甜叶菊提取物。
在又另一个具体实施例中，该起始组合物是包含按重量计约95％或更高例如像约96％、约97％、约98％或约99％的量的莱鲍迪苷A的甜菊醇糖苷混合物或甜叶菊提取物。
值得注意的是，该起始组合物可以包含一定量的莱鲍迪苷I。例如，该起始组合物是甜叶菊提取物或甜菊醇糖苷混合物。使生物催化剂与起始组合物接触产生莱鲍迪苷I组合物，该莱鲍迪苷I组合物与起始组合物中存在的莱鲍迪苷I的量(如果有的话)相比含有增加量的莱鲍迪苷I。莱鲍迪苷I的增加归因于生物催化剂的作用。
在一个具体的实施例中，莱鲍迪苷组合物(即由本发明的方法得到的组合物)中莱鲍迪苷I的量为比存在于起始组合物中的莱鲍迪苷I的量大出约0.5、约1、约3、约5、约10、约15、约20、约25、约30、约35、约40、约45、约50、约55、约60或约65、约70或约75％或更大。
起始组合物与生物催化剂在包含水和例如各种组分的水性介质中接触，所述组分选自碳源、能源、氮源、微量元素、维生素、核苷、核苷磷酸、核苷二磷酸、核苷三磷酸、有机盐和无机盐、有机酸和矿物酸、碱等等。碳源包括甘油、葡萄糖、二氧化碳、碳酸盐、碳酸氢盐。氮源可包括硝酸盐、亚硝酸盐、氨基酸、肽、蛋白胨、或蛋白质。
在一个具体的实施例中，介质包括缓冲液。适合的缓冲液包括但不限于，PIPES缓冲液、醋酸盐缓冲液和磷酸盐缓冲液。在一个具体的实施例中，介质包括磷酸盐缓冲液。
在一个实施例中，该介质还可以包括有机溶剂，例如，甲醇、乙醇、丙醇等。
如本文所用，“生物催化剂”是指能够将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的酶。该酶可以是天然存在的或重组的蛋白。至少一种生物催化剂用于将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的本发明方法。然而，如果必要的话，可以使用多种生物催化剂。因此，在一些实施例中，使用两种或更多种生物催化剂，例如像三种或更多种生物催化剂、四种或更多种生物催化剂或者五种或更多种生物催化剂。
生物催化剂可以被提供为全细胞悬液、粗裂解物、纯化酶或其组合的形式。在一个实施例中，生物催化剂以纯化形式提供，即作为纯化的酶提供。在另一个实施例中，该生物催化剂以粗裂解物的形式提供。在再另一个实施例中，该生物催化剂以全细胞悬液的形式提供。
在另一个实施例中，该生物催化剂以一个或多个细胞的形式提供，即生物催化剂与一个或多个细胞缔合。生物催化剂可位于细胞表面上、细胞内部或既位于细胞表面上又位于细胞内部。
在另一个实施例中，该生物催化剂以微生物的形式提供，即生物催化剂与微生物缔合。该微生物可以是具有用于将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的一种或多种必需的生物催化剂/酶的任何微生物。适合的微生物包括但不限于，大肠杆菌、酵母菌属物种、曲霉菌属物种、毕赤酵母属物种、芽孢杆菌属物种、耶氏酵母属物种等。
在一个实施例中，当与起始组合物接触时，微生物是游离的(即不是固定的)。
在另一个实施例中，当与起始组合物接触时，微生物是固定的。例如，可将微生物固定至由无机或有机材料制造的固体支持物。适合用于固定微生物的固体支持物的非限制性实例包括衍生的纤维素或玻璃、陶瓷、金属氧化物或膜。可以例如通过共价附着、吸附、交联、捕获或封装将微生物固定至固体支持物。
在再另一个实施例中，该生物催化剂由微生物分泌进入反应介质中。
用于将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的适合的生物催化剂包括但不限于甜菊醇生物合成酶和UDP-糖基转移酶(UGT)。
在一个实施例中，该生物催化剂是甜菊醇生物合成酶，例如甲羟戊酸(MVA)途径酶。
在另一个实施例中，该生物催化剂是甜菊醇生物合成酶，例如非甲羟戊酸2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸途径(MEP/DOXP)酶。
在一个实施例中，该生物催化剂是甜菊醇生物合成酶，选自下组，该组由以下各项组成：香叶基香叶基二磷酸合酶、柯巴基二磷酸合酶、贝壳杉烯合酶、贝壳杉烯氧化酶、贝壳杉烯酸13-羟化酶(KAH)、甜菊醇合成酶、脱氧木酮糖5-磷酸合酶(DXS)、D-1-脱氧木酮糖5-磷酸还原异构酶(DXR)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇合酶(CMS)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇激酶(CMK)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇2,4-环二磷酸合酶(MCS)、l-羟基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-二磷酸合酶(HDS)、l-羟基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-二磷酸还原酶(HDR)、乙酰乙酰-CoA硫解酶、截短的HMG-CoA还原酶、甲羟戊酸激酶、磷酸甲羟戊酸激酶、甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶和细胞色素P450还原酶。
在一个实施例中，该生物催化剂是能够向莱鲍迪苷A添加至少一个葡萄糖单元以提供莱鲍迪苷I的UGT。在一个实施例中，UGT是UGT76G1或其变体，其中该变体包含与UGT76G1约75％或更大的氨基酸序列一致性。示例性UGT76G1变体包括但不限于UGTSL、UGTSL2、UGTLB、UGT91D2、UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
在另一个实施例中，该生物催化剂是UGT，选自以下基因信息(GenInfo)识别号的清单，优选来自呈现在表1中的组，并且更优选呈现在表2中的组。
表1
表2
GI号 登录号 起源 内标
460409128 XP.004249992.1 番茄 UGTSL
460386018 XP.004238697.1 番茄 -
460409134 XP.004249995.1 番茄 -
460410132 XP.004250485.1 番茄 UGTSL2
460410130 XP.004250484.1 番茄 -
460410128 XP.004250483.1 番茄 -
460378310 XP.004234916.1 番茄 -
209954733 BAG80557.1 宁夏枸杞 UGTLB
209954725 BAG80553.1 宁夏枸杞 -
在一个实施例中，该生物催化剂是含有一个或多个点突变的UGT76G1变体，与在相同条件下使用未突变的UGT76G1相比，发现这些点突变将莱鲍迪苷A至莱鲍迪苷I的转化率提高至少约5％(其中结果为归一化的)。在另一个实施例中，该生物催化剂是含有一个或多个点突变的UGT76G1变体，与在相同条件下使用未突变的UGT76G1相比，发现这些点突变将莱鲍迪苷D至莱鲍迪苷M的转化率提高至少约5％(其中结果为归一化的)。
在一个实施例中，该生物催化剂是纯化的UGT76G1变体，即以纯化酶形式提供的UGT76G1。在另一个实施例中，该生物催化剂是以粗裂解物的形式提供的UGT76G1变体。在再另一个具体实施例中，该生物催化剂是以全细胞悬液的形式提供的UGT76G1变体。
在一个具体实施例中，该生物催化剂是包含一个或多个以下点突变的纯化的UGT76G1：Q266E、P272A、R334K、G348P和L379G。在一个更具体的实施例中，该生物催化剂是包含所有以下突变的UGT76G1：Q266E、P272A、R334K、G348P和L379G，即生物催化剂是UGT76G1-R1-F12。在一个具体的实施例中，该生物催化剂是以纯化酶的形式提供的UGT76G1-R1-F12。在另一个具体实施例中，该生物催化剂是以粗裂解物形式提供的UGT76G1-R1-F12。在再另一个具体实施例中，该生物催化剂是以全细胞悬液的形式提供的UGT76G1-R1-F12。
在另一个具体实施例中，该生物催化剂是包含一个或多个以下点突变的UGT76G1：Q266E、P272A、R334K、G348P、L379G、S42A、F46I、I190L、S274G、I295M、K303G、F314S、K316R、K393R、V394I、I407V、N409K、N409R、Q425E、Q432E、S447A和S456L。在更具体的实施例中，该生物催化剂是包含所有上述突变的UGT76G1变体，即生物催化剂是UGT76G1-R2-B9。在一个具体实施例中，该生物催化剂是纯化的UGT76G1-R2-B9，即以纯化酶的形式提供的UGT76G1-R2-B9。在另一个具体实施例中，该生物催化剂是以裂解物形式提供的UGT76G1-R2-B9。在再另一个实施例中，该生物催化剂是以全细胞悬液的形式提供的UGT76G1-R2-B9。
在再另一个具体实施例中，该生物催化剂是包含一个或多个以下点突变的UGT76G1变体：Q266E、P272A、R334K、G348P、L379G、S42A、F46I、I190L、S274G、I295M、K303G、F314S、K316R、K393R、V394I、I407V、N409K、N409R、Q425E、Q432E、S447A、S456L、I46L、I295M、S119A、S274G、K334R、F314S、K303G、K316R、K393R、I190L、Q425E、Q432E、N138G、V394I、F182L、V407I、A272P、V264C、E449D和A352G。在一个更具体的实施例中，该生物催化剂是包含所有上述突变的UGT76G1变体，即生物催化剂是UGT76G1-R3-G3。在一个具体的实施例中，该生物催化剂是纯化的UGT76G1-R3-G3，即以纯化酶的形式提供的UGT76G1-R3-G3。在另一个具体实施例中，该生物催化剂是以裂解物形式提供的UGT76G1-R3-G3。在再另一个具体实施例中，该生物催化剂是以全细胞悬液的形式提供的UGT76G1-R3-G3。
与在相同条件下使用未突变的UGT76G1相比，在本发明的方法中使用UGT76G1变体作为生物催化剂导致莱鲍迪苷A至莱鲍迪苷I的转化增加至少约5％(其中结果是归一化的)。在优选的实施例中，转化率从约5％增加至约1,000,000％，例如像从约5％至约100,000％，从约5％至约10,000％，从约5％至约1,000％，从约5％至约500％，从约5％至约250％，从约5％至约100％，从约50％，从约20％至约50％，从约30％至约50％或约40％至约50％。
任选地，本发明的方法还包括再循环UDP以提供UDP-葡萄糖。相应地，这些方法包括，通过提供再循环催化剂(即，能够使UDP-葡萄糖过量产生的催化剂)和再循环底物来伴随地再循环UDP，从而使用催化量的UDP-葡萄糖基转移酶和UDP-葡萄糖进行莱鲍迪苷A至莱鲍迪苷I的转化(图2)。
在一个实施例中，UDP-葡萄糖再循环催化剂是蔗糖合酶并且再循环底物是蔗糖。
在一个具体的实施例中，本发明的方法提供了包含按重量计约1％或更高，例如像约5％或更高、约10％或更高、约20％或更高、约30％或更高、约40％或更高、约50％或更高、约60％或更高、约70％或更高、约80％或更高或约90％或更高的量的莱鲍迪苷I的莱鲍迪苷I组合物。
在一个具体的实施例中，该方法提供了包含按重量计约50％或更高的量的莱鲍迪苷I的组合物。
在另一个具体实施例中，该方法提供了包含按重量计约80％或更高的量的莱鲍迪苷I的组合物。
在还另一个具体实施例中，该方法提供包含按重量计约90％或更高的量的莱鲍迪苷I的组合物。
在又另一个具体实施例中，该方法提供了包含按重量计约95％或更高，例如像按重量计约96％、约97％、约98％或约99％的量的莱鲍迪苷I的组合物。
任选地，本发明的方法进一步包括将莱鲍迪苷I从培养基中分离。可以使用任何合适的方法分离方法，例如像裂解、结晶、通过膜分离、离心、萃取(液相或固相)、色谱分离、HPLC(制备型或分析型)或此类方法的组合。在一个具体的实施例中，可以通过裂解和离心实现分离。
在一个实施例中，在转化进展的同时连续地将莱鲍迪苷I从该培养基中移除。在另一个实施例中，在反应完成后，从培养基中分离并任选纯化莱鲍迪苷I。
从培养基中分离可产生具有比期望的低的莱鲍迪苷I含量的组合物和/或该组合物可包含另外的组分，例如不期望的甜菊醇糖苷(在一致性或含量上)和/或残余反应产物。因此，可以进一步纯化该组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。如本文中使用的，术语“高度纯化的”是指具有基于干基按重量计大于约80％的莱鲍迪苷I的组合物。在一个实施例中，高度纯化的莱鲍迪苷I组合物包含按重量计大于约90％的莱鲍迪苷I，例如像按重量计大于约91％，大于约92％、大于约93％、大于约94％、大于约95％、大于约96％、大于约97％、大于约98％或约99％的莱鲍迪苷I。在示例性实施例中，可以将该组合物进一步纯化以提供纯莱鲍迪苷I，即基于干基按重量计>99％的莱鲍迪苷I。
纯化可以受到本领域技术人员已知的任何手段的影响，这些手段包括但不限于，结晶、通过膜的分离、离心、提取(液相或固相)、色谱分离、HPLC(制备型或分析型)或此类方法的组合。在一个具体实施例中，使用HPLC纯化莱鲍迪苷I。在一个更具体的实施例中，使用半制备型HPLC纯化莱鲍迪苷I。
在一个实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含莱鲍迪苷A的起始组合物与能够将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的酶接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物并且(b)分离莱鲍迪苷I以提供莱鲍迪苷I组合物(即，分离的莱鲍迪苷I组合物)。
在一个更具体的实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含莱鲍迪苷A的起始组合物与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体、和UDP葡萄糖接触以形成包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(b)分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。示例性UGT变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。任选地，该方法包括通过在(a)中提供蔗糖合酶和蔗糖的伴随的UDP-葡萄糖再循环。
在另一个更具体的实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使含有包含莱鲍迪苷A的起始组合物的培养基与至少与UGT76G1或其具有约75％或更高的氨基酸序列一致性的变体和UDP-葡萄糖接触以形成包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(b)从该培养基中分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。示例性UGT变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。任选地，该方法包括通过在(a)中提供蔗糖合酶和蔗糖的伴随的UDP-葡萄糖再循环。
在另一个实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含莱鲍迪苷A的起始组合物与能够将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的酶接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，(b)分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物，并且(c)纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。
在还另一个更具体的实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)将包含莱鲍迪苷A的起始组合物与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体、和UDP-葡萄糖接触，以形成包含莱鲍迪苷I的组合物，(b)分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物，并且(c)纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。任选地，该方法包括通过在(a)中提供蔗糖合酶和蔗糖的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
在另一个更具体的实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使含有包含莱鲍迪苷A的起始组合物的培养基与UGT76G1或其具有约75％或更高的氨基酸序列一致性的变体接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，(b)从该培养基中分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物，并且(c)纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。任选地，该方法包括通过在(a)中提供蔗糖合酶和蔗糖的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
在另一个实施例中，本发明提供了一种用于制备高度纯化的莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含莱鲍迪苷A的起始组合物与能够将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的酶接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物并且b)纯化该包含莱鲍迪苷I的组合物，以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。
在又另一个具体实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含莱鲍迪苷A的起始组合物与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体和UDP-葡萄糖接触，以形成包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(b)纯化该包含莱鲍迪苷I的组合物，以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。任选地，该方法包括通过在(a)中提供蔗糖合酶和蔗糖的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
在又另一个具体实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使含有包含莱鲍迪苷A的起始组合物的培养基与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体和UDP-葡萄糖接触，以形成包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(b)纯化该包含莱鲍迪苷I的组合物，以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。任选地，该方法包括通过在(a)中提供蔗糖合酶和蔗糖的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
发酵也可以用于重新合成莱鲍迪苷I。例如，一种生产莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使葡萄糖与包含至少一种能够将葡萄糖转化为莱鲍迪苷I的酶的微生物接触，以提供莱鲍迪苷I组合物，并且(b)分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。任选地，该方法还包括纯化莱鲍迪苷I以提供高度纯化的莱鲍迪苷I。
可以依次使用发酵和生物催化步骤。例如，可以首先进行用含有能够将葡萄糖转化为目标甜菊醇糖苷(例如莱鲍迪苷A)的至少一种酶的微生物对包含葡萄糖的组合物的发酵。然后可以使目标甜菊醇糖苷(例如莱鲍迪苷A)(现在变为用于下一生物转化目的的起始材料)与能够将其转化为下一种目标甜菊醇糖苷(例如莱鲍迪苷I)的生物催化剂接触。
在每次转化之间，目标甜菊醇糖苷可以任选地在与下一生物催化剂接触之前从培养基中分离。
在一个实施例中，本方法的起始组合物的莱鲍迪苷A通过使甜菊苷与能够将甜菊苷转化为莱鲍迪苷A的酶接触来制备。在一个具体实施例中，该酶是能够对其添加至少一个葡萄糖单元从而产生莱鲍迪苷A的任何UDP-葡萄糖基转移酶。该UDP-葡萄糖基转移酶可以是例如UGT76G1。
因此，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含甜菊苷的组合物与能够将甜菊苷转化为莱鲍迪苷A的酶接触，以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(b)分离莱鲍迪苷A，(c)使包含莱鲍迪苷A的组合物与能够将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的酶接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(d)分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I。
在一个更具体的实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含甜菊苷的组合物与UGT76G1和UDP-葡萄糖接触，以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(b)分离莱鲍迪苷A，(c)使包含莱鲍迪苷A的组合物与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体和UDP-葡萄糖接触以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(d)分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。任选地，该方法包括通过提供蔗糖合酶和蔗糖在一个或两个接触步骤中的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
在另一个更具体的实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使含有包含甜菊苷的组合物的培养基与UGT76G1和UDP-葡萄糖接触，以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(b)从该培养基中分离莱鲍迪苷A，(c)使含有包含莱鲍迪苷A的组合物的培养基与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体和UDP-葡萄糖接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(d)将莱鲍迪苷I从该培养基中分离以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。任选地，该方法包括通过提供蔗糖合酶和蔗糖在一个或两个接触步骤中的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
在另一个实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪甙苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含葡萄糖的组合物与包含至少一种能够将葡萄糖转化为莱鲍迪苷A的酶的微生物接触，以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(b)分离莱鲍迪苷A，(c)使包含莱鲍迪苷A的组合物与能够将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的酶接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(d)从该培养基中分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。
在一个更具体的实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含葡萄糖的组合物与包含至少一种能够将葡萄糖转化为莱鲍迪苷A的酶的微生物接触，以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(b)分离莱鲍迪苷A，(c)使包含莱鲍迪苷A的组合物与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体和UDP-葡萄糖接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(d)分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I。任选地，该方法包括通过提供蔗糖合酶和蔗糖在一个或两个接触步骤中的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
在另一个更具体的实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使含有包含葡萄糖的组合物的培养基与包含至少一种能够将葡萄糖转化为莱鲍迪苷A的酶的微生物接触，以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(b)从该培养基中分离莱鲍迪苷A，(c)使含有包含莱鲍迪苷A的组合物的培养基与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体和UDP-葡萄糖接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(d)从该培养基中分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I。任选地，该方法包括通过提供蔗糖合酶和蔗糖在一个或两个接触步骤中的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
在一个实施例中，甜菊苷通过使甜叶悬钩子苷与能够将甜叶悬钩子苷转化为甜菊苷的酶接触来制备。在一个实施例中，该酶是能够将至少一个葡萄糖单元添加至甜叶悬钩子苷由此产生甜菊苷的任何UDP-葡萄糖基转移酶。UDP-葡萄糖基转移酶可以是例如UGT91D2或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体。示例性UGT91D2变体包括但不限于UGTSL和UGTSL2。
因此，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含甜叶悬钩子苷的组合物与能够将甜叶悬钩子苷转化为甜菊苷的酶接触，(b)分离甜菊苷，(c)使包含甜菊苷的组合物与能够将甜菊苷转化为莱鲍迪苷A的酶接触以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(d)分离莱鲍迪苷A，(e)使包含莱鲍迪苷A的组合物与能够将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的酶接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(d)分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I。
在一个更具体的实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含甜叶悬钩子苷的组合物与UGT91D2或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体和UDP-葡萄糖接触，以提供包含甜菊苷的组合物，(b)分离甜菊苷，(c)使包含甜菊苷的组合物与UGT76G1和UDP-葡萄糖接触以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(d)分离莱鲍迪苷A，(e)使包含莱鲍迪苷A的组合物与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体和UDP-葡萄糖接触以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(f)分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。任选地，该方法包括通过提供蔗糖合酶和蔗糖在任何或所有接触步骤中的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT91D2变体包括但不限于UGTSL和UGTSL2。示例性UGT76G1变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
在另一个更具体的实施例中，本发明提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使含有包含甜叶悬钩子苷的组合物的培养基与UGT91D2或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体、和UDP-葡萄糖接触以提供包含甜菊苷的组合物，(b)从该培养基中分离甜菊苷，(c)使含有包含甜菊苷的组合物的培养基与UGT76G1和UDP-葡萄糖接触，以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(d)从该培养基分离莱鲍迪苷A，(e)使含有包含莱鲍迪苷A的组合物的培养基与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体、和UDP-葡萄糖接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(f)从该培养基中分离莱鲍迪苷I。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I。任选地，该方法包括通过提供蔗糖合酶和蔗糖在任何或所有接触步骤中的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT91D2变体包括但不限于UGTSL和UGTSL2。示例性UGT76G1变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
本发明还提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含葡萄糖的组合物与能够将葡萄糖转化为甜叶悬钩子苷的微生物接触，(b)分离甜叶悬钩子苷，(c)使包含甜叶悬钩子苷的组合物与能够将甜叶悬钩子苷转化为甜菊苷的酶接触，以提供包含甜菊苷的组合物，(d)分离甜菊苷，(e)使包含甜菊苷的组合物与能够将甜菊苷转化为莱鲍迪苷A的酶接触，以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(f)分离莱鲍迪苷A，(g)使包含莱鲍迪苷A的组合物与能够将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的酶接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(h)分离莱鲍迪苷I。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I。
在一个更具体的实施例中，本发明还提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使包含葡萄糖的组合物与能够将葡萄糖转化为甜叶悬钩子苷的微生物接触，(b)分离甜叶悬钩子苷，(c)使包含甜叶悬钩子苷的组合物与UGT91D2或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体、和UDP-葡萄糖接触，以提供包含甜菊苷的组合物，(d)分离甜菊苷，(e)使包含甜菊苷的组合物与UGT76G1和UDP-葡萄糖以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(f)分离莱鲍迪苷A，(g)使包含莱鲍迪苷A的组合物与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体、和UDP-葡萄糖接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(h)分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I。任选地，该方法包括通过提供蔗糖合酶和蔗糖在一个、两个或所有接触步骤中的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT91D2变体包括但不限于UGTSL和UGTSL2。示例性UGT76G1变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
在另一个更具体的实施例中，本发明还提供了一种用于制备莱鲍迪苷I组合物的方法，该方法包括(a)使含有包含葡萄糖的组合物的培养基与能够将葡萄糖转化为甜叶悬钩子苷的微生物接触，(b)从该培养基中分离甜叶悬钩子苷,(c)使含有包含甜叶悬钩子苷的组合物的培养基与UGT91D2或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体和UDP-葡萄糖接触，以提供包含甜菊苷的组合物，(d)从该培养基中分离甜菊苷，(e)使含有包含甜菊醇糖苷的组合物的培养基与UGT76G1和UDP-葡萄糖接触以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，(f)从该培养基中分离莱鲍迪苷A，(g)使含有包含莱鲍迪苷A的组合物的培养基与UGT76G1或其具有约75％或更高的氨基酸序列一致性的变体、和UDP-葡萄糖接触，以提供包含莱鲍迪苷I的组合物，并且(h)从该培养基中分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。该方法可以进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I。任选地，该方法包括通过提供蔗糖合酶和蔗糖在任何或所有接触步骤中的伴随的UDP-葡萄糖再循环。示例性UGT91D2变体包括但不限于UGTSL和UGTSL2。示例性UGT76G1变体包括但不限于UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
化合物和组合物
本发明提供了具有下式的莱鲍迪苷I：
13-[(2-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]对映-贝壳杉-16-烯-19-酸-[(3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖基)酯](莱鲍迪苷I)
在示例性实施例中，莱鲍迪苷I可以是分离且纯化的(即，基于干基，按重量计>99％的莱鲍迪苷I)或分离且高度纯化的(即基于干基按重量计大于约80％)。
本发明包括包含莱鲍迪苷I的组合物，特别是消费品。
在一个实施例中，该组合物包含作为混合物的一部分提供的莱鲍迪苷I。在一个具体的实施例中，该混合物选自下组，该组由以下各项的混合物组成：甜菊醇糖苷、甜叶菊提取物、其他甜菊醇糖苷分离和纯化方法的副产物、或其任何组合。在一个实施例中，该混合物包含基于干基范围从按重量计约1％至约99％，例如像，从约2％至约99％、从约3％至约99％、从约4％至约99％、从约5％至约99％、从约10％至约99％、从约20％至约99％、从约30％至约99％、从约40％至约99％、从约50％至约99％、从约60％至约99％、从约70％至约99％、从约80％至约99％以及从约90％至约99％的量的莱鲍迪苷I。在具体实施例中，该混合物包含基于干基按重量计大于约90％，例如，大于约91％、大于约92％、大于约93％、大于约94％、大于约95％、大于约96％、大于约97％、大于约98％以及大于约99％的量的莱鲍迪苷I。
在一个实施例中，该组合物包含以甜叶菊提取物形式提供的莱鲍迪苷I。甜叶菊提取物包含一种或多种另外的甜菊醇糖苷，包括但不限于天然存在的甜菊醇糖苷，例如甜菊单糖苷、甜菊双糖苷、甜叶悬钩子苷、杜克苷B、杜克苷A、莱鲍迪苷B、莱鲍迪苷G、甜菊苷、莱鲍迪苷C、莱鲍迪苷F、莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷I、莱鲍迪苷E、莱鲍迪苷H、莱鲍迪苷L、莱鲍迪苷K、莱鲍迪苷J、莱鲍迪苷M、莱鲍迪苷M2、莱鲍迪苷D、莱鲍迪苷D2、莱鲍迪苷N、莱鲍迪苷O、合成甜菊醇糖苷例如酶促葡萄糖基化的甜菊醇糖苷及其组合。
在又另一个实施例中，本发明提供了作为纯化合物(即按干基计>99％的纯度)的莱鲍迪苷I。
当该组合物添加到消费品中时，莱鲍迪苷I可以有效提供以下浓度的量存在于该组合物中：从约1ppm至约10,000ppm，例如像从约5ppm至约10,000ppm，从约10ppm至约10,000ppm，从约15ppm至约10,000ppm，从约20ppm至约10,000ppm，从约25ppm至约10,000ppm，从约50ppm至约10,000ppm，从约100ppm至约10,000ppm，从约200ppm至约10,000ppm，从约300ppm至约10,000ppm，从约400ppm至约10,000ppm，从约500ppm至约10,000ppm，从约600ppm至约10,000ppm，从约700ppm约10,000ppm，从约800至约10,000ppm，从约900ppm至约10,000ppm，从约1,000ppm至约10,000ppm，从约2,000ppm至约10,000ppm，从约3,000ppm至约10,000ppm，从约4,000ppm至约10,000ppm，从约5,000ppm至约10,000ppm。
在另一个实施例中，当该组合物添加到消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供以下浓度的量存在于该组合物中：从约10ppm至约1,000ppm，例如像，从约10ppm至约800ppm，从约50ppm至约800ppm，从约50ppm至约600ppm或从约200ppm至约250ppm。在一个具体实施例中，当该组合物加入到消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供从约300ppm至约600ppm浓度的量存在于该组合物中。
在一个具体的实施例中，当该组合物添加到消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供以下浓度的量存在于该组合物中：从约50ppm至约800ppm，例如像从约50ppm至约100ppm，约100ppm至约150ppm，约200ppm至约250ppm，约250ppm至约300ppm，从约300ppm至约350ppm，约350ppm至约400ppm，从约400ppm至约450ppm，约450ppm至约500ppm，约500ppm至约550ppm，约550ppm至约600ppm，约600ppm至约650ppm，约650ppm至约700ppm，约700ppm至约750ppm或约750ppm至约800ppm。
在一个示例性实施例中，当该组合物加入到饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供约200ppm与约300ppm之间的浓度的量存在于该组合物中。
在一个示例性实施例中，当该组合物加入到饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供约500ppm与约600ppm之间的浓度的量存在于该组合物中。
在另一个具体实施例中，当将该组合物加入到消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供以下浓度的量存在于该组合物中：约50ppm、约100ppm、约150ppm、约200ppm、约250ppm、约300ppm、约350ppm、约400ppm、约450ppm、约500ppm、约550ppm、约600ppm、约650ppm、约700ppm、约750ppm或约800pm。
在一个示例性实施例中，当该组合物加入到饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供约200ppm浓度的量存在于该组合物中。
在一个示例性实施例中，当该组合物加入到饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供约275ppm浓度的量存在于该组合物中。
在一个示例性实施例中，当该组合物加入到饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供约550ppm浓度的量存在于该组合物中。
在一个示例性实施例中，当该组合物加入到饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供约600ppm浓度的量存在于该组合物中。
在示例性实施例中，分离和纯化的莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物展现出比莱鲍迪苷M减少的甜味存留强度。在一个具体的实施例中，分离和纯化的莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物展现出比莱鲍迪苷M减少约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％或约50％的甜味存留强度。
甜味剂组合物
在一个实施例中，本发明是一种包含莱鲍迪苷I的甜味剂组合物。在一个更具体的实施例中，本发明是一种包含高度纯化的或纯的莱鲍迪苷I的甜味剂组合物。
如本文所用的“甜味剂组合物”是指可用于使含有至少一种甜味组分与至少一种其他物质组合的可甜化组合物(即可被甜化的组合物)甜化的组合物。
在一个实施例中，莱鲍迪苷I是该甜味剂组合物中的单独的甜味剂，即莱鲍迪苷I是存在于提供可检测的甜度的甜味剂组合物中的唯一化合物。在另一个实施例中，该甜味剂组合物包含莱鲍迪苷I的化合物与一种或多种甜味剂化合物相结合。
在示例性实施例中，甜味剂组合物包含莱鲍迪苷I和选自下组的化合物，该组由以下各项组成：莱鲍迪苷A、B、C、D、E、M、N、O、M2、D2、糖基化甜菊醇糖苷、罗汉果苷V、赤藓糖醇、阿洛酮糖、甜叶菊提取物、罗汉果提取物及其组合。
甜味剂组合物中莱鲍迪苷I的量可以变化。在一个实施例中，当甜味剂组合物添加到可甜化组合物或可甜化的消费品中时，莱鲍迪苷I以赋予期望的甜味的任何量存在于甜味剂组合物中。
一种非蔗糖甜味剂的甜度也可以是相对于一种蔗糖参考物通过测定非蔗糖甜味剂的蔗糖等效物来测量的。典型地，训练品味者检测含有1％-15％之间的蔗糖(w/v)的参考蔗糖溶液的甜度。然后在一系列稀释下品尝其他非蔗糖甜味剂，以确定与给定百分比的蔗糖参考物一样甜的非蔗糖甜味剂的浓度。例如，如果一种甜味剂的1％溶液与一种10％蔗糖溶液一样甜，那么该甜味剂被称为效力是蔗糖的10倍。
在一个实施例中，莱鲍迪苷I是以在加入到一种甜味剂组合物或甜味化消费品中时有效于提供大于约10％(w/v)的蔗糖等效物的量存在于甜味剂组合物中，例如像，大于约11％、大于约12％、大于约13％或大于约14％。
能够以白利糖度(°Bx)描述在一种参比溶液中的蔗糖的量，以及因此甜度的另一种测量。一白利糖度是在100克溶液中的1克蔗糖，并表示作为重量百分比的该溶液的强度(％w/w)(严格地说，按质量计)。在一个实施例中，一种甜味剂组合物含有在存在于一种甜味化的组合物中时有效于提供等效于从约0.50至14白利糖度的量的莱鲍迪苷I，例如像，从约5至约11白利糖度、从约4至约7白利糖度或约5白利糖度。在又另一个实施例中，包含莱鲍迪苷I的组合物与至少一种其他甜味剂是以有效提供以上列出的甜度等效量中的任一个的量存在。
在一个实施例中，当甜味剂组合物加入到消费品(例如饮料)中时，莱鲍迪苷I以有效提供以下浓度的量存在于甜味剂组合物中：从约1ppm至约10,000ppm，例如像从约5ppm至约10,000ppm，从约约10ppm至约10,000ppm，从约15ppm至约10,000ppm，从约20ppm至约10,000ppm，从约25ppm至约10,000ppm，从约50ppm至约10,000ppm，从约100ppm至约10,000ppm，从约200ppm至约10,000ppm，从约300ppm至约10,000ppm，从约400ppm至约10,000ppm，从约500ppm至约10,000ppm，从约600ppm至约10,000ppm，从约700ppm约10,000ppm，从约800至约10,000ppm，从约900ppm至约10,000ppm，从约1,000ppm至约10,000ppm，从约2,000ppm至约10,000ppm，从约3,000ppm至约10,000ppm，从约4,000ppm至约10,000ppm，从约5,000ppm至约10,000ppm。在另一个实施例中，当甜味剂组合物添加到消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供以下浓度的量存在于该甜味剂组合物中：从约10ppm至约1,000ppm，例如像，从约10ppm至约800ppm，从约50ppm至约800ppm，从约50ppm至约600ppm或从约200ppm至约250ppm。在一个具体实施例中，当甜味剂组合物加入到消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供约300ppm至约600ppm浓度的量存在于该甜味剂组合物中。
在一个实施例中，当甜味剂组合物添加到消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供在约400至约800ppm之间的浓度的量存在于该甜味剂组合物中，例如像从约50ppm至约100ppm，约100ppm至约150ppm，约200ppm至约250ppm，约250ppm至约300ppm，约300ppm至约350ppm，约350ppm至约400ppm，约400ppm至约450ppm，约450ppm至约500ppm，约500ppm至约550ppm，约550ppm至约600ppm，约600ppm至约650ppm，约650ppm至约700ppm，约700ppm至约750ppm或约750ppm至约800ppm。
在一个示例性实施例中，当甜味剂组合物加入到饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供约400至约800ppm之间浓度的量存在于该甜味剂组合物中。
在一个示例性实施例中，当甜味剂组合物加入到饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供约500至约600ppm之间浓度的量存在于该甜味剂组合物中。
当甜味剂组合物包括与一种或多种甜味剂化合物组合的莱鲍迪苷I时，甜味剂化合物的量可以变化。在一个实施例中，当甜味剂化合物加入到消费品中时，甜味剂组合物以有效提供约1％与约20％之间浓度的量存在于甜味剂组合物中，例如约1％与约5％之间，约5％与约10％之间，约10％与约15％之间，约15％与约20％之间，或更具体地，约1％、约2％、约3％、4％或约5％。
在一个示例性实施例中，本发明提供了甜味剂组合物，该甜味剂组合物包含(i)当该甜味剂组合物加入到饮料中时，有效提供在约500与约600ppm之间浓度的量的莱鲍迪苷I；以及(ii)选自下组的化合物，该组由以下各项组成：莱鲍迪苷A、B、C、D、E、M、N、O、M2、D2、糖基化甜菊醇糖苷、罗汉果苷V、赤藓糖醇、阿洛酮糖、甜叶菊提取物、罗汉果提取物及其组合。
在一个示例性实施例中，本发明提供了甜味剂组合物，该甜味剂组合物包含(i)当该甜味剂组合物加入到饮料中时，有效提供在约500与约600ppm之间浓度的量的莱鲍迪苷I；以及(ii)当将该甜味剂组合物加入到饮料中时，有效提供在约1％与约5％之间浓度的量的阿洛酮糖。
在另一个实施例中，当该甜味剂组合物添加到消费品中时，在甜味剂组合物中存在的量有效提供约50ppm，约100ppm，约150ppm，约200ppm，约250ppm，约300ppm，约350ppm，约400ppm，约450ppm，约500ppm，约550ppm，约600ppm，约650ppm，约700ppm，约750ppm或约800pm的浓度。
在一个示例性实施例中，当甜味剂组合物加入饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供约550ppm浓度的量存在于该组合物中。任选地，该甜味剂组合物还包括例如在约1％与约5％之间，或更特别地约3.5％的阿洛酮糖。
在一个示例性实施例中，当甜味剂组合物加入饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供约600ppm浓度的量存在于该组合物中。任选地，该甜味剂组合物还包括例如在约1％与约5％之间，或更特别地约3.5％的阿洛酮糖。
在示例性实施例中，包含莱鲍迪苷I的甜味剂组合物表现出比莱鲍迪苷M或包含它的甜味剂组合物减少的甜味存留强度。在一个具体的实施例中，分离和纯化的莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物显示出比莱鲍迪苷M或包含它的甜味剂组合物减少约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％或约50％的甜味存留强度。
在一些实施例中，当该甜味剂组合物加入到消费品(例如，饮料)中时，莱鲍迪苷I是以有效地提供高于、处于或低于其阈值甜味剂识别水平的化合物的浓度的量存在于该甜味剂组合物中。
风味增强组合物
在一个方面，本发明是包含莱鲍迪苷I的风味增强组合物。在一个具体实施例中，本发明是包含分离和纯化的莱鲍迪苷I的风味增强组合物。
如本文所用的“风味增强剂组合物”是指能够增强或加强消费品中特定风味的感觉的组合物。术语“风味增强组合物”或“风味增强剂”与术语“风味增效剂”、“风味放大剂”、以及“风味强化剂”是同义的。通常，本文提供的风味增强组合物可提高或增强风味成分的味道，即提供甜味、酸味、咸味、香味、苦味、金属味、涩味、持久甜余味、甜味起始等的任何物质。不受任何理论束缚，风味增强组合物可能不向其所加入的消费品提供任何明显的味道，因为莱鲍迪苷I以处于或低于其风味识别阈值浓度的浓度存在于该消费品中。
如在此所用，“风味识别阈值浓度”是指一种组分(例如，化合物)的具体风味或后味在消费品中是可察觉的最低浓度。风味识别阈值浓度对于不同的化合物改变，并且可以相对于感知风味的个体或具体消费品改变。
在一个实施例中，该风味增强组合物包含当该风味增强组合物添加到消费品中时有效提供处于或低于莱鲍迪苷I的阈值风味识别浓度的浓度的量的莱鲍迪苷I。
在一个具体实施例中，当风味增强组合物加入消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供低于莱鲍迪苷I的阈值风味识别浓度的浓度的量存在于该风味增强组合物中。
在某些实施例中，当将该风味增强组合物添加到消费品中时，莱鲍迪苷I是以有效提供低于阈值风味识别浓度至少约1％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％或至少约50％或更大的浓度的量存在于该风味增强组合物中。
在一些实施例中，当添加到消费品(例如饮料)中时，莱鲍迪苷I以提供范围为从1ppm至约10,000ppm的浓度的量存在于风味增强组合物中，例如像从约5ppm至约10,000ppm，从约10ppm至约10,000ppm，从约15ppm至约10,000ppm，从约20ppm至约10,000ppm，从约25ppm至约10,000ppm，从约50ppm至约10,000ppm，从约100ppm至约10,000ppm ppm，从约200ppm至约10,000ppm，从约300ppm至约10,000ppm，从约400ppm至约10,000ppm，从约500ppm至约10,000ppm，从约600ppm至约10,000ppm，从约700ppm约10,000ppm，从约800至约10,000ppm，从约900ppm至约10,000ppm，从约1,000ppm至约10,000ppm，从约2,000ppm至约10,000ppm，从约3,000ppm至约10,000ppm，从约4,000ppm至约10,000ppm，从约5,000ppm至约10,000ppm。在一些实施例中，当添加到消费品(例如饮料)中时，莱鲍迪苷I以提供范围为从1ppm至约1,000ppm的浓度的量存在于风味增强组合物中，例如像，从约5ppm至约1,000ppm，从约10ppm至约1,000ppm，从约20ppm至约1,000ppm，从约30ppm至约1,000ppm，从约40ppm至约1,000ppm，从约50ppm至约约1000ppm，从约100ppm至约1,000ppm，从约200ppm至约1,000ppm，从约300ppm至约1,000ppm，从约400ppm至约1,000ppm和从约500ppm至约1,000ppm。
本领域普通技术人员将能够选择莱鲍迪苷I在该风味增强组合物中的浓度，使得它可以赋予包含至少一种风味成分的消费品增强的风味。例如，一名熟练技术人员可以选择莱鲍迪苷I在该风味增强组合物中的浓度，使得当将该风味增强组合物添加到消费品中时，该风味增强组合物和/或该莱鲍迪苷I不赋予消费品任何可察觉的风味。
在一个实施例中，与不存在该风味增强剂的消费品中的相同成分的检测风味相比，添加风味增强组合物增加了消费品中至少一种调味成分的检测风味。
适合的调味成分包括但不限于，香草醛、香草提取物、芒果提取物、肉桂、柑橘、椰子、姜、白千层醇、扁桃、薄荷醇(包括不含薄荷的薄荷醇)、葡萄皮提取物、以及葡萄籽提取物。“调味剂”和“调味成分”是同义词并且可以包括天然物质或合成物质或其组合。调味剂还包括赋予风味的任何其他物质并且可以包括在以一个通常接受的范围使用时对于人或动物是安全的天然物质或非天然(合成)物质。专用调味剂的非限制性实例包括天然调味甜味增强剂K14323(德国达姆施塔特(Darmstadt,Germany))、甜味剂161453和164126的SymriseTM天然调味遮掩物(SymriseTM，德国霍尔茨明登(Holzminden,Germany))、Natural AdvantageTM苦味阻滞剂1、2、9和10(Natural AdvantageTM，美国新泽西州弗里霍尔德(Freehold,New Jersey,U.S.A.))、以及SucramaskTM(创造性科研管理(Creative Research Management)，美国加利福尼亚州斯托克顿市(Stockton,California,U.S.A.))。
在另一个实施例中，包含莱鲍迪苷I的风味增强剂组合物当添加到该消费品中增强了风味(单独的风味亦或整体的风味)。可替代地，莱鲍迪苷I可以直接添加到消费品中，即，不以组合物的形式提供，以增加风味。在该实施例中，莱鲍迪苷I是风味增强剂并且以处于或低于其阈值风味识别浓度的浓度加入到消费品中。
在一个具体实施例中，该风味增强组合物是甜味增强组合物。如本文所用的“甜味增强组合物”是指能够增强或加强消费品(例如饮料)的甜味感觉的组合物。术语“甜味增强剂”与术语“甜味道增效剂”、“甜味增效剂”、“甜味放大剂”和“甜味强化剂”是同义的。
如本文所用的“甜味识别阈值浓度”是由人类味觉可感知的甜化合物的最低已知的浓度。通常，本发明的甜味增强组合物可以提高或增强消费品的甜味道，而不提供任何明显的本身甜味，因为甜味增强组合物中莱鲍迪苷I的浓度处于或低于其甜味识别阈值浓度，在甜味增强组合物中，添加甜味增强组合物后的消费品中，或这两者中。甜味识别阈值浓度对于具体化合物是特异性的，并且可以基于温度、基质、成分和/或风味系统而变化。
在一个实施例中，当将该甜味增强组合物添加到消费品中时，该甜味增强组合物包含有效提供处于或低于莱鲍迪苷I的阈值甜味识别浓度的浓度的量的莱鲍迪苷I。
在一个具体实施例中，当将该甜味增强组合物添加到消费品中时，该甜味增强组合物包含有效提供低于莱鲍迪苷I的阈值甜味识别浓度的浓度的量的莱鲍迪苷I。
在某些实施例中，当将该甜味增强组合物添加到消费品中时，莱鲍迪苷I是以有效提供低于阈值甜味识别浓度至少约1％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％或至少约50％或更大的浓度的量存在于该甜味增强组合物中。
在一些实施例中，当添加到消费品(例如饮料)中时，莱鲍迪苷I以提供从约1ppm至约10,000ppm的浓度的量存在于甜味增强组合物中，例如像从约5ppm至约10,000ppm，从约10ppm至约10,000ppm，从约15ppm至约10,000ppm，从约20ppm至约10,000ppm，从约25ppm至约10,000ppm，从约50ppm至约10,000ppm，从约100ppm至约10,000ppm，从约200ppm至约10,000ppm，从约300ppm至约10,000ppm，从约400ppm至约10,000ppm，从约500ppm至约10,000ppm，从约600ppm至约10,000ppm，从约700ppm约10,000ppm，从约800至约10,000ppm，从约900ppm至约10,000ppm，从约1,000ppm至约10,000ppm，从约2,000ppm至约10,000ppm，从约3,000ppm至约10,000ppm，从约4,000ppm至约10,000ppm，从约5,000ppm至约10,000ppm。在一些实施例中，当添加到消费品(例如饮料)中时，莱鲍迪苷I以提供范围为从1ppm至约1,000ppm的浓度的量存在于甜味增强组合物中，例如像，从约5ppm至约1,000ppm，从约10ppm至约1,000ppm，从约20ppm至约1,000ppm，从约30ppm至约1,000ppm，从约40ppm至约1,000ppm，从约50ppm至约约1000ppm，从约100ppm至约1,000ppm，从约200ppm至约1,000ppm，从约300ppm至约1,000ppm，从约400ppm至约1,000ppm和从约500ppm至约1,000ppm。
可替代地，莱鲍迪苷I可以直接添加到消费品中，即，不以组合物的形式提供，以增加甜味。在该实施例中，莱鲍迪苷I是甜味增强剂，并且其以处于或低于其甜味识别阈值浓度的浓度加入到消费品中。
典型地参考一种蔗糖溶液测量给定组合物的甜度。通常参见“甜味剂浓度-反应关系的系统研究(A Systematic Study of Concentration-Response Relationships ofSweeteners)”，G.E.杜布瓦(G.E.DuBois)、D.E.沃尔特斯(D.E.Walters)、S.S.谢夫曼(S.S.Schiffman)、Z.S.沃里克(Z.S.Warwick)、B.J.博特(B.J.Booth)、S.D.皮科瑞(S.D.Pecore)、K.吉比斯(K.Gibes)、B.T.凯尔(B.T.Carr)、以及L.M.布兰茨(L.M.Brands)，在甜味剂：发现、分子设计和化学感应(Sweeteners:Discovery,Molecular Design andChemoreception)，D.E.沃尔特斯、F.T.Orthoefer和G.E.杜布瓦编辑，美国化学学会(American Chemical Society)，华盛顿(Washington)，DC(1991)，第261-276页。
考虑了甜味增强组合物可以包括除了莱鲍迪苷I之外的一种或多种甜味增强剂。在一个实施例中，甜味增强组合物可以包括一种另外的甜味增强剂。在其他实施例中，该甜味增强组合物可以包括两种或更多种另外的甜味增强剂。在利用两种或更多种甜味增强剂的实施例中，每一种甜味增强剂应低于其各自的甜味识别阈值浓度存在。
适合的甜味增强剂包括但不限于下组，该组由以下各项组成：2-羟基苯甲酸、3-羟基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、2,4-二羟基苯甲酸、3,4-二羟基苯甲酸、2,5-二羟基苯甲酸、2,6-二羟基苯甲酸、2,3,4-三羟基苯甲酸、2,4,6-三羟基苯甲酸、3-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、FEMA GRAS增强剂4469、FEMA GRAS增强剂4701、FEMA GRAS增强剂4720、FEMA GRAS增强剂4774、FEMA GRAS增强剂4708、FEMA GRAS增强剂4728、FEMA GRAS增强剂4601以及它们的组合。
在一个实施例中，与不存在甜味增强剂的相同消费品中的蔗糖等效值相比，添加该一种或多种甜味增强剂增加了消费品中该至少一种甜味剂的检测蔗糖等效值。
更具体地，莱鲍迪苷I和任选的一种或多种其他甜味增强剂(单独或以组合物的形式)在消费品(例如饮料)中的使用提供了检测到的蔗糖当量比在不存在莱鲍迪苷I和任选地一种或多种其他甜味增强剂的情况下相应的消费品(例如饮料)的蔗糖当量大至少约0.5％。例如，包含莱鲍迪苷I和任选的一种或多种其他甜味增强剂(单独或以组合物形式)的消费品(例如饮料)的检测蔗糖当量可以比在不存在莱鲍迪苷I和任选的一种或多种其他甜味增强剂的情况下相应的消费品的蔗糖当量大至少约1.0％、约1.5％、约2.0％、约2.5％、约3.0％、约3.5％、约4.5％、约5.0％或约5.5％或更大。
适合的甜味剂包括但不限于：蔗糖、甘油醛、二羟基丙酮、赤藓糖、苏糖、赤藓酮糖、阿拉伯糖、来苏糖、核糖、木糖、核酮糖、木酮糖、阿洛糖、阿卓糖、半乳糖、葡萄糖、古洛糖、艾杜糖、甘露糖、塔罗糖、果糖、阿洛酮糖、山梨糖、塔格糖、甘露庚酮糖、景天庚酮糖、辛酮糖、岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、松二糖、唾液糖、莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷B、莱鲍迪苷C、莱鲍迪苷D、莱鲍迪苷E、莱鲍迪苷F、莱鲍迪苷H、莱鲍迪苷L、莱鲍迪苷K、莱鲍迪苷J、莱鲍迪苷N、莱鲍迪苷O、杜克苷A、杜克苷B、甜茶苷、甜叶菊、甜菊苷、罗汉果苷IV、罗汉果苷V、罗汉果、赛门苷、莫那甜及其盐(莫那甜SS、RR、RS、SR)、仙茅甜蛋白(curculin)、甘草酸及其盐、索马甜、莫内林(monellin)、马宾灵(mabinlin)、布拉齐因(brazzein)、荷南度辛(hernandulcin)、叶甘素、根皮酚苷、根皮苷、三叶苷、白元参苷(baiyunoside)、欧亚水龙骨甜素(osladin)、聚波朵苷(polypodoside)A、蝶卡苷(pterocaryoside)A、蝶卡苷B、慕库若苷(mukurozioside)、弗米索苷(phlomisoside)I、巴西甘草甜素(periandrin)I、相思子三萜苷(abrusoside)A、甜菊双糖苷以及青钱柳苷I、糖醇类如赤藓糖醇、三氯蔗糖、乙酰舒泛钾、安赛蜜酸及其盐、阿司帕坦、阿力甜、糖精及其盐、新橙皮苷二氢查尔酮、环己基氨基磺酸盐、环己氨磺酸及其盐、纽甜、糖精(advantame)、糖基化的甜菊醇糖苷(GSG)以及它们的组合。
在一个实施例中，该甜味剂是一种有热量的甜味剂或有热量的甜味剂的混合物。在另一个实施例中，该有热量的甜味剂是选自蔗糖、果糖、葡萄糖、高果糖玉米/淀粉糖浆、甜菜糖、蔗糖、以及它们的组合。
在另一个实施例中，该甜味剂是一种稀有糖，选自D-阿洛酮糖、D-阿洛糖、L-核糖、D-塔格糖、L-葡萄糖、L-海藻糖、L-阿拉伯糖、松二糖以及它们的组合。
在又另一个实施例中，该甜味剂是一种无热量的甜味剂或无热量的甜味剂的混合物。在一个实例中，该无热量的甜味剂是一种天然高效甜味剂。如在此所用，短语“天然高效甜味剂”是指在自然界中未天然地发现并且特征地具有大于蔗糖、果糖、或葡萄糖的甜度效力，又具有较小卡路里的任何组合物。天然高效甜味剂可以作为一种纯化合物或者可替代地作为一种提取物的一部分来提供。
在又另一个实例中，该没有热量的甜味剂是一种合成高效甜味剂。如在此所用的，短语“合成的甜味剂”是指在自然界中未天然地发现并且特征地具有大于蔗糖、果糖或葡萄糖的甜味效力，又具有较小卡路里的任何组合物。
在一个具体的实施例中，该消费品是一种饮料。饮料包含莱鲍迪苷I和至少一种甜味剂，其中莱鲍迪苷I以处于或低于其甜味识别阈值的浓度存在。莱鲍迪苷I和至少一种甜味剂可以各自单独提供，或以甜味增强组合物的形式提供。在一个具体实施例中，检测到的蔗糖当量从例如约0.2％增加至约5.0％，例如约1％、约2％、约3％、约4％或约5％。
该甜味剂可以是在本文提供的任何天然或合成的甜味剂。在一个具体实施例中，甜味剂是提供卡路里的碳水化合物甜味剂。因此，结合该甜味增强剂由此降低了在一种给定消费品中必须使用的提供卡路里的碳水化合物甜味剂的量，由此允许制备低卡路里的消费品。
可以定制该组合物以提供所希望的热量含量。例如，这些组合物可以是“富含热量”的，使得它们在添加到一种消费品(例如像，饮料)中时赋予所希望的甜度并且具有每8盎司份约120卡路里。可替代地，这些组合物可以是“中值热量”的，使得它们在添加到一种消费品(例如像，饮料)中时赋予所希望的甜度并且具有每8盎司份小于约60卡路里。在其他实施例中，这些组合物可以是“低热量”的，使得它们在添加到一种消费品(例如像，饮料)中时赋予所希望的甜度并且具有每8盎司份小于40卡路里。在还其他实施例中，这些组合物可以是“零热量”的，使得它们在添加到一种消费品(例如像，饮料)中时赋予所希望的甜度并且具有每8盎司份小于5卡路里。
添加剂
组合物，例如甜味剂组合物和风味增强组合物，除了莱鲍迪苷I外，还可包含一种或多种添加剂，如下文所详述。在一些实施例中，该组合物包含添加剂，这些添加剂包括但不限于碳水化合物、多元醇、氨基酸及其相应盐、聚氨基酸及其相应盐、糖酸及其相应盐、核苷酸、有机酸、无机酸、有机盐(包括有机酸盐和有机碱盐)、无机盐、苦味化合物、调味剂和调味成分、涩味化合物、蛋白质或蛋白质水解物、表面活性剂、乳化剂、增重剂(weighingagent)、树胶(gum)、抗氧化剂、着色剂、类黄酮、醇、聚合物以及其组合。在一些实施例中，这些添加剂用于改进该甜味剂的时间特征曲线和风味特征曲线，以提供具有与蔗糖类似味道的一种甜味剂组合物。
在一个实施例中，该组合物进一步包含一种或多种多元醇。如在此所用的，术语“多元醇”是指含有超过一个羟基的分子。多元醇可以是分别含有2个、3个和4个羟基的二元醇、三元醇或四元醇。多元醇还可以含有超过4个羟基，例如分别含有5个、6个或7个羟基的五元醇、六元醇、七元醇等。另外，一种多元醇还可以是碳水化合物的还原形式的糖醇、多羟基醇或多元醇(polyalcohol)，其中羰基(醛或酮、还原糖)已被还原成伯羟基或仲羟基。
在一些实施例中多元醇的非限制性实例包括赤藓糖醇、麦芽糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖醇、木糖醇、异麦芽酮糖醇、丙二醇、甘油(丙三醇)、苏糖醇、半乳糖醇、帕拉金糖、还原性低聚异麦芽糖、还原性低聚木糖、还原性低聚龙胆糖、还原性麦芽糖糖浆、还原性葡萄糖糖浆以及糖醇或能够被还原的任何其他碳水化合物，其不会不利地影响组合物的味道。
在某些实施例中，当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该多元醇以有效于提供从约100ppm至约250,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。在其他实施例中，当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该多元醇以有效于提供从约400ppm至约80,000ppm的浓度的量存在于该组合物，例如像，从约5,000ppm至约40,000ppm。
在其他实施例中，莱鲍迪苷I和多元醇是以从约1:1至约1:800，例如像，从约1:4至约1:800、从约1:20至约1:600、从约1:50至约1:300或者从约1:75至约1:150的重量比存在于该组合物中。
适合的氨基酸添加剂包括但不限于，天冬氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸、苏氨酸、茶氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、丙氨酸、缬氨酸、酪氨酸、亮氨酸、阿拉伯糖、反式-4-羟基脯氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、赖氨酸、组氨酸、鸟氨酸、甲硫氨酸、肉毒碱、氨基丁酸(α、β、和/或δ-异构体)、谷氨酰胺、羟基脯氨酸、牛磺酸、正缬氨酸、肌氨酸、以及其盐形式例如钠盐或钾盐或酸盐。这些氨基酸添加剂还可以是处于D-构型或L-构型中并且是处于相同或不同氨基酸的一元-、二元-或三元-形式。另外，如果适当的话，这些氨基酸可以是α-、β-、γ-和/或δ-异构体。在一些实施例中，以上氨基酸及其相应盐(例如，其钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或其他碱金属盐或碱土金属盐，或酸盐)的组合也是适合的。这些氨基酸可以是天然或合成的。这些氨基酸还可以是改性的。改性的氨基酸是指其中至少一个原子已经被添加、去除、取代或其组合的任何氨基酸(例如，N-烷基氨基酸、N-酰基氨基酸或N-甲基氨基酸)。改性的氨基酸的非限制性实例包括氨基酸衍生物,如三甲基甘氨酸、N-甲基-甘氨酸、以及N-甲基-丙氨酸。如在此所用的，改性的氨基酸涵盖了改性的氨基酸和未改性的氨基酸二者。如在此所用，氨基酸还涵盖了肽和多肽二者(例如，二肽、三肽、四肽、以及五肽)，如谷胱甘肽和L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。适合的聚氨基酸添加剂包括聚-L-天冬氨酸、聚-L-赖氨酸(例如，聚-L-α-赖氨酸或聚-L-ε-赖氨酸)、聚-L-鸟氨酸(例如，聚-L-α-鸟氨酸或聚-L-ε-鸟氨酸)、聚-L-精氨酸、其他聚合物形式的氨基酸、以及其盐形式(例如钙盐、钾盐、钠盐或镁盐，例如L-谷氨酸单钠盐)。聚氨基酸添加剂也可以处于D-构型或L-构型。另外，如果适当的话，聚氨基酸可以是α-、β-、γ-、δ-、以及ε-异构体。在一些实施例中，以上聚氨基酸及其相应盐(例如，其钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或其他碱金属盐或碱土金属盐或酸盐)的组合也是适合的。在此所述的聚氨基酸还可以包括不同氨基酸的共聚物。这些聚氨基酸可以是天然或合成的。聚氨基酸也可以是修饰的，以使得至少一个原子被添加、去除、取代或其组合(例如，N-烷基聚氨基酸或N-酰基聚氨基酸)。如在此所用的,聚氨基酸涵盖了改性的聚氨基酸和未改性的聚氨基酸二者。例如，改性的聚氨基酸包括但不限于，具有不同分子量(MW)的聚氨基酸，如具有1,500的MW、6,000的MW、25,200的MW、63,000的MW、83,000的MW或者300,000的MW的聚-L-α-赖氨酸。
在具体的实施例中，当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该氨基酸是以有效提供从约10ppm至约50,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。在另一个实施例中，当存在于消费品中时，该氨基酸是以有效提供从约1,000ppm至约10,000ppm的浓度的量存在于该组合物中，例如像，从约2,500ppm至约5,000ppm或从约250ppm至约7,500ppm。
适合的糖酸添加剂包括但不限于，醛糖酸、糖醛酸、醛糖二酸、海藻酸、葡糖酸、葡糖醛酸、葡糖二酸、半乳糖二酸、半乳糖醛酸、及其盐(例如，钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或其他生理上可接受的盐)、以及其组合。
适合的核苷酸添加剂包括但不限于，单磷酸肌苷(“IMP”)、单磷酸鸟苷(“GMP”)、单磷酸腺苷(“AMP”)、单磷酸胞嘧啶(CMP)、单磷酸尿嘧啶(UMP)、二磷酸肌苷、二磷酸鸟苷、二磷酸腺苷、二磷酸胞嘧啶、二磷酸尿嘧啶、三磷酸肌苷、三磷酸鸟苷、三磷酸腺苷、三磷酸胞嘧啶、三磷酸尿嘧啶、其碱金属盐或碱土金属盐、以及其组合。在此所述的核苷酸还可以包含核苷酸相关的添加剂，如核苷或核酸碱(例如，鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶)。
当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该核苷酸是以有效提供从约5ppm至约1,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。
适合的有机酸添加剂包括包含一个-COOH部分的任何化合物，例如像C2-C30羧酸、取代的羟基C2-C30羧酸、丁酸(乙酯)、取代的丁酸(乙酯)、苯甲酸、取代的苯甲酸(例如，2,4-二羟基苯甲酸)、取代的肉桂酸、羟基酸、取代的羟基苯甲酸、茴香酸取代的环己基羧酸、鞣酸、乌头酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸、异柠檬酸、葡糖酸、葡庚糖酸、己二酸、羟基柠檬酸、苹果酸、水果酒石酸(fruitaric acid)(苹果酸、富马酸和酒石酸的一种共混物)、富马酸、马来酸、琥珀酸、绿原酸、水杨酸、肌酸、咖啡酸、胆汁酸、乙酸、抗坏血酸、藻酸、异抗坏血酸、聚谷氨酸、葡糖酸δ内酯、及其碱金属盐或碱土金属盐衍生物。另外，有机酸添加剂也可以处于D-构型或L-构型中。
适合的有机酸添加剂盐包括但不限于，所有有机酸的钠盐、钙盐、钾盐、以及镁盐，如柠檬酸、苹果酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、乳酸盐(例如，乳酸钠)、海藻酸盐(例如，藻酸钠)、抗坏血酸盐(例如，抗坏血酸钠)、苯甲酸盐(例如，苯甲酸钠或苯甲酸钾)、山梨酸盐以及己二酸盐。所述的有机酸添加剂的实例任选地可以是被选自以下的至少一个基团取代：氢、烷基、烯基、炔基、卤素、卤代烷基、羧基、酰基、酰氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺基、硫醇、亚胺、磺酰基、烃硫基、亚磺酰基、氨磺酰基、羧烷氧基、碳酰胺基(carboxamido)、膦酰基、氧膦基、磷酰基、膦基、硫酯、硫醚、酸酐、肟基、肼基、氨甲酰基、磷或膦酸酯基。在具体的实施例中，当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该有机酸添加剂是以有效提供从约10ppm至约5,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。
合适的无机酸添加剂包括但不限于，磷酸、亚磷酸、聚磷酸、盐酸、硫酸、碳酸、磷酸二氢钠、及其碱金属盐或碱土金属盐(例如，肌醇六磷酸Mg/Ca)。
当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该无机酸添加剂是以有效提供从约25ppm至约25,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。
合适的苦味化合物添加剂包括但不限于咖啡因、奎宁、尿素、苦橘油、柚皮苷、苦木、及其盐。
当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该苦味化合物是以有效提供从约25ppm至约25,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。
合适的调味剂和调味成分包括但不限于，香草醛、香草提取物、芒果提取物、肉桂、柑橘、椰子、姜、绿花白千层醇(viridiflorol)、扁桃仁、薄荷醇(包括不含薄荷的薄荷醇)、葡萄皮提取物、以及葡萄籽提取物。“调味剂”和“调味成分”是同义词并且可以包括天然物质或合成物质或其组合。调味剂还包括赋予风味的任何其他物质并且可以包括在以一个通常接受的范围使用时对于人或动物是安全的天然物质或非天然(合成)物质。专用调味剂的非限制性实例包括天然调味甜味增强剂K14323(德国达姆施塔特(Darmstadt,Germany))、甜味剂161453和164126的SymriseTM天然调味遮掩物(SymriseTM，德国霍尔茨明登(Holzminden,Germany))、Natural AdvantageTM苦味阻滞剂1、2、9和10(Natural AdvantageTM，美国新泽西州弗里霍尔德(Freehold,New Jersey,U.S.A.))、以及SucramaskTM(创造性科研管理(Creative Research Management)，美国加利福尼亚州斯托克顿市(Stockton,California,U.S.A.))。
当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该调味剂是以有效提供从约0.1ppm至约4,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。
适合的聚合物添加剂包括但不限于，壳多糖、果胶、果胶、果胶质酸、聚糖醛酸、聚半乳糖醛酸、淀粉、食品水解胶体或其粗提取物(例如，塞内加尔阿拉伯树胶(阿拉伯胶树(FibergumTM)、塞伊阿拉伯树胶、鹿角菜胶)、聚-L-赖氨酸(例如，聚-L-α-赖氨酸或聚-L-ε-赖氨酸)、聚-L-鸟氨酸(例如，聚-L-α-鸟氨酸或聚-L-ε-鸟氨酸)、聚丙二醇、聚乙二醇、聚(乙二醇甲基醚)、聚精氨酸、聚天冬氨酸、聚谷氨酸、聚乙烯亚胺、海藻酸、海藻酸钠、海藻酸丙二醇酯、以及聚乙二醇海藻酸钠、六偏磷酸钠及其盐、以及其他阳离子聚合物和阴离子聚合物.
当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该聚合物是以有效提供从约30ppm至约2,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。
适合的蛋白质或蛋白质水解物添加剂包括但不限于，牛血清白蛋白(BSA)、乳清蛋白(包括其级分或浓缩物，例如90％即时乳清蛋白分离物、34％乳清蛋白、50％水解乳清蛋白、以及80％乳清蛋白浓缩物)、可溶性大米蛋白、大豆蛋白、蛋白质分离物、蛋白质水解物、蛋白质水解物的反应产物、糖蛋白和/或含有氨基酸(例如，甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、正缬氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、酪氨酸、羟脯氨酸等)的蛋白聚糖、胶原蛋白(例如,明胶)、部分水解的胶原蛋白(例如，水解的鱼胶原蛋白)、以及胶原蛋白水解产物(例如，猪胶原蛋白水解产物)。
当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该蛋白质水解物是以有效提供从约200ppm至约50,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。
适合的表面活性剂添加剂包括但不限于，聚山梨醇酯(例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(聚山梨醇酯80)、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60)、十二烷基苯磺酸钠、磺基琥珀酸二辛酯或磺基琥珀酸二辛基酯钠、十二烷基硫酸钠、氯化十六烷基吡啶(氯化十六烷基吡啶鎓)、溴化十六烷基三甲铵、胆酸钠、氨甲酰基、氯化胆碱、甘胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、月桂酰精氨酸酯、硬脂酰乳酸钠、牛磺胆酸钠、卵磷脂、蔗糖油酸酯、蔗糖硬脂酸酯、蔗糖棕榈酸酯、蔗糖月桂酸酯以及其他乳化剂等。
当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该表面活性剂添加剂是以有效提供从约30ppm至约2,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。
适合的类黄酮添加剂被分为黄酮醇、黄酮、黄烷酮、黄烷-3-醇、异黄酮或花色素。类黄酮添加剂的非限制性实例包括但不限于，儿茶素(例如，绿茶提取物，如PolyphenonTM60、PolyphenonTM 30和PolyphenonTM 25(日本三川农林株式会社(Mitsui Norin Co.,Ltd.,Japan))、多酚、芦丁(例如，酶改性的芦丁SanmelinTM AO(日本大阪三荣源公株式会社(San-fi Gen F.F.I.,Inc.,Osaka,Japan))、新桔皮苷、柚皮苷、新橙皮苷二氢查尔酮等。
当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该类黄酮添加剂是以有效提供从约0.1ppm至约1,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。
适合的醇添加剂包括但不限于乙醇。在具体的实施例中，当存在于消费品(例如像，饮料)中时,该醇添加剂是以有效提供从约625ppm至约10,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。
适合的涩味化合物包括但不限于，鞣酸、氯化铕(EuCl3)、氯化钆(GdCl3)、氯化铽(TbCl3)、明矾、鞣酸以及多酚(例如，茶多酚)。当存在于消费品(例如像，饮料)中时，该涩味添加剂是以有效提供从约10ppm至约5,000ppm的浓度的量存在于该组合物中。
功能性成分
在此提供的组合物还可以含有一种或多种功能性成分，这些功能性成分为该组合物提供了实际的或感知的健康益处。功能性成分包括但不限于，皂苷、抗氧化剂、膳食纤维源、脂肪酸、维生素、葡糖胺、矿物质、防腐剂、水合剂、益生菌、益生元、体重管理剂(weightmanagement agent)、骨质疏松症管理剂(osteoporosis management agent)、植物雌激素、长链伯脂肪族饱和醇、植物甾醇以及其组合。
皂苷
在某些实施例中，功能性成分是至少一种皂苷。如在此所用，该至少一种皂苷可以包括作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的一种单一皂苷或多种皂苷。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种皂苷是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
皂苷是包含一个糖苷配基环结构和一个或多个糖部分的糖苷天然植物产物。非极性糖苷配基和水溶性糖部分的组合给予了皂苷表面活性剂特性，这些表面活性剂特性允许它们在水溶液中振摇时形成泡沫。
这些皂苷基于若干种常见特性而分组在一起。具体地说，皂苷是展现溶血活性并且与胆固醇形成络合物的表面活性剂。尽管皂苷共有这些特性，但它们在结构上是不同的。在皂苷中形成环结构的糖苷配基环结构的类型可以显著改变。在用于本发明的具体实施例中的皂苷中的这些糖苷配基环结构类型的非限制性实例包括甾体、三萜和甾类生物碱。用于本发明的具体实施例中的特定糖苷配基环结构的非限制性实例包括大豆皂醇A、大豆皂醇B和大豆皂醇E。与糖苷配基环结构连接的糖部分的数目和类型也可以变化很大。用于本发明的具体实施例中的糖部分的非限制性实例包括葡萄糖、半乳糖、葡糖醛酸、木糖、鼠李糖、以及甲基戊糖部分。用于本发明的具体实施例中的特定皂苷的非限制性实例包括A组乙酰皂苷、B组乙酰皂苷、以及E组乙酰皂苷。
皂苷可以见于各种各样的植物和植物产物中，并且在植物皮和树皮中特别普遍的，其中它们形成一个蜡状保护性涂层。皂苷的若干种常见来源包括具有按干重计大约5％皂苷含量的大豆、肥皂草植物(肥皂草属(Saponaria)，它的根在历史上用作肥皂)、以及苜蓿、芦荟、芦笋、葡萄、鹰嘴豆、丝兰、以及各种其他豆类和野草。皂苷可以是通过使用本领域普通技术人员已熟知的提取技术从这些来源中获得的。常规提取技术的描述可见于美国专利申请号2005/0123662中，该专利申请的披露内容通过引用明确结合。
抗氧化剂
在某些实施例中，功能性成分是至少一种抗氧化剂。如在此所用，该至少一种抗氧化剂可以包括作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的一种单一抗氧化剂或多种抗氧化剂。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种抗氧化剂是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
如在此所用的“抗氧化剂”是指禁止、抑制或减少对细胞和生物分子的氧化损害的任何物质。在不受理论约束的情况下，据信抗氧化剂通过稳定自由基(在它们可以引起有害反应之前)来阻止、抑制或减少对细胞或生物分子的氧化损害。这样，抗氧化剂可以防止或延迟一些变性疾病的发生。
用于本发明的实施例的适合抗氧化剂的实例包括但不限于，维生素、维生素辅因子、矿物质、激素、类胡萝卜素、类胡萝卜素萜类、非类胡萝卜素萜类、类黄酮、类黄酮多酚(如生物类黄酮)、黄酮醇类、黄酮类、酚类、多酚、酚酯、多酚酯、非类黄酮酚类、异硫氰酸酯类、以及其组合。在一些实施例中，该抗氧化剂是维生素A、维生素C、维生素E、泛醌、矿物质硒、锰、褪黑激素、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、番茄红素、叶黄素、玉蜀黍黄素(zeanthin)、隐黄素(crypoxanthin)、白藜芦醇(reservatol)、丁子香酚、槲皮素、儿茶素、棉酚、橙皮素、姜黄素、阿魏酸、百里酚、羟基酪醇、姜黄、百里香、橄榄油、硫辛酸、谷胱甘肽(glutathinone)、谷氨酰胺(gutamine)、草酸、生育酚衍生化合物、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、乙二胺四乙酸(EDTA)、叔丁基对苯二酚、乙酸、果胶、生育三烯酚、生育酚、辅酶Q10、玉米黄素、虾青素、斑蝥黄(canthaxantin)、皂苷、柠檬苦素、山柰酚(kaempfedrol)、杨梅酮、异鼠李素、原花色素、槲皮素、芦丁、木犀草素、芹菜素、红橘黄酮(tangeritin)、橙皮素、柚皮素、圣草酚(erodictyol)、黄烷-3-醇(例如，花青素)、没食子儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯形式、表没食子儿茶素及其没食子酸酯形式(ECGC)、茶黄素及其没食子酸酯形式、茶玉红精、异黄酮植物雌激素、染料木黄酮、大豆黄素、黄豆黄素、花色素苷(anythocyanin)、氰化物(cyaniding)、飞燕草色素、锦葵花素、锦葵色素、锦葵色素、甲基花青素、矮牵牛素、鞣花酸、没食子酸、水杨酸、迷迭香酸、肉桂酸及其衍生物(例如，阿魏酸)、绿原酸、菊苣酸(chicoric acid)、五倍子鞣质、鞣花丹宁、花黄素、β-花青苷和其他植物颜料、水飞蓟素、柠檬酸、木酚素、抗营养素(antinutrient)、胆红素、尿酸、R-α-硫辛酸，N-乙酰半胱氨酸、油柑宁(emblicanin)、苹果提取物、苹果皮提取物(苹果多酚)、红路易波士提取物(rooibos extract red)、绿路易波士提取物(rooibos extract,green)、山楂果提取物、覆盆子提取物、生咖啡抗氧化剂(GCA)、野樱梅提取物20％、葡萄籽提取物(VinOseed)、可可豆提取物、啤酒花提取物、山竹果提取物、山竹果壳提取物、蔓越莓提取物、石榴提取物、石榴皮提取物、石榴籽提取物、山楂浆果提取物、波梅拉(pomella)石榴提取物、肉桂皮提取物、葡萄皮提取物、越桔提取物、松树皮提取物、碧萝芷、接骨木提取物、桑树根提取物、枸杞(gogi)提取物、黑莓提取物、蓝莓提取物、蓝莓叶提取物、树莓提取物、姜黄提取物、柑橘属生物类黄酮、黑醋栗、姜、巴西莓粉、生咖啡豆提取物、绿茶提取物、以及植酸、或其组合。在替代性实施例中，该抗氧化剂是一种合成的抗氧化剂，例如像，丁基化羟基甲苯或丁基化羟基苯甲醚。用于本发明的实施例的适合抗氧化剂的其他来源包括但不限于，水果、蔬菜、茶、可可、巧克力、香辛料、药草、大米、来自家畜的器官肉类、酵母、全谷类(wholegrain)、或谷粒(cereal grain)。
具体的抗氧化剂属于称为多元酚(也称为“多酚”)的植物营养素类，它是在植物中可见的一组化学物质，其特征在于每个分子存在超过一个酚基团。多种健康益处可以源于多酚，例如包括预防癌症、心脏病、以及慢性炎性疾病以及提高的脑力和体力。用于本发明的实施例的适合的多酚包括儿茶素、原花色素、原花青素、花青素、槲皮素、芦丁、白藜芦醇、异黄酮、姜黄素、安石榴苷、鞣花单宁、橙皮苷、柚皮苷、柑橘类黄酮、绿原酸、其他类似材料、以及其组合。
在具体实施例中，该抗氧化剂是一种儿茶素，例如像表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)。用于本发明的实施例的儿茶素的适合来源包括但不限于，绿茶、白茶、红茶、乌龙茶、巧克力、可可、红葡萄酒、葡萄籽、红葡萄皮、紫色葡萄皮、红葡萄汁、紫葡萄汁、浆果、碧萝芷以及红苹果皮。
在一些实施例中，抗氧化剂是选自原花色素、原花青素或其组合。用于本发明的实施例的原花色素和原花青素的适合来源包括但不限于，红葡萄、紫色葡萄、可可、巧克力、葡萄籽、红葡萄酒、可可豆、蔓越莓、苹果皮、李子、蓝莓、黑醋栗、花楸果(choke berry)、绿茶、高粱、肉桂、大麦、红芸豆、黑白斑豆、啤酒花、杏仁、榛子、山核桃、阿月浑子果实、碧萝芷、以及彩莓。
在具体实施例中，该抗氧化剂是一种花青素。用于本发明的实施例的花青素的适合来源包括但不限于，红莓、蓝莓、越桔、蔓越莓、覆盆子、樱桃、石榴、草莓、接骨木、花楸果、红葡萄皮、紫葡萄皮、葡萄籽、红酒、黑醋栗、红醋栗、可可、李子、苹果皮、桃、红梨、红球甘蓝、红洋葱、红橙、以及黑莓。
在一些实施例中，抗氧化剂是选自槲皮素、芦丁或其组合。用于本发明的实施例的槲皮素和芦丁的适合来源包括但不限于，红苹果、洋葱、羽衣甘蓝、笃斯越桔、越橘、花楸果、蔓越莓、黑莓、蓝莓、草莓、覆盆子、黑醋栗、绿茶、红茶、李子、杏、欧芹、韭、西兰花、红辣椒、浆果酒、以及银杏。
在一些实施例中，该抗氧化剂是白藜芦醇。用于本发明的实施例的白藜芦醇的适合来源包括但不限于，红葡萄、花生、蔓越莓、蓝莓、越桔、桑葚、日本板取茶(JapaneseItadori tea)、以及红酒。
在具体实施例中，该抗氧化剂是异黄酮。用于本发明的实施例的异黄酮的适合来源包括但不限于，大豆、大豆产物、豆科植物、苜蓿芽(alfalfa spout)、鹰嘴豆、花生、以及红三叶草。
在一些实施例中，该抗氧化剂是姜黄素。用于本发明的实施例的姜黄素的适合来源包括但不限于，姜黄和芥末。
在具体实施例中，抗氧化剂是选自槲皮素、鞣花单宁或其组合。用于本发明的实施例的槲皮素和鞣花单宁的适合来源包括但不限于，石榴、覆盆子、草莓、胡桃、以及年代悠久的红葡萄酒。
在一些实施例中，该抗氧化剂是一种柑橘类黄酮，如橙皮苷或柚皮苷。用于本发明的实施例的柑橘类黄酮如橙皮苷或柚皮苷的适合来源包括但不限于，橙、葡萄柚、以及柑橘果汁。
在具体实施例中，该抗氧化剂是绿原酸。用于本发明的实施例的绿原酸的适合来源包括但不限于，生咖啡、巴拉圭茶、红葡萄酒、葡萄籽、红葡萄皮、紫葡萄皮、红葡萄汁、紫葡萄汁、苹果汁、蔓越莓、石榴、蓝莓、草莓、向日葵、紫锥花、碧萝芷、以及苹果皮。
膳食纤维
在某些实施例中，功能性成分是至少一种膳食纤维源。如在此所用，该至少一种膳食纤维来源可以包括作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的一种单一膳食纤维来源或多种膳食纤维来源。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种膳食纤维来源是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
在组成和连接二者中具有显著不同的结构的多种聚合物碳水化合物属于膳食纤维的定义内。此类化合物是本领域技术人员所熟知的，它们的非限制性实例包括非淀粉多醣、木质素、纤维素、甲基纤维素，半纤维素、β-葡聚糖、果胶、树胶、粘质、蜡、菊糖、寡糖、低聚果糖、环糊精、壳质以及其组合。
多糖是由通过糖苷键连接的单糖构成的复合碳水化合物。非淀粉多糖与β键结合，人们由于缺乏一种破坏β键的酶而不能消化它们。相反地，可消化淀粉多糖通常包含α(1-4)键。
木质素是基于氧化苯丙烷单元的一种大的、高度支化且交联的聚合物。纤维素是通过一个β(1-4)键连接的葡萄糖分子的一种线性聚合物，哺乳动物淀粉酶不能水解它。甲基纤维素是通常在食品中用作一种增稠剂和乳化剂的一种纤维素甲酯。它是可商购获得的(例如，葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline)销售的Citrucel、塞拉制药公司(ShirePharmaceuticals)销售的Celevac)。半纤维素是主要由葡糖醛酸-和4-O-甲基葡糖醛酸木聚糖组成的高度支化的聚合物。β葡聚糖是主要在谷类如燕麦和大麦中可见的混合键(1-3)、(1-4)β-D-葡萄糖聚合物。果胶如β果胶是一组主要由D-半乳糖醛酸组成的多糖，该D-半乳糖醛酸被甲氧基化至可变程度。
树胶和粘质代表广泛的一系列不同支化的结构。源于瓜尔豆种子的磨细胚乳的瓜尔豆胶是一种半乳甘露聚糖。瓜尔豆胶是可商购获得的(例如，通过诺华公司(NovartisAG)销售的Benefiber)。其他树胶如阿拉伯树胶和果胶还具有不同的结构。其他树胶还包括黄原胶、结冷胶、塔拉胶、车前子籽壳树胶(psylium seed husk gum)、以及槐豆胶。
蜡是乙二醇和两种脂肪酸的酯，通常作为不溶于水的一种疏水性液体存在。
菊糖包括属于被称为果聚糖的一类碳水化合物的天然存在的寡糖。它们通常是由通过具有一个末端葡萄糖单元的β-(2-1)糖苷键连接的果糖单元组成。寡糖是典型地含有三个至六个组分糖的糖聚合物。它们通常被发现O-连接或N-连接到蛋白质中的相容性氨基酸侧链或脂质分子。低聚果糖是由短链果糖分子组成的寡糖。
膳食纤维的食物来源包括但不限于，谷物、豆类、水果、以及蔬菜。提供膳食纤维的谷物包括但不限于，燕麦、黑麦、大麦、小麦。提供纤维的豆类包括但不限于，豌豆和菜豆如大豆。提供纤维来源的水果和蔬菜包括但不限于，苹果、橙、梨、香蕉、浆果、西红柿、青豆、西兰花、花椰菜、胡萝卜、马铃薯、芹菜。植物性食物如麸、坚果和种子(如亚麻籽)也是膳食纤维来源。提供膳食纤维的植物部分包括但不限于，茎、根、叶、种子、果肉、以及皮。
尽管膳食纤维通常源于植物源，但是难消化动物产物如壳质也被分类为膳食纤维。壳质是由通过与纤维素键类似的β(1-4)键连接的乙酰基葡萄糖胺单元组成的一种多糖。
膳食纤维来源通常基于其在水中的溶解度而被分成可溶性纤维类和不可溶性纤维类。可溶性纤维和不可溶性纤维二者根据植物特征而在不同程度上可见于植物性食物中。尽管不可溶于水中，不溶性纤维具有有助于增加体积、使粪便软化并缩短粪便固体通过肠道的通过时间的被动亲水性特征。
与不可溶性纤维不同，可溶性纤维容易溶解于水中。可溶性纤维通过在结肠内发酵而经受主动代谢过程，从而增加结肠菌群并且从而增加粪便固体的质量。通过结肠细菌发酵纤维还产生具有显著健康益处的终产物。例如，食物质量的发酵产生气体和短链脂肪酸。在发酵过程中产生的酸包括具有不同的有利特性的丁酸、乙酸、丙酸、以及戊酸，这些特性是如通过作用于胰腺胰岛素释放来稳定血糖水平以及通过糖原降解提供肝对照。另外，纤维发酵可以通过降低肝脏的胆固醇合成并且减小血液LDL和甘油三酯水平来减少动脉粥样硬化。在发酵过程中产生的酸降低了结肠pH，从而保护结肠粘膜免于形成癌症息肉。降低的结肠pH还增加了矿物质吸收，提高结肠粘膜层的阻隔特性，并且抑制了炎症和粘附刺激。纤维的发酵还可以通过刺激产生T辅助型细胞、抗体、白细胞、脾细胞、细胞分裂素以及淋巴细胞来有利于免疫系统。
脂肪酸
在某些实施例中，功能性成分是至少一种脂肪酸。如在此使用，该至少一种脂肪酸可以是作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的单一脂肪酸或多种脂肪酸。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种脂肪酸是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
如在此所用的，“脂肪酸”是指任何直链单羧酸并且包括饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、长链脂肪酸、中链脂肪酸、短链脂肪酸、脂肪酸前体(包括ω-9脂肪酸前体)、以及酯化脂肪酸。如在此所用的，“长链多元不饱和脂肪酸”是指具有一个长脂肪族尾部的任何多元不饱和羧酸或有机酸。如在此所用的，“ω-3脂肪酸”是指具有作为在从其碳链的末端甲基端开始的第三个碳碳键的一个第一双键的任何多元不饱和脂肪酸。在具体的实施例中，ω-3脂肪酸可以包括一种长链ω-3脂肪酸。如在此所用的，“ω-6脂肪酸”是指具有作为在从其碳链的末端甲基端开始的第六个碳碳键的一个第一双键的任何多元不饱和脂肪酸。
用于本发明的实施例中的适合的ω-3脂肪酸可以是源于例如藻类、鱼、动物、植物、或其组合。适合的ω-3脂肪酸的实例包括但不限于，亚麻酸、α-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、十八碳四烯酸、二十碳四烯酸及其组合。在一些实施例，适合的ω-3脂肪酸可以被提供在鱼油(例如鲱鱼油、金枪鱼油、鲑鱼油、鲣鱼油、以及鳕鱼油)、微藻类ω-3油或其组合中。在具体实施例，适合的ω-3脂肪酸可以是源于可商购的ω-3脂肪酸油，如微藻DHA油(来自马里兰州哥伦比亚马泰克公司(Martek,Columbia,MD)、OmegaPure(来自德克萨斯州德克萨斯州ω-蛋白公司(Omega Protein,Houston,TX))、屈大麻酚C-38(Marinol C-38)(来自伊利诺州Channahon市脂类营养公司(Lipid Nutrition,Channahon,IL))、鲣鱼油和MEG-3(Bonito oil and MEG-3)(来自NS达特茅斯海洋营养公司(Ocean Nutrition,Dartmouth,NS))、Evogel(来自德国霍尔茨明登德之馨公司(Symrise,Holzminden,Germany))、来自金枪鱼或鲑鱼的海洋油(来自CT阿里斯塔威尔顿公司(Arista Wilton,CT)、OmegaSource2000、来自鲱鱼的海洋油和来自鳕鱼的海洋油(来自OmegaSource,RTP,NC)。
适合的ω-6脂肪酸包括但不限于，亚油酸、γ-亚麻酸、二高-γ-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳二烯酸、二十二碳二烯酸、肾上腺酸、二十二碳五烯酸及其组合。
用于本发明的实施例的适合的酯化脂肪酸可以包括但不限于，含有ω-3和/或ω-6脂肪酸的单酰基甘油、含有ω-3和/或ω-6脂肪酸的二酰基甘油或者含有ω-3和/或ω-6脂肪酸的三酰基甘油以及其组合。
维生素
在某些实施例中，功能性成分是至少一种维生素。
如在此所用，该至少一种维生素可以是作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的单一维生素或多种维生素。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种维生素是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
维生素是人体需要少量来正常运行的有机化合物。身体使用维生素而不会破坏它们，与其他营养物如碳水化合物和蛋白质不同。迄今为止，已认识十三种维生素，并且一种或多种可以用于在此的组合物中。适合的维生素包括维生素A、维生素D、维生素E、维生素K、维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B7、维生素B9、维生素B12以及维生素C。很多维生素还具有替代性化学名，以下提供了它们的非限制性实例。
多种其他化合物已被一些官方分类为维生素。这些化合物可以被称为假维生素，并且包括但不限于，诸如泛醌(辅酶Q10)、潘氨酸、二甲基甘氨酸、taestrile、苦杏仁甙、类黄酮、对-氨基苯甲酸、腺嘌呤、腺苷酸、以及s-甲基甲硫氨酸的化合物。如在此所用的，术语维生素包括假维生素。
在一些实施例，该维生素是选自维生素A、维生素D、维生素E、维生素K以及其组合的脂溶性维生素。
在其他实施例中，该维生素是选自以下的一种水溶性维生素：维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B6、维生素B12、叶酸、生物素、泛酸、维生素C以及其组合。
葡萄糖胺
在某些实施例中，功能性成分是葡萄糖胺。
通常，根据本发明的具体实施例，葡萄糖胺是以足以促进健康和保健的量存在于这些组合物中。
葡萄糖胺(也称为壳糖胺)是被视为在糖基化蛋白质和脂质的生物化学合成中的一种重要前体的一种氨基糖。D-葡萄糖胺以葡萄糖胺-6-磷酸酯形式天然地存在于软骨中，它是由果糖-6-磷酸酯和谷氨酰胺合成的。然而，葡萄糖胺还可以其他形式获得，它的非限制性实例包括盐酸葡萄糖胺、硫酸葡萄糖胺、N-乙酰基-葡萄糖胺或任何其他盐形式或其组合。葡萄糖胺可以是使用本领域普通技术人员已熟知的方法通过酸水解龙虾、蟹、小虾或对虾的壳来获得。在一个具体实施例中，葡萄糖胺可以是源于含有壳质的真菌生物质，如美国专利公开号2006/0172392所述的。
这些组合物可以进一步包含硫酸软骨素。
矿物质
在某些实施例中，功能性成分是至少一种矿物质。
如在此所用，该至少一种矿物质可以是作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的单一矿物质或多种矿物质。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种矿物质是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
根据本发明的传授内容，矿物质包括生物体所需要的无机化学元素。矿物质是由一个广泛范围的组合物(例如，元素、简单的盐以及复合硅酸盐)组成的并且结晶结构也广泛不同。它们可以天然地存在于食物和饮料中，可以作为一种补充剂添加，或者可以与食物或饮料分开地消耗或给予。
矿物质可以被分类为相对大量需要的主体矿物质(bulk mineral)或相对小量需要的微量矿物质。主体矿物质通常每天需要大于或等于约100mg的量并且微量矿物质是每天需要小于约100mg的量的那些矿物质。
在本发明的具体实施例中，该矿物质是选自主体矿物质、微量矿物质或其组合。主体矿物质的非限制性实例包括钙、氯、镁、磷、钾、钠、以及硫。微量矿物质的非限制性实例包括铬、钴、铜、氟、铁、锰、钼、硒、锌、以及碘。尽管碘通常被分类为一种微量矿物质，它需要比其他微量矿物质更大的量并且常常被分类为一种主体矿物质。
在本发明的其他具体实施例中，该矿物质是被认为对于人类营养所必需的一种微量矿物质，它的非限制性实例包括铋、硼、锂、镍、铷、硅、锶、碲、锡、钛、钨、以及钒。
在此呈现的矿物质可以是处于本领域普通技术人员已知的任何形式。例如，在一个具体实施例中，这些矿物质可以是处于其具有一个正电荷或负电荷的离子形式。在另一个具体实施例中，这些矿物质可以是处于其分子形式。例如，硫和磷通常天然地出现为硫酸盐、硫化物和磷酸盐。
防腐剂
在某些实施例中，功能性成分是至少一种防腐剂。
如在此所用，该至少一种防腐剂可以是作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的单一防腐剂或多种防腐剂。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种防腐剂是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
在本发明的具体实施例中，该防腐剂是选自抗微生物剂、抗氧化剂、抗酵素剂或其组合。抗微生物剂的非限制性实例包括亚硫酸盐、丙酸盐、苯甲酸盐、山梨酸盐、硝酸盐、亚硝酸盐、细菌素、盐、糖、乙酸、二碳酸二甲酯(DMDC)、乙醇、以及臭氧。
根据一个具体实施例，该防腐剂是一种亚硫酸盐。亚硫酸盐包括但不限于，二氧化硫、亚硫酸氢钠和亚硫酸氢钾。
根据另一个具体实施例，该防腐剂是一种丙酸盐。丙酸盐包括但不限于，丙酸、丙酸钙和丙酸钠。
根据又另一个具体实施例，该防腐剂是一种苯甲酸盐。苯甲酸盐包括但不限于，苯甲酸钠和苯甲酸。
在另一个具体实施例，该防腐剂是一种山梨酸盐。山梨酸盐包括但不限于，山梨酸钾、山梨酸钠、山梨酸钙、以及山梨酸。
在还另一个具体实施例中，该防腐剂是一种硝酸盐和/或一种亚硝酸盐。硝酸盐和亚硝酸盐包括但不限于，硝酸钠和亚硝酸钠。
在又另一个具体实施例中，该至少一种防腐剂是一种细菌素，例如像尼生素。
在另一个具体实施例，该防腐剂是乙醇。
在还另一个具体实施例，该防腐剂是臭氧。
适用作本发明的具体实施例中的防腐剂的抗酶剂的非限制性实例包括抗坏血酸、柠檬酸和金属螯合剂如乙二胺四乙酸(EDTA)。
水合剂
在某些实施例中，功能性成分是至少一种水合剂。
如在此所用，该至少一种水合剂可以是作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的单一水合剂或多种水合剂。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种水合剂是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
水合产物有助于身体替换通过排泄损失的体液。例如，体液作为汗液损失以便调节体温，作为尿液损失以便排泄废物，并且作为水蒸气损失以便交换肺内的气体。体液损失还可以由于一个广泛范围的外部原因而出现，这些外部原因的非限制性实例包括身体活动、暴露于干燥空气、腹泻、呕吐、高热、休克、失血、以及血压过低。引起体液损失的疾病包括糖尿病、霍乱、胃肠炎、志贺菌病、以及黄热病。引起体液损失的营养失调形式包括过量消耗酒精、电解质不平衡、禁食、以及快速体重减轻。
在一个具体实施例中，水合产物是帮助身体替换在运动过程中损失的体液的一种组合物。因此，在一个具体实施例中，该水合产物是一种电解质，它的非限制性实例包括钠、钾、钙、镁、氯化物、磷酸盐、碳酸氢盐、以及其组合。在美国专利号5,681,569中也描述了用于本发明的具体实施例中的适合电解质，该专利的披露内容通过引用明确结合在此。在具体实施例中，这些电解质是从其相应水溶性盐中获得的。用于具体实施例中的盐的非限制性实例包括氯化物、碳酸盐、硫酸盐、乙酸盐、碳酸氢盐、柠檬酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、酒石酸盐、山梨酸酯、柠檬酸盐、苯甲酸盐或其组合。在其他实施例，这些电解质是通过果汁、果实提取物、蔬菜提取物、茶或茶提取物来提供的。
在本发明的具体实施例中，水合产物是补充肌肉所燃烧的能量存储的一种碳水化合物。在美国专利号4,312,856、4,853,237、5,681,569、以及6,989,171中描述了用于本发明的具体实施例中的适合碳水化合物，这些专利的披露内容通过引用明确结合在此。适合碳水化合物的非限制性实例包括单糖、二糖、寡糖、复合多糖或其组合。用于具体实施例中的适合类型的单糖的非限制性实例包括丙糖、丁糖、戊糖、己糖、庚糖、辛糖、以及壬糖。特定类型的适合单糖的非限制性实例包括甘油醛、二羟基丙酮、赤藓糖、苏阿糖、赤藓酮糖、阿拉伯糖、来苏糖、核糖、木糖、核酮糖、木酮糖、阿洛糖、阿卓糖、半乳糖、葡萄糖、古洛糖、艾杜糖、甘露糖、塔洛糖、果糖、阿洛酮糖、山梨糖、塔格糖、甘露庚酮糖、景天庚酮糖(sedoheltulose)、辛酮糖(octolose)、以及唾液糖(sialose)。适合二糖的非限制性实例包括蔗糖、乳糖和麦芽糖。适合寡糖的非限制性实例包括蔗糖、麦芽三糖和麦芽糖糊精。在其他具体实施例中，碳水化合物是通过玉米糖浆、甜菜糖、甘蔗糖、果汁或茶提供的。
在另一个具体实施例中，该水合是提供细胞再水合的一种黄烷醇。黄烷醇是存在于植物中的一类天然物质，并且通常包括附接到一个或多个化学部分的2-苯基苯并吡喃酮分子骨架。用于本发明的具体实施例中的适合黄烷醇的非限制性实例包括儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素3-没食子酸酯、茶黄素、茶黄素3-没食子酸酯、茶黄素3’-没食子酸酯、茶黄素3,3’-没食子酸酯、茶红素或其组合。黄烷醇的若干种常见来源包括茶树、果实、蔬菜、以及花。在优选的实施例中，黄烷醇是从绿茶中提取的。
在一个具体实施例中，该水合产物是增强运动耐力的一种甘油溶液。一种含有甘油的溶液的摄取已显示提供多种有利的生理作用，如扩大的血容量、降低的心率、以及降低的直肠温度。
益生菌/益生元
在某些实施例中，该功能性成分是选自至少一种益生菌、益生元以及其组合。
如在此所用，该至少一种益生菌或益生元可以是作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的单一益生菌或益生元或者多种益生菌或益生元。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种益生菌、益生元或其组合是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
根据本发明的传授内容，益生菌包括在以有效量消耗时有利于健康的微生物。理想地，益生菌有利地影响人体天然存在的胃肠道微生物区系并且赋予除营养之外的健康益处。益生菌可以包括而不限于细菌、酵母和真菌。
根据本发明的传授内容，益生元是促进有利细菌在肠内的生长的组合物。益生元物质可以是通过一种相关益生菌消耗，或者另外有助于保持相关益生菌存活或者刺激其生长。当以有效量消耗时，益生菌还有利地影响人体的天然存在的胃肠微生物区系病因此赋予除仅营养之外的健康益处。益生元食物进入结肠并且用作内生菌的底物，从而间接提供能量、代谢底物和必需微量营养素给宿主。身体的益生元食物的消化和吸收是取决于细菌代谢活性，这从在小肠内逃离消化和吸收的营养物中拯救了宿主的能量。
根据具体实施例，益生菌是有利地影响人体天然存在的胃肠道微生物区系并赋予除营养之外的健康益处的一种有利的微生物。益生菌的实例包括但不限于，给予对人的有利作用的乳酸杆菌(Lactobacilli)属、双歧杆菌(Bifidobacteria)属、链球菌(Streptococci)属或其组合的细菌。
在本发明的具体实施例中，该至少一种益生菌是选自乳酸杆菌属。乳酸杆菌(即，乳酸杆菌属细菌，在此之后是“L.”)已持续几百年用作一种食物方法并且用于促进人体健康。人胃肠道内可见的乳酸杆菌种类的非限制性实例包括嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、干酪乳杆菌(L.casei)、发酵乳杆菌(L.fermentum)、唾液乳杆菌(L.saliva roes)、短乳杆菌(L.brevis)、赖氏乳杆菌(L.leichmannii)、植物乳杆菌(L.plantarum)、纤维二糖乳杆菌(L.cellobiosus)、罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)、GG乳杆菌(L.GG)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)、以及嗜热乳酸菌(L.thermophilus)。
根据本发明的其他具体实施例，该益生菌是选自双歧杆菌属。也已知双歧杆菌通过碳水化合物代谢产生短链脂肪酸(例如，乙酸、丙酸和丁酸)、乳酸和甲酸来发挥对于人健康的一种有利影响。在人胃肠道中可见的双歧杆菌的非限制性种类包括婴儿双歧杆菌(B.angulatum)、动物双歧杆菌(B.animalis)、海星纲双歧杆菌(B.asteroides)、双叉双歧杆菌(B.bifidum)、布姆双歧杆菌(B.boum)、短双歧杆菌(B.breve)、链状双歧杆菌(B.catenulatum)、小猪双歧杆菌(B.choerinum)、棒状双岐杆菌(B.coryneforme)、串孔双歧杆菌(B.cuniculi)、齿双歧杆菌(B.dentium)、高卢氏双歧杆菌(B.gallicum)、鸡胚双歧杆菌(B.gallinarum)、野菊双歧杆菌(B indicum)、长双歧杆菌(B.longum)、玛格南双歧杆菌(B.magnum)、瘤胃双歧杆菌(B.merycicum)、最小双歧杆菌(B.minimum)、伪链状双歧杆菌(B.pseudocatenulatum)、伪长双歧杆菌(B.pseudolongum)、B.psychraerophilum、雏双歧杆菌(B.pullorum)、反刍兽双歧杆菌(B.ruminantium)、波伦亚双歧杆菌(B.saeculare)、B.scardovii、猿双歧杆菌(B.simiae)、微秒双歧杆菌(B.subtile)、B.thermacidophilum、嗜热双歧杆菌(B.thermophilum)、尿路双歧杆菌(B.urinalis)、以及双歧杆菌某种。
根据本发明的其他具体实施例，该益生菌是选自链球菌属。嗜热链球菌是一种格兰阳性兼性厌氧菌。它被分类为一种乳酸细菌并且通常可见于奶和奶制品中，并且用于生产酸奶。此细菌的其他非限制性益生菌种类包括唾液链球菌(Streptococcus salivarus)和乳脂链球菌(Streptococcus cremoris)。
可以根据本发明使用的益生菌是本领域技术人员已熟知的。包含益生菌的食品的非限制性实例包括酸奶、德国泡菜、山羊乳酪、韩国泡菜、发酵的蔬菜、以及含有通过改善肠内微平衡来有利地影响宿主动物的微生物元素的其他食品。
根据本发明的实施例，益生元包括而不限于，黏多醣、寡醣、多醣、氨基酸、维生素、营养物前体、蛋白质以及其组合。
根据本发明的一个具体实施例，该益生元是选自膳食纤维，包括而不限于，多糖和寡糖。这些化合物具有增加益生菌数量的能力，这产生由这些益生菌给予的益处。根据本发明的具体实施例被分类为益生元的寡糖的非限制性实例包括低聚果糖、菊糖、低聚异麦芽糖、乳糖醇(lactilol)、低聚乳果糖、乳果糖、焦糊精、大豆寡糖、低聚反式半乳糖、以及低聚木糖。
根据本发明的其他具体实施例，该益生元是一种氨基酸。尽管多种已知益生元分解来提供用于益生菌的碳水化合物，但是一些益生菌也需要氨基酸来提供养分。
益生元天然地可见于多种食物中，包括而不限于，香蕉、浆果、芦笋、大蒜、小麦、燕麦、大麦(以及其他全谷类)、亚麻籽、番茄、洋姜、洋葱和菊苣、菜叶(green)(例如，蒲公英嫩叶、菠菜、羽衣甘蓝叶、甜菜、无头甘蓝、芥菜叶、芜菁叶)、以及豆类(例如，小扁豆、云豆、鹰嘴豆、海军豆、白豆、黑豆)。
体重管理剂
在某些实施例中，功能性成分是至少一种体重管理剂。
如在此所用，该至少一种体重管理剂可以是作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的单一体重管理剂或多种体重管理剂。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种体重管理剂是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
如在此所用的，“体重管理剂”包括一种食欲抑制剂和/或生热作用剂。如在此所用的，短语“食欲抑制剂”、“食欲饱腹组合物”、“饱腹剂”、以及“饱腹成分”是同义词。短语“食欲抑制剂”描述了当以有效量递送时抑制、禁止、减少或以其他方式缩短人的食欲的大量营养素、草本植物提取物、外源性激素、减食欲药、食欲不振药、药物以及其组合。短语“生热作用剂”描述了当以有效量递送时刺激或以其他方式增强人的生热作用或代谢的大量营养素、草本植物提取物、外源性激素、减食欲药、食欲不振药、药物以及其组合。
适合的体重管理剂包括选自下组的大量营养素，该组由以下各项组成：蛋白质、碳水化合物、膳食脂肪、以及其组合。蛋白质、碳水化合物、以及膳食脂肪的消耗刺激了具有食欲抑制作用的肽的释放。例如，蛋白质和膳食脂肪的消耗刺激了胃肠激素胆囊收缩素(CCK)的释放，而碳水化合物和膳食脂肪的消耗刺激了胰高血糖素样肽1(GLP-1)的释放。
适合的大量营养素体重管理剂还包括碳水化合物。碳水化合物通常包括身体转化成用于能量的葡萄糖的糖、淀粉、纤维素和树胶。碳水化合物通常被分成两类，可消化碳水化合物(例如，单糖、二糖和淀粉)和不可消化碳水化合物(例如，膳食纤维)。研究已显示在小肠内不可消化的碳水化合物和具有减小的吸收和消化性的复合聚合物碳水化合物刺激了抑制食物摄取的生理反应。因此，在此呈现的碳水化合物理想地包括不可消化的碳水化合物或具有减小的消化性的碳水化合物。此类碳水化合物的非限制性实例包括聚右旋糖；菊糖；单糖衍生的多元醇，如赤藓糖醇、甘露糖醇、木糖醇、以及山梨糖醇；二糖衍生的醇，如异麦芽酮糖醇、乳糖醇和麦芽糖醇；以及氢化的淀粉水解物。在此以下更详细描述了碳水化合物。
在另一个具体实施例中，体重管理剂是一种膳食脂肪。膳食脂肪是包含饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的组合的脂质。多元不饱和脂肪酸已显示具有比单不饱和脂肪酸更大的饱腹能力。因此，在此呈现的膳食脂肪理想地包括多元不饱和脂肪酸，它的非限制性实例包括三酰甘油。
在一个具体实施例中，体重管理剂是一种草本提取物。来自多种类型的植物的提取物已被认定为具有食欲抑制特性。其提取物具有食欲抑制特性的植物的非限制性实例包括火地亚(Hoodia)属、亚罗汉(Trichocaulon)属、水牛掌(Caralluma)属、豹皮花(Stapelia)属、奥贝亚(Orbea)属、马利筋(Asclepias)属、以及山茶花(Camelia)属的植物。其他实施例包括源于匙羹藤(Gymnema Sylvestre)、可乐果(Kola Nut)、酸橙(CitrusAuran tium)、巴拉圭茶(Yerba Mate)、加纳谷物(Griffonia Simplicifolia)、瓜拉那(Guarana)、没药(myrrh)、香胶树脂质(guggul Lipid)、以及黑醋栗籽油(black currentseed oil)的提取物。
草本提取物可以是由任何类型的植物材料或植物生物质制备的。植物材料和生物质的非限制性实例包括茎、根、叶、从植物材料中获得的干燥粉料、以及树液或干燥树液。草本提取物通常是通过从该植物中提取树液并且然后喷雾干燥该树液来制备的。或者，可以使用溶剂提取程序。在初始提取之后，可能希望进一步分馏该初始提取物(例如，通过柱色谱法)，以便获得具有增强的活性的草本提取物。此类技术是本领域普通技术人员已熟知的。
在一个具体实施例中，草本植物提取物是源于火地亚属的植物，火地亚属的种类包括H.alstonii、H.currorii、H.dregei、火地亚黄花(H.flava)、火地亚仙人掌(H.gordonii)、H.jutatae、H.mossamedensis、火地亚地榆(H.officinalis)、H.parviflorai、火地亚同瓣草(H.pedicellata)、H.pilifera、H.ruschii、以及H.triebneri。火地亚属植物是原产自南非的肉茎植物。称为P57的一种火地亚属的甾醇糖苷被认为是火地亚种类的食欲抑制剂作用的原因。
在另一个具体实施例中，草本提取物是源于一种水牛掌属(genus Caralluma)植物，水牛掌属的种类包括印度仙人掌(C.indica)、C.fimbriata、C.attenuate、构叶仙人掌(C.tuberculata)、鸡蛋果仙人掌(C.edulis)、小叶仙人掌(C.adscendens)、C.stalagmifera、伞状花仙人掌(C.umbellate)、C.penicillata、C.russeliana、C.retrospicens、C.Arabica、以及C.lasiantha。水牛掌植物属于与火地亚属相同的子族萝摩科。水牛掌是原产自印度的具有医学特性如食欲抑制的矮小直立并且肉质的植物，这些医学特性通常是归因于属于糖苷孕烷组的糖苷，这些糖苷的非限制性实例包括瘤水牛掌糖苷(caratuberside)A、瘤水牛掌糖苷B、布塞洛糖苷(bouceroside)I、布塞洛糖苷II、布塞洛糖苷III、布塞洛糖苷IV、布塞洛糖苷V、布塞洛糖苷VI、布塞洛糖苷VII、布塞洛糖苷VIII、布塞洛糖苷IX、以及布塞洛糖苷X。
在另一个具体实施例中，该至少一种草本植物提取物是源于一种亚罗汉属植物。亚罗汉属植物是通常原产自南非的肉质植物，与火地亚属类似，并且包括摩耶夫人(T.piliferum)和T.officinale。
在另一个具体实施例中，该草本植物提取物是源于一种豹皮花属或奥贝亚属植物，它们的种类分别包括长须地毯海葵(S.gigantean)和杂色豹皮花(O.variegate)。豹皮花属和奥贝亚属植物二者属于与火地亚属相同的子族萝摩科。在不希望受任何理论约束的情况下，认为表现出食欲抑制活性的这些化合物是皂苷，如孕烷糖苷，它们包括杂色豹皮花苷(stavaroside)A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、以及K。
在另一个具体实施例中，该草本植物提取物是源于一种马利筋属植物。马利筋属植物也属于萝摩科族植物。马利筋属植物的非限制性实例包括沼泽乳草(A.incarnate)、黄冠马利筋(A.curassayica)、叙利亚马利筋(A.syriaca)、以及柳叶马利筋(A.tuberose)。在不希望受任何理论约束的情况下，认为这些提取物包含具有食欲抑制作用的甾族化合物，如孕烷糖苷和孕烷糖苷配基。
在一个具体实施例中，体重管理剂是具有体重管理作用的一种外源性激素。此类激素的非限制性实例包括CCK、肽YY、胃饥饿素、铃蟾肽和胃泌素释放肽(GRP)、肠抑素、载脂蛋白A-IV、GLP-1、淀粉不溶素、体抑素(somastatin)、以及瘦素。
在另一个实施例中，体重管理剂是一种药物。非限制性实例包括苯丁胺、二乙胺苯酮、苯甲曲秦、西布曲明、利莫那班、胃泌酸调节素、盐酸氟西汀、麻黄碱、苯乙胺、或其他刺激物。
骨质疏松症管理剂
在某些实施例中，功能性成分是至少一种骨质疏松症管理剂物。
如在此所用的，该至少一种骨质疏松症管理剂可以是作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的单一骨质疏松症管理剂或多种骨质疏松症管理剂。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种骨质疏松症管理剂是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
骨质疏松症是损害的骨强度的一种骨骼病症，这引起增加的骨破裂风险。通常，骨质疏松症的特征在于骨矿物质密度(BMD)的减小、骨微-结构的破坏、以及骨内非胶原蛋白的量和种类的改变。
在某些实施例中，骨质疏松症管理剂是至少一种钙源。根据一个具体实施例，该钙源是含有钙的任何化合物，包括钙的盐络合物、溶解物质、以及其他形式。钙源的非限制性实例包括氨基酸螯合钙、碳酸钙、氧化钙、氢氧化钙、硫酸钙、氯化钙、磷酸钙、磷酸氢钙、磷酸二氢钙、柠檬酸钙、苹果酸钙、柠檬酸苹果酸钙、葡萄糖酸钙、酒石酸钙、乳酸钙、其溶解物质、以及其组合。
根据一个具体实施例，该骨质疏松症管理剂是一种镁源。该镁源是含有镁的任何化合物，包括镁的盐络合物、溶解物质、以及其他形式。镁源的非限制性实例包括氯化镁、柠檬酸镁、葡庚糖酸镁、葡糖酸镁、乳酸镁、氢氧化镁、吡啶甲酸镁(magnesium picolate)、硫酸镁、其溶解物质、以及其混合物。在另一个具体实施例中，该镁源包括一种氨基酸螯合镁或肌酸螯合镁。
在其他实施例中，骨质疏松症剂是选自维生素D、C、K、其前体和/或β-胡萝卜素以及其组合。
多种植物和植物提取物也已被认定为对于防止和治疗骨质疏松症是有效的。在不希望受任何理论约束的情况下，认为这些植物和植物提取物刺激了成骨蛋白和/或抑制了骨再吸收，从而促进骨再生和强度。作为骨质疏松症管理剂的适合植物和植物提取物的非限制性实例包括如美国专利公开号2005/0106215中所披露的蒲公英属(Taraxacum)和唐棣属(Amelanchier)种类、以及如美国专利公开号2005/0079232所披露的山胡椒属(Lindera)、艾属(Artemisia)、菖蒲属(Acorus)、红花属(Carthamus)、葛缕子属(Carum)、蛇床属(Cnidium)、姜黄属(Curcuma)、莎草属(Cyperus)、刺柏属(Juniperus)、李属(Prunus)、鸢尾花属(Iris)、菊苣属(Cichorium)、坡柳属(Dodonaea)、淫羊藿属(Epimedium)、绒毛属(Erigonoum)、大豆属(Soya)、薄荷属(Mentha)、罗勒属(Ocimum)、百里香属(thymus)、菊蒿属(Tanacetum)、车前属(Plantago)、留兰香属(Spearmint)、红木属(Bixa)、葡萄属(Vitis)、迷迭香属(Rosemarinus)、漆树属(Rhus)、以及莳萝属(Anethum)的种类。
植物雌激素
在某些实施例中，功能性成分是至少一种植物雌激素。
如在此所用的，该至少一种植物雌激素可以是作为在此所提供的组合物的一种功能性成分的单一植物雌激素或多种植物雌激素。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种植物雌激素是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
植物雌激素是在植物中发现的化合物，它们典型地可以通过摄取具有这些植物雌激素的植物或植物部分来递送到人体中。如在此所用的，“植物雌激素”指的是当引入到身体内时引起任何程度的雌激素样作用的任何物质。例如，一种植物雌激素可以结合身体内的雌激素受体并且具有小的雌激素样作用。
用于本发明的实施例的适合植物雌激素的实例包括但不限于，异黄酮、芪类、木酚素、雷琐酸内酯(resorcyclic acid lactone)、香豆素、香豆雌醇(coumestan)、香豆雌酚(coumestroI)、雌马酚、以及其组合。适合的植物雌激素的来源包括但不限于，全谷类、谷物、纤维、水果、蔬菜、黑升麻、龙舌兰根、黑醋栗、樱叶荚卓、圣洁莓、痉挛树皮、当归根、魔鬼爪(devil's club)根、假独角兽根(false unicorn root)、人参根、地梁草、甘草汁、活根草、益母草、牡丹根、覆盆子叶、蔷薇科植物、鼠尾草叶、洋菝契根、塞润榈籽、野生山药根、开花蓍草、豆科植物、大豆、大豆产品(例如，味噌、大豆粉、豆奶、大豆坚果、大豆蛋白质分离物、马来豆酵饼(tempen)、或豆腐)、鹰嘴豆、坚果、小扁豆、种子、三叶草、红三叶草、蒲公英叶、蒲公英根、胡芦巴籽、绿茶、啤酒花、红葡萄酒、亚麻仁、大蒜、洋葱、亚麻籽、琉璃苣、块根马利筋(butterfly weed)、葛缕子、女贞子树(chaste tree)、牡荆、大枣、莳萝、茴香籽、雷公根、水飞蓟、唇萼薄荷、石榴、青蒿、豆粉、艾菊、葛藤根(葛根)等、以及其组合。
异黄酮属于称为多元酚的植物营养素组。通常，多元酚(也称为“多酚类”)是在植物中发现的一组化学物质，其特征在于每个分子存在超过一个酚基团。
根据本发明的实施例的适合植物雌激素异黄酮包括染料木黄酮、黄豆苷元、黄豆黄素、鹰嘴豆素A、芒柄花黄素、其各自天然存在的糖苷和糖苷缀合物、马台树脂醇、开环异落叶松脂素、肠内二酯、肠二醇、植物组织蛋白以及其组合。
用于本发明的实施例的异黄酮的适合来源包括但不限于，大豆、大豆产物、豆科植物、苜蓿芽(alfalfa spout)、鹰嘴豆、花生、以及红三叶草。
长链伯脂肪族饱和醇
在某些实施例中，功能性成分是至少一种长链伯脂肪族饱和醇。
如在此所用的，该至少一种长链脂肪族饱和伯醇可以是作为在此提供的组合物的一种功能性成分的单一长链脂肪族饱和伯醇或多种长链脂肪族饱和伯醇。通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种长链脂肪族饱和伯醇是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
长链脂肪族饱和伯醇是不同组的有机化合物。术语“醇”是指以下事实：这些化合物的特性是结合到一个碳原子上的一个羟基(-OH)。术语伯是指以下事实：在这些化合物中，羟基所结合的碳原子仅与一个另外的碳原子结合。术语饱和是指以下事实：这些化合物的特性是没有碳碳pi键。术语脂肪族是指以下事实：在这些化合物中的碳原子一起连接在直链或支链中而不是环中。术语长链是指以下事实：在这些化合物中的碳原子数目是至少8个碳。
用于本发明的具体实施例的具体长链脂肪族饱和伯醇的非限制性实例包括8碳原子1-辛醇、9碳1-壬醇、10碳原子1-癸醇、12碳原子1-十二烷醇、14碳原子1-十四烷醇、16碳原子1-十六烷醇、18碳原子1-十八烷醇、20碳原子1-二十烷醇、22碳1-二十二烷醇、24碳1-二十四烷醇、26碳1-二十六烷醇、27碳1-二十七烷醇、28碳1-二十八烷醇(octanosol)、29碳1-二十九烷醇、30碳1-三十烷醇、32碳1-三十二烷醇、以及34碳1-三十四烷醇。
在本发明的一个特别令人希望的实施例中，该长链伯脂肪族饱和醇是普利醇。普利醇是关于主要由以下组成的长链脂肪族饱和伯醇的混合物的术语：28碳1-二十八烷醇和30碳1-三十烷醇、以及较低浓度的其他醇如22碳1-二十二烷醇、24碳1-二十四烷醇、26碳1-二十六烷醇、27碳1-二十七烷醇、29碳1-二十九烷醇、32碳1-三十二烷醇和和34碳1-三十四烷醇。
长链伯脂肪族饱和醇是源于天然脂肪和油。它们可以是通过使用本领域普通技术人员已熟知的提取技术从这些来源中获得的。普利醇可以是从多种植物和材料中分离的，包括甘蔗(秀贵甘蔗(Saccharum officinarium))、山药(例如，怀山药(Dioscoreaopposite))、大米麸(例如，亚洲栽培稻(Oryza sativa))、以及蜂蜡。普利醇可以是通过使用本领域普通技术人员已熟知的提取技术从这些来源中获得的。此类提取技术的描述可见于美国专利申请号2005/0220868中，该专利申请的披露内容通过引用明确结合。
植物甾醇
在某些实施例中，该功能性成分是至少一种植物甾醇、植物甾烷醇或其组合。
通常，根据本发明的具体实施例，该至少一种植物甾醇、植物甾烷醇或其组合是以足以促进健康和保健的量存在于该组合物中。
如在此所用的,短语“甾烷醇”、“植物的甾烷醇”“植物甾烷醇”是同义词。
植物甾醇和甾烷醇少量天然地存在于很多水果、蔬菜、坚果、种子、谷物、豆类、植物油、树皮以及其他植物来源中。尽管人们每天正常消耗植物甾醇和甾烷醇，但是所消耗的量不足以具有显著的降胆固醇作用或其他健康益处。因此，希望补充具有植物甾醇和甾烷醇的食物和饮料。
甾醇是在C-3处具有羟基的一个甾族化合物的子组。通常，植物甾醇在甾核内具有一个双键，如胆固醇；然而，植物甾醇还可以在C-24处包含一个取代的侧链(R)，如乙基或甲基，或一个另外的双键。植物甾醇的结构是本领域技术人员已熟知的。
已发现至少44种天然存在的植物甾醇，并且它们通常是源于植物，如玉米、大豆、小麦以及桐油；然而，它们还可以合成地产生以形成与天然的那些相同的组合物或者具有与天然存在的植物甾醇特性相似的特性的组合物。根据本发明的具体实施例，本领域普通技术人员已熟知的植物甾醇的非限制性实例包括4-去甲基甾醇(例如，β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、菜籽甾醇、22-脱氢菜籽甾醇、以及Δ5-燕麦甾醇)、4-单甲基甾醇和4,4-二甲基甾醇(三萜烯醇)(例如，环阿屯醇、24-亚甲基环木菠萝烷醇和环甾烷醇(cyclobranol))。
如在此所用的，短语“甾烷醇”、“植物的甾烷醇”和“植物甾烷醇”是同义词。植物甾烷醇是仅微量存在于自然界中的饱和甾醇并且还可以是例如通过对植物甾醇进行加氢来合成地产生的。根据本发明的具体实施例，植物甾烷醇的非限制性实例包括β-谷甾烷醇、菜油甾烷醇、环木菠萝烷醇、以及其他三萜醇类的饱和形式。
如在此所用的植物甾醇和植物甾烷醇包括多种异构体如α和β异构体(例如，α-谷甾醇和β-谷甾烷醇，它们分别包括用于降低哺乳动物中的血清胆固醇的最有效的植物甾醇和植物甾烷醇之一)。
本发明的植物甾醇和植物甾烷醇还可以是处于其酯形式。用于得到植物甾醇和植物甾烷醇的酯的适合方法是本领域普通技术人员已熟知的，并且在美国专利号6,589,588、6,635,774、6,800,317、以及美国专利公开号2003/0045473中披露，这些专利的披露内容通过引用以其全部内容结合在此。适合的植物甾醇和植物甾烷醇的酯的非限制性实例包括乙酸谷甾醇酯、油酸谷甾醇酯、油酸豆甾醇酯、以及其相应植物甾烷醇酯。本发明的植物甾醇和植物甾烷醇还可以包括其衍生物。
通常，在组合物中的功能性成分的量根据具体组合物和所希望的功能性成分而广泛地改变。本领域普通技术人员将容易确定用于每种组合物的功能性成分的适当量。
在一个实施例中，一种用于制备组合物的方法包括将莱鲍迪苷I和至少一种甜味剂和/或添加剂和/或功能性成分组合。
消费品
在一个实施例中，本发明的组合物是包含莱鲍迪苷I的消费品或含有包含莱鲍迪苷I的组合物(例如，甜味剂组合物)的消费品。
莱鲍迪苷I或包含它的组合物可以结合在任何已知的可食用或口服组合物(本文称为“消费品”)中，例如像，药物组合物、可食用凝胶混合物和组合物、牙科组合物、食品(甜食、调味品、口香糖、谷物组合物、烤焙物、乳制品、以及桌面甜味剂组合物)、饮料和饮料产品。
如本文所使用的消费品是指与人或动物的口接触的物质，包括被摄入并随后从口中排出的物质和被饮用、食用、吞咽或以其他方式摄入的物质，并且当以通常可接受的范围使用时对人或动物消费是健康的。
例如，饮料是消费品。在添加莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物之前，饮料可以是增甜的或未增甜的。莱鲍迪苷I、或包含莱鲍迪苷I的组合物可以加入到饮料或饮料基质中以使饮料变甜或增强其现有甜味或风味。
在一个实施例中，本发明是一种包含莱鲍迪苷I的消费品。莱鲍迪苷I在消费品中的浓度可以高于、处于或低于其阈值甜味浓度。
在一个具体实施例中，本发明是包含莱鲍迪苷I的饮料。饮料中莱鲍迪苷I的浓度可以高于、处于或低于其阈值甜味浓度。
该消费品可以任选地包含添加剂、附加的甜味剂、功能性成分以及其组合，如本文所描述的。以上描述的任何添加剂、附加的甜味剂和功能性成分可以存在于该消费品中。
药物组合物
在一个实施例中，本发明是包含药物活性物质和莱鲍迪苷I的药物组合物。
在另一个实施例中，本发明是包含药物活性物质和包含莱鲍迪苷I的组合物的药物组合物。
莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物可以是作为一种赋形剂材料存在于该药物组合物中的，该赋形剂材料可以掩盖一种药物活性物质或另一种赋形剂材料的苦味或其他不希望的味道。该药物组合物可以是呈以下形式：片剂、胶囊、液体、气雾剂、粉剂、泡腾片剂或粉末、糖浆、乳剂、悬浮液、溶液、或任何其他形式，以为患者提供药物组合物。在具体实施例中，该药物组合物可以处于一个形式中，以用于口服给予、口腔给予、舌下给予、或本领域已知的任何其他给予路径。
如在此所提及的，“药物活性物质”意指具有生物活性的任何药物、药物制剂、药剂、预防剂、治疗剂、或其他物质。如在此所提及的，“赋形剂材料”是指用作一种活性成分的媒剂的任何无活性物质，如有助于药物活性物质的处理、稳定性、可分散性、可湿性、和/或释放动力学的任何材料。
适合的药物活性物质包括但不限于，用于胃肠道或消化系统的药剂、用于心血管系统的药剂、用于中枢神经系统的药剂、用于疼痛或意识的药剂、用于肌肉骨骼病症的药剂、用于眼睛的药剂、用于耳朵、鼻子和口咽的药剂、用于呼吸系统的药剂、用于内分泌问题的药剂、用于生殖系统或泌尿系统的药剂、用于避孕的药剂、用于产科学和妇科学的药剂、用于皮肤的药剂、用于传染和感染的药剂、用于免疫学的药剂、用于变态反应性病症的药剂、用于营养的药剂、用于血液肿瘤疾病的药剂、用于诊断的药剂、用于安乐死的药剂、或用于其他生物功能或病症的药剂。用于本发明的实施例的适合药物活性物质的实例包括但不限于，抗酸剂、回流抑制剂、抗气胀药、抗多巴胺药、质子泵抑制剂、细胞保护剂、前列腺素类似物、轻泻药、解痉药、止泻剂、胆汁酸螯合剂、阿片样物质、β-受体阻断剂、钙通道阻断剂、利尿剂、强心苷、抗心律失常药、硝酸酯、抗心绞痛药、血管收缩药、血管扩张药、末梢血管活化剂、ACE抑制剂、血管紧张素受体阻断剂、α阻断剂、抗凝血剂、肝素、抗血小板药、纤溶剂、抗血友病因子、止血药、降血脂剂、他汀类、安眠药(hynoptics)、麻醉剂、抗精神病药、抗抑郁药、止吐药、抗惊厥药、抗癫痫药、抗焦虑药、巴比妥类、运动障碍药物、刺激剂、苯二氮卓类、环吡咯酮、多巴胺拮抗剂、抗组胺剂、胆碱能药物、抗胆碱能药、催吐剂、大麻素、止痛药、肌肉松弛药、抗生素、氨基糖苷类、抗病毒剂、抗真菌剂、抗炎药、抗青光眼药、拟交感神经药、类固醇、耵聍溶解药(ceruminolytics)、支气管扩张药、NSAIDS、镇咳药、粘液溶解药、减充血药、皮质类固醇、雄激素、抗雄激素、促性腺激素、生长激素、胰岛素、抗糖尿病药、甲状腺激素、降钙素、二膦酸化合物、抗利尿激素类似物、碱化剂、喹诺酮类、抗胆碱酯酶、西地那非、口服避孕药、激素替代治疗、骨调节剂、促卵泡激素、促黄体激素、亚麻酸(gamolenicacid)、孕激素、多巴胺激动剂、雌激素、前列腺素、促性腺激素释放因子、氯米芬、他莫昔芬、己烯雌酚、抗麻风药、抗结核药、抗疟药、驱虫药、抗原生动物药、抗血清、疫苗、干扰素、补养药、维生素、细胞毒性药、性激素、芳香酶抑制剂、促生长素抑制素抑制剂、或类似类型物质、或其组合。此类组分通常被视为安全的(GRAS)和/或是美国食品药品管理局(FDA)批准的。
该药物活性物质是以广泛范围的量存在于该药物组合物中的，该量取决于所使用的具体药物活性剂和其预期应用。任何在此所述的药物活性物质的一个有效剂量可以是容易通过使用常规技术并且通过观察在类似情况下获得的结果来确定的。在确定有效剂量时，考虑多种因素，包括但不限于，患者的种类；其大小、年龄和一般健康；所涉及的特定疾病；涉及程度或疾病严重性；个别患者的反应；所给予的具体药物活性剂；给予模式；所给予的制剂的生物利用度特征；所选择的给药方案；以及合并用药的使用。该药物活性物质是以足以递送给患者的量被包含在药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂中，该量是该药物活性物质的体内有效量，当以通常可接受的量使用时不存在严重毒性作用。因此，适合的量可以是容易通过本领域技术人员判断的。
根据本发明的具体实施例，在药物组合物中药物活性物质的浓度将取决于药物的吸收、失活和排泄的速率以及本领域技术人员已知的其他因素。应注意剂量值将随着病状严重性减轻而改变。应进一步理解，对于任何特定受试者，应随着时间根据个体需要和给予的人或者监控药物组合物的给予的人的专业判断来调整特定给药方案，并且在此所述的剂量范围仅是示例性的并且并不旨在限制要求保护的组合物的范围和实践。药物活性物质可以是一次给予，或者可以被分成多个较小剂量以在不同时间间隔内给予。
药物组合物还可以包含其他药学上可接受的赋形剂材料。用于本发明的实施例的适合赋形剂材料的实例包括但不限于，抗粘附剂、粘合剂(例如，微晶纤维素、黄蓍胶或明胶)、包衣、崩解剂、填充剂、稀释剂、软化剂、乳化剂、调味剂、着色剂、佐剂、润滑剂、功能性试剂(例如，营养物)、粘度调节剂、膨胀剂、助流剂(例如，胶体二氧化硅)、表面活性剂、渗透剂、稀释剂、或任何其他非活性成分、或其组合。例如，本发明的药物组合物可以包括选自下组的赋形剂材料，该组由以下各项组成：碳酸钙、着色剂、增白剂、防腐剂和风味调料、三醋精、硬脂酸镁、氢化植物油(sterote)、天然风味调料或人工风味调料、精油、植物提取物、水果香精、明胶、或其组合。
药物组合物的赋形剂材料可以任选地包括其他人工甜味剂或天然甜味剂、填充型甜味剂或其组合。填充型甜味剂包括有热量化合物和无热量化合物二者。在一个具体实施例中，添加剂用作填充型甜味剂。填充型甜味剂的非限制性实例包括蔗糖、右旋糖、麦芽糖、糊精、干燥的转化糖、果糖、高果糖玉米糖浆、左旋糖、半乳糖、玉米糖浆固体、塔格糖、多元醇(例如，山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、以及麦芽糖醇)、氢化淀粉水解物、异麦芽酮糖醇、海藻糖、以及其混合物。在具体实施例，填充型甜味剂以广泛范围的量存在于药物组合物中，该量取决于所希望的甜度。两种甜味剂的适合的量是本领域技术人员容易辨别的。
可食用凝胶混合物和可食用凝胶组合物
在一个实施例中，本发明是包含莱鲍迪苷I的可食用凝胶或可食用凝胶混合物。在另一个实施例中，本发明是可食用凝胶或含有包含莱鲍迪苷I的组合物的可食用凝胶混合物。
可食用凝胶是可以吃的凝胶。凝胶是其中颗粒网络跨越液体介质的体积的胶体系统。尽管凝胶主要由液体组成并且因此展现出与液体类似的密度，但是凝胶由于跨越液体介质的颗粒网络而具有固体的结构连贯。出于这个原因，凝胶通常出现为固体、果冻样材料。凝胶可以用于多种应用中。例如，凝胶可以用于食物、颜料和粘附剂中。
用于具体实施例的可食用凝胶组合物的非限制性实例包括凝胶点心、布丁、果冻、糊剂、松糕、花色肉冻(aspics)、棉花糖、胶质奶糖等。可食用凝胶混合物通常是粉状或颗粒状固体，其中可添加一种流体以形成一种可食用凝胶组合物。用于具体实施例中的流体的非限制性实例包括水、乳品流体、乳品类似物流体、果汁、酒精、酒精饮料以及其组合。可以用于具体实施例中的乳品流体的非限制性实例包括奶、酸奶、奶油、流体乳清以及其混合物。可以用于具体实施例中的乳品类似物流体的非限制性实例包括例如豆奶和非乳品咖啡增白剂。因为在市场上可见的可食用凝胶产品典型地是用蔗糖甜味化的，所以希望用一种替代甜味剂甜味化的可食用凝胶以便提供一种低热量或无热量替代物。
如在此所用的，术语“胶凝成分”是指可以在一种液体介质内形成一种胶体系统的任何材料。用于具体实施例中的胶凝成分的非限制性实例包括明胶、藻酸盐、角叉藻胶、树胶、果胶、魔芋胶、琼脂、食用酸、凝乳酶、淀粉、淀粉衍生物以及其组合。本领域普通技术人员已熟知的是，用于一种可食用凝胶混合物或可食用凝胶组合物中的胶凝成分的量根据多种因素而适当改变，这些因素例如所使用的具体胶凝成分、所使用的具体基液、以及所希望的凝胶特性。
可食用凝胶混合物和可食用凝胶可以使用包含以下项的成分制备：食用酸、食用酸盐、缓冲系统、膨胀剂、螯合剂、交联剂、一种或多种风味调料、一种或多种颜料、以及其组合。用于具体实施例的食用酸的非限制性实例包括柠檬酸、己二酸、富马酸、乳酸、苹果酸以及其组合。用于具体实施例中的食用酸盐的非限制性实例包括食用酸的钠盐、食用酸的钾盐以及其组合。用于具体实施例中的膨胀剂的非限制性实例包括低聚果糖(raftilose)、异麦芽酮糖醇、山梨糖醇、聚葡萄糖、麦芽糊精以及其组合。用于具体实施例中的螯合剂的非限制性实例包括乙烯四乙酸钙二钠、葡糖酸δ-内酯、葡糖酸钠、葡糖酸钾、乙二胺四乙酸(EDTA)以及其组合。用于具体实施例中的交联剂的非限制性实例包括钙离子、镁离子、钠离子、以及其组合。
牙科组合物
在一个实施例中，本发明是包含莱鲍迪苷I的牙科组合物。在另一个实施例中，本发明是包含含有莱鲍迪苷I的组合物的牙科组合物。牙科组合物通常包含一种活性牙齿物质和一种基底材料。莱鲍迪苷I或者包含莱鲍迪苷I的组合物可以用作基底材料以甜味化该牙科组合物。牙科组合物可以是处于用于口腔的任何口服组合物形式，例如像，口腔清新制剂、漱口剂、口腔清洗剂、洁齿剂、牙齿抛光剂、洁牙剂、口腔喷雾剂、牙齿增白剂、牙线等。
如在此所提及的，“活性牙齿物质”意指可以用于提高牙齿或牙龈的美学外观和/或健康或者预防龋齿的任何组合物。如在此所提及的，“基底材料”是指用作一种活性牙齿物质的媒介物的任何无活性物质，如有助于一种活性牙齿物质的处理、稳定性、可分散性、可湿性、发泡、和/或释放动力学的任何材料。
用于本发明的实施例的适合活性牙齿物质包括但不限于，去除牙菌斑的物质、从牙齿去除食物的物质、有助于消除和/或掩盖口臭的物质、预防龋齿的物质、以及预防牙龈病(即，齿龈)的物质。用于本发明的实施例的适合活性牙齿物质的实例包括但不限于，防龋齿药、氟化物、氟化钠、单氟磷酸钠、氟化亚锡、过氧化氢、过氧化脲(即过氧化尿素)、抗菌剂、牙斑清除剂、去污剂、抗结石剂、研磨剂、小苏打、过碳酸盐、碱金属和碱土金属的过硼酸盐、或者类似类型的物质、或其组合。此类组分通常被视为安全的(GRAS)和/或是美国食品药品管理局(FDA)批准的。
根据本发明的具体实施例，活性牙齿物质是以牙科组合物的从约50ppm至约3000ppm的范围的量存在于该牙科组合物中。通常，活性牙科组合物是以有效地至少少量地提高牙齿或牙龈的美学外观和/或健康或者预防龋齿的量存在于牙科组合物中。例如，包含一种洁齿剂的一种牙科组合物可以包含一种活性牙科物质，该牙科物质包含约850至1,150ppm的量的氟。
除了莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物之外，牙科组合物还可以包含基底材料。用于本发明的实施例的适合基底材料的实例包括但不限于，水、十二烷基硫酸钠或其他硫酸盐、润湿剂、酶、维生素、药草、钙、调味剂(例如，薄荷、泡泡糖、肉桂、柠檬、或橙)、表面活性剂、粘合剂、防腐剂、胶凝剂、pH调节剂、过氧化物活化剂、稳定剂、着色剂、或相似类型的材料、以及其组合。
牙科组合物的基底材料可以任选地包括其他人工甜味剂或天然甜味剂、填充型甜味剂或其组合。填充型甜味剂包括有热量化合物和无热量化合物二者。填充型甜味剂的非限制性实例包括蔗糖、右旋糖、麦芽糖、糊精、干燥的转化糖、果糖、高果糖玉米糖浆、左旋糖、半乳糖、玉米糖浆固体、塔格糖、多元醇(例如，山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、以及麦芽糖醇)、氢化淀粉水解物、异麦芽酮糖醇、海藻糖、以及其混合物。通常，存在于牙科组合物中的填充型甜味剂的量的广泛范围取决于牙科组合物的具体实施例和所希望的甜度。本领域普通技术人员将容易确定填充型甜味剂的适当量。在具体实施例中，填充型甜味剂是以牙科组合物的约0.1重量％至约5重量％的范围的量存在于牙科组合物中。
根据本发明的具体实施例，该基底材料是以按牙科组合物重量计从约20％至约99％的范围的量存在于该牙科组合物中。通常，该基底材料是以向一种活性牙齿物质有效提供一种媒介物的量存在的。
在一个具体的实施例中，一种牙科组合物包含莱鲍迪苷I和活性牙科物质。在另一个具体的实施例中，一种牙科组合物包含含有莱鲍迪苷I和活性牙科物质的组合物。通常，该甜味剂的量取决于特定牙科组合物的性质和所希望的甜度而广泛改变。
食品包括但不限于，甜食、调味品、口香糖、谷物、烘焙食品、以及乳制品。
甜食
在一个实施例中，本发明是包含莱鲍迪苷I的甜食。在另一个实施例中，本发明是包含含有莱鲍迪苷I的组合物的甜食。
如在此所提及的，“甜食”可以意指糖果、糖(lollie)、糕点糖果或类似术语。甜食通常含有一种基底组成组分和一种甜味剂组分。莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物可用作甜味剂组分。该甜食可以是处于任何食物形式中，它典型地被认为富含糖或典型地是糖果。根据本发明的具体实施例，甜食可以是烘焙食品，如糕点；甜点，如酸乳、果冻、可饮用果冻、布丁、巴伐利亚奶油、牛奶冻、蛋糕、巧克力饼、慕斯等、在下午茶时或在餐后食用的甜食品；冷冻食品；冷甜食，例如，冰淇淋类型，例如冰淇淋、冰牛奶、奶味冰激淋(lacto-ice)等(其中甜味剂和各种其他类型的原料被加入到奶制品中并且所得到的混合物被搅动并冷冻的食品)，以及冰冻甜食，例如冰冻果子露(sherbet)、点心冰淇淋(dessertice)等(其中各种其他类型的原料被添加一种含糖液体并且所得到的混合物被搅动并冷冻的食品)；一般甜食，例如烘焙甜食或蒸煮甜食，如薄脆饼干、饼干、具有豆果酱填料的小圆面包、芝麻酥糖、甜奶夹心饼(alfajor)等；米糕和点心；桌面产品；一般糖类甜食，如口香糖(例如包括含有一种基本上不溶于水、可咀嚼的胶基的组合物，如糖胶树胶(chicle)或其替代物，包括节路顿胶(jetulong)、古塔柯(guttakay)橡胶或某种可食用天然合成树脂或蜡)、硬糖、软糖、薄荷糖、牛轧糖、软心豆粒糖、奶油软糖、乳脂糖、太妃糖、瑞士乳片剂、甘草糖、巧克力糖、凝胶糖、棉花糖、杏仁蛋白软、奶油蛋白软糖(divinity)、棉花糖等；沙司，包括水果风味酱、巧克力酱等；食用凝胶；奶油，包括黄油奶油、面粉糊、生奶油等；果酱，包括草莓果酱、柑橘酱等；以及面包，包括甜面包等或其他淀粉产品，以及其组合。
如在此所提及的，“基底组合物”意指可以是一种食品并且提供用于携带甜味剂组分的一种基质的任何组合物。
用于本发明的实施例的适合基底组合物可以包括面粉、酵母、水、盐、黄油、鸡蛋、奶、奶粉、烈酒、明胶、坚果、巧克力、柠檬酸、酒石酸、富马酸、天然风味调料、人工风味调料、色素、多元醇、山梨糖醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、苹果酸、硬脂酸镁、卵磷脂、氢化葡萄糖浆、甘油、天然树胶或合成树胶、淀粉等，以及其组合。此类组分通常被视为安全的(GRAS)和/或是美国食品药品管理局(FDA)批准的。根据本发明的具体实施例，该基底组合物是以按甜食重量计从约0.1重量％至约99重量％的范围的量存在于该甜食中。总体上，基料组合物以提供食品的量存在于甜食中。
甜食的基底材料可以任选地包括其他人工甜味剂或天然甜味剂、填充型甜味剂或其组合。填充型甜味剂包括有热量化合物和无热量化合物二者。填充型甜味剂的非限制性实例包括蔗糖、右旋糖、麦芽糖、糊精、干燥的转化糖、果糖、高果糖玉米糖浆、左旋糖、半乳糖、玉米糖浆固体、塔格糖、多元醇(例如，山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、以及麦芽糖醇)、氢化淀粉水解物、异麦芽酮糖醇、海藻糖、以及其混合物。通常，存在于甜食中的填充型甜味剂的量的广泛范围取决于甜食的具体实施例和所希望的甜度。本领域普通技术人员将容易确定填充型甜味剂的适当量。
在具体实施例中，甜食包含莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物以及碱组合物。通常，莱鲍迪苷I在甜食中的量取决于甜食的具体实施例和所希望的甜度而广泛变化。本领域普通技术人员将容易确定适当的量。在一个具体实施例中，莱鲍迪苷I是以甜食的约30ppm至约6000ppm的范围的量存在于甜食中。在另一个实施例中，莱鲍迪苷I是以甜食的约1ppm至约10,000ppm的范围内的量存在于甜食中。在其中甜食包含硬糖的实施例中，莱鲍迪苷I是以硬糖的约150ppm至约2250ppm的范围内的量存在的。
调味品组合物
在一个实施例中，本发明是包含莱鲍迪苷I的调味品。在另一个实施例中，本发明是包含含有莱鲍迪苷I的组合物的调味品。如本文所使用的调味品是用于增强或改善食品或饮料的风味的组合物。调味品的非限制性实例包括番茄沙司(番茄酱)；芥菜；烤肉调味酱；黄油；辣酱油；酸辣酱；开胃沙司；咖喱粉；蘸料；鱼露；辣根酱；辣椒酱；果冻、果酱、柑橘酱、或蜜饯；美乃滋；花生酱；开胃小菜(relish)；蛋黄酱；色拉调味料(例如，油和醋、凯撒酱(Caesar)、法国酱(French)、牧场酱(ranch)、蓝干酪、俄国酱(Russian)、千岛酱、意大利酱(Italian)、以及香醋汁)、萨尔萨辣酱(salsa)；德国泡菜；酱油；牛排酱；糖浆；塔塔酱；以及伍斯特沙司。
调味品基底通常包含一种不同成分的混合物，它的非限制性包括媒介物(例如，水和醋)；香辛料或佐料(例如，盐、胡椒、大蒜、芥菜籽、洋葱、辣椒、姜黄、以及其组合)；水果、蔬菜、或其产品(例如，番茄或基于番茄的产品(糊状物、浓汤)、果汁、果皮汁(fruit juicepeel)、以及其组合)；油或油乳液，具体地是蔬菜油；增稠剂(例如，黄原胶、食物淀粉、其他水解胶体、以及其组合)；及乳化剂(例如，蛋黄固体、蛋白质、阿拉伯树胶、角豆树胶、瓜尔胶、刺梧桐树胶、黄蓍胶、卡拉胶、果胶、海藻酸的丙二醇酯、羧甲基纤维素钠、聚山梨醇酯、以及其组合)。调味品基底的食谱和制备调味品基底的方法是本领域普通技术人员已熟知的。
通常，调味品还包含有热量甜味剂，如蔗糖、高果糖玉米糖浆、糖蜜、蜂蜜、或红糖。于在此所提供的调味品的示例性实施例中，使用莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的甜味剂组合物，而不是传统的有热量的甜味剂。因此，一种调味品组合物理想地包含莱鲍迪苷I或含有莱鲍迪苷I的组合物和调味品基底。
该调味品组合物任选地可以包含其他天然和/或合成的高效甜味剂、填充型甜味剂、pH改性剂(例如，乳酸、柠檬酸、磷酸、盐酸、乙酸、以及其组合)、填充剂、功能性试剂(例如，药剂、营养物、或食物或植物的组分)、调味剂、着色剂或其组合。
口香糖组合物
在一个实施例中，本发明是包含莱鲍迪苷I的口香糖组合物。在另一个实施例中，本发明是包含含有莱鲍迪苷I的组合物的口香糖组合物。口香糖组合物通常包含一个水溶性部分和一个水不溶性可咀嚼胶基部分。该水溶性部分，典型地包含本发明的组合物，随部分调味剂在咀嚼过程中在一段时间内消散而不溶性胶基部分保留在口中。不溶性胶基通常决定一种树胶是否被视为口香糖、泡泡糖或功能性口香糖。
不溶性胶基通常是以口香糖组合物的约15重量％至约35重量％的范围的量存在于口香糖组合物中，它通常包含弹性体、软化剂(增塑剂)、乳化剂、树脂、以及填充剂的组合。此类组分通常被视为食用级的，被视为安全的(GRA)和/或是美国食品药品管理局(FDA)批准的。
弹性体是胶基的主要组分，它为口香糖提供了橡胶样、粘着性质，并且可以包括一种或多种天然橡胶(例如，烟熏乳胶、液态乳胶、或银胶菊)；天然树胶(例如节路顿胶、佩里洛胶(perillo)、香豆果树胶、二齿铁线子胶、巧克力铁线子胶、人心果胶(nispero)、罗斯印迪哈胶(rosindinha)、糖胶树胶、以及马来乳胶(gutta hang kang))；或合成弹性体(例如，丁二烯-苯乙烯共聚物、异丁烯-异戊二烯共聚物、聚丁二烯、聚异丁烯、以及乙烯基聚合弹性体)。在一个具体实施例中，该弹性体是以胶基的约3重量％至约50重量％的范围的量存在于胶基中。
使用树脂改变胶基的坚固度，并且帮助软化胶基的弹性体组分。适合的树脂的非限制性实例包括松香酯、萜烯树脂(例如，来自α-蒎烯、β-蒎烯和/或d-柠檬烯的萜烯树脂)、聚乙酸乙烯酯、聚乙烯醇、乙烯乙酸乙烯酯、以及乙酸乙烯酯-月桂酸乙烯酯共聚物。松香酯的非限制性实例包括部分氢化松香的甘油酯、聚合松香的甘油酯、部分二聚松香的甘油酯、松香甘油酯，部分氢化松香的季戊四醇酯、松香甲酯、或部分氢化松香的甲酯。在一个具体实施例中，该树脂是以胶基的约5重量％至约75重量％的范围的量存在于胶基中。
软化剂也称为增塑剂，它们用于改变咀嚼容易度和/或口香糖组合物的口感。通常，软化剂包括油、脂肪、蜡、以及乳化剂。油和脂肪的非限制性实例包括牛脂、氢化牛脂、大的氢化或部分氢化植物油(如大豆油、菜籽油、棉籽油、向日葵油、棕榈油、椰子油、玉米油、红花油、或棕榈仁油))、可可脂、单硬脂酸甘油酯、三乙酸甘油酯、松香甘油酯、卵磷脂(leithin)、甘油单酯、甘油二酯、甘油三酯乙酰化单甘油酯、以及游离脂肪酸。蜡的非限制性实例包括聚丙烯/聚乙烯/费-托氏(Fisher-Tropsch)蜡、石蜡、以及微晶蜡和天然蜡(例如，小烛树蜡、蜂蜡和棕榈蜡)。微晶蜡，特别是具有高结晶度和高溶点的那些微晶蜡也可以被视为稠化剂或结构改性剂。在一个具体实施例中，这些软化剂是以胶基的约0.5重量％至约25重量％的范围的量存在于胶基中。
乳化剂用于形成口香糖组合物的不溶相和可溶相的一种均匀分散物并且也具有增塑特性。适合的乳化剂包括单硬脂酸甘油酯(GMS)、卵磷脂(磷脂酰胆碱)、聚甘油多聚蓖麻油酸(PPGR)、脂肪酸的单甘油酯和二甘油酯、甘油二硬脂酸酯、三三乙酸甘油酯、乙酰化甘油单酯、甘油三乙酸酯、以及硬脂酸镁。在一个具体实施例中，这些乳化剂是以胶基的约2重量％至约30重量％的范围的量存在于胶基中。
口香糖组合物还可以在口香糖组合物的胶基和/或可溶性部分中包含佐剂或填充剂。适合的佐剂和填充剂包括卵磷脂、菊糖、聚糊精、碳酸钙、碳酸镁、硅酸镁、石灰石粉、氢氧化铝、硅酸铝、滑石、粘土、氧化铝、二氧化钛、以及磷酸钙。在具体实施例中，卵磷脂可以用作一种惰性填充剂以减小口香糖组合物的粘度。在其他具体实施例中，乳酸共聚物、蛋白质(例如，谷蛋白和/或玉米蛋白)和/或瓜胶可以用于形成更容易生物降解的一种口香糖。这些佐剂或填充剂通常是以胶基的最高达约20重量％的量存在于该胶基中。其他任选成分包括着色剂、增白剂、防腐剂、以及风味调料。
在口香糖组合物的具体实施例中，该胶基构成该口香糖组合物的约5重量％至约95重量％，更理想地是构成该口香糖组合物的约15重量％至约50重量％并且甚至更理想地构成该口香糖组合物的从约20重量％至约30重量％。
该口香糖组合物的可溶性部分可以任选地包括其他人工甜味剂或天然甜味剂、填充型甜味剂、软化剂、乳化剂、调味剂、着色剂、佐剂、填充剂、功能性试剂(例如，药物或营养物)、或其组合。以上描述了适合的软化剂和乳化剂的实例。
填充型甜味剂包括有热量化合物和无热量化合物二者。填充型甜味剂的非限制性实例包括蔗糖、右旋糖、麦芽糖、糊精、干燥的转化糖、果糖、高果糖玉米糖浆、左旋糖、半乳糖、玉米糖浆固体、塔格糖、多元醇(例如，山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、乳糖醇、赤藓糖醇、以及麦芽糖醇)、氢化淀粉水解物、异麦芽酮糖醇、海藻糖、以及其混合物。在具体实施例中，填充型甜味剂是以口香糖组合物的约1重量％至约75重量％的范围的量存在于口香糖组合物中。
调味剂可以用于口香糖组合物的不溶性胶基或可溶性部分中。此类调味剂可以是天然风味调料或人工风味调料。在一个具体实施例中，该调味剂包括精油，如源于植物或水果的油、椒样薄荷油、绿薄荷油、其他薄荷油、丁香油、肉桂油、冬青油、月桂油、百里香油、雪松叶油、肉豆蔻油、多香果油、鼠尾草油、肉豆蔻衣油、以及杏仁油。在另一个具体实施例中，该调味剂包括植物提取物或水果香精，如苹果、香蕉、西瓜、梨、桃、葡萄、草莓、覆盆子、樱桃、李子、菠萝、杏、以及其混合物。在又一个具体实施例中，该调味剂包括柑橘调味剂，如提取物、香精、或者柠檬、酸橙、橙、橘子、葡萄柚、香橼、或金橘的油。
在一个具体实施例中，一种口香糖组合物包含莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I和胶基的组合物。在一个具体实施例中，莱鲍迪苷I是以口香糖组合物的约1ppm至约10,000ppm的范围内的量存在于该口香糖组合物中。
谷物组合物
在一个实施例中，本发明是包含莱鲍迪苷I的谷物组合物。在另一个实施例中，本发明是包含含有莱鲍迪苷I的组合物的谷物组合物。谷物组合物典型地是作为主食或作为小吃食用的。用于具体实施例中的谷物组合物的非限制性实例包括可即食谷物以及热谷物。可即食谷物是可以食用而不用消费者进一步加工(即，烹煮)的谷物。可即食谷物的实例包括早餐谷物和小吃棒。早餐谷物典型地被加工来产生一种切碎、薄片、膨胀或挤压形式。早餐谷物通常是冷却食用的并且通常与奶和/或水果混合。小吃棒包括例如能量棒、米糕、格兰诺拉麦片棒、以及营养棒。热谷物通常在吃之前是以奶或水烹煮的。热谷物的非限制性实例包括粗燕麦粉、粥、玉米粥、大米、以及燕麦片。
谷物组合物通常包含至少一种谷物成分。如在此所用的，术语“谷物成分”是指诸如全部或部分谷粒、全部或部分种子、以及全部或部分禾草的材料。用于具体实施例中的谷物成分的非限制性实例包括玉米、小麦、大米、大麦、麸皮、麸皮胚乳(bran endosperm)、碾碎的干小麦(bulgur)、高粱、粟、燕麦、黑麦、黑小麦、荞麦、福尼奥米(fonio)、藜麦、菜豆、大豆、苋菜、埃塞俄比亚画眉草(teff)、斯佩耳特小麦(spelt)、以及卡瓦尼(kaniwa)。
在一个具体实施例中，谷物组合物包含莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物以及至少一种谷物成分。莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物可以是以多种方式，例如作为涂料、作为霜状物、作为釉、或作为基质共混物添加到该谷物组合物中(即，在制备最终谷物产品之前作为一种成分添加到谷物制剂中)。
因此，在一个具体的实施例中，莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物是作为一种基质共混物添加到该谷物组合物中。在一个实施例中，在烹煮之前，将莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物与一种热谷物共混以提供一种甜味化的热谷物产品。在另一个实施例中，在挤压该谷物之前，将莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物与谷物基质共混。
在另一个具体实施例中，莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物作为涂料，例如像通过将莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物与食用级油组合并且将混合物应用于谷物上来添加到谷物组合物中。在一个不同的实施例中，莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物和食用级油可以通过首先应用油或甜味剂来分开地应用于谷物。用于具体实施例的食用级油的非限制性实例包括植物油，如玉米油、大豆油、棉籽油、花生油、椰子油、菜籽油、橄榄油、芝麻籽油、棕榈油、棕榈仁油、以及其混合物。在另一个实施例中，食用级脂肪可以用于替代这些油，只要该脂肪在将脂肪应用于谷物上之前熔解。
在另一个实施例中，莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物是作为一种釉添加到该谷物组合物。用于具体实施例中的上光剂的非限制性实例包括玉米糖浆、蜂蜜、糖浆和蜂蜜糖浆固体、枫树糖浆和枫树糖浆固体、蔗糖、异麦芽酮糖醇、聚葡萄糖、多元醇、氢化淀粉水解物、其水溶液、以及其混合物。在另一个此类实施例中，莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物是作为釉通过与上光剂和食用级油或脂肪组合并且将混合物应用于谷物中来添加的。在另一个实施例中，一种树胶系统，例如像，阿拉伯树胶、羧甲基纤维素、或藻胶，可以被添加到该釉中以提供结构支撑。另外，该釉还可以包含一种着色剂，并且还可以包含一种香料。
在另一个实施例中，莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物是作为一种霜状物添加到该谷物组合物。在一个此类实施例中，将莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物与水和一种结霜剂组合并且然后应用于谷物中。用于具体实施例中的结霜剂的非限制性实例包括麦芽糊精、蔗糖、淀粉、多元醇、以及其混合物。霜状物还可以包含一种食用级油、食用级脂肪、着色剂、和/或香料。
通常，莱鲍迪苷I在谷物组合物中的量取决于谷物组合物的具体类型和其所希望的甜度而广泛变化。本领域普通技术人员可以容易确定加入到谷物组合物中的甜味剂的适当量。在一个具体实施例中，莱鲍迪苷I是以谷物组合物的约0.02重量％至约1.5重量％的范围的量存在于该谷物组合物中，并且该至少一种添加剂是以该谷物组合物的约1重量％至约5重量％的范围的量存在于该谷物组合物中。
烘焙食品
在一个实施例中，本发明是包含莱鲍迪苷I的烘焙食品。在另一个实施例中，本发明是包含含有莱鲍迪苷I的组合物的焙烤食品。如在此所用的，烘焙食品包括在供应之前需要制备的可即食和所有可即时烘烤的产品、面粉和混合物。烘焙食品的非限制性实例包括蛋糕、薄脆饼干、甜饼干、巧克力饼、松饼、面包卷、百吉饼、甜甜圈、果馅卷、糕点、羊角面包、小点心、面包、面包产品、以及小圆面包。
根据本发明的实施例优选的烘焙食品可以被分类成三组：面包型生面团(例如，白面包、风味面包(variety bread)、软面包、硬面包卷、百吉饼、比萨面团、以及墨西哥薄饼)、甜面团(例如、丹麦酥皮饼、羊角面包、薄脆饼干、千层饼、馅饼酥皮、小点心、以及甜饼干)和糊状物(例如，蛋糕，如海绵蛋糕、磅饼、魔鬼蛋糕、奶酪蛋糕、以及夹心蛋糕、甜甜圈或其他酵母发酵蛋糕、巧克力饼、以及松饼)。生面团的特征通常是基于面粉的，而糊状物是更基于水的。
根据本发明的具体实施例的烘焙食品通常包含甜味剂、水和脂肪的组合。根据本发明的很多实施例制备的烘焙食品还含有面粉，以便制备一个生面团或糊状物。如在此所用的术语“生面团”是一种面粉和其他成分的混合物，其硬度足以揉捏或碾压。如在此所用的术语“糊状物”由面粉、液体如奶或水、以及其他成分组成并且是稀薄到足以从匙上倾泻或滴落。理想地，根据本发明的具体实施例，该面粉是以在干重基础上的约15％至约60％、更理想地是在干重基础上的约23％至约48％的范围的量存在于烘焙食品中的。
面粉的类型可以是基于所希望的产品来选择的。通常，面粉包含通常用于烘焙食品中的可食用无毒面粉。根据具体实施例，面粉可以是一种漂白烘烤面粉、通用面粉、或未漂白面粉。在其他具体实施例中，还可以使用以其他方式处理的面粉。例如，在具体实施例中，面粉可以富含附加维生素、矿物质或蛋白质。适用于本发明的具体实施例的面粉的非限制性实例包括小麦粉、玉米粉、全谷类、全谷类的各部分(小麦、麸皮和麦片)、以及其组合。在具体实施例中，淀粉或含淀粉材料也可以用作面粉。常见食物淀粉通常是源于马铃薯、玉米、小麦、大麦、燕麦、木薯、竹芋、以及西米。在本发明的具体实施例中，可以使用改性淀粉和预胶凝淀粉。
在本发明的具体实施例中使用的脂肪或油的类型可以包括适用于烘焙的任何可食用脂肪、油或其组合。适用于本发明的具体实施例中的脂肪的非限制性实例包括植物油、牛脂、猪油、海洋动物油、以及其组合。根据具体实施例，这些脂肪可以是分馏的、部分氢化的和/或强化的。在另一个具体实施例中，该脂肪理想地包括还原的、低热量的、或不可消化的脂肪、脂肪替代品或合成脂肪。在另一个具体实施例中，还可以使用起酥油、脂肪或硬脂肪和软脂肪的混合物。在具体实施例中，起酥油可以是大部分源于甘油三酯，该甘油三酯源于植物来源(例如，棉籽油、大豆油、花生油、亚麻籽油、芝麻油、棕榈油、棕榈仁油、菜籽油、红花油、椰子油、玉米油、葵花籽油、以及其混合物)。在具体实施例中，还可以使用具有从8至24个碳原子的链长度的脂肪酸的合成甘油三酯或天然甘油三酯。理想地，根据本发明的具体实施例，该脂肪是以按干基重量计约2％至约35％、更理想地是按干基重量计约3％至约29％的范围的量存在于烘焙食品中的。
根据本发明的具体实施例的烘焙食品还包含足以提供所希望的稠度的量的水，从而能够在烹煮之前或之后适当成形、机加工并切割烘焙食品。烘焙食品的总水份含量包括直接添加到烘焙食品中的任何水以及存在于单独添加的成分中的水(例如，面粉，它通常包含按重量计约12％至约14％的水分)。理想地，根据本发明的具体实施例，水是以按烘焙食品重量计最高达约25％的量存在于该烘焙食品中。
根据本发明的具体实施例的烘焙食品还可以包含多种附加的常见成分，如膨松剂、风味调料、颜料、奶、奶副产品、蛋、蛋副产品、可可、香草或其他调味剂、以及内含物，如坚果类、葡萄干、樱桃、苹果、杏、桃、其他水果、柑桔皮、防腐剂、椰子、风味薄片(如巧克力薄片、奶油糖果薄片和焦糖薄片)以及其组合。在具体实施例中，烘焙食品还可以包含乳化剂，如卵磷脂和甘油单酯。
根据本发明的具体实施例，膨松剂可以包括化学膨松剂或酵母膨松剂。适用于本发明的具体实施例的化学膨松剂的非限制性实例包括小苏打(例如，碳酸氢钠、碳酸氢钾、或碳酸氢铝)、发酵酸(例如，磷酸钠铝、磷酸一钙、或磷酸二钙)、以及其组合。
根据本发明的另一个具体实施例，可可可以包含天然巧克力或“碱处理”巧克力，它们的大部分脂肪或可可脂通过溶剂提取、挤压或其他方式表示或取出。在一个具体实施例，可能需要减少包含巧克力的烘焙食品中的脂肪的量，因为在可可脂中存在附加脂肪。在具体实施例中，与可可相比可能需要添加更大量的巧克力，以便提供等效量的风味和颜色。
烘焙食品通常还包含有热量甜味剂，如蔗糖、高果糖玉米糖浆、赤藓糖醇、糖蜜、蜂蜜、或红糖。于在此所提供的烘焙食品的示例性实施例中，有热量的甜味剂被莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物部分或全部替换。因此，在一个实施例中，一种烘焙食品包含莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物与脂肪、水、以及任选地面粉组合。在具体实施例中，烘焙食品可以任选地包含其他天然和/或合成的高效甜味剂和/或填充型甜味剂。
乳制品
在一个实施例中，本发明的消费品是包含莱鲍迪苷I的乳制品。在另一个实施例中，本发明的消费品是包含含有莱鲍迪苷I的组合物的乳制品。适用于本发明的乳制品产品和用于制备乳制品的方法是本领域普通技术人员已熟知的。如在此所用的，乳制品包括奶或由奶生产的食品。适用于本发明的实施例的乳制品的非限制性实例包括奶、奶油、酸奶油、法式鲜奶油、酪乳、发酵酪乳、奶粉、炼乳、淡炼乳、黄油、干酪、白软干酪、奶油干酪、酸奶、冰淇淋、软香乳冻、冷冻酸奶、意大利冰淇淋(gelato)、奶黄酱(vla)、健康酸奶(piima)、酸奶卡耶克(kajmak)、酸乳酒(kephir)、威利酒(viili)、马奶酒(kumiss)、艾日格酸奶(airag)、冰牛奶、干酪素、咸酸奶(ayran)、印度奶昔(lassi)、韩式浓缩奶(khoa)、或其组合。
奶是由雌性哺乳动物的乳腺分泌的用于养育它们幼崽的一种流体。产生奶的雌性能力是定义的哺乳动物特征之一并且在新生儿能够消化更多样化的食物之前为它们提供主要营养物来源。在本发明的具体实施例中，这些乳制品是源于牛、山羊、绵羊、马、驴、骆驼、水牛、牦牛、驯鹿、驼鹿、或人的生奶。
在本发明的具体实施例中，由生奶加工乳制品通常包括巴氏灭菌、乳油化和均质化的步骤。尽管生奶可以在没有巴氏灭菌的情况下消耗，但是它通常被巴氏灭菌以破坏有害微生物，如细菌、病毒、原生动物、霉菌、以及酵母。巴氏灭菌通常包括持续短时间段将该奶加热至高温，以基本上减少微生物数量，从而减小疾病风险。
乳油化在传统上是在巴氏灭菌步骤之后，并且涉及将奶分离成一个较高脂肪奶油层和一个较低脂肪奶层。奶将在放置十二至二十四小时之后分离成奶层和奶油层。奶油上升到奶层顶部并且可以被撇去并用作一种单独的乳制品。作为替代方案，可以使用离心作用来将奶油与奶分离。根据奶的脂肪含量对剩余奶进行分类，它的非限制性实例包括全脂奶、2％脂奶、1％脂奶、以及脱脂奶。
在通过乳油化从该奶中去除所希望的量的脂肪之后，奶常常是均质化的。均质化防止奶油与奶分离并且通常涉及在高压下将奶泵送通过小直径管，以便破坏奶中的脂肪球。奶的巴氏灭菌、乳油化和均质化是常见的，但并不是生产可消耗乳制品所必须的。因此，用于本发明的实施例中的适合乳制品可以不经过加工步骤、经过单一加工步骤、或经过在此所述的加工步骤的组合。用于本发明的实施例中的适合乳制品可以经过除在此所述的加工步骤之外的加工步骤。
本发明的具体实施例包括通过附加加工步骤由奶生产的乳制品。如以上所述的，奶油可以是使用机器离心器来从奶顶部撇去或者与奶分离的。在一个具体实施例中，乳制品包括酸奶油，它是使用一种细菌培养发酵奶油来获得的富含脂肪的一种乳制品。细菌在发酵过程中产生乳酸，该发酵使奶油变酸并变稠。在另一个具体实施例中，乳制品包括法式鲜奶油，它是以与酸奶油类似的方式用细菌培养稍微酸化的一种多脂奶油。法式鲜奶油通常与酸奶油并不一样稠或一样酸。在另一个具体实施例中，乳制品包括发酵酪乳。发酵酪乳是通过向奶中添加细菌来获得的。其中细菌培养将乳糖转化为乳酸的所得发酵产生了酸味的发酵酪乳。尽管以一种不同方式产生它，但是发酵酪乳通常与传统酪乳类似，该传统酪乳是黄油制造的一种副产物。
根据本发明的其他具体实施例，乳制品包括奶粉、炼乳、淡炼乳或其组合。奶粉、炼乳和淡炼乳通常是通过从奶中去除水来产生的。在一个具体实施例中，该乳制品包含含有干乳固体的一种奶粉，该干乳固体具有低水份含量。在另一个具体实施例中，乳制品包括炼乳。炼乳通常包含具有降低的水份含量的奶和添加的甜味剂，从而产生具有长贮藏寿命的一种稠的甜味产品。在另一个具体实施例中，乳制品包括淡炼乳。淡炼乳通常包括已从中去除约60％的水的新鲜、均质奶，它已冷却，用添加剂如维生素和稳定剂强化，包装，并且最终灭菌。根据本发明的另一个具体实施例，乳制品包含干奶精和莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物。
在另一个具体实施例中，在此提供的乳制品包括黄油。黄油通常是通过搅拌新鲜或发酵的奶油或奶来制备的。黄油通常在包含大部分水和乳蛋白的小液滴周围包含乳脂。搅拌过程损害了乳脂微小球周围的膜，从而允许乳脂连结并与奶油的其他部分分离。在另一个具体实施例中，乳制品包括酪乳，它是在通过搅拌过程由全脂奶产生黄油之后保留的酸味液体。
在另一个具体实施例中，乳制品包括干酪，它是使用凝乳酶或凝乳酶替代物与酸化的组合使乳凝结来产生的一种固体食品。凝乳酶是在消化奶的哺乳动物胃内产生的一种天然的酶络合物，它在干酪制备中用于使奶凝结，从而使得它分离成被称为凝乳的固体和被称为乳清的液体。通常，凝乳酶是从幼龄反刍动物如小牛的胃内获得的；然而，凝乳酶的替代来源包括一些植物、微生物有机体、以及基因改造的细菌、真菌或酵母。此外，奶可以是通过添加酸如柠檬酸来凝结的。通常，凝乳酶和/或酸化的组合是用于使奶凝结。在将奶分离成凝乳和乳清之后，一些干酪是通过简单排水、成盐以及包装这些凝乳来制成的。然而，对于大部分干酪，需要更多加工。可以使用很多不同的方法来产生数以百计可用的干酪种类。加工方法包括加热该干酪、将其切割成小块以排水(drain)、成盐、伸展、形成切达干酪、洗涤、使其发霉、熟化、以及成熟。一些干酪如蓝干酪具有在熟化之前或过程中引入它们的附加细菌或霉菌，从而向最终产品赋予风味和芳香。白软干酪是具有适宜风味的一种干酪凝乳产品，它被排出但并未被挤压，以使得保留一些乳清。通常洗涤凝乳以去除酸度。奶油干酪是具有高脂肪含量的一种软的、味道适中的白干酪，它是通过向奶中添加奶油并且然后使其凝结以形成一种丰富的凝乳来产生的。或者，奶油干酪可以是由脱脂乳制成的，其中奶油被添加到凝乳中。应理解，如在此所用的干酪包括通过使奶凝结生产的所有固体食品。
在本发明的另一个具体实施例中，乳制品包括酸乳。酸乳通常是通过细菌发酵奶来产生的。乳糖的发酵产生乳酸，这作用于奶中的蛋白质，以产生一种凝胶样质地和酸味。在特别希望的实施例中，酸乳可以是用一种甜味剂甜味化的和/或调味的。调味剂的非限制性实例包括但不限于，水果(例如，桃、草莓、香蕉)、香草、以及巧克力。如在此所用的，酸乳还包括具有不同稠度和粘度的酸乳品种，如达希酸奶(dahi)、达希凝乳(dadih)或达缇凝乳(dadiah)、浓缩型酸奶(labneh)或地中海式酸奶(labaneh)、保加利亚酸奶(bulgarian)、克非尔(kefir)、以及里海优酪乳(matsoni)。在另一个具体实施例中，乳制品包括一种基于酸乳的饮料，它也称为可饮用酸乳或一种酸奶思慕斯(yogurt smoothie)。在特别希望的实施例中，基于酸乳的饮料可以包含甜味剂、调味剂、其他成分或其组合。
在本发明的具体实施例中，可以使用除在此所述的那些之外的其他乳制品。此类乳制品是本领域普通技术人员已熟知的，它们的非限制性实例包括奶、牛奶和果汁、咖啡、茶、奶黄酱(vla)、健康酸奶、酸奶(filmjolk)、卡耶克(kajmak)、酸乳酒(kephir)、威利酒(viili)、马奶酒(kumiss)、艾日格酸奶(airag)、冰牛奶、干酪素、咸酸奶(ayran)、印度奶昔(lassi)、以及韩式浓缩奶(khoa)。
根据本发明的具体实施例，乳制品组合物还可以包含其他添加剂。适合的添加剂的非限制性实例包括甜味剂和调味剂，如巧克力、草莓和香蕉。在此提供的乳制品组合物的具体实施例还可以包含附加营养物补充剂如维生素(例如，维生素D)和矿物质(例如，钙)，以改进奶的营养物组成。
在一个特别希望的实施例中，乳品组合物包含莱鲍迪苷I或含有莱鲍迪苷I的组合物与一种乳制品组合。在一个具体实施例中，莱鲍迪苷I是以乳品组合物的约200重量％至约20,000重量％的范围的量存在于该乳品组合物中。
莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物也适用于加工的农产品、畜产品或海鲜；加工的肉产品如香肠等；甑煮食品、腌渍品、在酱油中煮沸的果酱、佳肴、配菜；汤；小吃，如薯片、甜饼干等；切碎的填料、叶、杆、茎、均质化的烤叶以及动物饲料。
桌面甜味剂组合物
在一个实施例中，本发明是包含莱鲍迪苷I的桌面甜味剂。该桌面组合物可以进一步包含至少一种膨胀剂、添加剂、抗结块剂、功能性成分或其组合。
适合的“膨胀剂”包括但不限于，麦芽糊精(10DE、18DE、或5DE)、玉米糖浆固体(20DE或36DE)、蔗糖、果糖、葡萄糖、转化糖、山梨糖醇、木糖、核酮糖、甘露糖、木糖醇、甘露糖醇、半乳糖醇、赤藻糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、异麦芽酮糖醇、麦芽糖、塔格糖、乳糖、菊糖、甘油、丙二醇、多元醇、聚葡萄糖、低聚果糖、纤维素和纤维素衍生物等、以及其混合物。另外，还根据本发明的其他实施例，砂糖(蔗糖)或其他有卡路里甜味剂如结晶果糖、其他碳水化合物或糖醇由于其提供良好的含量均匀度而没有添加大量卡路里而可以用作一种膨胀剂。
如在此所用的，短语“抗结块剂”和“助流剂”是指有助于含量均匀度和均匀溶解的任何组合物。根据具体实施例，抗结块剂的非限制性实例包括酒石、硅酸钙、二氧化硅、微晶纤维素(宾夕法尼亚州费城FMC生物聚合物公司的Avicel(Avicel,FMC BioPolymer,Philadelphia,Pennsylvania))、以及磷酸三钙。在一个实施例中，抗结块剂以按桌面甜味剂组合物重量计从约0.001％至约3％的量存在于该桌面甜味剂组合物中。
这些桌面甜味剂组合物可以是以本领域已知的任何形式包装。非限制性形式包括但不限于，粉末形式、颗粒形式、小包、片剂、囊剂、小球、立方体、固体、以及液体。
在一个实施例中，桌面甜味剂组合物是含有一种干燥共混物的一次性(份量控制)包装。干燥共混物制剂通常可以包括粉末或颗粒。尽管桌面甜味剂组合物可以是处于任何大小的一个小包中，常规分量控制桌面甜味剂小包的非限制性实施例是大约2.5×1.5英寸并且保持具有等效于2茶勺砂糖(约8g)的甜度的大约1克甜味剂组合物。在一种干燥共混物的桌面甜味剂制剂中的莱鲍迪苷I的量可以改变。在一个具体实施例中，一种干燥共混物的桌面甜味剂制剂可以含有从该桌面甜味剂组合物的约1％(w/w)至约10％(w/w)的量的莱鲍迪苷I。
固体桌面甜味剂实施例包括立方体和片剂。常规的立方体的一个非限制性实例大小等同于砂糖的标准物立方体，该标准物立方体是大约2.2×2.2×2.2cm3并且重大约8g。在一个实施例中，固体桌面甜味剂是处于片剂形式或本领域技术人员已知的任何其他形式。
桌面甜味剂组合物也可具体化为呈液体形式，其中莱鲍迪苷I与一种液体载体组合。液体桌面甜味剂的载体剂的适合的非限制性例包括水、醇、多元醇、溶解于水中的甘油基或柠檬酸基、以及其混合物。可以改变在此所述的或本领域中已知的任何形式的桌面甜味剂组合物的甜度当量以获得所希望的甜度特征曲线(profile)。例如，该桌面甜味剂组合物可以包含与相当量的标准糖可比较的甜度。在另一个实施例中，该桌面甜味剂组合物可以包含最高达相当量的糖的100倍的甜度。在另一个实施例中，该桌面甜味剂组合物可以包含最高达相当量的糖的90倍、80倍、70倍、60倍、50倍、40倍、30倍、20倍、10倍、9倍、8倍、7倍、6倍、5倍、4倍、3倍、以及2倍的甜度。
饮料和饮料产品
在一个实施例中，本发明是包含莱鲍迪苷I的饮料或饮料产品。在另一个实施例中，本发明是包含含有莱鲍迪苷I的组合物(例如甜味剂组合物)的饮料或饮料。
如在此所用的，一种“饮料产品”是一种立即可饮的饮料、一种饮料浓缩物、一种饮料糖浆或一种饮料粉冲泡饮料。适合的立即可饮的饮料包括碳酸饮料和非碳酸饮料。碳酸饮料包括但不限于，增强的起泡饮料、可乐、柠檬-酸橙味起泡饮料、橙风味起泡饮料、葡萄风味起泡饮料、草莓风味起泡饮料、菠萝风味起泡饮料、姜汁酒、汽水以及根汁汽水。非碳酸饮料包括，但不限于，果汁、水果风味果汁、果汁饮品、花蜜、蔬菜汁、蔬菜风味汁、运动饮品、能量饮品、增强水饮品、具有维生素的增强水、近水饮品(例如，具有天然的或合成的调味剂的水)、椰子汁、茶类型饮品(例如，黑茶、绿茶、红茶、乌龙茶)、咖啡、可可饮品、含有乳组分的饮料(例如，乳饮料、含乳组分的咖啡、欧蕾咖啡(caféau lait)、奶茶、果乳饮料)、含有谷物提取物的饮料、冰沙以及其组合。
饮料浓缩物和饮料糖浆是用初始体积的液体基质(例如，水)和所希望的饮料成分制备的。全强度饮料然后是通过添加另外体积的水来制备的。饮料粉冲泡饮料是通过在一种液体基质缺乏下干燥混合所有饮料成分来制备的。全强度饮料(full strengthbeverage)然后是通过添加全部体积的水来制备的。
饮料含有一种液体基质，即其中溶解了这些成分(包括本发明的组合物)的基础成分。在一个实施例中，饮料包含饮料品质的水作为该液体基质，例如像，可以使用去离子水、蒸馏水、反渗透水、碳处理水、纯水、软化水以及其组合。附加适合的液体基质包括但不限于，磷酸、磷酸盐缓冲液、柠檬酸、柠檬酸盐缓冲液以及碳处理水。
在一个实施例中，本发明的消费品是包含莱鲍迪苷I的饮料。
在另一个实施例中，饮料含有包含莱鲍迪苷I的组合物。
在又一个实施例中，本发明是包含莱鲍迪苷I的饮料产品。
在另一个实施例中，本发明是含有包含莱鲍迪苷I的组合物的饮料产品。
饮料或饮料产品中的莱鲍迪苷I的浓度可以高于、处于或低于其阈值甜味或识别浓度。
在一个具体实施例中，饮料或饮料产品中的莱鲍迪苷I的浓度高于其阈值甜味或风味识别浓度。在一个实施例中，莱鲍迪苷I的浓度为高于其阈值甜味或风味识别浓度至少约1％，至少约5％，至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％或更大。
在另一个具体实施例中，饮料或饮料产品中的莱鲍迪苷I的浓度为处于或约莱鲍迪苷I的阈值甜味或风味识别浓度。
在又另一个具体实施例中，饮料或饮料产品中莱鲍迪苷I的浓度低于莱鲍迪苷I的阈值甜味或风味识别浓度。在一个实施例中，莱鲍迪苷I的浓度为低于其阈值甜味或风味识别浓度至少约1％，至少约5％，至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％或更大。
在一个实施例中，本发明是饮料或饮料产品，其含有的莱鲍迪苷I的量为范围从约1ppm至约10,000ppm，例如从约5ppm至约10,000ppm，从约10ppm至约10,000ppm，从约15ppm至约10,000ppm，从约20ppm至约10,000ppm或从约25ppm至约10,000ppm。在另一个实施例中，莱鲍迪苷I是以从约100ppm至约600ppm的范围的量存在于饮料中。在其他实施例中，莱鲍迪苷I是以从约100至约200ppm、从约100ppm至约300ppm、从约100ppm至约400ppm或从约100ppm至约500ppm的范围的量存在于饮料中。在另一个实施例中，莱鲍迪苷I是以从约300ppm至约700ppm，例如像，从约400ppm至约600ppm的范围的量存在于该饮料或饮料产品中。在另一个实施例中，莱鲍迪苷I在饮料或饮料产品中存在的量范围为从约200ppm至约400ppm，例如约200至约250ppm，约250ppm至约300ppm，约300ppm至约350ppm或约350ppm。在另一个实施例中，莱鲍迪苷I在饮料或饮料产品中存在的量范围为从约450ppm至约650ppm，例如约450ppm至约500ppm，约500ppm至约550ppm，约550ppm至约600ppm或约600至约650ppm。
在一个示例性实施例中，本发明的饮料是包含从约200至约300ppm，更特别是约200ppm，约225，约250ppm，约275ppm或约300ppm的量的莱鲍迪苷I。
在一个示例性实施例中，本发明的饮料是包含从约500至约600ppm，更特别是约500ppm，约525ppm，约550ppm，约575ppm或约600ppm的量的莱鲍迪苷I。
该饮料可以进一步包含至少一种附加甜味剂。可以使用在此详述的任何甜味剂，包括天然甜味剂、非天然甜味剂或合成甜味剂。这些可以在莱鲍迪苷I之前、同时或之后加入饮料中。
在一个实施例中，该饮料包含从约100ppm至约140,000ppm的浓度的碳水化合物甜味剂。合成甜味剂可以是以从约0.3ppm至约3,500ppm的浓度存在于该饮料中的。天然高效甜味剂可以是以从约0.1ppm至约3,000ppm的浓度存在于该饮料中的。
该饮料可以进一步包含添加剂，该添加剂包括但不限于碳水化合物、多元醇、氨基酸及其相应盐、聚氨基酸及其相应盐、糖酸及其相应盐、核苷酸、有机酸、无机酸、有机盐(包括有机酸盐和有机碱盐)、无机盐、苦味化合物、咖啡因、调味剂和调味成分、涩味化合物、蛋白质或蛋白质水解物、表面活性剂、乳化剂、增重剂、汁、乳制品、谷物和其他植物提取物、类黄酮、醇、聚合物以及其组合。可以使用在此所述的任何适合的添加剂。
在一个实施例中，该多元醇可以是以从约100ppm至约250,000ppm，例如像，从约5,000ppm至约40,000ppm的浓度存在于该饮料中。
在另一个实施例中，该氨基酸可以是以从约10ppm至约50,000ppm，例如像，从约1,000ppm至约10,000ppm、从约2,500ppm至约5,000ppm或者从约250ppm至约7,500ppm的浓度存在于该饮料中。
在又一个实施例中，该核苷酸可以是以从约5ppm至约1,000ppm的浓度存在于该饮料中。
在另一个实施例中，该有机酸添加剂可以是以从约10ppm至约5,000ppm的浓度存在于该饮料中。
在又一个实施例中，该无机酸添加剂可以是以从约25ppm至约25,000ppm的浓度存在于该饮料中。
在另一个实施例中，该苦味化合物可以是以从约25ppm至约25,000ppm的浓度存在于该饮料中。
在另一个实施例中，该调味剂可以是以从约0.1ppm至约4,000ppm的浓度存在于该饮料中。
在又一个实施例中，该聚合物可以是以从约30ppm至约2,000ppm的浓度存在于该饮料中。
在另一个实施例中，该蛋白质水解物可以是以从约200ppm至约50,000ppm的浓度存在于该饮料中。
在另一个实施例中，该表面活性剂添加剂可以是以从约30ppm至约2,000ppm的浓度存在于该饮料中。
在又一个实施例中，该类黄酮添加剂可以是以从约0.1ppm至约1,000ppm的浓度存在于该饮料中。
在另一个实施例中，该醇添加剂可以是以从约625ppm至约10,000ppm的浓度存在于该饮料中。
在又一个实施例中，涩味添加剂可以是以从约10ppm至约5,000ppm的浓度存在于该饮料中。
该饮料可以进一步含有以上详述的一种或多种功能性成分。功能性成分包括但不限于，维生素、矿物质、抗氧化剂、防腐剂、葡萄糖胺、多元酚以及其组合。可以使用在此所述的任何适合的功能性成分。
考虑到消费品(例如像，饮料)的pH不会实质上或不利地影响甜味剂的味道。该饮料的pH范围的一个非限制性实例可以是从约1.8至约10。另一个实例包括从约2至约5的一个pH范围。在一个具体实施例中，饮料的pH可以是从约2.5至约4.2。本领域技术人员将理解，饮料的pH可以基于饮料的类型而改变。例如，乳品饮料可以具有大于4.2的pH。
包含莱鲍迪苷I的饮料的可滴定酸度范围例如可以是从按饮料重量计约0.01％至约1.0％。
在一个实施例中，起泡饮料产品具有按饮料重量计从约0.01％至约1.0％，例如像按饮料重量计从约0.05％至约0.25％的酸度。
一种起泡饮料产品的碳酸化作用具有0至约2％(w/w)二氧化碳或其等效物，例如从约0.1％至约1.0％(w/w)。
该饮料的温度范围可以是例如从约4℃至约100℃，例如像，从约4℃至约25℃。
该饮料可以是一种富含卡路里的饮料，它具有最高达约120卡路里/8盎司份量。
该饮料可以是一种中值卡路里的饮料，它具有最高达约60卡路里/8盎司份量。
该饮料可以是一种低卡路里的饮料，它具有最高达约40卡路里/8盎司份量。
该饮料可以是一种零卡路里的饮料，它具有小于约5卡路里/8盎司份量。
使用方法
本发明的化合物和组合物可以用来赋予甜味或增强消费品或其他组合物的风味或甜度。
在另一个方面中，本发明是一种用于制备消费品的方法，该方法包括(i)提供一种消费品基质并且(ii)将莱鲍迪苷I添加到该消费品基质中以提供一种消费品。
在一个具体的实施例中，本发明是一种用于制备饮料的方法，该方法包括(i)提供一种饮料基质并且(ii)将莱鲍迪苷I添加到该消费品基质中以提供一种饮料。
在另一方面，本发明是一种制备甜味化消费品的方法，该方法包括(i)提供可甜化消费品和(ii)将莱鲍迪苷I加入到该可甜化消费品中以提供甜味消费品。
在一个具体的实施例中，本发明是一种制备甜味化饮料的方法，该方法包括(i)提供可甜化饮料和(ii)将莱鲍迪苷I加入可甜化饮料中以提供甜味化饮料。
在上述方法中，莱鲍迪苷I可以原样提供，或以组合物的形式提供。当莱鲍迪苷I作为组合物提供时，当将该组合物添加到消费品(例如，饮料)中时，该组合物的量有效提供高于、处于或低于其阈值风味或甜味识别浓度的莱鲍迪苷I浓度。当莱鲍迪苷I不作为组合物提供时，其可以以高于、处于或低于其阈值风味或甜味识别浓度的浓度加入到消费品中。
在一个实施例中，本发明是一种用于增强消费品的甜度的方法，该方法包括(i)提供包含一种或多种甜成分的消费品，和(ii)将莱鲍迪苷I(1)加入到消费品中以提供具有增强的甜味的消费品，其中将莱鲍迪苷I以处于或低于其阈值甜味识别浓度的浓度加入到消费品中。在一个具体实施例中，将莱鲍迪苷I以低于其阈值甜味识别浓度的浓度加入到消费品中。
在另一个实施例中，本发明是一种增强消费品的甜度的方法，该方法包括(i)提供包含一种或多种甜味成分的消费品，和(ii)向该消费品中加入包含莱鲍迪苷I的组合物，以提供具有增强的甜味的消费品，其中当将该组合物加入该消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供处于或低于其阈值甜味识别浓度的莱鲍迪苷I的浓度的量存在于该组合物中。在一个具体实施例中，莱鲍迪苷I以有效提供低于其阈值甜味识别浓度的莱鲍迪苷I浓度的量存在于组合物中。
在一个具体的实施例中，本发明是一种用于增强饮料甜味的方法，该方法包括(i)提供包含至少一种甜味成分的饮料，和(ii)向该饮料中加入莱鲍迪苷I以提供具有增强甜味的饮料，其中将莱鲍迪苷I以有效提供处于或低于其阈值甜味识别浓度的浓度的量加入到饮料中。在一个具体实施例中，将莱鲍迪苷I以有效提供低于其阈值甜味识别浓度的浓度的量加入到消费品中。
在另一个具体实施例中，本发明是一种增强饮料的甜度的方法，该方法包括(i)提供包含一种或多种甜味成分的饮料，和(ii)向该饮料中加入包含莱鲍迪苷I的组合物，以提供具有增强的甜味的饮料，其中当将该组合物加入该饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供处于或低于其阈值甜味识别浓度的莱鲍迪苷I的浓度的量存在于该组合物中。在具体实施例中，当将组合物加入到饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供低于其阈值甜味识别浓度的莱鲍迪苷I浓度的量存在于组合物中。
在另一个实施例中，本发明是一种用于增强消费品的风味的方法，该方法包括(i)提供包含至少一种风味成分的消费品，和(ii)将莱鲍迪苷I添加到该消费品中以提供具有增强风味的消费品，其中将莱鲍迪苷I以处于或低于其阈值风味识别浓度的浓度加入到消费品中。在一个具体实施例中，将莱鲍迪苷I以低于阈值风味识别浓度的浓度加入到消费品中。
在另一个实施例中，本发明是一种用于增强消费品的风味的方法，该方法包括(i)提供包含至少一种风味成分的消费品，和(ii)向该消费品中加入组合物莱鲍迪苷I以提供具有增强风味的消费品，其中当将该组合物加入到该消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供处于或低于其阈值风味识别浓度的莱鲍迪苷I的浓度的量存在于该组合物中。在一个具体实施例中，当将该组合物加入到该消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供低于其阈值风味识别浓度的莱鲍迪苷I浓度的量存在于组合物中。
在一个具体实施例中，本发明是一种用于增强饮料的风味的方法，该方法包括(i)提供包含至少一种风味成分的饮料，和(ii)将莱鲍迪苷I添加到该饮料中以提供具有增强风味的饮料，其中将莱鲍迪苷I以处于或低于其阈值风味识别浓度的浓度加入到饮料中。在一个具体实施例中，将莱鲍迪苷I以低于阈值风味识别浓度的浓度加入到消费品中。
在一个具体实施例中，本发明是一种用于增强饮料的风味的方法，该方法包括(i)提供包含至少一种风味成分的饮料，和(ii)向该饮料中加入包含莱鲍迪苷I的组合物以提供具有增强风味的饮料，其中当将该组合物加入到该饮料中时，莱鲍迪苷I以有效提供处于或低于其阈值风味识别浓度的莱鲍迪苷I的浓度的量存在于该组合物中。在一个具体实施例中，当将该组合物加入到该消费品中时，莱鲍迪苷I以有效提供低于其阈值风味识别浓度的莱鲍迪苷I浓度的量存在于组合物中。
本发明还包括通过将莱鲍迪苷I或包含莱鲍迪苷I的组合物加入到此类组合物/消费品中来制备甜味化组合物(例如甜味化消费品)和风味增强组合物(例如风味增强消费品)的方法。
以下实施例说明本发明的优选实施例。应当理解，本发明并不限于在这些实例中的材料、比例、条件和程序，它们仅仅是说明性的。
实例1
UGT76G1的体内产生
将NcoI和NdeI限制性位点添加至描述于Genbank登录号AAR06912.1中的原始核酸序列。在密码子优化之后，获得了下列核酸序列：
CCATGGCCCATATGGAAAACAAAACCGAAACCACCGTTCGTCGTCGTCGCCGTATTATTCTGTTTCCGGTTCCGTTTCAGGGTCATATTAATCCGATTCTGCAGCTGGCAAATGTGCTGTATAGCAAAGGTTTTAGCATTACCATTTTTCATACCAATTTTAACAAACCGAAAACCAGCAATTATCCGCATTTTACCTTTCGCTTTATTCTGGATAATGATCCGCAGGATGAACGCATTAGCAATCTGCCGACACATGGTCCGCTGGCAGGTATGCGTATTCCGATTATTAACGAACATGGTGCAGATGAACTGCGTCGTGAACTGGAACTGCTGATGCTGGCAAGCGAAGAAGATGAAGAAGTTAGCTGTCTGATTACCGATGCACTGTGGTATTTTGCACAGAGCGTTGCAGATAGCCTGAATCTGCGTCGTCTGGTTCTGATGACCAGCAGCCTGTTTAACTTTCATGCACATGTTAGCCTGCCGCAGTTTGATGAACTGGGTTATCTGGATCCGGATGATAAAACCCGTCTGGAAGAACAGGCAAGCGGTTTTCCGATGCTGAAAGTGAAAGATATCAAAAGCGCCTATAGCAATTGGCAGATTCTGAAAGAAATTCTGGGCAAAATGATTAAACAGACCAAAGCAAGCAGCGGTGTTATTTGGAATAGCTTTAAAGAACTGGAAGAAAGCGAACTGGAAACCGTGATTCGTGAAATTCCGGCACCGAGCTTTCTGATTCCGCTGCCGAAACATCTGACCGCAAGCAGCAGCAGCCTGCTGGATCATGATCGTACCGTTTTTCAGTGGCTGGATCAGCAGCCTCCGAGCAGCGTTCTGTATGTTAGCTTTGGTAGCACCAGCGAAGTTGATGAAAAAGATTTTCTGGAAATTGCCCGTGGTCTGGTTGATAGCAAACAGAGCTTTCTGTGGGTTGTTCGTCCGGGTTTTGTTAAAGGTAGCACCTGGGTTGAACCGCTGCCGGATGGTTTTCTGGGTGAACGTGGTCGTATTGTTAAATGGGTTCCGCAGCAAGAAGTTCTGGCACACGGCGCAATTGGTGCATTTTGGACCCATAGCGGTTGGAATAGCACCCTGGAAAGCGTTTGTGAAGGTGTTCCGATGATTTTTAGCGATTTTGGTCTGGATCAGCCGCTGAATGCACGTTATATGAGTGATGTTCTGAAAGTGGGTGTGTATCTGGAAAATGGTTGGGAACGTGGTGAAATTGCAAATGCAATTCGTCGTGTTATGGTGGATGAAGAAGGTGAATATATTCGTCAGAATGCCCGTGTTCTGAAACAGAAAGCAGATGTTAGCCTGATGAAAGGTGGTAGCAGCTATGAAAGCCTGGAAAGTCTGGTTAGCTATATTAGCAGCCTGTAATAACTCGA(SEQ ID NO：1)。
在合成基因并将该基因利用NdeI和XhoI克隆位点亚克隆到pET30A+载体之后，通过电穿孔将UGT76G1_pET30a+质粒引入到大肠杆菌Bl21(DE3)和大肠杆菌EC100中。将获得的细胞在卡那霉素存在的情况下培养在培养皿中，并选择适当的菌落，并让其在液体LB培养基(埃伦迈尔烧瓶)中生长。将甘油作为冷冻保护剂添加到悬浮液中并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将含有pET30A+_UGT76G1质粒的大肠杆菌BL21(DE3)的贮存等分试样解冻，并添加至30mL的LBGKP培养基(20g/L Luria Broth Lennox；50mM PIPES缓冲液pH 7.00；50mM磷酸盐缓冲液pH 7.00；2.5g/L葡萄糖和50mg/L卡那霉素)。在135rpm振摇下在30℃进行此培养持续8h。
该生产培养基含有60g/L的过夜快速表达TB培养基(Novagen公司)、10g/L的甘油和50mg/L的卡那霉素。将该培养基在20℃搅拌，同时取样品测量OD和pH。培养物产生显著的生长并获得了良好的OD。40小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻，以产生12.7g的细胞湿重。
通过添加Bugbuster母混合物(Novagen公司)进行裂解，并通过离心回收裂解物，且保持冷冻。对解冻的裂解物进行活性测试。
实例2
UGT76G1的体外产生
使用来自普洛麦格(Promega)的S30 T7高产率蛋白质表达系统试剂盒。将4μg的来自大肠杆菌EC100的UGT76G1_pET30a+质粒与80μL的S30预混物plus混合，并且添加72μL的S30T7提取物。添加不含核酸酶的水以获得200μL的总体积，并将所得的溶液在30℃孵育2h。将180μL用于催化测试反应。
实例3
UGT91D2的体外产生
将NcoI和NdeI限制性位点添加至描述于Genbank登录号ACE87855.1中的原始核酸序列。在密码子优化之后，获得了下列核酸序列：
CCATGGCACATATGGCAACCAGCGATAGCATTGTTGATGATCGTAAACAGCTGCATGTTGCAACCTTTCCGTGGCTGGCATTTGGTCATATTCTGCCGTATCTGCAGCTGAGCAAACTGATTGCAGAAAAAGGTCATAAAGTGAGCTTTCTGAGCACCACCCGTAATATTCAGCGTCTGAGCAGCCATATTAGTCCGCTGATTAATGTTGTTCAGCTGACCCTGCCTCGTGTTCAAGAACTGCCGGAAGATGCCGAAGCAACCACCGATGTTCATCCGGAAGATATTCCGTATCTGAAAAAAGCAAGTGATGGTCTGCAGCCGGAAGTTACCCGTTTTCTGGAACAGCATAGTCCGGATTGGATCATCTATGATTATACCCATTATTGGCTGCCGAGCATTGCAGCAAGCCTGGGTATTAGCCGTGCACATTTTAGCGTTACCACCCCGTGGGCAATTGCATATATGGGTCCGAGCGCAGATGCAATGATTAATGGTAGTGATGGTCGTACCACCGTTGAAGATCTGACCACCCCTCCGAAATGGTTTCCGTTTCCGACCAAAGTTTGTTGGCGTAAACATGATCTGGCACGTCTGGTTCCGTATAAAGCACCGGGTATTAGTGATGGTTATCGTATGGGTCTGGTTCTGAAAGGTAGCGATTGTCTGCTGAGCAAATGCTATCATGAATTTGGCACCCAGTGGCTGCCGCTGCTGGAAACCCTGCATCAGGTTCCGGTTGTTCCGGTGGGTCTGCTGCCTCCGGAAGTTCCGGGTGATGAAAAAGATGAAACCTGGGTTAGCATCAAAAAATGGCTGGATGGTAAACAGAAAGGTAGCGTGGTTTATGTTGCACTGGGTAGCGAAGTTCTGGTTAGCCAGACCGAAGTTGTTGAACTGGCACTGGGTCTGGAACTGAGCGGTCTGCCGTTTGTTTGGGCATATCGTAAACCGAAAGGTCCGGCAAAAAGCGATAGCGTTGAACTGCCGGATGGTTTTGTTGAACGTACCCGTGATCGTGGTCTGGTTTGGACCAGCTGGGCACCTCAGCTGCGTATTCTGAGCCATGAAAGCGTTTGTGGTTTTCTGACCCATTGTGGTAGCGGTAGCATTGTGGAAGGTCTGATGTTTGGTCATCCGCTGATTATGCTGCCGATTTTTGGTGATCAGCCGCTGAATGCACGTCTGCTGGAAGATAAACAGGTTGGTATTGAAATTCCGCGTAATGAAGAAGATGGTTGCCTGACCAAAGAAAGCGTTGCACGTAGCCTGCGTAGCGTTGTTGTTGAAAAAGAAGGCGAAATCTATAAAGCCAATGCACGTGAACTGAGCAAAATCTATAATGATACCAAAGTGGAAAAAGAATATGTGAGCCAGTTCGTGGATTATCTGGAAAAAAACACCCGTGCAGTTGCCATTGATCACGAAAGCTAATGACTCGAG(SEQ ID NO：2)。
在合成基因并将该基因利用NcoI和XhoI克隆位点亚克隆到pET30A+载体之后，通过电穿孔将UGT91D2_pET30a+质粒引入到大肠杆菌EC100中。将获得的细胞在卡那霉素存在的情况下培养，选择适当的菌落，让其在液体LB培养基(埃伦迈尔烧瓶)中生长。将甘油作为冷冻保护剂添加到悬浮液中并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将来自普洛麦格的S30T7高产率蛋白质表达系统试剂盒用于蛋白质的体外合成。
将4μg的UGT91D2_pET30a+质粒与80μL的S30预混物plus混合，并且添加72μL的S30T7提取物。添加不含核酸酶的水以获得200μL的总体积，并将所得的溶液在30℃孵育2h。5μL用于SDS-page分析，而剩余45μL用于催化测试反应中。
实例4
UGTSL的体内产生
通过热激将含有相应于该酶(GI 460409128，Version XP_004249992.1)的基因的pET30A+载体引入到大肠杆菌BL21(DE3)中。将获得的细胞在卡那霉素存在的情况下培养在培养皿中，并且选择适当的菌落，并让其在液体LB培养基(埃伦迈尔烧瓶)中生长。将甘油作为冷冻保护剂添加到悬液中并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将含有pET30A+_UGT质粒的大肠杆菌BL21(DE3)的贮存等分试样解冻，并添加至30mL的LBGKP培养基(20g/L Luria Broth Lennox；50mM PIPES缓冲液pH7.00；50mM磷酸盐缓冲液pH 7.00；2.5g/L葡萄糖和50mg/L卡那霉素)。在135rpm振动下在30℃进行此培养8小时。
该生产培养基含有60g/L的过夜快速表达TB培养基(Novagen公司)、10g/L的甘油和50mg/L的卡那霉素。将预培养物添加到400mL的该培养基中并且将该溶液在20℃搅拌，同时取样品测量OD和pH。培养物产生显著的生长并获得了良好的OD。40小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻。细胞湿重(CWW)为6.8g。
通过添加Bugbuster母混合物(Novagen公司)进行裂解，并通过离心回收裂解物，且趁新鲜使用。
实例5
UGTSL2的体内产生
UGTSL2(GI_460410132/XP_004250485.1)氨基酸序列：
MATNLRVLMFPWLAYGHISPFLNIAKQLADRGFLIYLCSTRINLESIIKKIPEKYADSIHLIELQLPELPELPPHYHTTNGLPPHLNPTLHKALKMSKPNFSRILQNLKPDLLIYDVLQPWAEHVANEQNIPAGKLLTSCAAVFSYFFSFRKNPGVEFPFPAIHLPEVEKVKIREILAKEPEEGGRLDEGNKQMMLMCTSRTIEAKYIDYCTELCNWKVVPVGPPFQDLITNDADNKELIDWLGTKHENSTVFVSFGSEYFLSKEDMEEVAFALELSNVNFIWVARFPKGEERNLEDALPKGFLERIGERGRVLDKFAPQPRILNHPSTGGFISHCGWNSAMESIDFGVPIIAMPIHNDQPINAKLMVELGVAVEIVRDDDGKIHRGEIAETLKSVVTGETGEILRAKVREISKNLKSIRDEEMDAVAEELIQLCRNSNKSK(SEQ ID NO：9)。
通过热激将含有UGTSL2基因的pET30A+载体引入到大肠杆菌B121(DE3)中。将获得的细胞在卡那霉素存在的情况下培养在培养皿中，并选择适当的菌落，并让其在液体LB培养基(埃伦迈尔烧瓶)中生长。将甘油作为冷冻保护剂添加到悬液中并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将含有pET30A+_UGTSL2质粒的大肠杆菌BL21(DE3)的贮存等分试样解冻，并添加至30mL的LBGKP培养基(20g/L Luria Broth Lennox；50mM PIPES缓冲液pH 7.00；50mM磷酸盐缓冲液pH 7.00；2.5g/L葡萄糖和50mg/L卡那霉素)。在135rpm振摇下在30℃进行此培养持续8h。
该生产培养基含有60g/L的过夜快速表达TB培养基(Novagen公司)、10g/L的甘油和50mg/L的卡那霉素。将预培养物添加到200mL的该培养基中并且将该溶液在20℃搅拌，同时取样品测量OD和pH。培养物产生显著的生长并获得了良好的OD。40小时后，通过离心收获细胞，将其冷冻，获得6.22g的细胞湿重。
通过在1.4g的细胞上添加Bugbuster母混合物(Novagen公司)进行裂解，并通过离心回收裂解物，且趁新鲜使用。
实例6
具有体内产生的UGT76G1的催化反应
反应总体积为5.0mL，具有以下组成：50mM磷酸钠缓冲液pH 7.2、3mM MgCl2、2.5mMUDP-葡萄糖、0.5mM甜菊苷和500μL的UGT76G1解冻裂解物。在30℃在轨道摇床上在135rpm下运行反应。对于每个样品，用40μL的2N H2SO4和420μL的甲醇/水(6/4)将460μL的反应混合物淬灭。立即将样品离心并在10℃下维持，之后通过HPLC(CAD)进行分析。HPLC指示甜菊苷几乎完全转化为莱鲍迪苷A(图4)。
实例7
通过pET30a+质粒和BL21(DE3)表达菌株制备的UGT76G1的制备和活性
将pET30a+_UGT76G1质粒转化到BL21DE3)表达菌株中(Lucigen E.EXPRESS电感受态细胞)。使获得的细胞在卡那霉素的存在下在培养皿中的LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在含有卡那霉素的液体LBGKP培养基中生长。添加甘油并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将储存等分试样解冻并添加到30mL的LBGKP培养基中。在30℃振摇下将该培养进行8h，随后将其用于接种400mL的含60g/L的“过夜快速表达TB培养基”(Novagen公司，参考71491-5)、10g/L的甘油和50mg/L的卡那霉素的生产培养基。将该培养基在20℃搅拌，同时取样品测量OD(600nm)和pH。40小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻。获得的细胞湿重为10.58g。
通过添加8.1mL的“Bugbuster母混合物”(Novagen公司，参考71456)和3.5mL的水将3.24g获得的沉淀裂解。通过离心回收裂解物并保持冷冻。
实例8
通过pET30a+质粒和Tuner(DE3)表达菌株制备的UGT76G1的制备和活性
通过热激处理将pET30a+_UGT76G1质粒转化到Tuner(DE3)表达菌株(NovagenTunertm(DE3)感受态细胞)中。使获得的细胞在卡那霉素的存在下在培养皿中的LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在含有卡那霉素的液体LBGKP培养基中生长)。添加甘油并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将储存等分试样解冻并添加到100mL的含有50mg/L卡那霉素的LB培养基中。在30℃振摇下进行此培养持续15h。4.4mL的该培养物用来接种200mL含有LB的生产培养基。在37℃搅拌该培养基直至获得0.9的OD(600nm)，随后添加400μL的100mM IPTG溶液，并在30℃搅拌该培养基4小时。通过离心收获细胞，并将其冷冻。获得的细胞湿重为1.38g。
通过添加4.9mL的“Bugbuster母混合物”(Novagen公司，参考71456)和2.1mL的水将获得的沉淀裂解。通过离心回收裂解物并保持冷冻。
实例9
通过pMAL质粒和BL21表达菌株制备的UGT76G1的制备和活性
使用Nde1和Sal1克隆位点将合成的UGT76G1基因亚克隆到pMAL质粒后，通过热激处理将pMAL_UGT76G1质粒转化到BL21表达菌株(New England Biolabs BL21感受态大肠杆菌)中。使获得的细胞在氨苄青霉素的存在下在培养皿中的LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在含有氨苄青霉素的液体LBGKP培养基中生长)。添加甘油并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将储存等分试样解冻并添加到30mL的LBGKP培养基中。在30℃振摇下将该培养进行8h，随后将其用于接种400mL的含60g/L的“过夜快速表达TB培养基”(Novagen公司，参考71491-5)、10g/L的甘油和50mg/L的氨苄青霉素的生产培养基。将该培养基在20℃搅拌，同时取样品测量OD和pH。40小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻。获得的细胞湿重为5.86g。
通过添加9.6mL的“Bugbuster母混合物”(Novagen公司，参考71456)和4.1mL的水将2.74g获得的沉淀裂解。通过离心回收裂解物并保持冷冻。
实例10
通过pMAL质粒和ArcticExpress表达菌株制备的UGT76G1的制备和活性
通过热激处理将pMAL_UGT76G1质粒转化到ArticExpress表达菌株(安捷伦(Agilent)ArcticExpress感受态细胞)中。使获得的细胞在氨苄青霉素和遗传霉素的存在下在培养皿中的LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在含有氨苄青霉素和遗传霉素的液体LBGKP培养基中生长。添加甘油并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将储存等分试样解冻并添加到30mL的LBGKP培养基(含有氨苄青霉素和遗传霉素)中。在30℃振摇下将该培养进行8h，随后将其用于接种400mL的含60g/L的“过夜快速表达TB培养基”(Novagen公司，参考71491-5)、10g/L的甘油和50mg/L的氨苄青霉素的生产培养基。将该培养基在12℃搅拌，同时取样品测量OD(600nm)和pH。68小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻。获得的细胞湿重为8.96g。
通过添加8.73mL的“Bugbuster母混合物”(Novagen公司，参考71456)和3.79mL的水将2.47g获得的沉淀裂解。通过离心回收裂解物并保持冷冻。
实例11
通过pCOLDIII质粒和ArcticExpress表达菌株制备的UGT76G1的制备和活性
使用Nde1和Xho1克隆位点将合成的UGT76G1基因亚克隆入pCOLDIII质粒后，通过热激处理将pCOLDIII_UGT76G1质粒转化到ArcticExpress表达菌株(安捷伦ArcticExpress感受态细胞)中。使获得的细胞在氨苄青霉素和遗传霉素的存在下在培养皿中的LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在含有氨苄青霉素和遗传霉素的液体LBGKP培养基中生长。添加甘油并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将储存等分试样解冻并添加到30mL的LBGKP培养基(含有氨苄青霉素和遗传霉素)中。在30℃振摇下将该培养进行8h，随后将其用于接种400mL的含60g/L的“过夜快速表达TB培养基”(Novagen公司，参考71491-5)、10g/L的甘油和50mg/L的卡那霉素的生产培养基。将该培养基在12℃搅拌，同时取样品测量OD(600nm)和pH。63小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻。获得的细胞湿重为6.54g。
通过添加9.8mL的“Bugbuster母混合物”(Novagen公司，参考71456)和4.2mL的水将2.81g获得的沉淀裂解。通过离心回收裂解物并保持冷冻。
实例12
通过pCOLDIII质粒和Origami2(DE3)表达菌株制备的UGT76G1的制备和活性
通过热激处理将pCOLDIII_UGT76G1质粒转化到Origami2(DE3)表达菌株(NovagenOrigamiTM2(DE3)感受态细胞)中。使获得的细胞在氨苄青霉素的存在下在培养皿中的LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在含有氨苄青霉素的液体LBGKP培养基中生长。添加甘油并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将储存等分试样解冻并添加到30mL的LBGKP培养基(含有氨苄青霉素)中。在30℃振摇下将该培养进行8h，随后将其用于接种400mL的含60g/L的“过夜快速表达TB培养基”(Novagen公司，参考71491-5)、10g/L的甘油和50mg/L的卡那霉素的生产培养基。将该培养基在12℃搅拌，同时取样品测量OD(600nm)和pH。68小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻。获得的细胞湿重为2.53g。
通过添加6.0mL的“Bugbuster母混合物”(Novagen公司，参考71456)和1.9mL的水将1.71g获得的沉淀裂解。通过离心回收裂解物并保持冷冻。
实例13
使用pMAL质粒和BL21表达菌株制备UGT91D2
使用Nde1和Sal1克隆位点将合成的UGT91D2基因亚克隆到pMAL质粒中后，通过热激处理将pMAL_UGT91D2质粒转化到BL21表达菌株(New England Biolabs BL21感受态大肠杆菌)中。使获得的细胞在氨苄青霉素的存在下在培养皿中的LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在含有氨苄青霉素的液体LBGKP培养基中生长)。添加甘油并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将储存等分试样解冻并添加到30mL的LBGKP培养基中。在30℃振摇下将该培养进行8h，随后将其用于接种400mL的含60g/L的“过夜快速表达TB培养基”(Novagen公司，参考71491-5)、10g/L的甘油和50mg/L的氨苄青霉素的生产培养基。将该培养基在20℃搅拌，同时取样品测量OD和pH。40小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻。获得的细胞湿重为12.32g。
通过添加7.7mL的“Bugbuster母混合物”(Novagen公司，参考71456)和3.2mL的水将2.18g获得的沉淀裂解。通过离心回收裂解物并且直接将其用于活性测试。
实例14
使用pMAL质粒和ArcticExpress表达菌株制备UGT91D2
通过热激处理将pMAL_UGT91D2质粒转化到ArcticExpress表达菌株(安捷伦ArcticExpress感受态细胞)中。使获得的细胞在氨苄青霉素和遗传霉素的存在下在培养皿中的LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在含有氨苄青霉素和遗传霉素的液体LBGKP培养基中生长。添加甘油并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将储存等分试样解冻并添加到30mL的LBGKP培养基(含有氨苄青霉素和遗传霉素)中。在30℃振摇下将该培养进行8h，随后将其用于接种400mL的含60g/L的“过夜快速表达TB培养基”(Novagen公司，参考71491-5)、10g/L的甘油和50mg/L的氨苄青霉素的生产培养基。将该培养基在20℃搅拌16小时，然后在12℃另外搅拌50小时，同时取样品测量OD(600nm)和pH。通过离心收获细胞，并将其冷冻。获得的细胞湿重为15.77g。
通过添加9.0mL的“Bugbuster母混合物”(Novagen公司，参考71456)和3.8mL的水将2.57g获得的沉淀裂解。通过离心回收裂解物并且直接将其用于活性测试。
实例15
使用pET30a+质粒和Tuner(DE3)表达菌株制备UGT91D2
通过热激处理将pET30a+_UGT91D2质粒转化到Tuner(DE3)表达菌株(NovagenTunertm(DE3)感受态细胞)中。使获得的细胞在卡那霉素的存在下在培养皿中的LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在液体LBGKP培养基(含有卡那霉素)中生长。添加甘油并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将储存等分试样解冻并添加到100mL的含有50mg/L卡那霉素的LB培养基中。在30℃振摇下进行此培养持续15h。6.2mL的该培养物用来接种500mL含有LB的生产培养基。在37℃搅拌该培养基直至获得0.9的OD(600nm)，随后添加500μL的100mM IPTG溶液(培养基中的IPTG浓度为100μM)，并在30℃搅拌培养基4小时，通过离心收获细胞，并将其冷冻。获得的细胞湿重为4.02g。
通过添加6.8mL的“Bugbuster母混合物”(Novagen公司，参考71456)和2.8mL的水将1.92g获得的沉淀裂解。通过离心回收裂解物并且直接将其进行活性测试。
实例16
使用pET30a+质粒和ArcticExpress表达菌株制备UGT91D2
通过热激处理将pET30a+_UGT91D2质粒转化到ArcticExpress(DE3)表达菌株(安捷伦ArcticExpress感受态细胞)中。使获得的细胞在卡那霉素和遗传霉素的存在下在培养皿中的LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在含有卡那霉素和遗传霉素的液体LBGKP培养基中生长。添加甘油并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将储存等分试样解冻并添加到30mL的LBGKP培养基(含有卡那霉素和遗传霉素)中。在30℃振摇下将该培养进行8h，随后将其用于接种400mL的含60g/L的“过夜快速表达TB培养基”(Novagen公司，参考71491-5)、10g/L的甘油和50mg/L的氨苄青霉素的生产培养基。将该培养基在20℃下搅拌16小时。然后在12℃再50小时。同时取样品以测量OD(600nm)和pH。60小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻。获得的细胞湿重为16.07g。
通过添加11.4mL的“Bugbuster母混合物”(Novagen公司，参考71456)和4.8mL的水将3.24g获得的沉淀裂解。通过离心回收裂解物并且直接将其用于活性测试。
实例17
UGT91D2的体内制剂的活性测定
使用在pH 7.2的50mM磷酸钠缓冲液中的0.5mM底物、2.5mM的UDP-葡萄糖和3mM的MgCl2，利用1000μL的裂解物，以5mL规模进行关于甜叶悬钩子苷至甜菊苷的转化的活性测试。取得样品并通过HPLC进行分析。UGT91D2的不同制备结果概括在下表中。
*注意：以每mL的裂解物提及活性。1U即为在30℃和pH 7.2下在1小时内转化1μmol的底物。
实例18
用于莱鲍迪苷D到莱鲍迪苷M的转化的UGT76G1的定向演化
从如描述于Genbank(AAR06912.1)中的UGT76G1的氨基酸序列开始，鉴定了在各个氨基酸位置处的不同突变，这些突变可改变用于莱鲍迪苷D(Reb D)到莱鲍迪苷M(Reb M)的转化的酶的活性。通过DNA2.0ProteinGPSTM策略设计的突变的这个清单随后用于合成96个变体基因，这些变体基因含有针对在大肠杆菌中表达经密码子优化的这些突变中的3个、4个或5个。这些基因被亚克隆到pET30a+质粒中并且用于转化大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞。使获得的细胞在卡那霉素的存在下在培养皿中在固体LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在试管中的液体LB培养基中生长。将甘油作为冷冻保护剂添加到悬液中并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将含有pET30a+_UGT76G1var质粒的大肠杆菌BL21(DE3)的这些贮存等分试样解冻，并添加至LBGKP培养基(20g/L Luria Broth Lennox；50mM PIPES缓冲液pH 7.00；50mM磷酸盐缓冲液pH 7.00；2.5g/L葡萄糖和50mg/L卡那霉素)。在135rpm在30℃下，在振摇下在96微量滴定板中进行此培养持续8h。
用50μL的上述培养物接种含有60g/L的过夜快速表达TB培养基(OvernightExpressTM Instant TB medium)10g/L的甘油和50mg/L的卡那霉素的3.95mL的生产培养基。在20℃在48深孔板中搅拌所得培养物。培养物产生显著的生长并获得了良好的OD(600nm；1cm)。44小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻。
通过向解冻的细胞添加母混合物进行裂解，并通过离心回收裂解物。用100μL的新鲜裂解物进行活性测试，该裂解物被添加到在50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.2)中的莱鲍迪苷D(终浓度0.5mM)、MgCl2(终浓度3mM)和UDP-葡萄糖(终浓度2.5mM)的溶液中。
使反应在30℃下进行，并在2、4、7和24小时后取样，以使用上述的用于莱鲍迪苷D到莱鲍迪苷M的转化的分析方法通过HPLC(CAD检测)确定转化和初始速率。结果描绘于下表中。
*突变标注如下：原始氨基酸-位置-新氨基酸：例如，在位置33处的丙氨酸突变为甘氨酸被标注为A33G。
实例19
在酿酒酵母中的UGT76G1的体内生产
UGT76G1[甜叶菊](gi_37993653/gb_AAR06912.1)
MENKTETTVRRRRRIILFPVPFQGHINPILQLANVLYSKGFSITIFHTNFNKPKTSNYPHFTFRFILDNDPQDERISNLPTHGPLAGMRIPIINEHGADELRRELELLMLASEEDEEVSCLITDALWYFAQSVADSLNLRRLVLMTSSLFNFHAHVSLPQFDELGYLDPDDKTRLEEQASGFPMLKVKDIKSAYSNWQILKEILGKMIKQTKASSGVIWNSFKELEESELETVIREIPAPSFLIPLPKHLTASSSSLLDHDRTVFQWLDQQPPSSVLYVSFGSTSEVDEKDFLEIARGLVDSKQSFLWVVRPGFVKGSTWVEPLPDGFLGERGRIVKWVPQQEVLAHGAIGAFWTHSGWNSTLESVCEGVPMIFSDFGLDQPLNARYMSDVLKVGVYLENGWERGEIANAIRRVMVDEEGEYIRQNARVLKQKADVSLMKGGSSYESLESLVSYISSL。
上述氨基酸序列针对在酿酒酵母中表达进行了密码子优化。此外，在ATG起始密码子之前添加了酵母共有序列AACACA。使用Hind III和Xba I限制性位点将合成基因亚克隆到pYES2载体中。使用pYES2_UGT76G1_Sc载体来转化化学感受态酿酒酵母INVSc1细胞(英杰公司)。
使细胞在缺乏尿嘧啶的含有2％葡萄糖的固体合成基本培养基上生长，并挑选单个菌落，且使其在缺乏尿嘧啶的液体合成基本培养基(含有2％葡萄糖的SC-U)上生长。在离心之后，将细胞用SC-U(含有2％葡萄糖)和60％甘油/水悬浮。将等分试样在-80℃下储存，并且使用一个等分试样来开始在SC-U(含有2％葡萄糖)中培养，在30℃持续43小时。将此培养物的一部分离心，并将其悬浮在诱导培养基(含有2％半乳糖的SC-U)中，在30℃持续19小时。
通过离心获得细胞并且用五倍体积的CelLyticTM Y细胞裂解试剂(西格玛公司)进行裂解。将裂解物直接用于活性测试(UGT76G1_Sc)。
实例20
用于莱鲍迪苷D到莱鲍迪苷M的转化的UGT76G1的定向演化(第2轮)
选择来自UGT76G1的第一轮定向演化的最有活性的克隆(参见实例18，含有突变Q266E_P272A_R334K_G348P_L379G的UGT76G1var94)作为第2轮的基线克隆。建立了53种突变的清单，该清单含有来自第一轮的鉴定的不同正突变和通过DNA2.0ProteinGPStm策略获得的新突变。这个突变清单随后用于设计92个变体基因，这些变体基因各自含有3个不同的突变。针对在大肠杆菌中表达进行密码子优化之后，合成了这些基因，将其亚克隆到pET30a+质粒中并且用于转化大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞。使获得的细胞在卡那霉素的存在下在培养皿中在固体LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在试管中的液体LB培养基中生长。将甘油作为冷冻保护剂添加到悬液中并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将含有pET30a+_UGT76G1var质粒的大肠杆菌BL21(DE3)的这些贮存等分试样解冻，并添加至LBGKP培养基(20g/L Luria Broth Lennox；50mM PIPES缓冲液pH 7.00；50mM磷酸盐缓冲液pH 7.00；2.5g/L葡萄糖和50mg/L卡那霉素)。在30℃下，在振摇下在微量滴定板中进行此培养持续8h。
用50μL的上述培养物接种含有60g/L的过夜快速表达TB培养基(OvernightExpressTM Instant TB medium)10g/L的甘油和50mg/L的卡那霉素的3.95mL的生产培养基。在20℃在48深孔板中搅拌所得培养物。培养物产生显著的生长并获得了良好的OD(600nm)。44小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻。
通过向解冻的细胞添加母混合物进行裂解，并通过离心回收裂解物。用100μL的新鲜裂解物进行活性测试，该裂解物被添加到在50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.2)中的莱鲍迪苷D(终浓度0.5mM)、MgCl2(终浓度3mM)和UDP-葡萄糖(终浓度2.5mM)的溶液中。
使反应在30℃下进行，并在2、4、7和24小时后取样，以使用上述的用于莱鲍迪苷D到莱鲍迪苷M的转化的分析方法通过HPLC(CAD检测)确定转化和初始速率。用基线克隆第1轮-Var94并行地进行实验。22h之后的转化率以及针对这个基线克隆的初始速率被定义为100％，且对于第2轮克隆的归一化转化率和初始速率描绘在下表中：
*突变标注如下：参考基因-原始氨基酸-位置-新的氨基酸：例如，对于来自UGT76G1的第一轮定向演化的变体94，在位置33处的丙氨酸突变为甘氨酸被标注为第1轮-Var94(A33G)
这些结果的建模允许获得每个突变的效应的分级。以下突变被确定为对于活性是有益的：S42A、F46I、I190L、S274G、I295M、K303G、F31S、K316R、K393R、V394I、I407V、N409K、N409R、Q425E、Q432E、S447A、S456L。
实例21
用于莱鲍迪苷D到莱鲍迪苷X的转化的UGT76G1的定向演化(第3轮)
选择来自UGT76G1的第二轮定向演化的最有活性的克隆(参见实例20，包含突变S42A_F46I_I407V的第二轮_UGT76G1var66)作为第3轮定向演化的基线克隆。建立了56种突变的清单，该清单含有来自第二轮的鉴定的不同正突变和通过DNA2.0ProteinGPStm策略获得的30个新突变。这个突变清单随后用于设计92个变体基因，这些变体基因各自含有3或4个不同的突变。针对在大肠杆菌中表达进行密码子优化之后，合成了这些基因，将其亚克隆到pET30a+质粒中并且用于转化大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞。使获得的细胞在卡那霉素的存在下在培养皿中在固体LB琼脂培养基上生长。选择适合的菌落，并使其在试管中的液体LB培养基中生长。将甘油作为冷冻保护剂添加到悬液中并且将400μL的等分试样在-20℃和在-80℃下储存。
将含有pET30a+_UGT76G1var质粒的大肠杆菌BL21(DE3)的这些贮存等分试样解冻，并添加至LBGKP培养基(20g/L Luria Broth Lennox；50mM PIPES缓冲液pH 7.00；50mM磷酸盐缓冲液pH 7.00；2.5g/L葡萄糖和50mg/L卡那霉素)。在30℃下，在振摇下在96微量滴定板中进行此培养持续8h。
用50μL的上述培养物接种含有60g/L的过夜快速表达TB培养基(OvernightExpressTM Instant TB medium)10g/L的甘油和50mg/L的卡那霉素的3.95mL的生产培养基。在20℃在48深孔板中搅拌所得培养物。培养物产生显著的生长并获得了良好的OD(600nm)。44小时后，通过离心收获细胞，并将其冷冻。
通过向解冻的细胞添加母混合物进行裂解，并通过离心回收裂解物。用100μL的新鲜裂解物进行活性测试，该裂解物被添加到在50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.2)中的莱鲍迪苷D(终浓度0.5mM)、MgCl2(终浓度3mM)和UDP-葡萄糖(终浓度2.5mM)的溶液中。
使反应在30℃下进行，并在1、2、4、6和22小时后取样，以使用上述的用于莱鲍迪苷D到莱鲍迪苷M的转化的分析方法通过HPLC(CAD检测)确定转化和初始速率。用基线克隆第2轮-Var66并行地进行实验。22h之后的转化率以及针对这个基线克隆的初始速率被定义为100％，且对于第3轮克隆的归一化转化率和初始速率描绘在下表中：
*突变标注如下：参考基因-原始氨基酸-位置-新氨基酸：例如，对于来自UGT76G1的第二轮定向演化的变体66，在位置190处的异亮氨酸突变为亮氨酸被标注为第2轮-Var66(I190L)
这些结果的建模允许获得每个突变的效应的分级。以下突变被确定为对于活性是有益的：
I46L、I295M、S119A、S274G、K334R、F314S、K303G、K316R、K393R、I190L、Q425E、Q432E、N138G、V394I、F182L、V407I、A272P、V264C、E449D、A352G。
实例22
使用UGT76G1将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I
使用UGT76G1-R1-F12(也称为UGT76G1var94)进行反应
反应总体积为40mL，具有以下组成：50mM磷酸钾缓冲液pH 7.5、3mM MgCl2、2.5mMUDP-葡萄糖、0.5mM莱鲍迪苷A和4mL UGT76G1-R1-F12裂解物(2.5U/mL)。在30℃在轨道摇床上在135rpm下运行反应。对于取样，用10μL的2N H2SO4和115μL的甲醇/水(7/3)将125μL的反应混合物淬灭。立即将样品离心并在10℃下维持，之后通过LC-MS进行分析。使用与安捷伦(Agilent)6110A MSD连接并且接合“LC/MSD Chemstation”软件的装备有二元泵(G1312B)、自动进样器(G1367D)、恒温柱箱(G1316B)、DAD检测器(G1315C)的安捷伦1200系列HPLC系统。
仪器条件
流动相梯度程序
反应特征曲线显示在图5中。
反应42小时后，将20mL反应混合物用20mL乙醇淬灭并用于结构说明。
以类似的方式，将UGT76G1定向演化第1轮(UGT76G1-R1-F12)、第2轮(上文鉴定为“第2轮-Var66”的UGT76G1-R2-B9)和第3轮(上文鉴定为“第3轮-Var21”的UGT76G1-R3-G3)和天然UGT76G1的最佳克隆针对莱鲍迪苷A至莱鲍迪苷I的转化进行测试。结果在图5中示出。
实例23
莱鲍迪苷I的分离和表征
粗反应样品。根据实例22用UGT76G1制备了用于分离的批号为粗CB-2977-198的样品。
HPLC分析。使用Waters 2695Alliance系统按照下列方法进行了样品的初步HPLC分析：Phenomenex Synergi Hydro-RP,4.6×250mm,4μm(p/n 00G-4375-E0)；柱温：55℃；流动相A：在水中0.0284％NH4OAc和0.0116％HOAc水溶液；流动相B：乙腈(MeCN)；流速：1.0mL/min；注射体积：10μL。通过UV(210nm)和CAD进行检测。
梯度：
时间(min) ％A ％B
0.0–8.5 75 25
10.0 71 29
16.5 70 30
18.5–24.5 66 34
26.5–29.0 48 52
31–37 30 70
38 75 25
通过HPLC分离。使用Waters Atlantis dC18(30×100mm，5μm，p/n 186001375)柱，用80:20水/MeCN的等度流动相条件进行纯化。流速保持在45mL/min，注射负载量为180mg。检测器波长设定为210nm。
使用以下进行级分分析：Waters Atlantis dC18(4.6×150mm，5μm，p/n186001342)柱；流动相A：水；流动相B：MeCN；流速：1mL/min；等度流动相条件：75:25A/B持续30分钟。
MS和MS/MS。用装备有电喷雾电离源的Micro质谱仪的Waters QT产生MS和MS/MS数据。通过负ESI分析样品。将样品用H2O:MeCN(1:1)稀释至0.25mg/mL的浓度，并通过流动注射引入用于MS数据采集。将样品进一步稀释至0.01mg/mL以产生良好的s/n以调谐用于MS/MS并且通过直接灌注获得。碰撞能量设置为60V，以便获得由于分子的性质而具有增加的碎片离子峰的MS/MS数据
NMR。通过将约1.0mg溶解在180μL的吡啶-d5+TMS中来准备样品，并且在具有2.5mm反式探头或5mm宽频带探头的Bruker Avance 500MHz仪器上获得NMR数据。13C和HMBC NMR数据在Rensselaer Polytechnic Institute使用他们的Bruker Avance 600MHz和800MHz仪器分别用5mm冷冻探头(cryo-probe)获得。1H和13C NMR谱参考TMS共振(δH 0.00ppm和δC0.0ppm)。
Reb I的分离使用半合成甜菊醇糖苷混合物(批号CB-2977-198)进行。如上所述通过HPLC分析材料。如图6所示，在约17分钟的保留时间(tR)观察到Reb I峰。
结果和讨论
如上所述从反应粗料中分离出reb I峰。合并分离的级分并冻干。最终产物的纯度为91％，如通过使用上述方法的LC-CAD所证实的。提供大约1mg的reb I用于分光光度和光谱测定分析。
质谱分析法。通过灌注reb I的样品获得的ESI-TOF质谱显示出处于m/z1127.4741的[M-H]-离子。[M-H]-离子的质量与针对reb I所预期的分子式C50H79O28(对C50H79O28计算为：1127.4758，误差：-1.5ppm)很好地一致。MS数据确认reb I具有1128道尔顿的标称质量与分子式C50H80O28。
reb I的MS/MS谱(选择m/z 1127.4处的[M-H]-离子进行碎裂)，表明在m/z803.5301处两个糖单元的损失，但是没有显示出使用30V的碰撞能量的另外的碎裂。当施加较高的碰撞能量(60V)时，未观察到母离子，但是从m/z 803.5301观察到m/z 641.4488、479.3897和317.3023处的三个糖单元的顺序损失
NMR光谱学。进行一系列NMR实验，包括1H NMR、13C NMR、1H-1H COSY、HSQC-DEPT、HMBC NOESY，并且进行1D TOCSY，以允许对reb I的指定。
在300K下获得的reb I的1H NMR谱中，端基质子之一被水共振完全遮蔽。因此，在较低温度(292K)下获得样品的1H NMR谱，以移出水共振，并且在该温度下，充分分辨端基质子。因此，在292K获得reb I的所有其他NMR数据。
1D和2D NMR数据表明糖苷的中心核是二萜。从在δH 1.22处的甲基质子到在δC176.9处的羰基的HMBC关联允许指定叔甲基基团(C-18)以及C-19之一，并且提供了用于指定其余糖苷配基的起点。从甲基质子(H-18)到在δC 38.5、44.0、和57.2处的碳的另外的HMBC关联允许指定C-3、C-4、和C-5。1H-13C HSQC-DEPT数据的分析表明，在δC 38.5处的碳为亚甲基并且在δC 57.2处的碳为次甲基，其分别指定为C-3和C-5。这留下在δC 44.0处的碳，其未显示在HSQC-DEPT谱中的关联，被指定为季碳，C-4。使用HSQC-DEPT数据指定对于C-3(δH 1.02和2.35)和C-5(δH 1.03)的1H化学位移。在H-3质子之一(δH 1.02)与在δH 1.44处的质子之间的COSY关联允许指定H-2质子之一，所述H-2质子之一进而显示出与被指定为H-1的在δH 0.74处的质子的关联。然后，基于另外的COSY和HSQC-DEPT关联，对C-1和C-2的剩余1H和13C化学位移进行指定，并概括在下表中。
1H和13C NMR(500和150MHz，吡啶-d5)，莱鲍迪苷I糖苷配基的指定
在δH 1.26处观察到的其他叔甲基单峰显示出与C-1和C-5的HMBC关联并且被指定为H-20。甲基质子显示出与分别被指定为C-10和C-9的季碳(δC 39.8)和次甲基碳(δC 54.1)的另外的HMBC关联。然后，在H-5(δH 1.03)与在δH 1.90和2.33处的质子之间的COSY关联允许H-6质子的指定，该H-6质子进而显示出与被指定为H-7的在δH 1.29和1.31处的质子的关联。然后根据HSQC-DEPT数据确定关于C-6(δC 22.2)和C-7(δC 41.7)的13C化学位移。在H-9(δH 0.88)与在δH 1.67和1.70处的质子之间的COSY关联允许H-11质子的指定，该H-11质子进而显示出与被指定为H-12质子的在δH 1.98和2.28处的质子的COSY关联。然后使用HSQC-DEPT数据来指定C-11(δC 20.5)和C-12(δC 37.3)。在δH 5.02和5.67处观察到的烯属质子显示出与C-13(δC 86.7)处的季碳的HMBC关联并且因此被指定为H-17(经由HSQC-DEPT为δC104.8)。次甲基质子H-9显示与分别指定为C-8、C-14和C-15的δC 42.3、44.3和47.6处的碳的HMBC关联。使用HSQC-DEPT数据指定在C-14(δH 1.78和2.59)和C-15(δH 2.04)的1H化学位移。从H-9到C-11和H-12到C-9的另外的HMBC关联进一步证实了上面做出的指定。从H-14观察到的与在δC 154.0处的季碳的HMBC关联允许C-16的指定以完成中心核的指定。
使用在NOESY谱中观察到的关联来指定中心二萜核的相对立体化学。在该NOESY谱中，在H-14与H-20之间观察到的NOE关联表明H-14和H-20在环的同一面上。类似地，在H-9与H-5以及H-5与H-18之间观察到NOE关联。没有观察到H-9与H-14之间的NOE关联。因此，NOESY数据表明，如下图所示的与H-14和H-20相比，H-5、H-9和H-18在环的相对面上。这些数据因此表明，在中央核中的相对立体化学在糖基化步骤过程中被保留。
对于reb I，1H-13C HSQC-DEPT数据的分析证实了五个端基质子的存在。在292K在δH 6.14(δC 95.3)、5.57(δC 104.6)、5.38(δC 104.7)、5.29(δC105.0)、和5.06(δC 98.0)处获得的光谱中分辨所有五个端基质子。此外，所有五个端基质子具有大的偶联(7.7Hz-8.2Hz)，表明它们具有β-构型。在δH 6.14处观察到的端基质子显示出与C-19的HMBC关联，表明它对应于GlcI的端基质子。类似地，在δH 5.06处观察到的端基质子显示出与C-13的HMBC关联，从而允许它被指定为GlcII的端基质子。
GlcI端基质子(δH 6.14)显示出与在δH 4.18处的被指定为GlcI H-2的质子的COSY关联。由于数据重叠，COSY谱不允许H-3或H-4的指定。因此，使用GlcI端基质子的选择性照射以若干不同的混合时间进行一系列的1D TOCSY实验。除了确认对于GlcI H-2的指定之外，TOCSY数据显示了在δH 4.27、4.25、以及3.93处的质子分别被指认为H-3、H-4、以及H-5。在TOCSY谱中在δH 4.37处观察到的质子被指定为GlcI H-6质子之一。δH 4.27处的其他H-6亚甲基质子基于从H-5到δH 4.27的COSY关联进行指定。使用HSQC-DEPT数据，指定关于GlcIC-2(δC 72.5)、C-3(δC 89.4)、C-4(δC 69.2)、C-5(δC 78.2-78.8)、和C-6(δC 61.7)的13C化学位移。H-1至C-3和H-4至C-6的HMBC关联进一步证实了以上做出的指定，从而完成GlcI的指定。
在四个剩余的未指定的葡萄糖部分中，基于HMBC关联，将一个指定为GlcI的C-3处的取代基。在δH 5.29处观察到的端基质子显示出与GlcI C-3的HMBC关联并且被指定为GlcV的端基质子。还观察到了从GlcI H-3至GlcV的异头碳的相反HMBC关联。
关于在C-19处的糖苷的1H和13C化学位移的总结显示在下列表中：
1H和13C NMR(500和150MHz，吡啶-d5)，莱苞迪苷I C-19糖苷的指定。
在78.2-78.8(78.16、78.47、78.50、78.55和78.77)范围内的五个碳共振，因此不能明确地指定化学位移。
用来指定C-19糖苷区域的关键HMBC和COSY关联的总结提供如下：
1H-13C HMBC关联
1H-1H COSY关联
GlcV(δH 5.29)的端基质子显示出与在δH 4.04处的被指定为GlcV H-2的质子的COSY关联。然后使用HSQC-DEPT数据指定GlcV C-2(δC 75.3或75.5)。由于数据重叠，COSY谱不允许剩余质子的指定。因此，使用GlcV端基质子的选择性照射以若干不同的混合时间进行一系列的1D TOCSY实验。除了确认GlcV H-2的指定之外，TOCSY数据允许指定GlcV H-3(δH4.27)、H-4(δH 4.12)、和H-5(δH 4.05)。在TOCSY谱中在δH4.56处观察到的质子被指定为GlcV H-6质子之一。δH 4.26处的其他H-6亚甲基质子基于从H-5到δH 4.26的COSY关联进行指定。使用HSQC-DEPT数据指定关于GlcV C-3(δC 78.2-78.6)、C-4(δC 71.5或71.6)、C-5(δC78.5或78.6)和C-6(δC 62.3或62.4)的13C化学位移，从而完成GlcV的指定。
以类似的方式进行GlcII的指定。GlcII异头质子(δH 5.06)显示与被指认为GlcIIH-2的在δH 4.34处的质子的COSY关联并且进而显示了与在δH 4.20(GlcII H-3)处的质子的COSY关联，这显示了与在δH 3.97(GlcII H-4)处的质子的附加的关联，这还显示了与在δH3.80(GlcII H-5)处的质子的COSY关联。H-5显示与在指定为H-6的δH 4.18和4.49处的质子的另外的COSY关联。因此，还使用GlcII端基质子的选择性照射以若干不同的混合时间进行一系列的1D TOCSY实验。TOCSY数据证实了上述质子指定。关于GlcII C-2(δC 80.2)、C-3(δC87.5)、C-4(δC 70.1)、C-5(δC 77.6)、和C-6(δC 62.5)的13C化学位移的指定是基于HSQC-DEPT数据。从GlcII H-3到C-2和C-4以及还有从GlcII H-4到C-3、C-5和C-6的HMBC关联证实了以上做出的指定，从而完成GlcII的指定。
基于HMBC关联，两个剩余的未指定的葡萄糖部分被指定为在GlcII的C-2和C-3处的取代基。在δH 5.57处观察到的端基质子显示出与GlcII C-2的HMBC关联并且被指定为GlcIII的端基质子。在δH 5.38处观察到的端基质子显示出与GlcII C-3的HMBC关联并且被指定为GlcIV的端基质子。还观察到从GlcII H-2到GlcIII的端基碳以及从GlcII H-3到GlcIV的端基碳的相互HMBC关联。
GlcIII(δH 5.57)的端基质子显示出与在δH 4.21处的被指定为GlcIII H-2的质子的COSY关联。然后使用HSQC-DEPT数据指定GlcIII C-2(δC76.3)。由于数据重叠，COSY谱不允许剩余质子的指定。因此，使用GlcIII端基质子的选择性照射以若干不同的混合时间进行一系列的1D TOCSY实验。除了确认GlcIII H-2的指定以外，TOCSY数据允许指定GlcIII H-3(δH4.27)、H-4(δH 4.25)和H-5(δH 3.94)。在TOCSY谱中在δH 4.41和δH 4.53处观察到的质子被指定为GlcIII H-6质子。使用HSQC-DEPT数据指定关于C-3(δC 78.2-78.6)、C-4(δC 72.1)、C-5(δC 78.2-78.8)和C-6(δC 63.1)的13C化学位移。从H-5到δC 63.1处的碳的HMBC关联进一步证实了GlcIII C-6的指定，从而完成GlcIII的指定。
GlcIV(δH 5.38)的端基质子显示出与在δH 4.01处的被指定为GlcIV H-2的质子的COSY关联。然后使用HSQC-DEPT数据指定GlcIV C-2(δC 75.3或75.5)。由于数据重叠，COSY谱不允许剩余质子的指定。因此，使用GlcIV端基质子的选择性照射以若干不同的混合时间进行一系列的1D TOCSY实验。除了确认GlcIV H-2的指定之外，1D TOCSY数据允许指定H-3(δH4.28)、H-4(δH 4.11)、H-5(δH 4.13)和H-6(δH 4.25和4.58)。在δH 4.25处的质子也显示与δH4.58的COSY关联，进一步证实这些质子属于H-6。使用HSQC-DEPT数据指定关于C-3(δC78.2-78.6)、C-4(δC72.1)、C-5(δC 78.2-78.6)和C-6(δC 62.3或62.4)的13C化学位移。H-4至C-6和H-5至C-1的HMBC关联进一步证实GlcIV C-6的指定，从而完成GlcIV的指定。
关于在C-13处的糖苷的1H和13C化学位移的总结在以下示出：
1H和13C NMR(500和150MHz，吡啶-d5)，莱苞迪苷I C-13糖苷的指定。
在78.2-78.8(78.16、78.47、78.50、78.55和78.77)范围内的五个碳共振，因此不能明确地指定化学位移。
用来指定C-13糖苷区域的关键HMBC和COSY关联的总结提供如下：
1H-13C HMBC关联
1H-1H COSY关联
莱鲍迪苷I的NMR和MS分析允许该结构完全指定为(13-[(2-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基)氧基]对映-贝壳杉-16-烯-19-酸(3-O-β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖基)酯]。
实例24
莱鲍迪苷I的感官特征
评价莱鲍迪苷I以确定其感觉特征，包括与莱鲍迪苷M相比。
样品制备。在水基质中以400ppm的浓度制备样品。进行分析以确定样品的实际浓度。
方法
七位专家组成员参与了莱鲍迪苷I和莱鲍迪苷M的测试。在约4℃下提供样品。指示专家组成员喝1口样品(10mL)，在口中保持5秒，吐出并评价味道属性，如下所述。在每个样品之间设置5分钟的间歇，并且指示专家组成员用至少1口无盐饼干和2口滤过水来清洗他们的味觉。样品是随机化的并且在此时段中每个样品以重复的方式存在。
评价的属性包括：甜味强度(在5秒过程内在口中最大甜度水平)；苦味强度(在5秒过程内在口中最大苦味水平)；总体最大甜味强度(从喝一口到1分钟时间经历的最大甜度强度)；总体最大苦味强度(从喝一口到1分钟时间经历的最大苦味强度)；其他强度(除甜味和苦味之外的任何味道、芳香或口感的强度(例如，金属、塑料、甘草等))；甜味存留强度(吐出样品后1分钟的甜味强度)；和苦后味强度(吐出样品后1分钟的苦味强度)。
使用3因素ANOVA分析针对每个属性来比较甜味剂，并且在95％CL下测定显著性。Fishers LSD用于比较平均分数之间的显着差异。
结果
莱鲍迪苷I的甜味强度、总体最大甜味强度和甜味存留强度较低。
表1：在400ppm下与莱鲍迪苷M相比莱鲍迪苷I的感官属性
实施例25：饮料配制品
调味红茶：将含有浓度为275ppm的Reb A的调味的零卡路里红茶饮料的味道特性与具有浓度为275ppm的Reb I的可比较的调味的零卡路里红茶饮料进行比较。含有Reb I的饮料被确定为回味更清新，具有较少的甜味存留和更丰满的总甜味分布。
增强水：将含有浓度为200ppm的Reb A的零卡路里增强水饮料的味道特性与含有浓度为200ppm的Reb I的可比较的零卡路里增强水饮料进行比较。含Reb I的饮料回味更清新，并具有减少的甜味存留和更丰满的总甜味味道品质。
酸柠檬调味的发泡饮料：在零卡路里的酸柠檬调味的发泡饮料基料中评价Reb I水平，以确定增加甜味的效果。制备酸柠檬调味的发泡饮料的样品，其中Reb I的量在400与750ppm(按50ppm增量)之间并且阿洛酮糖为3.5％。所有样品的味道显著优于可比较的含有Reb A的配制品，导致具有增加的甜味强度且不具有负后味特征的更清新的特征曲线。发现具有550ppm和600ppm Reb I的样品在甜味水平上与10.0Brix HFCS增甜的酸柠檬调味的发泡饮料配制品最接近。

Claims (34)

1.一种制备莱鲍迪苷I组合物的方法，包括：
a.使包含莱鲍迪苷A的起始组合物与能够将莱鲍迪苷A转化为莱鲍迪苷I的生物催化剂接触以提供包含莱鲍迪苷I的组合物。
2.如权利要求1所述的方法，其中该生物催化剂是UDP-糖基转移酶(UGT)。
3.如权利要求2所述的方法，其中该UGT是UGT76G1或其含有约75％氨基酸序列一致性或更高一致性的变体。
4.如权利要求3所述的方法，其中该UGT76G1变体选自下组，该组由以下各项组成：UGT76G1-R1-F12、UGT76G1-R2-B9和UGT76G1-R3-G3。
5.如权利要求3所述的方法，其中该UGT76G1变体包括一个或多个以下点突变：Q266E、P272A、R334K、G348P、L379G、S42A、F46I、I190L、S274G、I295M、K303G、F314S、K316R、K393R、V394I、I407V、N409K、N409R、Q425E、Q432E、S447A、S456L、I46L、I295M、S119A、S274G、K334R、F314S、K303G、K316R、K393R、I190L、Q425E、Q432E、N138G、V394I、F182L、V407I、A272P、V264C、E449D和A352G。
6.如权利要求5所述的方法，其中该UGT变体含有以下点突变：Q266E、P272A、R334K、G348P和L379G。
7.如权利要求5所述的方法，其中该UGT变体含有以下点突变：Q266E、P272A、R334K、G348P、L379G、S42A、F46I、I190L、S274G、I295M、K303G、F314S、K316R、K393R、V394I、I407V、N409K、N409R、Q425E、Q432E、S447A和S456L。
8.如权利要求5所述的方法，其中该UGT变体含有以下点突变：Q266E、P272A、R334K、G348P、L379G、S42A、F46I、I190L、S274G、I295M、K303G、F314S、K316R、K393R、V394I、I407V、N409K、N409R、Q425E、Q432E、S447A、S456L、I46L、I295M、S119A、S274G、K334R、F314S、K303G、K316R、K393R、I190L、Q425E、Q432E、N138G、V394I、F182L、V407I、A272P、V264C、E449D和A352G。
9.如权利要求2-8中任一项所述的方法，其中该UGT以选自纯化的、粗裂解物或全细胞悬液的形式提供。
10.如权利要求2-8中任一项所述的方法，其中该UGT以微生物提供。
11.如权利要求1所述的方法，其中莱鲍迪苷A以纯形式提供。
12.如权利要求1所述的方法，其中莱鲍迪苷A以含有按重量计至少约1％的莱鲍迪苷A的甜菊醇糖苷混合物或甜叶菊提取物提供。
13.如权利要求12所述的方法，其中莱鲍迪苷A以含有按重量计至少约80％的莱鲍迪苷A的甜菊醇糖苷混合物或甜叶菊提取物提供。
14.如权利要求1所述的方法，其中该莱鲍迪苷I组合物包含按重量计大于约1％的莱鲍迪苷I。
15.如权利要求1所述的方法，进一步包括分离莱鲍迪苷I以提供分离的莱鲍迪苷I组合物。
16.如权利要求15所述的方法，进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I。
17.如权利要求15所述的方法，进一步包括纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供纯莱鲍迪苷I。
18.一种制备高度纯化的莱鲍迪苷I组合物的方法，包括：
a.使包含莱鲍迪苷A的起始组合物与UGT76G1或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体、和UDP-葡萄糖接触以形成包含莱鲍迪苷I的组合物，并且任选地通过提供蔗糖合酶和蔗糖来伴随地再循环UDP-葡萄糖；
b.分离莱鲍迪苷I以形成分离的莱鲍迪苷I组合物；并且，
c.纯化所分离的莱鲍迪苷I组合物以提供高度纯化的莱鲍迪苷I组合物。
19.如权利要求18所述的方法，其中该高度纯化的莱鲍迪苷I包含按重量计大于约80％的莱鲍迪苷I。
20.如权利要求18或19所述的方法，进一步包括：
a.使包含甜菊苷的组合物与UGT76G1和UDP-葡萄糖接触以提供包含莱鲍迪苷A的组合物，并且
b.分离莱鲍迪苷A。
21.如权利要求20所述的方法，进一步包括：
a.使包含甜叶悬钩子苷的组合物与UGT91D2或其具有约75％或更高氨基酸序列一致性的变体、和UDP-葡萄糖接触，以提供包含甜菊苷的组合物；并且
b.分离甜菊苷。
22.一种组合物，包含基于干基按重量计约1％至约99％的量的莱鲍迪苷I。
23.如权利要求22所述的组合物，包含基于干基按重量计大于约80％的量的莱鲍迪苷I。
24.如权利要求22所述的组合物，包含基于干基按重量计大于约95％的量的莱鲍迪苷I。
25.具有大于约99％的纯度的莱鲍迪苷I。
26.一种风味增强组合物，包含莱鲍迪苷I，该莱鲍迪苷I的量为当该风味增强组合物添加到消费品中时有效提供低于莱鲍迪苷I的阈值风味识别浓度的浓度。
27.一种甜味增强组合物，包含莱鲍迪苷I，该莱鲍迪苷I的量为当该甜味增强组合物添加到消费品中时有效提供低于莱鲍迪苷I的阈值甜味识别浓度的浓度。
28.如权利要求22-24或26-27中任一项所述的组合物，进一步包含一种或多种选自下组的添加剂，该组由以下各项组成：碳水化合物、多元醇、氨基酸及其相应盐、聚氨基酸及其相应盐、糖酸及其相应盐、核苷酸、有机酸、无机酸、包括有机酸盐和有机碱盐的有机盐、无机盐、苦味化合物、调味剂和调味成分、涩味化合物、蛋白质或蛋白质水解物、表面活性剂、乳化剂、增重剂、树胶、抗氧化剂、着色剂、类黄酮、醇、聚合物以及其组合。
29.如权利要求22-24或26-27中任一项所述的组合物，进一步包含一种或多种选自下组的功能性成分，该组由以下各项组成：皂苷、抗氧化剂、膳食纤维源、脂肪酸、维生素、葡糖胺、矿物质、防腐剂、水合剂、益生菌、益生元、体重管理剂、骨质疏松症管理剂、植物雌激素、长链伯脂肪族饱和醇、植物甾醇以及其组合。
30.如权利要求22-24或26-27中任一项所述的消费品，其中该消费品是选自下组，该组由以下各项组成：药物组合物、可食用凝胶混合物或组合物、牙科组合物、甜食、调味组合物、口香糖组合物、谷物组合物、焙烤食品、乳制品、桌面甜味剂组合物、饮料或饮料产品。
31.一种包含分离的和纯化的莱鲍迪苷I的消费品，其中该消费品是选自下组，该组由以下各项组成：药物组合物、可食用凝胶混合物和组合物、牙科组合物、甜食、调味组合物、口香糖组合物、谷物组合物、焙烤食品、乳制品、桌面甜味剂组合物、饮料或饮料产品。
32.一种包含莱鲍迪苷I的饮料。
33.一种包含甜味剂组合物的饮料，该甜味剂组合物包含莱鲍迪苷I。
34.如权利要求29所述的，其中该甜味剂组合物进一步包含选自下组的化合物，该组由以下各项组成：莱鲍迪苷A、B、C、D、E、M、N、O、M2、D2、糖基化甜菊醇糖苷、罗汉果苷V、赤藓糖醇、阿洛酮糖、甜叶菊提取物、罗汉果提取物及其组合。
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