CN106718894A - 一种水藤菜组培快繁系统 - Google Patents

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陈磊
刘玉英
罗云米
陆景伟
向华丰
刘吉振
何叶
张世才
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

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Abstract

本发明涉及一种水藤菜组培快繁系统，包括高压灭菌锅、超净工作台、水浴锅、烧杯、容量瓶、量筒、刻度移液管、玻璃棒、组培瓶、分析天平、酒精灯、镊子、剪刀、酸度计。本发明的水藤菜组培快繁系统以水蕹菜的嫩茎为试材，开展水蕹菜组织培养无性系研究，旨在为早春大规模生产优质水蕹菜种苗提供关键技术。

Description

一种水藤菜组培快繁系统
技术领域
本发明属于植物培养技术领域，尤其涉及一种水藤菜组培快繁系统。
背景技术
蕹菜又称空心菜、藤菜、竹叶菜，是旋花科番薯属一年生或多年蔓生草本植物，因其梗中空而得名，原产中国华南、西南地区的沼泽地带及东南亚地区，性喜温暖湿润，耐炎热，不耐霜冻，生长速度快，采收期长，病虫害少，产量高，是夏、秋季节重要的叶类蔬菜。小叶水蕹菜具有叶片短小、节间短，茎杆粗壮，质地脆嫩等特点。近年来，西南地区水蕹菜种植面积日益增加，且菜农对水蕹菜的早春栽培获得了较好的经济效益。由于水蕹菜在西南地区不能开花或较少开花，大多依靠种藤无性繁殖留种，从而易导致水蕹菜体内病毒的侵染，抗逆境能力削弱，种藤存活率下降，产量及品质降低。
传统茎蔓扦插繁殖种苗具有以下缺点：保留老茎杆受气候环境条件影响，种蔓成活率低，繁殖速度慢；栽培季节性强，扦插繁殖速度慢，缓苗时间较长，推迟上市时间。长期无性繁殖易受到交种病原苗的侵染，一些病毒在种苗上长期存在和积累，导致种苗退化严重影响空心菜的产量和品质。
发明内容
本发明为解决现有的传统茎蔓扦插繁殖种苗保留老茎杆受气候环境条件影响，种蔓成活率低，繁殖速度慢；栽培季节性强，扦插繁殖速度慢，缓苗时间较长，推迟上市时间。长期无性繁殖易受到交种病原苗的侵染，一些病毒在种苗上长期存在和积累，导致种苗退化严重影响空心菜的产量和品质的技术问题而提供一种水藤菜组培快繁系统。
本发明为解决公知技术中存在的技术问题所采取的技术方案是：
本发明提供的水藤菜组培快繁方法，所述水藤菜组培快繁方法包括以下步骤：
步骤一，选择健康、无病害病含有节间的茎段1～2cm；
步骤二，田间取回的藤菜先用自来水清洗，再取带有叶芽的茎段，进行消毒处理；
步骤三，外植体灭菌：外植体用75％酒精浸10秒，0.2％升汞浸5～8分钟，50倍84消毒液浸6～8分钟；0.1％升汞浸5分钟，50倍84消毒液，浸6～8分钟；益培隆消毒液0.03％，浸10～20分钟；
步骤四，外植体接种：每用一次消毒液后立即用无菌水清洗2～3次，然后在超净工作台上修剪茎段，每节代叶芽接入MS培养基中，每个培养皿接4～12个外植体；
步骤五，快繁和转瓶培养，外植体在培养基中，20～30天长成3～5cm，有3～4个叶片的小苗，除去污染瓶苗，在超净工作台中每苗在剪成2～3个带叶片的节段，在转接到新的培养基中；
步骤六，瓶苗繁殖2～3代再将小苗转入生根培养基中，MS培养基除去生长素和激动素，另加0.5％的活性炭在上述环境中加强光照促进壮苗生长。
进一步，无菌苗的子叶展开后，剪去1/3的胚根，在插入新的培养基中培养；以上瓶苗在25～28度，每天光照12小时，光照强度3000到4000勒克斯的环境条件下进行培养。
进一步，当瓶苗生根后，应作适应性炼苗，把瓶苗放在准备移栽的地方，1～2天后再逐步打开瓶盖；炼苗后瓶内注水取出小苗在放入0.5％的多菌灵溶液中，清洗根部的培养基，取出晾干后栽入基质的穴盘中，同时浇透水，在保湿，保温，通风透光的环境中生长经过10～15天后移栽到大田。
本办法吗的另一目的在于提供一种所述水藤菜组培快繁方法的水藤菜组培快繁系统，所述水藤菜组培快繁系统包括：
高压灭菌锅：用于培养基、蒸馏水、和各种器具的灭菌消毒，高压蒸汽灭菌时，控制的温度、时间为121℃、20分钟；
超净工作台：用于组织培养的无菌操作；
水浴锅：用于加热生化试剂时，溶解琼脂、化学药品；
烧杯：用于存放、溶解化学试剂，规格为50mL、100mL；
容量瓶：用于标准溶液的配制，规格为100mL、1000mL；
量筒：用于量取溶液，规格为50mL、100mL；
刻度移液管：用于量取溶液，规格为1mL、5mL。
玻璃棒：用于化学试剂溶解搅拌；
组培瓶：用于植物外植体的无菌培养，由瓶体、瓶盖、调节封盖、透气帘组成；
分析天平：用于称量化学试剂，称量精度为0.001克；
酒精灯：用于金属接种工具的高温灭菌；
镊子：用于植物外植体的转移、接种；
剪刀：用于剪取植物外植体材料和接种；
酸度计：用于植物组织培养基pH值的调整。
本发明具有的优点和积极效果是：该水藤菜组培快繁系统以水蕹菜的嫩茎为试材，开展水蕹菜组织培养无性系研究，旨在为早春大规模生产优质水蕹菜种苗提供关键技术。
附图说明
图1是本发明实施例提供的水藤菜组培快繁方法的流程图。
具体实施方式
为能进一步了解本发明的发明内容、特点及功效，兹例举以下实施例，并配合附图详细说明如下。
下面对本发明的结构作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的水藤菜组培快繁方法包括以下步骤：
S101：选择健康、无病害病含有节间的茎段1～2cm；
S102：田间取回的藤菜先用自来水清洗，再取带有叶芽的茎段，进行消毒处理；
S103：外植体灭菌：外植体用75％酒精浸10秒，0.2％升汞浸5～8分钟，50倍84消毒液浸6～8分钟；0.1％升汞浸5分钟，50倍84消毒液，浸6～8分钟；益培隆消毒液0.03％，浸10～20分钟；
S104：外植体接种：每用一次消毒液后立即用无菌水清洗2～3次，然后在超净工作台上修剪茎段，每节代叶芽接入MS培养基中，每个培养皿接4～12个外植体；
S105：快繁和转瓶培养，外植体在培养基中，20～30天长成3～5cm，有3～4个叶片的小苗，除去污染瓶苗，在超净工作台中每苗在剪成2～3个带叶片的节段，在转接到新的培养基中；
S106：瓶苗繁殖2～3代再将小苗转入生根培养基中，MS培养基除去生长素和激动素，另加0.5％的活性炭在上述环境中加强光照促进壮苗生长。
本发明实施例提供的水藤菜组培快繁系统包括：
高压灭菌锅：用于培养基、蒸馏水、和各种器具的灭菌消毒，高压蒸汽灭菌时，控制的温度、时间为121℃、20分钟。
超净工作台：用于组织培养的无菌操作。
水浴锅：用于加热生化试剂时，溶解琼脂、化学药品等。
烧杯：用于存放、溶解化学试剂等，规格为50mL、100mL。
容量瓶：用于标准溶液的配制，规格为100mL、1000mL。
量筒：用于量取一定体积的溶液，规格为50mL、100mL。
刻度移液管：用于量取一定体积的溶液，规格为1mL、5mL。
玻璃棒：用于化学试剂溶解搅拌。
组培瓶：用于植物外植体的无菌培养，由瓶体、瓶盖、调节封盖、透气帘组成。
分析天平：用于称量化学试剂，称量精度为0.001克。
酒精灯：用于金属接种工具的高温灭菌。
镊子：用于植物外植体的转移、接种。
剪刀：用于剪取植物外植体材料和接种。
酸度计：用于植物组织培养基pH值的调整。
本发明实施例提供的水藤菜组培快繁方法包括以下步骤：
1、试验材料选取：选择健康、无病害病含有节间的茎段1～2cm。
2、预处理：田间取回的藤菜先用自来水清洗，再取带有叶芽的茎段，进行消毒处理。
3、外植体灭菌：外植体用75％酒精浸10秒，0.2％升汞浸5～8分钟，50倍“84”消毒液浸6～8分钟。0.1％升汞浸5分钟，50倍“84”消毒液，浸6～8分钟。●益培隆消毒液0.03％(浸10～20分钟)。
4、外植体接种：每用一次消毒液后立即用无菌水清洗2～3次，然后在超净工作台上修剪茎段，每节代叶芽接入MS培养基中(6BA0.5，NAA0.2)，每个培养皿接4～12个外植体。
5、快繁和转瓶培养
外植体在培养基中，20～30天长成3～5cm，有3～4个叶片的小苗，除去污染瓶苗，在超净工作台中每苗在剪成2～3个带叶片的节段，在转接到新的培养基中(ms培养基除去NAA)。
无菌苗的子叶展开后，剪去1/3的胚根，在插入新的培养基中培养。以上瓶苗在25～28度，每天光照12小时，光照强度3000到4000勒克斯的环境条件下进行培养。
6、生根炼苗及移栽。
瓶苗扩繁到一定数量后(最好繁殖2～3代)再将小苗转入生根培养基中(MS培养基除去生长素和激动素，另加0.5％的活性炭在上述环境中加强光照促进壮苗生长。
当瓶苗生根后，应作适应性炼苗，把瓶苗放在准备移栽的地方，1～2天后再逐步打开瓶盖。炼苗后瓶内注水取出小苗在放入0.5％的多菌灵溶液中，仔细清洗根部的培养基，取出晾干后栽入基质的穴盘中，同时浇透水，在保湿，保温，通风透光的环境中生长经过10～15天后移栽到大田。
以上所述仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

Claims (4)

1.一种水藤菜组培快繁方法，其特征在于，所述水藤菜组培快繁方法包括以下步骤：
步骤一，选择健康、无病害病含有节间的茎段1～2cm；
步骤二，田间取回的藤菜先用自来水清洗，再取带有叶芽的茎段，进行消毒处理；
步骤三，外植体灭菌：外植体用75％酒精浸10秒，0.2％升汞浸5～8分钟，50倍84消毒液浸6～8分钟；0.1％升汞浸5分钟，50倍84消毒液，浸6～8分钟；益培隆消毒液0.03％，浸10～20分钟；
步骤四，外植体接种：每用一次消毒液后立即用无菌水清洗2～3次，然后在超净工作台上修剪茎段，每节代叶芽接入MS培养基中，每个培养皿接4～12个外植体；
步骤五，快繁和转瓶培养，外植体在培养基中，20～30天长成3～5cm，有3～4个叶片的小苗，除去污染瓶苗，在超净工作台中每苗在剪成2～3个带叶片的节段，在转接到新的培养基中；
步骤六，瓶苗繁殖2～3代再将小苗转入生根培养基中，MS培养基除去生长素和激动素，另加0.5％的活性炭在上述环境中加强光照促进壮苗生长。
2.如权利要求1所述的水藤菜组培快繁方法，其特征在于，无菌苗的子叶展开后，剪去1/3的胚根，在插入新的培养基中培养；以上瓶苗在25～28度，每天光照12小时，光照强度3000到4000勒克斯的环境条件下进行培养。
3.如权利要求1所述的水藤菜组培快繁方法，其特征在于，当瓶苗生根后，应作适应性炼苗，把瓶苗放在准备移栽的地方，1～2天后再逐步打开瓶盖；炼苗后瓶内注水取出小苗在放入0.5％的多菌灵溶液中，清洗根部的培养基，取出晾干后栽入基质的穴盘中，同时浇透水，在保湿，保温，通风透光的环境中生长经过10～15天后移栽到大田。
4.一种如权利要求1所述水藤菜组培快繁方法的水藤菜组培快繁系统，其特征在于，所述水藤菜组培快繁系统包括：
高压灭菌锅：用于培养基、蒸馏水、和各种器具的灭菌消毒，高压蒸汽灭菌时，控制的温度、时间为：121℃、20分钟；
超净工作台：用于组织培养的无菌操作；
水浴锅：用于加热生化试剂时，溶解琼脂、化学药品；
烧杯：用于存放、溶解化学试剂，规格为50mL、100mL；
容量瓶：用于标准溶液的配制，规格为100mL、1000mL；
量筒：用于量取溶液，规格为50mL、100mL；
刻度移液管：用于量取溶液，规格为1mL、5mL。
玻璃棒：用于化学试剂溶解搅拌；
组培瓶：用于植物外植体的无菌培养，由瓶体、瓶盖、调节封盖、透气帘组成；
分析天平：用于称量化学试剂，称量精度为0.001克；
酒精灯：用于金属接种工具的高温灭菌；
镊子：用于植物外植体的转移、接种；
剪刀：用于剪取植物外植体材料和接种；
酸度计：用于植物组织培养基pH值的调整。
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