CN106645709A - 一种双竞争法适配体检测试纸条及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医学检测领域，具体而言，涉及一种双竞争法适配体检测试纸条及其应用。所述试纸条包括样品吸收垫、标记物垫、反应膜、吸水垫和底板；所述标记物垫包被有检测探针，所述检测探针为标有用于显示信号强度的指示剂的检测靶标物的适配体；所述反应膜上设置有检测区和质检区；所述检测区固定包被有靶标物抗原；所述质检区固定包被有质控探针；所述质控探针的核酸序列与所述适配体的核酸序列互补。

Description

一种双竞争法适配体检测试纸条及其应用

技术领域

本发明涉及生物医学检测领域，具体而言，涉及一种双竞争法适配体检测试纸条及其应用。

背景技术

核酸适配体(Aptamer)是一种单链的寡核苷酸，多为单链DNA，长度在10～100bp之间，通常是利用特异的靶标从随机序列的寡核苷酸文库中通过体外筛选获得，作为一种新型生物识别分子，可以与靶标物质高亲和力特异性结合。目前文献报道的已经筛选到适配体的靶标有几百种，建立的基于适配体的检测方法主要包括比色法、荧光法、电化学等上百种方法，但到目前为止基于适配体的商品化的检测产品还几乎没有。

胶体金免疫层析试纸条技术是目前最常见最成熟也最受欢迎的快速检测产品形式之一，被广泛应用与临床诊断、食品安全以及环境分析等，比如著名的早孕试纸条、瘦肉精试纸条等。适配体作为一种特异性的识别分子，也可以被用来开发基于试纸条形式的快速检测产品，但是目前有关适配体试纸条的文献报道却很少，仅有几篇文献。这些文献一般采用的原理是在试纸条检测线处固定适配体的互补链，样品中含有靶标时，标记有荧光或胶体金的适配体和样品中的靶标结合，则不能和试纸条检测线处的互补链结合，检测线处荧光信号降低或不出信号；反之，样品中没有靶标时，标记有荧光或胶体金的适配体流经试纸条时和检测线处的互补链结合，检测线处出现较强的信号，从而根据荧光或胶体金信号大小判断样品中靶标含量。

然而，在实际的应用中，由于该检测方法的原理主要是基于适配体-靶标和适配体-互补链的竞争来实现的，因此很难设计比较可靠的检测方法。由于不同适配体长度不同，因此其互补链的长度也不同，从而适配体与互补链的的亲和力也不同。由于适配体链一般比较长，所以适配体与互补链的亲和力经常大于适配体与靶标的亲和力，从而导致无法检测；目前文献的解决方法都是通过将互补链截短，仅将部分互补链固定到检测线上，从而降低互补链和适配体的亲和力，但是这种方法需要繁杂的摸索，且互补链长度过短时适配体无法与互补链杂交，从而也导致无法检测。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种双竞争法适配体检测试纸条，以解决上述问题。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种双竞争法适配体检测试纸条，所述试纸条包括底板和依次设置在底板上的样品吸收垫、标记物垫、反应膜以及吸水垫；

所述标记物垫包被有检测探针，所述检测探针为标有用于显示信号强度的指示剂的检测靶标物的适配体；

所述反应膜上设置有检测区和质检区；

所述检测区固定包被有靶标物抗原；

所述质检区固定包被有质控探针；所述质控探针的核酸序列与所述适配体的核酸序列互补。

本发明这种双竞争模式适配体试纸条具有设计简单、灵敏度高、特异性强、线性范围广等优点，且实验条件也更简单，摸索起来更容易。

优选的，如上所述的双竞争法适配体检测试纸条，当所述靶标物为有机物大分子靶标时，所述靶标物抗原即为靶标物本身；

当所述靶标物为无机小分子靶标时，所述靶标物抗原为所述无机小分子靶标与载体蛋白的偶联物。

本发明所指的大分子是指可以直接固定到膜上并暴露抗原表位的物质，小分子是指需要通过偶联载体蛋白才能固定到膜上并暴露抗原表位的物质。

优选的，如上所述的双竞争法适配体检测试纸条，所述载体蛋白包括酪蛋白、牛血清白蛋白或鸡卵清白蛋白。

鸡卵清白蛋白(Ovalbumin，OVA)由386个氨基酸组成，分子量约43Kd。OVA作为载体蛋白可以协助小分子物质固定到硝酸纤维素膜上并暴露其抗原表位，从而利于抗原与适配体的结合。

同样的，载体蛋白也可选用酪蛋白(Casein)或牛血清白蛋白(BSA)等。

优选的，如上所述的双竞争法适配体检测试纸条，所述质控探针通过末端修饰生物素-亲和素固定到所述质控区。

优选的，如上所述的双竞争法适配体检测试纸条，所述显示信号强度的指示剂包括荧光物质、量子点、地高辛标记探针、生物素、放射性同位素、电子致密物质、胶体金或酶中的任一种。

优选的，如上所述的双竞争法适配体检测试纸条，所述荧光物质包括Alexa 350、Alexa 405、Alexa 430、Alexa 488、Alexa 555、Alexa 647、AMCA、氨基吖啶、BODIPY 630/650、BODIPY 650/665、BODIPY-FL、BODIPY-R6G、BODIPY-TMR、BODIPY-TRX、5-羧基-4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基荧光素、5-羧基-2′，4′，5′，7′-四氯荧光素、5-羧基荧光素、5-羧基罗丹明、6-羧基罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、Cascade Blue、Cy2、Cy3、Cy5、Cy7、6-FAM、丹磺酰氯、荧光素、HEX、6-JOE、NBD(7-硝基苯并-2-氧杂-1，3-二唑)、Oregon Green 488、OregonGreen 500、Oregon Green514、Pacific Blue、邻苯二甲酸、对苯二甲酸、间苯二甲酸、甲酚固紫、甲酚蓝紫、亮甲酚蓝、对氨基苯甲酸、赤藓红、酞菁、偶氮甲碱、花青、黄嘌呤、琥珀酰荧光素、稀土金属穴状化合物、三双吡啶基二胺铕、铕穴状化合物或螯合物、二胺、双花青苷、La Jolla蓝染料、别藻蓝蛋白、allococyanin B、藻蓝蛋白C、藻蓝蛋白R、硫胺、藻红青蛋白、藻红蛋白R、REG、罗丹明绿、罗丹明异硫氰酸酯、罗丹明红、ROX、TAMRA、TET、TRIT(四甲基罗丹明异硫醇)、四甲基罗丹明和德克萨斯红中的任一种。

优选的，如上所述的双竞争法适配体检测试纸条，所述放射性同位素包括¹¹⁰In、¹¹¹In、¹⁷⁷Lu、¹⁸F、⁵²Fe、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁸⁶Y、⁹⁰Y、⁸⁹Zr、⁹⁴mTc、⁹⁴Tc、⁹⁹mTc、¹²⁰I、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³¹I、^154-158Gd、³²P、¹¹C、¹³N、¹⁵O、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、⁵¹Mn、⁵²mMn、⁵⁵Co、⁷²As、⁷⁵Br、⁷⁶Br、⁸²mRb和⁸³Sr中的任一种。

优选的，如上所述的双竞争法适配体检测试纸条，所述酶包括辣根过氧化酶、碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶中的任一种。

如上所述的双竞争法适配体检测试纸条在检测黄曲霉毒素B1中的应用。

如上所述的双竞争法适配体检测试纸条检测靶标物含量的方法，其特征在于，包括：

1)、用试纸条检测靶标物标准品，得到标准品在试纸条的检测区和质控区的信号强度比值，制作靶标标准品的浓度对应信号强度比值的线性回归曲线，计算回归方程；

2)、用试纸条检测待测样品，得到待测样品在试纸条的检测区和质控区的信号强度比值，根据步骤1)得到回归方程，得到所述待测样品中靶标物的含量。

用上述的试纸条检测靶标标准品或待测样品，得到标准品在所述试纸的检测区和质控区的荧光或显色信号比值包括如下步骤：取靶标标准品或待测样品滴加到试纸的样品吸收垫上，10分钟后，将试纸条放入试纸条检测仪器ESEQuant-LR3中进行检测，分别测定检测区和质控区的荧光或显色信号强度；将检测区的荧光信号强度(T)比上质控区的荧光信号强度(C)，得到T/C值，为检测区和质控区的荧光信号比值。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1)、由于采用了双竞争法，在检测区固定靶标抗原，使得靶标-适配体与适配体-靶标抗原的亲和力一致，T线可以正确反映样品中靶标的含量，避免了原来由于适配体互补链亲和力过大而无法设计试纸条或检测结果不准确不稳定的问题；

2)、变原来由于适配体互补链亲和力过大需要繁琐优化不容易开发试纸条的劣势为优势，将适配体互补链固定到质控区，当适配体靶标复合物移动到质控区时，由于适配体与互补链结合力更强，因此复合物解离，适配体与互补链结合，作为第二重检测提高了检测的特异性；

3)、本方法采用T/C值对靶标浓度做标准曲线计算样品中的靶标含量，比单独用T线和C线计算提高了信噪比、灵敏度，扩大了检测范围；

4)、本发明采用双竞争模式进一步增强了本方法的可靠性，样品中靶标浓度高，则T线荧光强度弱C线强，若样品中样品浓度低，则T线荧光强度强C线弱，也就是说无论样品中是否含有靶标，T、C中至少有一条线荧光信号较强，也如果两条线均没有荧光，则表明试纸条失效或检测方法有误，需要重新测定；

5)、本双竞争模式适配体试纸条采用比值作为数据归一化方法，降低了不同纸条间不同操作人员乃至不同仪器扫描的实验误差，将不同纸条测得的样品值代入标准曲线，即可以达到精确定量的效果；

6)、由于采用了适配体作为识别分子，基于适配体对靶标的高亲和力和高特异性，因此本发明试纸条具有高灵敏高特异性的优点；

7)、核酸适配体具有非常好的热稳定性，因此本发明的试纸条还可以常温储运，具有货架期长、结果可靠等优点；

8)、本发明避免了传统的繁琐的互补链截短优化过程，直接采用抗原和互补链固定，使得适配体试纸条开发更简单，且性能更优异。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明提供的试纸条的结构示意图；

图2为本申请实施例中不同浓度AFB1水溶液下检测区和质控区处荧光强度检测结果图；

图3为本申请实施例中AFB1浓度与T/C值线性关系的标准曲线；

图4为申请实施例中用试纸条检测仪器ESEQuant-LR3分别测定不同物质检测区和质控区处的荧光强度，进而计算出的T/C值。

附图标记：

1 样品吸收垫；

2 标记物垫；

3 反应膜；

4 吸水垫；

5 底板；

6 检测区；

7 质控区；

8 待检靶标；

9 标有用于显示信号强度的指示剂的检测靶标物的适配体；

10 固定包被在检测区的靶标物抗原；

11 固定包被在质控区的质控探针。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例 检测黄曲霉毒素B1试纸条的制备及在检测黄曲霉毒素B1(AFB1)中的应用

一、检测黄曲霉毒素B1试纸条的制备

1、检测探针和质控探针的合成

分别设计合成荧光素标记的检测探针和生物素标记的质控探针。

其中检测探针为荧光素Cy5标记的黄曲霉毒素B1适配体；黄曲霉毒素B1适配体可以和检测区的黄曲霉毒素B1半抗原结合，具体序列如下：

5'-Cy5-GTT-GGG-CAC-GTG-TTG-TCT-CTC-TGT-GTC-TCG-TGC-CCT-TCG-CTA-GGC-CCA-CA-3′

质控探针为生物素标记的黄曲霉毒素B1适配体的互补序列，可以与检测探针适配体序列通过碱基互补结合。

质控探针的核酸序列为：

5'-biotin-TGT-GGG-CCT-AGC-GAA-GGG-CAC-GAG-ACA-CAG-AGA-GAC-AAC-ACG-TGC-CCA-AC-3'

2、AFB1半抗原和载体蛋白BSA的偶联物AFB1-BSA制备

首先经过肟化反应制备AFB1肟(AFB1-O)；然后用碳二亚胺法制备AFB1人工抗原，然后与阳离子化牛血清蛋白(C-BSA)的反应得到偶联产物，即偶联物AFB1-BSA。

3、制备试纸条

1)、标记物垫制备

将检测探针包被在标记物垫(上海杰一生物技术有限公司，JY-BX101)上(包被浓度为0.02μM)，得到包被检测探针的标记物垫,37度过夜烘干。

2)、反应膜制备

反应膜包括检测区和质控区。

将偶联物AFB1-BSA按照包被浓度为5μM包被在反应膜形成检测区；

质控探针为标记生物素的适配体的互补序列，其通过链酶亲和素与其上的生物素偶联形成共价键包被在反应膜上形成质控区，包被浓度为1μM。

3)、试纸条组装

试纸条由样品吸收垫(上海杰一生物技术有限公司，JY-BX111)、上述1)制备的包被检测探针的标记物垫、上述2)制备的反应膜、吸水垫依次按照顺序黏贴在底板上，且反应膜的检测区与标记物垫相邻，反应膜的检质控区与吸水垫相邻，如图1所示。

二、试纸条检测原理

如图1所示，当不含黄曲霉毒素B1的样品加入样品吸收垫1上时，样品在毛细作用下流动到标记物垫2，并带着荧光标记的探针混合物一起继续向前流动。当流动到检测区6时，检测探针会与检测区6处固定的半抗原结合，经试纸条检测仪器ESEQuant-LR3检测出高荧光强度；由于固定在标记物垫2上的检测探针浓度较低，绝大部分被检测区结合，只有少数在层析作用下来不及结合的会流动到质控区7与质控探针11结合，因此质控区7出现很弱的荧光强度。

如图1所示，当含有黄曲霉毒素B1的样品加入样品吸收垫1上时，样品在毛细作用下流动到标记物垫2，黄曲霉毒素B1与检测探针(适配体)结合，并在毛细作用下一起向前流动。当流动到检测区6时，剩余未与黄曲霉毒素B1结合的检测探针会与半抗原结合；样品中的AFB1越多，结合的检测探针也就越来越多，剩余的游离检测探针就会越来越少，和检测区6半抗原结合的检测探针也就越少，荧光强度越低。反之，样品中的黄曲霉毒素B1越少，剩余的游离检测探针就会越来越多，和检测区6处半抗原结合也就越多，荧光强度越强，AFB1浓度与检测区6(T)的荧光强度成反比。和AFB1结合的检测探针在液体流动下急需上行至质控区7，由于质控区7适配体互补链和适配体的结合力大于适配体与靶标的结合力，因此检测探针适配体/AFB1复合物解离，检测探针适配体结合到质控区7互补链上，因此样品的靶标AFB1越多，带到质控区7供互补链结合的检测探针也就越多，荧光信号越强，反之样品中的AFB1越少，带到质控区7可供质控探针互补链结合的检测探针适配体就越少，荧光强度越低，因此样品中AFB1浓度与质控区7(C)荧光信号成反比。利用检测区6荧光强度(T)和质控区7荧光强度(C)比值对AFB1浓度做标准曲线，根据回归方程即可计算样品中的AFB1浓度。

三、试纸条检测方法

1)、黄曲霉毒素B1标准品滴加到试纸的样品吸收垫上，10分钟后，将试纸条放入试纸条检测仪器ESEQuant-LR3中，进行检测，分别测定检测区和质控区的荧光信号强度；将检测区的荧光信号强度(T)比上质控区的荧光信号强度(C)，得到T/C值，制作黄曲霉毒素B1标准品的浓度对应荧光信号T/C比值的线性回归曲线，计算回归方程；

2)、黄曲霉毒素标准品B1替换为待测样品，用上述试纸检测待测样品，记录在所述试纸的检测区和质控区的荧光信号比值，根据步骤(1)的回归方程，得到待测样品中黄曲霉毒素的浓度。

四、黄曲霉毒素B1试纸条在检测黄曲霉毒素B1中的应用

1、检测黄曲霉毒素B1灵敏度与线性范围研究

配制图2所示的不同浓度AFB1(Fermentek Ltd，AF028)水溶液，分别用实施例1制备的试纸条进行测定。

用试纸条检测仪器ESEQuant-LR3分别测定检测区和质控区处的荧光强度。结果如图2所示，可以看出，随着AFB1浓度增加，检测区处荧光强度逐渐变小，质控区荧光强度逐渐增加。利用检测区荧光强度与质控区荧光强度比值T/C值和黄曲霉毒素B1浓度对数做标准曲线(表1)，绘制检测黄曲霉毒素B1的标准曲线如图3所示，结果表明，试纸条的灵敏度0.1ng/mL；线性检测范围为0.1ng/mL-1000ng/mL，线性回归方程为y＝-1.8196x+5.2694，R²＝0.9846。

表1黄曲霉毒素B1标准品的检测结果

2、特异性研究

配制浓度为100ng/mL的AFB1溶液、100ng/mL的AFM1(百灵威科技有限公司)溶液、浓度为100ng/mL的黄曲霉毒素G1和G2(百灵威科技有限公司)、浓度为100ng/mL的黄曲霉毒素B2(百灵威科技有限公司)、浓度为100ng/mL的赭曲酶毒素Ochratoxin A(OTA,FermentekLtd)溶液、浓度为100ng/mL的玉米赤酶烯酮Zearalenone(ZEN，百灵威科技有限公司)溶液，浓度为100ng/mL的呕吐毒素Vomitoxin(DON，百灵威科技有限公司)，浓度为100ng/mL的磺胺二甲氧嘧啶(SDM，百灵威科技有限公司)溶液，浓度为100ng/mL的卡那霉素(KAN，百灵威科技有限公司)溶液，浓度为100ng/mL的铅离子溶液和空白样品分别用试纸条进行测定。

用试纸条检测仪器ESEQuant-LR3分别测定检测区和质控区处的荧光强度，计算T/C值。结果如图4所示，其中AFM1为AFB1代谢物，结构相似，表现出了近90％的交叉，而AFG1、AFB2、OTA、ZEN、DON等物质以及空白样品等均不能引起检测区处荧光变化，这也说明本方法对黄曲霉毒素B1/M1具有很好的特异性。

五、黄曲霉毒素B1试纸条在饲料样品中黄曲霉毒素B1检测中的应用

1、标准曲线绘制

同本实施例第一部分中检测黄曲霉毒素B1灵敏度与检测范围研究中的标准曲线方法，得到的回归方程为：0.1ng/mL-1000ng/mL，线性回归方程为y＝-1.8196x+5.2694，R²＝0.9846，为黄曲霉毒素B1标准曲线指数回归方程。

2、样品提取

选择5份经进口黄曲霉毒素B1酶联免疫试剂盒(美国ROMER试剂盒)测定为阳性或阴性的饲料样品，用本试纸条进行测定。首先称取2g样品于50mL离心管中，加入8mL正己烷和10mL70％的甲醇水溶液，振荡5min，室温4000转/分离心10min；去除上层液体，取0.5mL下层液体加入0.5mL去离子水，混匀，再取混匀液体0.5mL加入0.5mL35％的甲醇水溶液，振荡30s；取100μL进行分析(样品稀释倍数为20倍)。

3、样品测定

取上述制备好的待测样品100μL滴加到所述试纸的样品吸收垫上，观察样品层析沿着硝酸纤维素膜流动，直到被上面的吸水垫吸附；10分钟后，将试纸条放入试纸条检测仪器ESEQuant-LR3中，进行检测，分别测定检测区和质控区的荧光信号强度；将检测区的荧光信号强度(T)比上质控区的荧光信号强度(C)，将得到的计算值代入上述步骤1的回归方程，计算得到待测样品中黄曲霉毒素B1的浓度。

4、检测结果：

5份饲料实际样品检测结果如表2所示。从结果可以看出，本发明试纸条结果与进口试剂盒相比，回收率在92.7％～134.4％之间，回收率较好，说明本发明试纸条和进口试剂盒具有非常好一致性，因此可以用于实际样品中黄曲霉毒素B1的检测。

表2本发明试纸条检测玉米中AFB1结果与LC-MS方法比较

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种双竞争法适配体检测试纸条，其特征在于，所述试纸条包括底板和依次设置在底板上的样品吸收垫、标记物垫、反应膜以及吸水垫；

所述标记物垫包被有检测探针，所述检测探针为标有用于显示信号强度的指示剂的检测靶标物的适配体；

所述反应膜上设置有检测区和质检区；

所述检测区固定包被有靶标物抗原；

所述质检区固定包被有质控探针；所述质控探针的核酸序列与所述适配体的核酸序列互补。

2.根据权利要求1所述的双竞争法适配体检测试纸条，其特征在于，当所述靶标物为有机物大分子靶标时，所述靶标物抗原即为靶标物本身；

当所述靶标物为无机小分子靶标时，所述靶标物抗原为所述无机小分子靶标与载体蛋白的偶联物。

3.根据权利要求2所述的双竞争法适配体检测试纸条，其特征在于，所述载体蛋白包括酪蛋白、牛血清白蛋白或鸡卵清白蛋白。

4.根据权利要求1所述的双竞争法适配体检测试纸条，其特征在于，所述质控探针通过末端修饰生物素-亲和素固定到所述质控区。

5.根据权利要求1所述的双竞争法适配体检测试纸条，其特征在于，所述显示信号强度的指示剂包括荧光物质、量子点、地高辛标记探针、生物素、放射性同位素、电子致密物质、胶体金或酶中的任一种。

6.根据权利要求5所述的双竞争法适配体检测试纸条，其特征在于，所述荧光物质包括Alexa 350、Alexa 405、Alexa 430、Alexa 488、Alexa 555、Alexa 647、AMCA、氨基吖啶、BODIPY 630/650、BODIPY 650/665、BODIPY-FL、BODIPY-R6G、BODIPY-TMR、BODIPY-TRX、5-羧基-4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基荧光素、5-羧基-2′，4′，5′，7′-四氯荧光素、5-羧基荧光素、5-羧基罗丹明、6-羧基罗丹明、6-羧基四甲基罗丹明、Cascade Blue、Cy2、Cy3、Cy5、Cy7、6-FAM、丹磺酰氯、荧光素、HEX、6-JOE、NBD(7-硝基苯并-2-氧杂-1，3-二唑)、Oregon Green488、Oregon Green 500、Oregon Green5 14、Pacific Blue、邻苯二甲酸、对苯二甲酸、间苯二甲酸、甲酚固紫、甲酚蓝紫、亮甲酚蓝、对氨基苯甲酸、赤藓红、酞菁、偶氮甲碱、花青、黄嘌呤、琥珀酰荧光素、稀土金属穴状化合物、三双吡啶基二胺铕、铕穴状化合物或螯合物、二胺、双花青苷、La Jolla蓝染料、别藻蓝蛋白、allococyanin B、藻蓝蛋白C、藻蓝蛋白R、硫胺、藻红青蛋白、藻红蛋白R、REG、罗丹明绿、罗丹明异硫氰酸酯、罗丹明红、ROX、TAMRA、TET、TRIT(四甲基罗丹明异硫醇)、四甲基罗丹明和德克萨斯红中的任一种。

7.根据权利要求5所述的双竞争法适配体检测试纸条，其特征在于，所述放射性同位素包括¹¹⁰In、¹¹¹In、¹⁷⁷Lu、¹⁸F、⁵²Fe、⁶²Cu、⁶⁴Cu、⁶⁷Cu、⁶⁷Ga、⁶⁸Ga、⁸⁶Y、⁹⁰Y、⁸⁹Zr、⁹⁴mTc、⁹⁴Tc、⁹⁹mTc、¹²⁰I、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I、¹³¹I、^154-158Gd、³²P、¹¹C、¹³N、¹⁵O、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、⁵¹Mn、⁵²mMn、⁵⁵Co、⁷²As、⁷⁵Br、⁷⁶Br、⁸²mRb和⁸³Sr中的任一种。

8.根据权利要求5所述的双竞争法适配体检测试纸条，其特征在于，所述酶包括辣根过氧化酶、碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶中的任一种。

9.权利要求1～8任一项所述的双竞争法适配体检测试纸条在检测黄曲霉毒素B1中的应用。

10.使用权利要求1～8任一项所述的双竞争法适配体检测试纸条检测靶标物含量的方法，其特征在于，包括：

1)、用试纸条检测靶标物标准品，得到标准品在试纸条的检测区和质控区的信号强度比值，制作靶标标准品的浓度对应信号强度比值的线性回归曲线，计算回归方程；

2)、用试纸条检测待测样品，得到待测样品在试纸条的检测区和质控区的信号强度比值，根据步骤1)得到回归方程，得到所述待测样品中靶标物的含量。