CN106645474A - 丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,涉及医药检测技术领域。色谱条件:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱;流动相:乙腈:0.1‑0.2wt%磷酸水溶液(体积比49:51);波长:266±4nm;柱温:35‑45℃;流速:0.9‑1.1ml/min;取次野鸢尾黄素和胡椒碱对照品,加甲醇制成含次野鸢尾黄素和胡椒碱的对照品溶液;取丹绿补肾胶囊内容物,混匀,加入甲醇溶解,过滤,取续滤液作为供试品溶液;吸取对照品与供试品溶液,注入高效液相色谱仪,测定次野鸢尾黄素和胡椒碱含量。本方法同时测定次野鸢尾黄素和胡椒碱含量,两种成分能达到良好的分离效果,且操作简单,快捷,准确,易于掌握。
Description
技术领域
本发明涉及医药检测技术领域。
背景技术
丹绿补肾胶囊由白花丹、绿包藤、射干、胡椒、干姜,辅料为淀粉制成;补肾滋阴壮阳。用于治疗男性形衰体弱,性欲低下甚或阳痿、遗精、精少、精冷、不育等;女性未老先衰,容颜无华,颜面黑斑,月经不调、痛经、闭经、宫寒不孕等。
丹绿补肾胶囊质量标准为国家药品标准WS-10436(ZD-0436)-2002-2012Z,其中只有一项含量测定,是采用HPLC法,以甲醇-水(77:23)为流动相测定胡椒碱的含量。查阅文献得知,目前有关胡椒碱和次野鸢尾黄素的含量测定都是单独进行测定的,目前还未查阅到采用一个色谱条件同时测定次野鸢尾黄素和胡椒碱的报道;现有检测方法次野鸢尾黄素与其他成分分离度较差,甚至会出现合峰。在上述背景情况下,为简便、快捷、多指标控制丹绿补肾胶囊的质量,发明了采用普通液相色谱仪、等度洗脱,同时测定丹绿补肾胶囊中的次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量。并使其达到良好的分离效果,准确测定其含量。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,该方法可同时测定次野鸢尾黄素和胡椒碱含量,两种成分能达到良好的分离效果,准确测定其含量,且操作简单,快捷,易于掌握。
为解决上述技术问题,本发明所采取的技术方案是:一种丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,包括以下步骤:
(1)色谱条件:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
流动相:乙腈与0.1-0.2wt%磷酸水溶液,其中,乙腈:0.1-0.2wt%磷酸水溶液的体积比为49:51;
检测波长:266±4nm;
柱温:35-45℃;
流速:0.9-1.1ml/min;
(2)对照品溶液的制备:分别取次野鸢尾黄素和胡椒碱对照品,加甲醇制成含次野鸢尾黄素和胡椒碱的溶液,作为对照品溶液;
(3)供试品溶液的制备:取丹绿补肾胶囊内容物,混匀,加入甲醇溶解,过滤,取续滤液作为供试品溶液;
(4)测定法:分别吸取上述对照品溶液与供试品溶液,注入高效液相色谱仪,测定丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量。
优选的,色谱条件为:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
流动相:乙腈-0.2wt%磷酸水溶液,其中,乙腈与0.2wt%磷酸水溶液的体积比为49:51;
检测波长:266nm;
柱温:40℃;
流速:1.0ml/min。
高效液相色谱系统的理论板数按胡椒碱峰计算不低于5000。
每1ml对照品溶液中含次野鸢尾黄素10-30μg,胡椒碱50-80μg。
优选的,每1ml对照品溶液中含次野鸢尾黄素10μg,胡椒碱80μg。
供试品溶液的制备为:取适量丹绿补肾胶囊内容物,混匀,取0.35-1.05g,精密称定,至具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25-75ml,超声处理,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。
优选的,供试品溶液的制备为:取适量丹绿补肾胶囊内容物,混匀,取0.35,精密称定,至具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,超声处理,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。
对照品溶液与供试品溶液的进样体积各为10μl。
色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6×250mm 5μm。
检测器为二极管阵列检测器。
DAD检测器的英文全称为Diode array detector,为二极管阵列检测器。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于:
(1)本发明采用普通液相色谱仪、等度洗脱,同时测定丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱含量,两种成分能达到良好的分离效果,准确测定其含量,实现了多指标控制丹绿补肾胶囊的质量,且操作简单,快捷,易于掌握;
(2)本发明通过紫外扫描两种成分的紫外吸收,次野鸢尾黄素在266±4nm有最大吸收;胡椒碱在343nm有最大吸收,但其在200nm~378nm均有较高的响应值,综合考虑以266±4nm为检测波长,进行含量测定。直接以甲醇超声处理,过滤,进样即可。通过调整乙腈-0.1-0.2wt%磷酸水溶液的体积比,使两种成分能很好的分离,分离度均大于1.5。
附图说明
图1是本发明实施例1中对照品溶液的高效液相色谱图;
图2是本发明实施例1中供试品溶液的高效液相色谱图;
图3是现有技术提供的对照品溶液的高效液相色谱图;
图4是现有技术提供的供试品溶液的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,但并不构成对本发明的任何限制,任何人在本发明的权利要求范围内所做的有限次的修改仍在本发明的权利要求范围内。
实施例1
丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,依次包括下述步骤:
1.仪器与试药
(1)仪器:Agilent高效液相色谱仪,二极管阵列检测器,四元梯度泵
(2)试药:乙腈(色谱纯),纯化水,其它试剂均为分析纯。次野鸢尾黄素对照品(批号111557-200602)、胡椒碱对照品(批号110775-201405)均购于中国食品药品检定研究院。
2.实验条件
色谱条件与系统适应性试验:色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 4.6×250mm 5μm;流动相:乙腈-0.1wt%磷酸水溶液(体积比49:51);检测波长为266±4nm;柱温:35℃;流速:0.9ml/min;理论板数按胡椒碱峰计算应不低于5000。
3.样品测定:
对照品溶液的制备:分别取次野鸢尾黄素和胡椒碱对照品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加甲醇制成每1ml含次野鸢尾黄素30μg,胡椒碱50μg的溶液,作为对照品溶液。
供试品溶液的制备:取适量丹绿补肾胶囊内容物,混匀,取1.05g,精密称定,至具塞锥形瓶中。精密加甲醇75ml,称定重量,超声30分钟,放置室温,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液为供试品溶液。
测定法:分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量。次野鸢尾黄素和胡椒碱两种成分能很好的分离,分离度大于1.5。
实施例2
丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,依次包括下述步骤:
1.仪器与试药
(1)仪器:Agilent高效液相色谱仪,二极管阵列检测器,四元梯度泵
(2)试药:乙腈(色谱纯),纯化水,其它试剂均为分析纯。次野鸢尾黄素对照品(批号111557-200602)、胡椒碱对照品(批号110775-201405)均购于中国食品药品检定研究院。
2.实验条件
色谱条件与系统适应性试验::色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 4.6×250mm 5μm;流动相:乙腈-0.2wt%磷酸水溶液(体积比49:51);检测波长为266±4nm;柱温:45℃;流速:1.1ml/min;理论板数按胡椒碱峰计算应不低于5000。
3.样品测定:
对照品溶液的制备:分别取次野鸢尾黄素和胡椒碱对照品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加甲醇制成每1ml含次野鸢尾黄素20μg,胡椒碱65μg的溶液,作为对照品溶液。
供试品溶液的制备:取适量丹绿补肾胶囊内容物,混匀,取0.60g,精密称定,至具塞锥形瓶中。精密加甲醇50ml,称定重量,超声30分钟,放置室温,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液为供试品溶液。
测定法:分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量。次野鸢尾黄素和胡椒碱两种成分能很好的分离,分离度大于1.5。
实施例3
丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,依次包括下述步骤:
1.仪器与试药
(1)仪器:Agilent高效液相色谱仪,DAD检测器,四元梯度泵
(2)试药:乙腈(色谱纯),纯化水,其它试剂均为分析纯。次野鸢尾黄素对照品(批号111557-200602)、胡椒碱对照品(批号110775-201405)均购于中国食品药品检定研究院。
2.实验条件
色谱条件与系统适应性试验:色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 4.6×250mm 5μm;流动相:乙腈-0.2wt%磷酸水溶液(体积比49:51);检测波长为266nm;柱温:40℃;流速:1.0ml/min;理论板数按胡椒碱峰计算应不低于5000。
3.方法学考察
(1)线性范围的考察:
取混合对照品溶液,分别进样1、2、5、10、20、30μl,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,进行线性回归,得标准曲线。
次野鸢尾黄素的进样量在0.01030~0.3090μg,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=4445.4x-1.513,r=0.9998;结果见表1。胡椒碱的进样量在0.08173~2.4519μg,与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=5517.6x-55.041,r=0.9998。结果见表2。
表1次野鸢尾黄素对照品测定结果
表2胡椒碱对照品测定结果
(2)精密度试验:精密吸取混合对照品溶液10μl重复进样6次,测得峰面积RSD<2.0%。结果见表3。
表3精密度试验结果
(3)稳定性试验:取同一供试品(批号:16070811)溶液,间隔一段时间进样一次,结果次野鸢尾黄素峰面积RSD<2.0,表明24小试内稳定。结果见表4。
表4稳定性试验结果
(4)重复性试验:取同一批样品(批号:16070811)分别取0.175g、0.35g、0.525g各三份制备供试品溶液,按拟定的含量测定方法测定。结果见表5。
表5样品重复性试验
(5)回收率试验:取已知含量的样品(批号:16070811),分别精密加入一定量的次野鸢尾黄素和胡椒碱对照品,按供试品制备与测定方法,平行做9组,结果见表6、7。
表6次野鸢尾黄素回收率测定结果
表7胡椒碱回收率测定结果
(6)样品测定:
对照品溶液的制备:分别取次野鸢尾黄素和胡椒碱对照品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加甲醇制成每1ml含次野鸢尾黄素10μg,胡椒碱80μg的溶液,作为对照品溶液。
供试品溶液的制备:取适量丹绿补肾胶囊内容物,混匀,取0.35g,精密称定,至具塞锥形瓶中。精密加甲醇25ml,称定重量,超声30分钟,放置室温,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液为供试品溶液。
测定法:分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定,结果见表8。
表8样品含量测定结果
本发明实施例1对照品溶液和供试品溶液的高效液相色谱图分别为图1和图2所示。图1中,12.860min为次野鸢尾黄素的峰,22.205min为胡椒碱的峰;图2中,13.077min为次野鸢尾黄素的峰,21.866min为胡椒碱的峰;两种成分能很好的分离,分离度大于1.5。
对比例:
丹绿补肾胶囊质量标准为国家药品标准WS-10436(ZD-0436)-2002-2012Z,其中只有一项含量测定,是采用HPLC法,以甲醇-水(77:23)为流动相测定胡椒碱的含量。
现有技术测定丹绿补肾胶囊含量的具体方法为:
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水(77:23)为流动相;检测波长为343nm。
对照品溶液的制备:取胡椒碱对照品适量,精密称定,加无水乙醇制成每1ml含80μg的溶液,既得。
供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品内容物,研细,混匀,取0.35g,精密称定,置100ml棕色量瓶中,加无水乙醇80ml,超声处理(功率250W,频率20kHz)30分钟,放冷,加无水乙醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,既得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,既得。
现有技术提供的对照品溶液和供试品溶液的高效液相色谱图见图3和图4所示。图3中,8.406min为胡椒碱的峰;图4中,8.411min为胡椒碱的峰。
本发明在同一色谱条件下测定样品中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量,两种成分能很好的分离,分离度均大于1.5,实现了多指标控制丹绿补肾胶囊的质量,且操作简单,快捷,易于掌握;且在前处理过程中,减少了有机试剂的用量。为了使次野鸢尾黄素与胡椒碱很好的分离,流动相中有机相比例下降,使本发明的分析时间比现有技术略长。而现有技术只有一项含量测定。
Claims (10)
1.一种丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)色谱条件:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
流动相:乙腈:0.1-0.2wt%磷酸水溶液,其中,乙腈与0.1-0.2wt%磷酸水溶液的体积比为49:51;
检测波长:266±4nm;
柱温:35-45℃;
流速:0.9-1.1ml/min;
(2)对照品溶液的制备:分别取次野鸢尾黄素和胡椒碱对照品,加甲醇制成含次野鸢尾黄素和胡椒碱的溶液,作为对照品溶液;
(3)供试品溶液的制备:取丹绿补肾胶囊内容物,混匀,加入甲醇溶解,过滤,取续滤液作为供试品溶液;
(4)测定法:分别吸取上述对照品溶液与供试品溶液,注入高效液相色谱仪,测定丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量。
2.根据权利要求1所述的丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,其特征在于:色谱条件为:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;
流动相:乙腈-0.2wt%磷酸水溶液,其中,乙腈与0.2wt%磷酸水溶液的体积比为49:51;
检测波长:266nm;
柱温:40℃;
流速:1.0ml/min。
3.根据权利要求1所述的丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,其特征在于:高效液相色谱系统的理论板数按胡椒碱峰计算不低于5000。
4.根据权利要求1所述的丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,其特征在于:每1ml对照品溶液中含次野鸢尾黄素10-30μg,胡椒碱50-80μg。
5.根据权利要求4所述的丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,其特征在于:每1ml对照品溶液中含次野鸢尾黄素10μg,胡椒碱80μg。
6.根据权利要求1所述的丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,其特征在于:供试品溶液的制备为:取适量丹绿补肾胶囊内容物,混匀,取0.35-1.05g,精密称定,至具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25-75ml,超声处理,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。
7.根据权利要求6所述的丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,其特征在于:供试品溶液的制备为:取适量丹绿补肾胶囊内容物,混匀,取0.35,精密称定,至具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,超声处理,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。
8.根据权利要求4-7任意一项所述的丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,其特征在于:对照品溶液与供试品溶液的进样体积各为10μl。
9.根据权利要求1所述的丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,其特征在于:色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6×250mm 5μm。
10.根据权利要求1所述的丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法,其特征在于:检测器为二极管阵列检测器。
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2016
- 2016-12-16 CN CN201611167861.4A patent/CN106645474B/zh active Active
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