CN106619971A - 五味子提取物在制备防治禽流感的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了中药五味子提取物在制备防治禽流感的药物中的应用，本发明应用五味子提取物防治禽流感传染病时，疗效高，副作用小，为临床防治禽流感传染病提供了一种新的药物来源，将在医学和生物制药领域，具有较大的实际意义和广阔的应用前景。

Description

五味子提取物在制备防治禽流感的药物中的应用
技术领域
本发明属于中药领域，具体涉及五味子提取物在制备防治禽流感的药物中的应用。
背景技术
禽流感病毒，属于甲型流感病毒。禽流感是人畜共患传染病，自1878年在意大利首次暴发以来，已在世界范围内发生了20多次，每次暴发都造成了严重的经济损失和社会恐慌。1997年我国香港地区首次报告发现禽流感病毒突破种间障碍直接感染人并致人死亡的事件。目前全世界很多国家均有禽流感病例，并有不断扩大的趋势。目前用于防治禽流感病毒的西药主要有：扎那米韦、奥司他韦(达菲)、金刚烷胺、金刚乙胺和帕拉米韦等。但是扎那米韦口服生物利用度低，临床只有气雾剂应用，而无口服剂型限制了该药物的应用，奥司他韦易产生耐药性的问题限制了其应用，且该药生产能力有限，难以应对较大规模的禽流感疫情。金刚烷胺和金刚乙胺神经毒副作用大，也易产生耐药病毒株。帕拉米韦是国家食品药品监督管理局在2013年4月5日批准的一种新型的流感病毒神经氨基酸酶抑制剂，对甲型和乙型流感有效，但易产生耐药病毒株，还有腹泻、恶心、呕吐等不良反应。对于病毒性传染病，抗生素、磺胺类药物又无治疗作用，因此，开发研究中药抗病毒迫在眉睫。我国中药资源丰富，而且中药抗病毒效果好、价格低廉，相对于化学合成药而言，中药有多种有效成分，不仅具有毒性低、不易产生副作用、多靶点、病原微生物对其不易产生耐药性的优点，而且在抗病毒的同时，还有增强免疫机能，提高机体抵抗力作用。
五味子，异名玄及、会及、五梅子、山花椒，为五味子科植物五味子Schisandruchinensis(Turcz)Baill.的果实。具有收敛固涩，益气生津，宁心安神作用。主治久咳虚喘，梦遗滑精，尿频遗尿，久泻不止，自汗盗汗，津伤口渴，心悸失眠。迄今，尚未见有五味子防治禽流感传染病的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供五味子提取物在制备防治禽流感的药物中的应用。
本发明的技术问题是通过以下技术方案实施的：
五味子提取物在制备防治禽流感的药物中的应用。前述五味子提取物包括五味子水或有机溶剂提取物或以五味子为主要活性成分的制剂。
本发明五味子提取物为采用水或有机溶剂作为溶剂，所述的有机溶剂是指乙醇或甲醇。优选采用质量百分比浓度为50％～80％的乙醇溶液或质量百分比浓度为65％～85％的甲醇溶液。
水提取物优选按照如下方法制备得到：
取五味子，粉碎，过20目筛，按药材重量的5～20倍加水浸泡后，煎煮1～4次，每次1～3h，合并煎煮液，脱水浓缩至稠膏状烘干即得五味子提取物。
有机溶剂提取物优选按照如下方法制备得到：
取五味子，粉碎，过20目，加入按药材重量的5～20倍重量的50％～80％乙醇溶液(质量百分比浓度)或65％～85％甲醇溶液(质量百分比浓度)浸泡1～4小时后，渗漉，回收乙醇或甲醇，浓缩至稠膏状,低温减压烘干，得到提取物。
五味子提取物可直接粉碎制成散剂，或加入药学上可接受的辅料，采用常规方法制成口服制剂。所述口服制剂优选为合剂、片剂或口服液。
用于患者时，本发明所述的五味子提取物剂量也可以为90mg-180mg/kg.天(以70kg体重计算)，该剂量或用量通常根据患者或使用者的年龄和体重以及身体状况或患者的状况来决定，优选为100mg-130mg/kg.天。
本发明的有益效果：发明人以五味子及其提取物防治禽流感，疗效确实稳定。本发明提供了五味子提取物用于制备防治禽流感传染病的药物中的应用，为临床防治禽禽流感传染病提供了一种新的选择。
以下通过实例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
下面就本发明的临床效果进一步说明本发明的疗效：
一、五味子提取物鸡胚接种抗禽流感病毒试验。
1、药品：
(1)五味子提取物样品1：按照实施例1方法制备得到，用生理盐水配成每mL药液含1g生药的浓度。
(2)五味子提取物样品2：按照实施例2方法制备得到，用生理盐水配成每mL药液含1g生药的浓度。
(3)西药对照药品：将金刚烷胺粉剂，稀释成0.2mg/mL溶液。
2、禽流感毒株 由中国预防医学科学院病毒学研究所提供，鸡胚尿囊液的HA效价9log2，经测定，半数致死量为1：5000万倍稀释。
3、SPF鸡胚 购自南京生物药厂养殖中心。
4、试验分组 SPF鸡胚50个，具体分组情况见表1。
5、试验方法
(1)药物毒性实验将五味子提取物样品1和五味子提取物样品2分别用生理盐水稀释，将原液及不同浓度的药液分别接种于3只10日龄鸡胚的尿囊腔中，每只0.2mL，置37.8℃温箱孵育72h，每天观察存活情况，鸡胚全部存活的最高药液浓度为正式实验起始浓度，同时设生理盐水对照组，药物对鸡胚毒性实验结果见表2。
表1实验分组情况
编号 组别 数量(枚) 处理
1 试验I组 10 五味子样品1
2 试验II组 10 五味子样品2
3 试验III组 10 金刚烷胺
4 阳性对照组 10 接种病毒尿囊液，按试验量给生理盐水
5 空白对照组 10 不接种病毒尿囊液、不给药
表2中药对鸡胚毒性实验结果(n＝4)
*分母为接种胚数，分子为存活胚数。
(2)具体方法：
试验I组 每个鸡胚尿囊腔同时接种五味子提取物样品1原液0.2mL，病毒稀释液0.1mL。
试验Ⅱ组 每个鸡胚尿囊腔同时接种五味子提取物样品2原液0.2mL，病毒稀释液0.1mL。
试验III组 每个鸡胚尿囊腔同时接种0.2mg/mL的金刚烷胺0.2mL，病毒稀释液0.1mL。
阳性对照组 每个鸡胚尿囊腔同时接种生理盐水0.2mL，病毒0.1mL。
空白对照组 不接种病毒，不给药。
上述鸡胚在37.8℃恒温箱中继续孵化，每天照蛋2～3次，弃去24h内死胚，收取24～72h死胚和72h活胚的尿囊液，低温保存备用。以血凝(HA)实验检测鸡胚尿囊液的病毒效价。
(3)五味子提取物对禽流感病毒增殖的影响，结果见表3。
表3五味子提取物对禽流感病毒增殖的抑制作用测定结果
分组 24～72h死亡胚数 72h活胚数 HA效价
五味子提取物样品1原液 3** 7** 0**
五味子提取物样品2原液 2** 8** 0**
金刚烷胺 10 0 6log2*
阳性对照组 10 0 9log2
空白对照组 0 10 0
与阳性对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
二、本发明对小白鼠感染禽流感病毒的保护作用
小白鼠140只，体重18～22g，雌雄各半，随机分为7组，每组20只。空白组，病毒对照组，金刚烷胺组(15mg/kg)，五味子提取物(按照实施例3方法制备得到)低、中、高剂量(200、400、800mg生药/kg)组，五味子药材组(400mg生药/kg)，除空白组外，其余各组小白鼠以60微升禽流感病毒尿囊液滴鼻。病毒液半数致死量为血凝滴度9log2原液稀释7倍。2h后分别给药，空白组口服生理盐水，病毒对照组感染病毒后口服生理盐水，金刚烷胺组、五味子低、中、高剂量组及五味子药材组按用量灌胃给药。各组给药体积为0.5mL/只，每天给药2次，连续给药5d。观察至14天，记录小白鼠的死亡数及生存时间，计算成活率及生命延长率。五味子对禽流感病毒感染小白鼠生存时间的影响，见表4。
生命延长率＝(给药组平均生存时间-病毒对照组平均生存时间)/病毒对照组平均生存时间×100％。
表4五味子提取物对禽流感病毒感染小白鼠生存时间的作用
与病毒对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
三、五味子对禽流感病毒感染小白鼠肺指数的影响
1、分组与方法：小白鼠140只，体重18～22g，雌雄各半，随机分为7组，每组20只。空白组，病毒对照组，金刚烷胺组(15mg/kg)，五味子(按照实施例3方法制备得到)低、中、高剂量(200、400、800mg生药/kg)组，五味子药材组(400mg生药/kg)空白组、病毒对照组口服生理盐水，金刚烷胺组、五味子低、中、高剂量组及五味子药材组按用量灌胃给药。各组给药体积为0.5mL/只，每天给药2次，连续给药5d。各组小白鼠(空白对照组除外)给药第二天在乙醚浅麻醉下，以60微升禽流感病毒尿囊液滴鼻，病毒尿囊液半数致死量为血凝滴度9log2原液稀释7倍。
2、指标测定：实验至第6天，各组小白鼠称重，脱颈椎处死，解剖取肺，准确称重，计算肺指数、肺指数抑制率，结果见表5。
肺指数＝小白鼠肺重量/小白鼠体重
肺指数抑制率＝(病毒对照组肺指数均值-治疗组肺指数均值)/病毒对照组肺指数均值×100％
表5五味子提取物对禽流感病毒感染小白鼠的肺指数抑制率的影响
组别 剂量(mg/kg) 肺指数 肺指数抑制率(％)
空白组 0 0.89±0.18 0
病毒对照组 0 2.15±0.33 0
金刚烷胺组 15 1.47±0.21* 31.63
五味子提取物低剂量组 200 1.67±0.31* 22.32
五味子提取物中剂量组 400 1.25±0.28** 41.86
五味子提取物高剂量组 800 1.04±0.24** 51.62
五味子药材组 400 1.49±0.39 30.69
与病毒对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
四、本发明对小白鼠的急性毒性试验
五味子提取物口服液(按实施例4方法制备得到)按9000mg/kg、12000mg/kg、15000mg/kg、18000mg/kg的剂量对小白鼠进行灌服给药，经7天观察，全部小白鼠的精神、食欲、饮水等情况和对照组比较均无异常。据此确定小白鼠服五味子1800mg/kg的剂量后，仍未出现中毒死亡。按毒理学评价标准，可不必测定半数致死量(LD50)，即LD50>15000mg/kg。结果表明，五味子提取物属于实际无毒类物质。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述：
实施例1本发明提取物1的制备
取五味子500g，粉碎，按药材重量的10倍加水浸泡5h后，置煎煮罐熬1h，滤出药液，再加药材重量的10倍水煎1h，滤出药液，合并两次药液，脱水浓缩至稠膏状，低温减压烘干，共得105g提取物。
实施例2本发明提取物2的制备
取五味子500g，粉碎，用五味子粉末重量10倍量，质量百分浓度为80％乙醇溶液浸泡4小时后，渗漉，回收乙醇，浓缩至稠膏状,低温减压烘干,共得90g提取物。
实施例3本发明口服液1的制备
取五味子500g，粉碎，按药材重量的8倍加水浸泡5h，置煎煮罐熬2h，滤出药液，再加药材重量的8倍水煎2h，滤出药液，合并两次药液，浓缩至500mL，装瓶，封口、灭菌即可。
实施例4本发明口服液2的制备
取五味子500g，粉碎，在五味子药材重量10倍量50％乙醇溶液中浸泡4小时后，渗漉，回收乙醇，浓缩至500mL，装瓶，封口、灭菌即可。
实施例5本发明提取物3的制备
取五味子500g，粉碎，用五味子粉末重量10倍量，质量百分浓度为60％乙醇溶液浸泡4小时后，渗漉，回收乙醇，浓缩至稠膏状,低温减压烘干,共得102g提取物。
实施例6本发明提取物4的制备
取五味子500g，粉碎，用五味子粉末重量10倍量，质量百分浓度为85％甲醇溶液浸泡4小时后，渗漉，回收甲醇，浓缩至稠膏状，低温减压烘干，共得93g提取物。
实施例7本发明片剂的制备
将按照实施例1方法制备得到的五味子提取物加糊精，混匀制粒，60℃烘干，过20目筛整粒，压片。
实施例8
取五味子生药材，干燥，粉碎，用蒸馏水配成每mL药液含1g生药的浓度。

Claims (6)

1.五味子提取物在制备防治禽流感的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的五味子提取物包括五味子水或有机溶剂提取物或以五味子提取物为主要活性成分的制剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的有机溶剂为乙醇或甲醇。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述的有机溶剂为质量百分比浓度为50％～80％的乙醇溶液或质量百分比浓度为65％～85％的甲醇溶液。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的制剂提取物直接干燥粉碎制成散剂或加入药学上可接受的辅料制成口服制剂。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述口服制剂为合剂、片剂或口服液。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
邓明鲁等: "《吉林省中药资源》", 30 November 2014, 中国中医药出版社 *
高兴: "咋吃穿才能防禽流感", 《农村天地》 *

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Application publication date: 20170510