CN106619573A - 马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液及其制备方法，主要由以下重量份的组分制备而成：马来酸噻吗洛尔0.4～1.0份、液晶材料1.0～18.0份、表面活性剂0.2～3.0份、水100份；所述液晶材料为甘油单油酸酯；所述表面活性剂为泊洛沙。该马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液可显著增加马来酸噻吗洛尔的角膜渗透量，可显著而平稳地降低眼内压，延长药物在眼部的保留时间，且不添加防腐剂，可有效地解决现有技术存在的马来酸噻吗洛尔滴眼剂在眼部保留时间短及长期使用带来的刺激性问题。

Description

马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液及其制备方法
技术领域
本发明涉及药物制剂领域，特别是涉及一种马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液及其制备方法。
背景技术
青光眼(Glaucoma)是以视神经病变、视觉功能丧失为特点的眼部疾病。眼压升高是青光眼的主要致盲因素，药物治疗是最主要的治疗方法。目前青光眼的临床用药以滴眼剂为主，包括β-受体拮抗剂、前列腺素类似物、碳酸酐酶抑制剂、肾上腺素能受体激动剂、胆碱受体激动剂和视神经保护药物等。尽管欧美及其他国家越来越多地把前列腺素类似物，如：拉坦前列素、贝美前列素和曲伏前列素，列为临床一线药物，但由于价格高昂，会增加长期用药患者的经济负担，限制了其在我国作为青光眼临床一线药物的使用。目前，我国临床治疗青光眼的药物仍以价格较低且疗效明确的β-受体拮抗剂为主，马来酸噻吗洛尔则是其中使用最广泛的临床用药。
马来酸噻吗洛尔是一种非选择性的β-肾上腺素受体阻滞剂，无明显内源性交感活性和局部麻醉作用，对心肌无直接抑制作用。马来酸噻吗洛尔滴眼液是治疗青光眼最常用的药物之一，对高眼压患者和正常人均有降眼内压作用，适用于原发性开角型青光眼、继发性青光眼、高眼压症及部分原发性碧角性青光眼。对于采用其他药物或手术治疗无效的青光眼，也可应用本品进行治疗。
马来酸噻吗洛尔滴眼剂的降眼压作用起效快，给药后20～30分钟眼压即开始下降，经1～2小时达到最大效应，降眼压作用可持续较长时间。但由于眨眼及泪液分泌的影响，普通滴眼液给药后在眼部的保留时间短，吸收的药量通常仅占给药剂量的极小部分，用药剂量通常较高，一般需要反复给药，容易产生明显的全身性副作用，如心动过缓、心率失常、支气管痉挛等，且患者顺应性较差。此外，高眼压尤其是青光眼患者，通常需要长期用药，而目前市售的马来酸滴眼液中，均有防腐剂。大量研究表明，长期使用含有防腐剂的眼用制剂不可避免地会给眼睛带来刺激性和危害。
美国FDA批准了默沙东公司的一种眼用噻吗洛尔即型凝胶(Timoptic-XE，gelformingsolution)，其凝胶机制为离子型敏感性洁冷胶，且该产品中含有新洁尔灭(0.012％)作为防腐剂。另一种由爱尔康公司生产的眼用噻吗洛尔即型凝胶(Timolast，gelformingsolution)，其凝胶基质为蛋白敏感性黄原胶，处方中也含有新洁尔灭(0.012％)做防腐剂。中国专利CN101342176A公开了一种马来酸噻吗洛尔眼用即型凝胶，其凝胶基质选自甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇、聚丙烯酸及聚丙烯酸纳中的一种或多种，处方中含有防腐剂。中国专利CN101474146A公开了一种不含抑菌剂的马来酸噻吗洛尔滴眼液及其制备方法，但专利为溶液型滴眼剂，未解决药物在眼部保留时间短这一问题。总之，现有噻吗洛尔眼用产品和已公开的文献均未能同时解决马来酸噻吗洛尔滴眼剂在眼部保留时间短及长期使用带来的刺激性问题。
发明内容
基于此，本发明提供了一种马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液。该马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液可显著增加马来酸噻吗洛尔的角膜渗透量，可显著而平稳地降低眼内压，延长药物在眼部的保留时间，且不添加防腐剂，可有效地解决现有技术存在的马来酸噻吗洛尔滴眼剂在眼部保留时间短及长期使用带来的刺激性问题。
具体技术方案如下：
一种马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液，主要由以下重量份的组分制备而成：
所述液晶材料为甘油单油酸酯；所述表面活性剂为泊洛沙姆；所述液晶材料与表面活性剂的质量比为2-15:1。
在其中一些实施例中，所述马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液主要由以下重量份的组分制备而成：
在其中一些实施例中，所述马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液主要由以下重量份的组分制备而成：
在其中一些实施例中，所述马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液主要由以下重量份的组分制备而成：
在其中一些实施例中，所述马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液主要由以下重量份的组分制备而成：
在其中一些实施例中，所述液晶材料与所述表面活性剂的质量比为8.5-9.5:1。
在其中一些实施例中，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188和/或泊洛沙姆407。
在其中一些实施例中，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆407。
本发明还提供了上述马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备方法。
具体技术方案如下：
一种上述的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备方法，包括以下步骤：
将液晶材料和表面活性剂加热至熔融，得油相混合物；
将马来酸噻吗洛尔溶解于水中，搅伴均匀，得水相混合物；
将水相混合物置于高剪切均质机内，将油相混合物缓慢加入水相混合物中，进行高剪切分散，将所得混合物再转入高压均质机内，进行高压均质，即得所述马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液。
在其中一些实施例中，所述高剪切分散的转速为9000rpm～11000rpm，时间为2～4分钟。
在其中一些实施例中，所述高压均质的压力为450～550MPa，均质次数为4～6次。
在其中一些实施例中，所述将液晶材料和表面活性剂加热至熔融的加热温度为60℃～70℃。
本发明的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液及其制备方法具有以下优点和有益效果：
本发明首次将马来酸噻吗洛尔与特定种类和特定比例的液晶材料和表面活性剂制备成立方液晶纳米粒滴眼液。发明人通过大量实验研究从大量液晶材料以及表面活性剂中筛选得到：以甘油单油酸酯为液晶材料，泊洛沙姆(尤其是泊洛沙姆407)为表面活性剂，制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒，可显著增加马来酸噻吗洛尔的角膜渗透量，延长药物在眼部的保留时间。本发明的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒可将水溶性的马来酸噻吗洛尔包载于其封闭的水通道中，具有脂双层结构的载药立方液晶纳米粒与角膜亲和，可增加马来酸噻吗洛尔的角膜透过量，延长马来酸噻吗洛尔在眼部的滞留时间，持续释放药物，降眼内压的作用更为显著、且迅速而平稳，减少用药剂量和给药次数，减少因用药剂量过大可能带来的一系列不良反应，提高用药顺应性。另一方面，马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒含有与外界相连的水通道，在黏附角膜的同时，可一定程度保持角膜表面水分，对角膜无损伤、无刺激，减轻眼部不适感，缓解多次滴眼后引起的眼干症状，提高用药顺应性。
本发明所用材料生物相容性良好，由于立方液晶纳米粒对马来酸噻吗洛尔的包封作用，可起到对马来酸噻吗洛尔的保护作用，可提高马来酸噻吗洛尔的稳定性，因此本发明的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒中没有添加任何防腐剂，同样可保证马来酸噻吗洛尔的药物稳定性，有效解决现有马来酸噻吗洛尔滴眼剂在长期使用过程中防腐剂引起的刺激性问题，与已有的马来酸噻吗洛尔滴眼剂相比，具有明显的临床应用优势。
本发明的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液还具有流动性好，使用方便，粒径小且均匀性好，眼部异物感小等特点，尤其适用于眼部局部给药。
本发明的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备方法工艺简单，包封率高，使制备得到的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒粒径小，且分布均匀，生产成本较低，有利于工业化生产，具有良好的应用前景。
附图说明
图1是实施例7的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液粒径分布图；
图2是实施例7的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液偏光显微镜图；
图3是实施例7的空白立方液晶纳米粒与马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液小角X射线散射结果图；
图4是实施例7的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液透射电镜图；
图5是实施例8的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液与市售对照药的累积渗透图；
图6是实施例9的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液细胞毒性实验结果；
图7是实施例10的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液与市售对照药的单次给药兔房水中噻吗洛尔浓度与时间变化图；
图8是实施例11的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液与市售对照药的连续给药一周后新西兰兔眼压变化图；
图9是实施例11的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液与市售对照药的连续给药一周后新西兰兔裂隙灯检查眼表图(A：生理盐水、B：市售滴眼液、C：实施例4的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液)；
图10是实施例11中的生理盐水组角膜组织切片图；
图11是实施例11中的市售马来酸噻吗洛尔滴眼液组角膜组织切片图；
图12是实施例11中的实施例4的马来酸噻吗洛尔纳米粒滴眼液组角膜组织切片图。
具体实施方式
以下通过具体实施例并结合附图对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制。
实施例1：马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备
本实施例的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液由以下原料制备而成：
本实施例的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备方法包括以下步骤：
精密称取甘油单油酸酯和泊洛沙姆407，在65℃水浴中加热至熔融，得油相混合物；另精密称取马来酸噻吗洛尔，溶于100g水中，搅伴均匀，得水相混合物；将水相混合物置于高剪切均质机内，将油相混合物缓慢加入水相混合物中，在10000rpm下高剪切分散3分钟；然后将所得混合物转入高压均质机内，在500MPa下高压均质5次，即得。
实施例2：马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备
本实施例的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液由以下原料制备而成：
制备方法同实施例1。
实施例3：马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备
本实施例的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液由以下原料制备而成：
制备方法同实施例1。
实施例4：马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备
本实施例的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液由以下原料制备而成：
制备方法同实施例1。
实施例5：马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备
本实施例的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液由以下原料制备而成：
制备方法同实施例1。
实施例6：马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备
本实施例的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液由以下原料制备而成：
制备方法同实施例1。
对比例1
本对比例的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液由以下原料制备而成：
制备方法同实施例1。
对比例2
本对比例的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液由以下原料制备而成：
制备方法同实施例1。
对比例3
本对比例的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液由以下原料制备而成：
制备方法同实施例1。
实施例7：马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制剂表征
将实施例1～6所制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液，稀释一定倍数，用马尔文粒度仪(Zeta-sizer Nano-ZS90，英国马尔文公司)测定其粒径大小、多分散系数(PDI)和Zeta电位，结果见表1。实施例4所制备的马来酸立方液晶滴眼液粒径分布图如图1所示。
取实施例1～6所制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液1mL，置于超滤离心管内管中，4000rpm离心10分钟，取滤液稀释一定倍数，于紫外分光光度计296nm下测定吸光度，按标准曲线方程求得出游离药物量，按公式1计算包封率(Encapsulationefficiency，EE)，结果见表1。
包封率(％)＝(W总药-W游离药)/W总药×100％公式(1)
W总药为制备纳米粒滴眼液投入的马来酸噻吗洛尔总药量，W游离药为紫外测定所得滤液中马来酸噻吗洛尔的量。
表1实施例1-6制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的
粒径和包封率测定结果
表1结果表明：
(1)GMO(甘油单油酸酯)和泊洛沙姆407用量对马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的包封率、粒径有重要影响。GMO和泊洛沙姆407总用量较少时，包封率较低，油相不足以包封水相中的马来酸噻吗洛尔，导致有较多的药物游离在水中；GMO和泊洛沙姆407总用量增加，包封率增加，但用量增加到一定程度，包封率基本保持恒定；GMO用量过高(对比例2)，粒径明显增加，滴眼液的稳定性变差，放置过夜后，马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液分层；泊洛沙姆用量过少(对比例3)，粒径显著增加，稳定性变差，放置2h后，立方液晶纳米粒滴眼液分层。
(2)GMO和泊洛沙姆407的质量比对马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的粒径分布有重要影响。GMO和泊洛沙姆407的质量比为9:1时，粒径较小，且PDI较小，粒径分布均匀，包封较大。泊洛沙姆407与GMO的质量比过大或过小，均会导致液晶结构不稳定，不利于包封水溶性的噻吗洛尔，且形成的纳米粒粒径和PDI变大。
(3)表面活性剂的种类对马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的粒径和包封率有重要影响。采用聚氧乙烯蓖麻油作为表面活性剂(对比例1)，马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的粒径太大，且粒径分布较宽，包封率降低。
将实施例4所制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液滴于载玻片上，于偏光显微镜(MP41，明美光电技术有限公司)下观察，初步推断晶相结构。偏光显微镜图如图2所示。结果表明：在偏光显微镜下，可观察得马来酸噻吗洛尔纳米粒为暗视野，无双折射现象，可初步推断样品为立方液晶结构。
采用的高通量SAXS以成像板作为检测器，联机进行准直测量。仪器在50kV和40mA条件下的X射线发射器产生波长为0.1542nm的CuKα射线。将实施例4所制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液进行小角X射线散射实验，判断其晶相结构。小角X射线散射图如图3所示。结果显示：空白纳米粒和马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒的液晶结构均为：的Pn3m立方液晶结构。从出峰位置可知，载药前后的纳米粒的q值无显著偏移，表明实施例4制备的马来酸噻吗洛尔纳米粒为立方液晶结构。
采用透射电镜对实施例4所制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液进行形态学观察。以负染色法制备样品，取一滴样品液于封口膜上，将铜网置于液滴上，吸附2min，用滤纸吸走多余样品液，再在另一膜上滴加2％磷钨酸一滴，将吸附完样品的铜网置于其上，用滤纸吸走多余的磷钨酸，置于透射电子显微镜下观察纳米粒的粒径和形态，拍照记录。透射电镜图如图4所示。结果表明：马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒的形态为类球性粒子，粒径与粒度仪所测结果一致，平均粒径在142nm左右。
实施例8：马来酸噻吗洛尔立方液晶滴眼液离体角膜渗透实验
离体角膜扩散实验以谷胱甘肽-碳酸氢钠缓冲溶液(GBR)作为介质，以模拟眼球房水的生理环境。GBR溶液是由两部分溶液混合组成：溶液一为氯化钠6.2g、氯化钾0.358g、一水磷酸二氢钠0.103g和碳酸氢钠2.454g，溶于500mL水。溶液二为二水氯化钙0.115g、五水氯化镁0.159g、葡萄糖0.9g、氧化型谷胱甘肽0.092g，溶于500mL水。置于5℃冰箱中冷藏，临用前将溶液一与溶液二等量混合，即得GBR溶液。
离体角膜扩散实验以新西兰兔离体角膜为渗透膜，离体角膜渗透实验在处死动物后20min内开始。将新鲜离体角膜固定夹于改进的Franz立式扩散池的两个半池之间，上皮层面向供给池，内皮层面向接收池。接收池内装有一个搅拌子，且加满GBR溶液，供给池内加入0.5mL样品，并用封口膜封严。将扩散池置于34±0.5℃的恒温磁力搅拌器中，分别于30、60、120、180、240、360min时从接收池中取渗透介质样品0.5mL，同时补加等温度体积的GBR溶液，样品经0.22μm微孔滤膜，过滤取续滤液20μL进样，进行高效液相色谱HPLC分析测定，计算样品中马来酸噻吗洛尔的累积透过量。
实施例4所制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液与市售对照药(马来酸噻吗洛尔滴眼液，中山大学附属眼科医院)的离体角膜累积渗透结果如图5所示，从0.5h至4h的释药过程中，马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的药物累积渗透量均大于市售对照药。当离体角膜渗透实验达6h时，市售对照药的噻吗洛尔累积渗透量为159.5μg，马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒的药物累积渗透量为542.3μg，为前者的3.5倍。因此，马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液相较于市售马来酸噻吗洛尔滴眼液，促马来酸噻吗洛尔角膜渗透的效果更为明显，证明本发明的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液能显著提高马来酸噻吗洛尔的角膜渗透率。
角膜水化值是体外实验评价物质对角膜刺激性的重要指标，角膜水化值通常为76％～83％，超过83％的水化值即可判定角膜受到一定程度的损伤。将新鲜分离的新西兰兔角膜或体外渗透实验暴露于扩散介质的角膜区域剪下，称重，记为Wa，70℃干燥12h后再称重，记为Wb。角膜水化值可按以下公式计算得到：角膜水化值HL(％)＝(1–Wb/Wa)×100％。结果表明：市售对照药组与实施例4所制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液制剂组的角膜水化值均小于83％，表明两组制剂均对兔离体角膜无损伤。两组制剂的角膜水化值如表2所示。
表2：角膜水化值
实施例9：马来酸噻吗洛尔立方液晶滴眼液细胞毒性实验
按实施例4所述的处方工艺制备空白立方液晶纳米粒溶液、马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液，经0.22μm无菌滤膜过滤除菌。
取新西兰兔，分离出完整角膜，用完全培养基(含1％双抗，20％胎牛血清)培养兔角膜上皮细胞，待原代培养的兔角膜上皮细胞生长至孔面积80％后，制备兔角膜上皮细胞完全贴壁的96孔板，将孔分为3组：PBS组、低浓度载药制剂组(马来酸噻吗洛尔的浓度为12.5μg.mL-1)、高浓度载药制剂组(马来酸噻吗洛尔的浓度为25μg.mL-1)。用完全培养基配制加入设定浓度的样品后，每孔加入200μL，置于37℃培养箱中培养24小时，然后将培养液吸干，加入含10％的MTT培养基溶液，放回37℃培养箱中培养24h。取出培养24h后的96孔板，避光下条件下，吸干MTT培养基溶液，每孔加入100μL的DMSO，置于摇床上混匀5min。在酶标仪490nm和630nm测定吸光度。细胞毒性结果如图6所示，结果表明：当载药制剂组的给药量为12.5和25μg.mL-1时，两者的兔角膜上皮细胞存活率分别为108.6％和105.5％，与空白对照组(空白立方液晶纳米粒溶液)无显著性差异，说明马本发明的来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液对兔角膜上皮细胞无毒性。
实施例10：马来酸噻吗洛尔立方液晶滴眼液药动学实验
本实验采用新西兰兔为动物模型，将新西兰兔完全随机分为2组，市售马来酸噻吗洛尔滴眼液(中山大学附属眼科医院)组为对照组，实施例4制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒组滴眼液为实验组。
对照组新西兰兔眼结膜囊内滴50μL市售马来酸噻吗洛尔滴眼液(按噻吗洛尔计，为5.0mg.mL-1)，实验组滴50μL实施例4制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液(按噻吗洛尔计，为5.0mg.mL-1)，闭合双眼，轻压鼻泪管30s。滴眼后分别在15，30，60，120，240，360min用1mL胰岛素针抽取100μL房水，置于离心管中。精密吸取100μL房水样品于离心管中，加入6％高氯酸-甲醇溶液100μL，涡旋混合1min，于4000rpm离心10min，取上清液进行HPLC测定，记录色谱图，以峰面积-外标法计算房水样品的药物浓度。采用WinNonlin药动学软件以非房室模型法计算实验药动学参数。
单次给药后，马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液组与市售马来酸噻吗洛尔滴眼液组的房水噻吗洛尔浓度随时间变化曲线如图7所示，药动学参数如表3所示。
表3：马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液与市售马来酸噻吗洛尔滴眼液单次给药后兔房水药动学参数
药动学结果表明：单次给药后，马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液组在360min内均可在房水中检测到噻吗洛尔药物浓度，360min内噻吗洛尔血药浓度-曲线下面积(AUC)为123.9μg.mL-1.min，其达峰时间(tmax)为30min，稍晚于市售制剂组，峰浓度(Cmax)为1.4μg.mL-1，小于市售制剂组，但噻吗洛尔的半衰期(tmax)为71.5min，为市售制剂组的2.2倍，平均滞留时间(MRT)为86.6min，为市售制剂的2.0倍。
尽管纳米粒组360min内的AUC仅稍高于市售制剂，但从半衰期t1/2和平均滞留时间MRT数据均可得出，本发明的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液可较显著延长马来酸噻吗洛尔在眼前节和房水的滞留时间与代谢时间，且360min内的药物浓度波动较市售制剂的小。由此，可进一步推断马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒在眼表的滞留时间较长，并较缓慢地释放噻吗洛尔，避免给药后短时间内药物浓度大幅度升高，使眼内压较平缓地下降，减少眼压波动而带来的不适，且降压效果持续时间更长。
实施例11：马来酸噻吗洛尔立方液晶滴眼液药效学实验
本实验采用新西兰兔为动物模型，在单次给药药动学实验后，继续将新西兰兔饲养一周，待药物代谢完全，并分别用眼底镜对眼底，裂隙灯对眼表进行检查，确保无任何眼疾，即可进行药效学实验。
采用0.3％复方卡波姆造模剂建立青光眼高眼压模型：用丙美卡因滴眼液对新西兰兔眼进行局部麻醉，用胰岛素针抽取兔眼房水0.1mL，而后注射0.3％复方卡波姆造模剂0.1mL(取适量卡波姆940和地塞米松，用生理盐水配制成含0.3％卡波姆和0.025％地塞米松的复方卡波姆溶液)。造模后每天滴加妥布霉素地塞米松滴眼液，以防止炎症反应和眼部感染。
建模后，将实验动物完全随机分为3组，每组各5只：生理盐水组(阴性对照组)，每次50μL，每天给药一次；市售马来酸噻吗洛尔滴眼液组(中山大学附属眼科医院，阳性对照组)，每次50μL(含噻吗洛尔250μg)，按市售马来酸噻吗洛尔滴眼液的使用说明，每天给药两次；实施例4制备的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液组(实验组)，每次50μL(含噻吗洛尔250μg)，每天给药一次。3组新西兰兔给药后均闭目，轻压鼻泪管30s，持续给药一周，每天测量眼压一次，记录眼压数据。
连续给药一周后新西兰兔眼压变化结果如图8所示，结果表明：生理盐水组在一周内仍维持高眼压，甚至继续升高，而马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液组的兔眼压则在给药后第一天即下降，且具有持续降压的趋势。市售马来酸噻吗洛尔滴眼液的降眼压效果弱于马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液组，且波动较大。在连续给药一周左右，马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液组已降压至接近正常眼压范围，降眼压效果较市售制剂组明显。
给药后角膜裂隙灯检查结果：连续给药一周后对兔眼进行裂隙灯检查，结果如图9所示，结果表明：生理盐水组、马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液组、市售马来酸噻吗洛尔滴眼液组新西兰兔眼在给药一周后，角膜经裂隙灯-钴蓝光检查，均未发现黄绿色斑块，说明均无明显角膜损伤。
给药后角膜病理学检查：连续给药一周后，对3组新西兰兔以耳缘静脉注射过量20％乌拉坦溶液致死，摘取眼球，立刻放到Davidson溶液中，浸泡24小时后，取出眼球置于4％多聚甲醛溶液中固定完全后，分离角膜得组织标本。标本经自动脱水机脱水，包埋，石蜡切片，厚度约3μm，60℃烘箱过夜，用透明剂脱蜡，经梯度酒精水化，苏木素-伊红染色，梯度酒精脱水，透明剂透明，中性树胶封片。用LEICA DM5000B普通光学显微镜观察。病理分级评判参考表如表4所示：
表4：组织病理病变分级标准
给药后角膜病理学检查结果如图10、图11、图12所示，结果表明：
3组的角膜上皮细胞排列整齐，前弹力层，基质层，厚弹力层，内皮细胞层清晰可见，未见异常改变。由此说明本发明的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液在给药一周后未对角膜造成损伤，生物相容性、安全性良好。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液，其特征在于，主要由以下重量份的组分制备而成：
所述液晶材料为甘油单油酸酯；所述表面活性剂为泊洛沙姆；所述液晶材料与所述表面活性剂的质量比为2-15:1。
2.根据权利要求1所述的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液，其特征在于，主要由以下重量份的组分制备而成：
3.根据权利要求2所述的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液，其特征在于，主要由以下重量份的组分制备而成：
4.根据权利要求3所述的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液，其特征在于，主要由以下重量份的组分制备而成：
5.根据权利要求4所述的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液，其特征在于，主要由以下重量份的组分制备而成：
6.根据权利要求1-5任一项所述的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液，其特征在于，所述液晶材料与所述表面活性剂的质量比为8.5-9.5:1。
7.根据权利要求1-5任一项所述的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液，其特征在于，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188和/或泊洛沙姆407。
8.一种权利要求1-7任一项所述的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将液晶材料和表面活性剂加热至熔融，得油相混合物；
将马来酸噻吗洛尔溶解于水中，搅伴均匀，得水相混合物；
将水相混合物置于高剪切均质机内，将油相混合物缓慢加入水相混合物中，进行高剪切分散，将所得混合物再转入高压均质机内，进行高压均质，即得所述马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液。
9.根据权利要求8所述的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备方法，其特征在于，所述高剪切分散的转速为9000rpm～11000rpm，时间为2-4分钟。
10.根据权利要求8所述的马来酸噻吗洛尔立方液晶纳米粒滴眼液的制备方法，其特征在于，所述高压均质的压力为450～550MPa，均质次数为4～6次。
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