CN101401791A - 噻吗洛尔脂质体及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物制剂技术领域，具体公开了噻吗洛尔脂质体及其制备方法。噻吗洛尔脂质体由噻吗洛尔、磷脂、胆固醇和抗氧剂等组成，各组分的重量百分比为：噻吗洛尔0.01％－60.00％，磷脂10.00％－99.99％，胆固醇0.00％－68.00％，抗氧剂0.00％－50.00％，渗透压调节剂0.00％－89.99％。可进一步加入凝胶基质可制成凝胶剂。本发明包封率高，稳定性好，具有优良的生物相容性、生物黏附性和生物可降解性，并能在体眼角膜内形成非常好的储库效应，可实现提高生物利用度，降低毒性，减少刺激性，特别适合于眼部给药，能更好地发挥噻吗洛尔的降低眼压，抗青光眼的作用。

Description

噻吗洛尔脂质体及其制备方法

技术领域：

本发明属于药物制剂领域，具体涉及噻吗洛尔脂质体及其制备方法。

背景技术：

噻吗洛尔(噻吗心安timolol)为β肾上腺素能阻断剂，按受体亚型和内在交感活性分类法，属于第二类，即无选择性，无明显的内在拟交感活性和膜稳定作用。由于阻断了心脏的β₁受体，使心率减慢，心收缩力减弱，心输出量减少，心肌耗氧量下降，血压下降。

随着对其药理学研究的不断深入，噻吗洛尔的临床应用也日趋广泛。如：治疗高血压、抗心绞痛、抗心肌梗塞等。近年来，发现了其对眼部的药理作用，并引起了眼科学和药理学很大的关注，逐渐受到重视，1978年被美国FDA批准用于青光眼的治疗，是唯一已经证明安全用于青光眼降眼压的药物，同年在日本东京的二十三届国际眼科青光眼专题学术会议上，被推荐为治疗青光眼的首选药物。

噻吗洛尔将眼压的作用原理为噻吗洛尔与睫状突内特异细胞上的β-肾上腺素能受体结合，阻滞了内源性儿茶酚胺，使环磷酸腺苷浓度降低，细胞分泌减少、房水生成减少、眼压下降，但不影响房水回流。常用滴眼液浓度为0.25％和0.5％，11例健康受试者和4例青光眼受试者，以0.5％的噻吗洛尔滴眼，一天两次，每次两滴，给药两周后，健康受试者和青光眼患者的最大血药浓度分别为5μg/ml和1μg/ml，滴眼后8小时，血药浓度低于1μg/ml。

眼压的稳定有赖于房水的生成量与排出量的动态平衡，抑制房水产生或增加，房水排出均可降低眼压。大多数抗青光眼药通过抑制房水产生，以降低眼压。马来酸噻吗洛尔是临床上使用较多的用于治疗青光眼的药物之一，由于噻吗洛尔具有较好的降眼压作用，且副作用小，近年来被广泛应用于开角型、闭角型青光眼，以及继发性青光眼和其他高眼压症的临床治疗，并被认为是治疗开角型青光眼最理想的药物。

滴眼剂给药，由于人眼的特殊生理结构，眼球运动和鼻泪系统的作用，保留时间仅几分钟，生物利用度很低，一般不超过5％。需每日多次给药，剂量不准确使眼内浓度波动大，混悬液或软膏给药又影响视力和运动。为克服上述缺点，采用凝胶基质增加粘度，延缓药物的滞留时间，但容易使视力模糊，影响眼睑；或植入长效的控制给药系统，使患者有异物感。

为了改善常规局部滴眼制剂的缺陷，而兴起了眼部给药系统(OcularDrug Delivery System)的研究，理想的眼部给药系统能维持药物储库，较长时间地释放，脂质体滴眼剂能够有效的穿透角膜，到达眼内各用药部位；能降低原有的局部和全身毒副作用；制剂透明，不影响眼部正常的生理功能。

对于青光眼的治疗，要求药物滴眼后能够有效透过角膜，在房水中达到一定的治疗浓度。且青光眼的防治过程较长，需要长期给药。因此要求给药系统具有缓释和长效作用，尽量减少滴眼次数，减少全身副作用和对眼部的刺激性。综上所述，噻吗洛尔眼部给药系统至少应具有以下三个特点：1)增加药物的角膜透过性；2)提高生物利用度；3)无毒无刺激性。

脂质体作为新型药物载体，是近年来药剂领域的一个研究热点，具有极强的实际应用价值。脂质体眼部给药系统，其组成材料为磷脂双分子层，类似于生物膜，易于生物膜融合，促进药物生物膜的穿透性，所以药物滴眼剂的角膜的转运效率较高。脂质体是一种新型眼用药物载体，能够：(1)增强药物的溶解性；(2)减低药物毒性；(3)赋予药物靶向性；(4)增加药物的缓释作用；(5)保护药物，提高药物的稳定性；(6)通过膜融合作用将药物送入细胞内部，实现细胞内给药。近年来，脂质体作为眼用药物的载体的研究和应用日益受到关注。脂质体释药机制独特，可通过融合作用使药物透过角膜上皮细胞。脂质体能够起到药物储库的作用，实现缓释和长效给药，且脂质体具有一定的生物黏附性，能增加药物与角膜的接触时间，因此有利于药物的角膜透过；尤其地，脂质体具有优良的生物相容性和可降解性，对眼部组织无毒无刺激性，不影响眼部的正常生理功能，是优秀的眼部给药系统。因此，将噻吗洛尔制成脂质体滴眼液，可实现减少药物浓度波动的作用，增加角膜透过性，提高药物的生物利用度，降低药物的毒副作用，提高患者的顺应性。中国专利CN1206987C将非甾体抗炎药吲哚美辛制备成脂质体滴眼液，大大减少了滴眼后眼部的灼烧感及刺痛感，疗效优于普通吲哚美辛滴眼液。

本发明首次将噻吗洛尔制成脂质体，目前，在国内外均未见噻吗洛尔脂质体的报道，更没有相关制剂的上市，因此本发明具有令人瞩目的实际应用前景与潜在经济价值。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种噻吗洛尔脂质体及其制备方法，该脂质体可用于眼用、静脉注射和口服。

本发明是通过如下技术方案完成的：

本发明的噻吗洛尔脂质体，含以下组分及重量百分比：

噻吗洛尔        0.01％-50.00％

磷脂            10.00％-99.99％

胆固醇          0.00％-68.00％

抗氧剂          0.00％-50.00％

渗透压调节剂    0.00％-89.99％

本发明的噻吗洛尔脂质体，其中噻吗洛尔为外消旋体(RS-)噻吗洛尔、左旋(S-)噻吗洛尔和右旋(R-)噻吗洛尔中的任何一种，或其中任何一种的盐酸盐、乳酸盐、硫酸盐、硝酸盐、枸橼酸盐、马来酸盐、酒石酸盐和重酒石酸盐。

本发明的噻吗洛尔脂质体，其中磷脂为两条脂肪烃链各含有8至26个饱和或不饱和碳原子的天然来源、人工合成、人工半合成或人工修饰的磷脂类物质，选自大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、烷基醚磷脂酰胆碱中的一种或几种，或其中任何一种的衍生物的一种或几种的混合物。

本发明的噻吗洛尔脂质体，可以加入抗氧剂，抗氧剂可以为氢醌、羟基香豆素、维生素E、维生素C、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸棕榈酸酯、没食子酸烷酯、丁羟基茴香醚(BHA)、丁羟基甲苯(BHT)、去甲二氢愈创木酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中的一种或几种的混合物。

本发明的噻吗洛尔脂质体，可以加入渗透压调节剂调节渗透压，渗透压调节剂可以为：氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、甘油、玻璃酸钠、透明质酸中的一种或几种的混合物。

本发明的噻吗洛尔脂质体，制备方法为薄膜分散法、乙醇注入法、逆相蒸发法、硫酸铵梯度法、硫酸铵梯度与pH调节法。

本发明的噻吗洛尔脂质体，可加入凝胶基质进一步制成脂质体凝胶剂。

本发明的噻吗洛尔脂质体，加入的凝胶基质可以是亲水高分子材料，可以选自：羟丙甲纤维素、聚丙烯酸、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚半乳糖醛酸、木质葡聚糖中的一种或几种的混合物。

本发明的噻吗洛尔脂质体，加入的凝胶基质可以为在位凝胶基质，可以选自：泊洛沙姆、邻苯二甲酸醋酸纤维素、交联丙烯酸及卡伯波、聚卡波非、聚丙烯酸树脂、聚乙烯吡咯烷酮、胶凝糖树胶或海藻酸中的一种或几种，从而形成温度敏感型、pH敏感型、离子活化型或混合型凝胶。

本发明的噻吗洛尔脂质体的制备方法如下：

一、脂质体的制备：噻吗洛尔脂质体可以通过以下四种方法制得：

1.逆向蒸发法(REV)

将脂质材料溶解于乙醚中，将配置好的噻吗洛尔溶液加于上述的乙醚液，超声，使之形成稳定的W/O乳剂，恒温电磁搅拌下，挥去乙醚直至形成胶态，加入水相，继续恒温搅拌将乙醚蒸除，调整体积，探头超声细胞破碎器超声，得脂质体。

2.乙醇注入法(ethanol injection)

以缓冲液为溶剂，配制噻吗洛尔溶液，脂质材料溶于无水乙醇中。恒温电磁搅拌下，缓缓将乙醇溶液用五号针头(针尖在液面以下)注入噻吗洛尔溶液中，继续恒温搅拌挥发除去乙醇，调整体积，探头超声细胞破碎器超声，得脂质体。

3.薄膜分散法(TFV)

将脂质材料溶于有机溶剂中，恒温水浴条件下旋转蒸发仪减压除去有机溶剂，在梨形瓶中形成均匀的磷脂膜。于真空干燥箱中干燥后，加入噻吗洛尔溶液，浸泡，搅拌洗脱脂质膜，探头超声细胞破碎器超声，即得脂质体。

4.硫酸铵梯度法(ammonium sulfate gradients)

以硫酸铵溶液水相，制备空白脂质体，将制备的空白脂质体用探头超声细胞破碎器超声后，装入透析袋中，放入等渗溶液中透析，取出透析好的空白脂质体，加入噻吗洛尔置于水浴中孵化，得脂质体。

5硫酸铵梯度结合pH调解法

空白脂质体制备如4.将制备的空白脂质体用探头超声细胞破碎器超声后，装入透析袋中，放入等渗溶液中透析24h，取出透析好的空白脂质体，加入噻吗洛尔溶液，溶解后调PH值，水浴中孵化，再用等渗溶液透析，得脂质体。

本发明所研制的噻吗洛尔脂质体，其包封率可达98.8％，粒径分布均匀，可达到静脉注射或局部药用标准。其稳定性良好，4℃下充氮气储存，6个月内稳定性良好，其包封率、粒径与外观均无显著变化，并且可以通过制成冻干品进一步提高其稳定性。同时，本发明所采用的空白脂质体-硫酸铵梯度载药制备工艺非常适合工业化大生产，有非常广阔的产业化前景。

本发明的噻吗洛尔脂质体，制成滴眼剂时，其推荐的药物浓度为2.5mg/mL；制成注射剂时，其推荐的药物浓度为5mg/mL。

动物实验研究结果表明，本发明的噻吗洛尔脂质体，具有增加角膜透过性，提高药物的生物利用度的作用，因此能很好地发挥噻吗洛尔的抗青光眼的作用，较之普通滴眼液具有明显的优势。动物实验具体如下：

1.家兔离体角膜透过性实验

目的：研究眼用制剂的角膜透过性。

动物：新西兰白兔，体重2.5-3.0kg，雌雄不限。

试药：噻吗洛尔脂质体(2.5mg/ml实施例1)、噻吗洛尔生理盐水溶液(2.5mg/mL)。

方法：将兔耳缘静脉注射空气致死，处死后立即用手术刀片和眼科镊子分离出角膜。所用装置为改进的Franz立式扩散池，如图1所示，在接受池中注入7.8mL新鲜配制的谷胱甘肽缓冲液，然后将新鲜离体角膜用谷胱甘肽缓冲液冲洗后，小心夹于两个半池之间，上皮层面向样品池，内皮层面向接受池。样品池放入1mL的药物溶液，样品池用封口模封严，防止蒸发。排除气泡，此时，由于接受池较多的体积使角膜保持原来的曲率。接受池内用磁力搅拌器进行搅拌，水浴温度保持在34℃。于不同的时间从接受池取出1mL接受液，随后立即补充同等体积的谷胱甘肽缓冲液溶液。接受液用0.22μm的微孔滤膜过滤，取续滤液进样，进行HPLC测定.

结果：实验结果见图2。在6小时内2.5mg/ml的噻吗洛尔脂质体的角膜透过量是同浓度的滴眼液2倍多，证明本发明的脂质体能够有效促进噻吗洛尔的角膜透过性，使更多的药物透过角膜到达房水，提高药物在房水中的浓度，从而更好地发挥药效。

2，对急性眼高压模型家兔的眼压抑制作用

取兔10只，任意分成两组，实验前眼内以1％地卡因局部麻醉，用眼压计测量眼压，作为基础眼压。滴一滴噻吗洛尔滴眼剂和脂质体1h后，在家兔耳缘静脉快速注射5％葡萄糖注射液(15ml/kg)，在1min内完成，可导致急性高眼压。测量静脉注射葡萄糖后5、10、20、30、40min兔的眼压，每次测量3次，求平均值，重复实验，结果见表1

表1噻吗洛尔脂质体(2.5mg/mL)滴眼后，家兔眼内的眼压变化以滴眼液为对照(n＝3)

P＜0.05，P^*＞0.05

上述实验表明，将噻吗洛尔制成脂质体，能够有效促进噻吗洛尔的角膜透过性，提高生物利用度，使其更好的发挥药效。因此能够减少用药浓度或用药量减少药物浓度的波动，提高药效。

本发明的脂质体不仅对噻吗洛尔适用，作为理想的眼部药物载体，对于其他抗青光眼药物和抗白内障药物，也可适用，或作为有价值的参考。

本发明制备的脂质体在眼用时，能够提高药物的角膜透过量，提高药物的生物利用度，降低药物的毒副作用，减少药用浓度，减少药物浓度的波动，相对于普通滴眼剂具有明显的优势，因此能更好地发挥噻吗洛尔的抗青光眼的作用。

附图说明：

图1为改进的Franz立式扩散池示意图

图2为噻吗洛尔脂质体(2.5mg/mL)家兔离体角膜渗透曲线，以滴眼液为对照(n＝3)。

滴眼剂，

脂质体

具体实施方式：

实施例1

噻吗洛尔       25mg

磷脂酰胆碱     170mg

制备方法：取处方量的磷脂酰胆碱，将其溶解于10mL乙醚，加入4mL200mmol·L^-1的硫酸铵溶液，混匀，超声5min，使其形成稳定的W/O型乳剂，将该乳剂置50mL烧杯中。40℃恒温电磁搅拌下，在达到胶态状态时加入200mmol·L^-1的硫酸铵溶液6mL，继续恒温搅拌1h将乙醚蒸除，得空白脂质体。透析好的空白脂质体加入噻吗洛尔溶解后，用1mol·L^{- 1}的NaOH溶液调pH到9.2，置于40℃水浴中孵化30min，再用0.9％NaCl透析24h后，调整体积为10mL，得噻吗洛尔脂质体.

实施例2

噻吗洛尔      25mg

磷脂酰胆碱    170mg

胆固醇        34mg

制备方法：取处方量的磷脂酰胆碱和胆固醇，将其溶解于10mL乙醚，加入4mL 200mmol·L^-1的硫酸铵溶液，混匀，超声5min，使其形成稳定的W/O型乳剂，将该乳剂置50mL烧杯中。40℃恒温电磁搅拌下，在达到胶态状态时加入200mmol·L^-1的硫酸铵溶液6mL，继续恒温搅拌1h将乙醚蒸除，得空白脂质体。透析好的空白脂质体加入噻吗洛尔溶解后，用1mol·L^-1的NaOH溶液调pH到9.2，置于40℃水浴中孵化30min，再用0.9％NaCl透析24h后，调整体积为10mL，得噻吗洛尔脂质体.

实施例3

噻吗洛尔      50mg

磷脂酰胆碱    340mg

胆固醇        68mg

维生素E       10mg

制备方法：取处方量的磷脂酰胆碱，胆固醇和维生素E，将其溶解于10mL乙醚，加4mL 200mmol·L^-1的硫酸铵溶液，混匀，超声5min，使其形成稳定的W/O型乳剂，将该乳剂置于50mL烧杯中。40℃恒温电磁搅拌下，在达到胶态状态时加入200mmol·L^-1的硫酸铵溶液6mL，继续恒温搅拌1h将乙醚蒸除，得空白脂质体。透析好的空白脂质体加入噻吗洛尔溶解后，用1mol·L^-1的NaOH溶液调pH到9.2，置于40℃水浴中孵化30min，再用0.9％NaCl透析24h后，调整体积为10mL，得噻吗洛尔脂质体。

实施例4

噻吗洛尔      50mg

蛋黄卵磷脂    340mg

胆固醇        68mg

维生素E       25mg

方法：取处方量的蛋黄卵磷脂，胆固醇和维生素E，将其溶解于10mL乙醚，加入4mL 200mmol·L^-1的硫酸铵溶液，混匀，超声5min，使其形成稳定的W/O型乳剂，将该乳剂置于50mL烧杯中。40℃恒温电磁搅拌下，在达到胶态状态时加入200mmol·L^-1的硫酸铵溶液6mL，继续恒温搅拌1h将乙醚蒸除，得空白脂质体。透析好的空白脂质体加入噻吗洛尔溶解后，用1mol·L^-1的NaOH溶液调pH到9.2，置于40℃水浴中孵化30min，再用0.9％NaCl透析24h后，调整体积为10mL，得噻吗洛尔脂质体，将HPMC 150mg在快速搅拌条件下，缓慢加入到脂质体溶液中，既得噻吗洛尔脂质体凝胶.

Claims (10)

1、噻吗洛尔脂质体，由噻吗洛尔、磷脂、胆固醇、抗氧剂和渗透压调节剂组成，其特征在于：各组分重量百分比如下：

噻吗洛尔    0.01％-50.00％

磷脂        10.00％-99.99％

胆固醇      0.00％-68.00％

抗氧剂      0.00％-50.00％

渗透压调节剂0.00％-89.99％。

2、根据权利要求1所述的噻吗洛尔脂质体，其特征在于：所述的噻吗洛尔为外消旋体(RS-)噻吗洛尔、左旋(S-)噻吗洛尔和右旋(R-)噻吗洛尔中的任何一种，或其中任何一种的盐。

3、根据权利要求2所述的噻吗洛尔脂质体，其特征在于：所述的盐为噻吗洛尔的盐酸盐、乳酸盐、硫酸盐、硝酸盐、枸橼酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、重酒石酸盐。

4、根据权利要求1所述的噻吗洛尔脂质体，其特征在于：所述的磷脂为两条脂肪烃链各含有8至26个饱和或不饱和碳原子的天然来源、人工合成、人工半合成或人工修饰的磷脂类物质，选自大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、烷基醚磷脂酰胆碱中的一种或几种，或其中任何一种的衍生物的一种或几种。

5、根据权利要求1所述的噻吗洛尔脂质体，其特征在于：所述的抗氧剂为氢醌、羟基香豆素、维生素E、维生素C、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸棕榈酸酯、没食子酸烷酯、丁羟基茴香醚、丁羟基甲苯、去甲二氢愈创木酸、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中的一种或几种。

6、根据权利要求1所述的噻吗洛尔脂质体，其特征在于：所述的渗透压调节剂为：氯化钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、甘油、玻璃酸钠、透明质酸中的一种或几种。

7、一种如权利要求1所述的噻吗洛尔脂质体的制备方法，其特征在于：该制备方法为薄膜分散法、乙醇注入法、逆相蒸发法、硫酸铵梯度法、硫酸铵梯度与pH调节法。

8、根据权利要求1所述的噻吗洛尔脂质体，其特征在于：还可加入凝胶基质进一步制成脂质体凝胶剂。

9、根据权利要求8所述的噻吗洛尔脂质体，其特征在于：所述的凝胶基质可以为亲水高分子材料，选自：羟丙甲纤维素、聚丙烯酸、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚半乳糖醛酸或木质葡聚糖中的一种或几种。

10、根据权利要求8所述的噻吗洛尔脂质体，其特征在于：所述的凝胶基质可以为在位凝胶基质，选自：泊洛沙姆、邻苯二甲酸醋酸纤维素、交联丙烯酸及卡伯波、聚卡波非、聚丙烯酸树脂、聚乙烯吡咯烷酮、胶凝糖树胶或海藻酸中的一种或几种，从而形成温度敏感型、pH敏感型、离子活化型或混合型凝胶。