CN103040763A - 一种盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂及其制法。通过选用特定重量配比的盐酸拉贝洛尔、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、胆固醇和泊洛沙姆188、甘露醇或氯化钠制成品质优异的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂。与现有制剂相比，本发明的制剂大大提高了制剂的稳定性和生物利用度，释药平稳，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，疗效更显著。

Description

一种盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂

技术领域

本发明涉及一种脂质体注射剂及其制法，具体涉及一种盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂及其制法，属于医药技术领域。

背景技术

盐酸拉贝洛尔，其化学名称为5-[1-羟基-2(1-甲基-3苯丙胺基)-乙基]水杨酰胺盐酸盐，分子式C₁₉H₂₄N₂O₃·HCl，分子量364.87，结构式为:

盐酸拉贝洛尔是一种甲型肾上腺受体阻断剂和乙型肾上腺受体阻滞剂，可以阻断肾上腺素受体，放缓实性心律，减少外周血管阻力。盐酸拉贝洛尔在化学结构上有两个光学中心，有4种立体异构物，即r,r-,s-,s,r-及s,s-盐酸拉贝洛尔。各异构物的阻断受体的选择性各不相同：r,r-型者主要阻断β受体；s,r-型的阻断α受体的作用最强；s,s-型具有较弱的阴断α受体的作用；r,s-型不具任何阻断作用。临床应用的盐酸拉贝洛尔为上述4种异构体的消旋混合物。故兼有α受体及β受体阻断作用。其β受体阻滞作用约为普萘洛尔的1/2.5，但无心肌抑制作用，α受体阻滞作用为酚妥拉明的1/6～10。对β受体的作用比α受体强，口服时为3:1，静注时则为6.9:1。它与单纯β阻滞剂不同，能降低卧位血压和周围血管阻力，一般不降低心排血量或每次心搏量。对卧位病人心率无明显变化，立位或运动时心率则减慢。对高血压的疗效比单纯β阻滞剂为优。本品亦可引起体位性低血压。

临床上盐酸拉贝洛尔主要用于治疗各种类型的高血压急症，如高血压危象、嗜铬细胞瘤危象、先兆子痫、高血压脑病、大面积烧伤引起高血压，伴有冠状动脉疾病或急性心肌梗塞高血压和手术后高血压，亦可用于麻醉中控制血压。

目前上市销售的盐酸拉贝洛尔的制剂主要有片剂、注射用粉针剂和注射液。然而，片剂吸收缓慢，生物利用度低；粉针剂复溶性不好，复溶后盐酸拉贝洛尔含量下降；注射液长期放置澄明度不合格，pH值降低，稳定性较差。上述弊端均影响了盐酸拉贝洛尔在临床上的应用。

脂质体是由磷脂双分子层构成的亲水性囊泡，由于脂质体具有提高被包封药物的稳定性、促进药物透皮吸收，延长药物的作用时间、对局部病变部位的靶向作用、降低药物毒副作用等特点，因此，脂质体作为药物载体已广泛应用于药物制剂工艺配方中。

脂质体（Liposome）最初是由英国学者Bangham和Standlish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均未脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4nm。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。脂质体可分为多室脂质体和胆识脂质体。单室脂质体又分为小单室脂质体和大单室脂质体。小单室脂质体为球形，尺寸一般为20-50纳米；大单室脂质体的尺寸为微米数量级。

1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体，主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主药被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。

由于盐酸拉贝洛尔注射剂的不足，目前对于盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂存在需求。

制备脂质体的挑战在于选择适当的脂质体组成成分和制法。由于脂质体的性质如稳定性、包封率、起效时间、在体内的循环时间、生物利用度和毒副作用等与脂质体的组成直接地密切相关，而脂质体的组成与所要包封的药物性质直接地密切相关，因此，选择什么样的成分形成具有良好品质的盐酸拉贝洛尔脂质体注射液是首要解决的问题。

发明内容

本发明人经过锐意研究发现，通过选用特定重量配比的盐酸拉贝洛尔、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、胆固醇和泊洛沙姆188、甘露醇或氯化钠，可以形成品质优异的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂，从而完成本发明。

本发明的脂质体注射剂具有良好的制剂稳定性，脂质体具有良好的包封率，较现有产品具有更好的生物利用度，本发明制得的脂质体注射剂减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，适合于工业化大生产。

本发明解决的技术方案如下：

本发明提供一种盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂，主要由盐酸拉贝洛尔、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、胆固醇和泊洛沙姆188、甘露醇或氯化钠制成。

本发明提供一种盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂，其中单位计量的盐酸拉贝洛尔的规格为25mg、50mg或2ml：25mg、5ml:50mg、10ml:50mg（注射液体积：拉贝洛尔重量）。

本发明提供一种盐酸拉贝洛尔脂质体冻干粉针注射剂，主要由下列重量份数比的成分制成：

本发明提供一种盐酸拉贝洛尔脂质体冻干粉针注射剂，各组分的优选重份数为：

本发明提供一种盐酸拉贝洛尔脂质体注射液，主要由下列重量份数比的成分制成：

本发明提供一种盐酸拉贝洛尔脂质体注射液，各组分的优选重份数为：

作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括磷脂酰乙醇胺、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、和大豆磷脂酰肌醇等。合成磷脂为二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油等。

在本发明中，作为药物活性成分的盐酸拉贝洛尔，其脂溶性差，水溶性良好。针对盐酸拉贝洛尔的特点，本发明人通过研究发现二肉豆蔻酰磷脂酰甘油特别适于作为基础磷脂成膜材料。

二肉豆蔻酰磷脂酰甘油作为一种合成磷脂，其含量非常高，容易获得，价格低廉。二肉豆蔻酰磷脂酰甘油的相变温度较高，易于形成稳定的脂质体膜。

当使用其他磷脂时，难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性和渗漏率等性质差。

为了改善脂质体的稳定性，所用二肉豆蔻酰磷脂酰甘油的纯度为98%以上，优选99%以上。

在本发明的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂中，相对于1重量份的拉贝洛尔而言，二肉豆蔻酰磷脂酰甘油的用量为3-8重量份。如果二肉豆蔻酰磷脂酰甘油的用量低于3重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果二肉豆蔻酰磷脂酰甘油的用量的用量高于8重量份，则作为药物活性成分的盐酸拉贝洛尔的包封率下降，注射剂的品质以及疗效降低。

在本发明的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂中，胆固醇和泊洛沙姆188用于调节脂质体的膜稳定性。

胆固醇是一种双亲性分子，与二肉豆蔻酰磷脂酰甘油相结合，阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇掺入二肉豆蔻酰磷脂酰甘油双层，类似于“缓冲剂”一样起到调节膜结构“流动性”的作用。当低于相变温度时，胆固醇可以使膜减少有序排列，增加流动性；当高于相变温度时，胆固醇可以增加膜的有序排列，从而降低膜的流动性。胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。

研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。

另一方面，本发明人研究发现，在本发明的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂中，相对于1重量份的拉贝洛尔而言，二肉豆蔻酰磷脂酰甘油的用量为3-8重量份，胆固醇为1-6重量份时，所形成的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂的包封率高。

在本发明的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂中，使用泊洛沙姆188来进一步改进脂质体膜的稳定性。泊洛沙姆188是一种新型的非离子表面活性剂，当用于二肉豆蔻酰磷脂酰甘油双层膜中时，能提高该双层膜之间的化学能，从而提高脂质体在水性液体中的化学稳定性，进而提高盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂的稳定性。

在本发明的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂中，相对于1重量份的拉贝洛尔而言，泊洛沙姆188的用量为0.5-3重量份。如果泊洛沙姆188的用量低于0.5重量份，则由于其用量过低导致对盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂的稳定性改进不够，反之，如果泊洛沙姆188的用量高于3重量份，则用于其用量过高而导致脂质体膜易于泄露。

研究发现，当使用上述特定量的盐酸拉贝洛尔、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、胆固醇和泊洛沙姆188时，可以得到品质优良的盐酸拉贝洛尔脂质体，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。

在本发明的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂中，使用甘露醇作为赋形剂，用于形成稳定的注射剂。

另一方面，本发明还提供一种盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂的制备方法，具体包括如下制备步骤：

（1）将二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、胆固醇和泊洛沙姆188溶于缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；

（2）将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次15分钟；

（3）无菌条件下，向熔融状态的脂质体中加入盐酸拉贝洛尔，不断搅拌2小时，制得盐酸拉贝洛尔脂质体溶液；

（4）向上述脂质体溶液中加入甘露醇，0.45um微孔滤膜过滤，定容，分装，冷冻干燥，即得盐酸拉贝洛尔脂质体冻干粉针注射剂；

或者，向上述脂质体溶液中加入氯化钠，0.45um微孔滤膜过滤，定容，快速冷冻，然后恢复到室温，定容，灌装，灭菌，即得盐酸拉贝洛尔脂质体注射液。

上述所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液是选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液中的一种。

上述所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液为pH为6.2的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液。

上述所述的制备方法，其中步骤（3）中所述的熔融状态脂质体的温度为70℃。

上述所述的制备方法，其中步骤（4）中所述的冷冻的温度为-60℃。

制备脂质体的挑战在于如何使脂质体膜形成适当大小、适当结构材料的包封率高的囊泡。而且这些材料在形成脂质体不漏出。

本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备工艺，获得了品质优良的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂，脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。

研究发现，脂质体的大小是影响脂质体在体内分布和停留时间的主要因素，脂质体的粒径越小，体内停留时间越长。通过本发明方法制备的盐酸拉贝洛尔脂质体颗粒小，粒径大小分布均匀，这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案。图1是盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂的血药浓度-时间曲线。表示实施例1-3中制备的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂、对比例1-3中制备的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂和市售盐酸拉贝洛尔注射剂的血药浓度与时间的关系曲线。

其中：

上市例

实施例1

实施例2

实施例3

对比例1对比例2

对比例3

具体实施方式

以下通过具体优选的实施例对本发明进行进一步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。

实施例1盐酸拉贝洛尔脂质体冻干粉针剂的制备

所用成分及其重量如下：

采用以下制备工艺制备盐酸拉贝洛尔脂质体冻干粉针剂：

（1）将125g二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、25g胆固醇和75g泊洛沙姆188溶于800ml pH为6.2的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液中，制成空白脂质体；

（2）将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次15分钟；

（3）无菌条件下，向70℃熔融状态的脂质体中加入25g盐酸拉贝洛尔，不断搅拌2小时，制得盐酸拉贝洛尔脂质体溶液；

（4）向上述脂质体溶液加入40g甘露醇，0.45um微孔滤膜过滤，定容至1000ml，分装，冷冻干燥，即得盐酸拉贝洛尔脂质体冻干粉针剂。

实施例2盐酸拉贝洛尔脂质体注射液的制备

所用成分及其重量如下：

采用以下制备工艺制备盐酸拉贝洛尔脂质体注射液：

（1）将150g二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、150g胆固醇和100g泊洛沙姆188溶于2000mlpH为6.2的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液中，制成空白脂质体；

（2）将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次15分钟；

（3）无菌条件下，向70℃熔融状态的脂质体中加入50g盐酸拉贝洛尔，不断搅拌2小时，制得盐酸拉贝洛尔脂质体溶液；

（4）向上述脂质体溶液加入45g氯化钠，0.45um微孔滤膜过滤，定容至5000ml，分装，快速冷冻，然后恢复到室温，灭菌，即得盐酸拉贝洛尔脂质体注射液。

实施例3盐酸拉贝洛尔脂质体注射液的制备

所用成分及其重量如下：

采用以下制备工艺制备盐酸拉贝洛尔脂质体注射液：

（1）将400g二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、300g胆固醇和25g泊洛沙姆188溶于5000mlpH为6.2的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液中，制成空白脂质体；

（2）将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次15分钟；

（3）无菌条件下，向70℃熔融状态的脂质体中加入50g盐酸拉贝洛尔，不断搅拌2小时，制得盐酸拉贝洛尔脂质体溶液；

（4）向上述脂质体溶液加入90g氯化钠，0.45um微孔滤膜过滤，定容至10000ml，快速冷冻，然后恢复到室温，定容，灌装，灭菌，即得盐酸拉贝洛尔脂质体注射液。

对比例1-3盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂的制备

采用分别与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的成分分别制成盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂：

表1对比例1-3中所用成分

其中，“/”表示未使用。

试验例1脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3中的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2脂质体粒径检测结果

从表2可知，实施例1-3制得的脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂质体粒径不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-3中所得盐酸拉贝洛尔脂质体的颗粒外观及其平均粒径明显优于对比例1-3中所得的盐酸拉贝洛尔脂质体。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得盐酸拉贝洛尔脂质体的外观劣于本发明，平均粒径明显大出很多。

试验例2包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-3中制备的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂以10000r/min的转速高速离心，离心5分钟，取上清液，用甲醇溶解，HPLC法测盐酸拉贝洛尔含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3制备的样品和上市的盐酸拉贝洛尔注射液（批号：110602，江苏迪赛诺制药有限公司）分别置于高温40℃、相对湿度75%的条件下6个月，进行加速试验考察，实验结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由表4可知，加速6月时，上市制剂含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4渗漏率试验

取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果示于下表5中。

表5渗漏率试验结果

由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-3中制备的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂渗漏率变化不大，而对比例1-3中制备的注射剂渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂具有更高的稳定性。

试验例5血药浓度的测定

将42只大鼠随机分成7组，每组分别静脉注射给药实施例1-3及对比例1-3中制备的注射剂，以及市售注射用盐酸拉贝洛尔（批号：110602，江苏迪赛诺制药有限公司），注射量为5mg拉贝洛尔。给药后分别于0.5h、1h、1.5h、2h、3h、6h、8h、12h和24h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-3中制备的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂、对比例1-3中制备的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂和市售盐酸拉贝洛尔注射剂的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

由图1可知，与对比例1-3中制备的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂和市售盐酸拉贝洛尔注射剂相比，本发明实施例1-3中制备的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂具有以下优点：在体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了改进的缓释效果，生物利用度增加。

工业实用性

由上述实施例以及实验例的结果可知，本发明的盐酸拉贝洛尔脂质体具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均应落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims (9)

1.一种盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂，其特征在于主要由盐酸拉贝洛尔、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、胆固醇和泊洛沙姆188、甘露醇或氯化钠制成。

2.根据权利要求1所述的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂，其特征在于单位剂量的盐酸拉贝洛尔的规格为25mg、50mg或2ml：25mg、5ml:50mg、10ml:50mg（注射液体积：拉贝洛尔重量）。

3.根据权利要求1或2任一所述的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂，其特征在于由下列重量份数比的成分制成：

4.根据权利要求1或2任一所述的盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂，其特征在于由下列重量份数比的成分制成：

5.一种制备盐酸拉贝洛尔脂质体注射剂的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、胆固醇和泊洛沙姆188溶于缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；

（2）将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，每次15分钟；

（3）无菌条件下，向熔融状态的脂质体中加入盐酸拉贝洛尔，不断搅拌2小时，制得盐酸拉贝洛尔脂质体溶液；

（4）向上述脂质体溶液中加入甘露醇，0.45um微孔滤膜过滤，定容，分装，冷冻干燥，即得盐酸拉贝洛尔脂质体冻干粉针注射剂；

或者，向上述脂质体溶液中加入氯化钠，0.45um微孔滤膜过滤，定容，快速冷冻，然后恢复到室温，定容，灌装，灭菌，即得盐酸拉贝洛尔脂质体注射液。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液中的一种。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液为pH为6.2的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲溶液。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤（3）中所述的熔融状态脂质体的温度为70℃。

9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤（4）中所述的冷冻的温度为-60℃。

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