CN106596806A - 一种从首乌益智胶囊中同时制备大黄素和大黄素甲醚的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从首乌益智胶囊中同时制备大黄素和大黄素甲醚的方法，该方法是通过以下步骤实现的：（1）大黄素蒽醌的提取与水解；（2）大黄素和大黄素甲醚的薄层制备。本方法以首乌益智胶囊为原料，经甲醇提取、水解和制备型薄层分离可同时制备大黄素和大黄素甲醚。对制备的两种成分，经与中国药品生物制品检定所提供的大黄素和大黄素甲醚对照品对比分析和含量测定，表明采用本法制备大黄素的含量为98.32%，大黄素甲醚的含量为98.15%，其纯度与两种对照品基本相当，达到了中药化学对照品的质量要求。本方法无需贵重仪器，简便易行，成本低，且能达到中药化学对照品的质量。

Description

一种从首乌益智胶囊中同时制备大黄素和大黄素甲醚的方法

技术领域

本发明涉及大黄素和大黄素甲醚的提取方法，具体涉及一种从首乌益智胶囊中同时制备大黄素和大黄素甲醚的方法。

背景技术

首乌益智胶囊主要由制何首乌、益智、黄芪等中药组成，具有补肾填精、化瘀通窍的功效，主要用于治疗肾精亏虚，瘀血阻络型血管性痴呆。方中君药制何首乌的主要成分是大黄素和大黄素甲醚。大黄素和大黄素甲醚不仅对人体具有重要的生理活性，而且是中医药研究和分析测试中常用的化学对照品，因此，制备大黄素和大黄素甲醚具有重要的应用价值。目前对大黄素和大黄素甲醚对照品的制备多采用制备型高效液相色谱法，该方法制备的对照品虽纯度较高，但需要大型贵重仪器和专用层析柱，具有成本高、制备周期长等缺陷。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种从首乌益智胶囊中同时制备大黄素和大黄素甲醚的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种从首乌益智胶囊中同时制备大黄素和大黄素甲醚的方法，包括以下步骤：

（1）大黄素蒽醌的提取与水解：取1g首乌益智胶囊胶囊内容物，研细，加硅藻土1g，拌匀，置索氏提取器中，加甲醇100mL，加热回流3小时，提取液蒸干，残渣加稀盐酸溶液40mL，转移至圆底烧瓶中，加三氯甲烷40mL，水浴回流2 h，立即冷却，转移至分液漏斗中，分出三氯甲烷层，酸水液再用三氯甲烷提取2次，每次40mL，合并三氯甲烷液，用水80mL洗涤1次，三氯甲烷液加无水硫酸钠15g，振摇15min，放置30min，滤过，用少量三氯甲烷洗涤滤渣及滤器，合并滤液及洗液，蒸干，残渣用三氯甲烷溶解，并转移至1mL量瓶中，甲醇定容，摇匀；

（2）大黄素及大黄素甲醚的薄层制备：取上述溶液，作为薄层供试品溶液；用微型点样器吸取供试品溶液，以条状或点状形式连续点于多块层析板上，置于盛有展开剂的层析缸中，取出，晾干，薄层板置紫外光灯下显色，将层析板大黄素及大黄素甲醚斑点区域分别刮下，将刮下的大黄素和大黄素甲醚硅胶粉分别置于锥形瓶中，加丙酮适量，砂芯漏斗滤过，重复操作3次，滤液过0.45µm微孔滤膜，滤液低温回收溶剂，即分别得到制备的大黄素和大黄素甲醚。

进一步的，所述层析板为厚度0.6mm的硅胶H薄层板。

进一步的，所述层析板预先在105℃下活化60min。

本发明所使用的展开剂为石油醚（60~90℃）-甲酸乙酯-甲酸的上层。

上述石油醚、甲酸乙酯、甲酸的体积比为15:5:1。

进一步的，所述步骤（2）中，紫外光灯检视波长为365nm。

进一步的：所述步骤（2）中，薄层层析的展距为13cm。

大黄素（式一）及大黄素甲醚（式二）的结构式如下：

本发明的有益效果为：

（1）本发明以首乌益智胶囊为原料，经提取、水解和制备型薄层分离制备大黄素和大黄素甲醚，，其纯度与两种对照品基本相当，达到了中药化学对照品的要求；

（2）本发明无需贵重仪器，简便易行，成本低，且能达到化学对照品的质量要求等优点，是同时制备两种中药化学对照品的理想的方法。

附图说明

图1：薄层制备示意全部紫外光灯下检视图。

图2：薄层制备的大黄素和大黄素甲醚的TLC图，其中，条带1：TLC制备的大黄素；条带2：大黄素对照；条带3：TLC制备的大黄素甲醚；条带4：大黄素甲醚对照。

图3：大黄素对照品HPLC图。

图4：大黄素甲醚对照品HPLC图。

图5：薄层制备的大黄素HPLC图。

图6：薄层制备的大黄素甲醚HPLC图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

（1）大黄素蒽醌的提取与水解：称取装量差异项下本胶囊内容物适量，研细，取约5g，加硅藻土5g，拌匀，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流3小时，提取液蒸干，残渣加稀盐酸溶液200mL使溶解，转移至圆底烧瓶中，加三氯甲烷200mL，水浴回流2 h，立即冷却，转移至分液漏斗中，分出三氯甲烷层，酸水液再用三氯甲烷提取2次，每次200mL，合并三氯甲烷液，用水400mL洗涤1次，三氯甲烷液加无水硫酸钠75g，振摇15min，放置30min，滤过，用少量三氯甲烷洗涤滤渣及滤器，合并滤液及洗液，回收溶剂，残渣用三氯甲烷溶解，并转移至5mL量瓶中，定容，摇匀。

（2）大黄素及大黄素甲醚的薄层制备：

①薄层供试品溶液的制备：取上述溶液，作为薄层供试品溶液；

②薄层条件：

层析板：层析板为厚度为0.6mm的硅胶H薄层板（20cm×20cm），105℃活化60min，备用；

展开剂：石油醚（60~90℃）-甲酸乙酯-甲酸（体积比为15: 5:1）上层；

检视方法：紫外光灯365nm下检视；

展距：13cm；

③点样及制备：用微型点样器吸取样品液400µL，以点状形式连续点于薄层板上，置于盛有展开剂的层析缸中，展距13cm，取出，晾干，薄层板置于紫外光灯365nm下检视如图3所示，图中可以明显看出，大黄素及大黄素甲醚色带分别与各自对照斑点的颜色及位置相同，且与其他斑点分离情况良好。然后再用微型点样器吸取样品液400µL，以条状形式连续点于20块薄层板上，置于盛有展开剂的层析缸中，展距13cm，取出，晾干，薄层板置于紫外光灯365nm下检视，将层析板大黄素甲醚（上部黄色斑点）和大黄素（下部橙黄色斑点）显色斑点对应区域分别仔细刮下，将刮下的大黄素和大黄素甲醚硅胶粉各置于一个250mL锥形瓶中，加丙酮适量，砂芯漏斗滤过，重复操作3次，滤液过0.45µm微孔滤膜，滤液低温回收溶剂，即分别得到制备的大黄素和大黄素甲醚。

采用上述方法制备三批大黄素和大黄素甲醚，每批各制备20块薄层板，将各层析板刮下的含大黄素和大黄素甲醚的硅胶粉分别合并，按上述方法处理，即得制备的三批大黄素和大黄素甲醚样品，各批样品制备结果见表1。

表1 三批大黄素和大黄素甲醚的制备结果

对制备的大黄素和大黄素甲醚的鉴定和含量研究：

为鉴定采用实施例1的方法制备的两种成分是否为大黄素和大黄素甲醚，并分析其纯度，又以大黄素和大黄素甲醚对照品为对照，分别进行了两种成分的熔点测定、薄层色谱和HPLC对比分析，结果表明，采用制备型薄层分得的两种化合物分别与大黄素和大黄素甲醚对照品具有基本相同的熔点、Rf值和HPLC保留时间，其纯度已与中国药品生物制品检定所提供的对照品基本相同，达到了中药化学对照品的质量要求，其各项试验方法及其结果如下：

（1）熔点混测试验：对分离的大黄素和大黄素甲醚分别进行了熔点测定，测得大黄素的熔点为256-257℃（文献报道256-257℃），大黄素甲醚的熔点为203-207℃（文献报道196-206℃或203-207℃），与两种对照品文献报道基本一致；并分别将分得的大黄素和大黄素甲醚对照品和分得的大黄素和大黄素甲醚对照品研匀后，装入毛细管中，进行熔点混测，测得大黄素和大黄素甲醚混合物的熔点分别256-257℃和203-207℃，表明两种成分的混合熔点测定均未见明显下降，表明分得大黄素和大黄素甲醚两种成分的纯度已与对照品基本相当。

（2）薄层色谱法对制备大黄素和大黄素甲醚的分析结果：将分离的大黄素和大黄素甲醚与大黄素和大黄素甲醚对照品，用甲醇配成每1mL含1mg的溶液，分别点于同一薄层板上，同上展开、显色（实施例1的展开、检视方法）后，在与对照品大黄素和大黄素甲醚的对应位置上，均仅有大黄素和大黄素甲醚的单一主要显色点，见图2，这表明实施例1的方法制备的大黄素和大黄素甲醚具有较高的纯度，从薄层显色的结果看，其纯度与对照品基本相当；本发明提供的展距具有重要作用，当展距大于或小于本发明提供的数值时，斑点分散，模糊不清，且制剂点看不到；当展开剂为石油醚（60~90℃）-甲酸乙酯-醋酸时，分离度低，效果差，且在本发明提供的展距时，得不到分离的组合。

（3）HPLC对制备的大黄素和大黄素甲醚的分析结果：

高效液相色谱仪（Waters e2695）。色谱柱为Thermo Syncronis C₁₈色谱柱(250mm×4.6，5µm)，超纯水，流动相用甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；大黄素对照品（批号为110756-200110）、大黄素甲醚对照品（批号为110758-201415）均由中国食品药品检定研究院提供。

色谱条件与系统适用性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%磷酸水溶液（74:26）为流动相；流速1.0mL.min^-1；检测波长为254 nm；温度：30℃。理论板数按大黄素峰计算应不低于2500。

供试品溶液的制备：取薄层制备的大黄素和大黄素甲醚各适量，用甲醇制成每1mL约含10µg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：取大黄素对照品适量，精密称定，加色谱甲醇制成每1 mL量瓶含大黄素10µg的对照品溶液；取大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加色谱甲醇制成每1 mL量瓶含大黄素甲醚10µg的对照品溶液。

试验结果：

分别吸取大黄素对照品溶液、大黄素甲醚对照品溶液、大黄素供试品溶液和大黄素甲醚供试品溶液各10µL，注入高效液相色谱仪测定，即得各色谱图，如图3～6所示。

①对大黄素HPLC图谱的分析：采用上述HPLC条件对薄层制备的大黄素分析结果表明，薄层制备大黄素的HPLC色谱图（图5），在与大黄素对照品（图3）相同保留时间（13.541）处具有明显的大黄素的主要吸收峰，两HPLC图对比，除大黄素主峰外，对照品有微小的溶剂杂质峰，制备的样品除了有溶剂峰之外，还另有微小的杂质峰，但总体看来，薄层制备的大黄素已具有较高的纯度，其制备样品中大黄素的含量应与大黄素对照品基本相当，达到了中药化学对照品对大黄素的质量要求。

②对大黄素甲醚HPLC图谱的分析：采用上述HPLC条件对薄层制备的大黄素甲醚分析结果表明，薄层制备的大黄素甲醚HPLC色谱图（图6）在与大黄素甲醚对照品（图4）相同保留时间（23.148）处具有明显的大黄素甲醚的主要吸收峰，两HPLC图对比，除大黄素甲醚主峰外对照品有微小的溶剂杂质峰，制备的样品除了有溶剂峰之外，还另有微小的杂质峰，薄层制备样品中大黄素甲醚的含量已高于所用的大黄素甲醚对照品，达到了中药化学对照品对大黄素甲醚的质量要求。

（4）制备样品中大黄素和大黄素甲醚的含量测定：对制备的大黄素和大黄素甲醚，按照（3）HPLC对大黄素和大黄素甲醚的分析条件和测定方法进行了含量测定，测得制备大黄素的含量为98.32%，制备大黄素甲醚的含量为98.15%，达到了国家相关部门规定的中药化学对照品不应低于97.0%的技术要求。

（1）本发明的方法以首乌益智胶囊为原料，经提取、水解和制备型薄层分离同时制备大黄素和大黄素甲醚对照品，并进行了三批两种成分的制备试验，通过对制备两种成分的分析表明，采用本法制备大黄素的含量为98.32%，制备大黄素甲醚的含量为98.15%，达到了国家相关部门规定的中药化学对照品不应低于97.0%的技术要求。

（2）本制备大黄素和大黄素甲醚的方法与目前的制备方法相比，该方法具有无需贵重仪器，简便易行，成本低，且能达到中药化学对照品的质量要求等优点，是同时制备两种中药化学对照品的较理想的方法。

（3）本方法的制备量大黄素和大黄素甲醚均达到毫克级别，在制备过程中，还可根据对两种成分的需用量，再继续进行放大级别的制备。

Claims (7)

1.一种从首乌益智胶囊中同时制备大黄素和大黄素甲醚的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）大黄素蒽醌的提取与水解：取1g首乌益智胶囊胶囊内容物，研细，加硅藻土1g，拌匀，置索氏提取器中，加甲醇100mL，加热回流3小时，提取液蒸干，残渣加稀盐酸溶液40mL，转移至圆底烧瓶中，加三氯甲烷40mL，水浴回流2 h，立即冷却，转移至分液漏斗中，分出三氯甲烷层，酸水液再用三氯甲烷提取2次，每次40mL，合并三氯甲烷液，用水80mL洗涤1次，三氯甲烷液加无水硫酸钠15g，振摇15min，放置30min，滤过，用少量三氯甲烷洗涤滤渣及滤器，合并滤液及洗液，蒸干，残渣用三氯甲烷溶解，并转移至1mL量瓶中，甲醇定容，摇匀；

（2）大黄素及大黄素甲醚的薄层制备：取上述溶液，作为薄层供试品溶液；用微型点样器吸取供试品溶液，以条状或点状形式连续点于多块层析板上，置于盛有展开剂的层析缸中，取出，晾干，薄层板置紫外光灯下显色，将层析板大黄素及大黄素甲醚斑点区域分别刮下，将刮下的大黄素和大黄素甲醚硅胶粉分别置于锥形瓶中，加丙酮适量，砂芯漏斗滤过，重复操作3次，滤液过0.45µm微孔滤膜，滤液低温回收溶剂，即分别得到制备的大黄素和大黄素甲醚。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述层析板为厚度0.6mm的硅胶H薄层板。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述层析板预先在105℃下活化60min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述展开剂为石油醚（60~90℃）-甲酸乙酯-甲酸的上层。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述石油醚、甲酸乙酯、甲酸的体积比为15:5:1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，紫外光灯检视波长为365nm。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，薄层层析的展距为13cm。