CN106489536B - 一种棕色蘑菇液体菌种高密度生产方法 - Google Patents

一种棕色蘑菇液体菌种高密度生产方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106489536B
CN106489536B CN201611126524.0A CN201611126524A CN106489536B CN 106489536 B CN106489536 B CN 106489536B CN 201611126524 A CN201611126524 A CN 201611126524A CN 106489536 B CN106489536 B CN 106489536B
Authority
CN
China
Prior art keywords
high density
brown mushroom
dissolved oxygen
fermentation
control
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201611126524.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106489536A (zh
Inventor
王玉
班立桐
李政
黄亮
杨红澎
孙宁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Agricultural University
Original Assignee
Tianjin Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Agricultural University filed Critical Tianjin Agricultural University
Priority to CN201810132231.6A priority Critical patent/CN108179116B/zh
Priority to CN201810132340.8A priority patent/CN108179117B/zh
Priority to CN201810132361.XA priority patent/CN108184548B/zh
Priority to CN201611126524.0A priority patent/CN106489536B/zh
Publication of CN106489536A publication Critical patent/CN106489536A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106489536B publication Critical patent/CN106489536B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00—Cultivation of mushrooms

Abstract

本发明公开一种高密度生产棕色蘑菇液体菌种的方法，属于食品领域。所述棕色蘑菇液态菌种的高密度生产方法，包括菌种活化、种子液的制备、高密度发酵棕色蘑菇液体菌种：采用5L全自动发酵罐，装液量为3L，初始葡萄糖为50g/L，接种量3％，25℃；在发酵过程，通过自动控制流加2mol/L的氢氧化钠将发酵过程的pH恒定为6.0；第一阶段0‑24h结合自动控制通气量调整溶氧控制在50％，搅拌控制100转/分钟；第二阶段24h之后停止搅拌，通过控制通气量来实现溶氧控制，溶氧控制在30％，总培养时间100‑160小时。在pH恒定，二阶式控制溶氧策略下，最大菌球数与不控制发酵参数相比提高了300％以上。

Description

一种棕色蘑菇液体菌种高密度生产方法
技术领域
本发明涉及一种高密度生产棕色蘑菇液体菌种的方法。
背景技术
棕色蘑菇(Agaricus brunnescens Peck)是蘑菇中的珍稀类品种，属于担子菌纲(Basidiomycotina)、伞菌目(Agaritales)、蘑菇科(Agaricaceae)、蘑菇属(Agaricus)，也称为棕蘑、变褐蘑菇、有色蘑菇、洋菇、美味蘑菇等。
棕色蘑菇菌盖呈天然棕褐色，菌柄白色，因其菌盖色泽而得名，该品种肉质致密、紧实、口感鲜嫩。棕色蘑菇与双孢蘑菇相比，在菇质、抗性、营养等方面都具有一定的优势。棕色蘑菇菇质结实、口感韧性强、香味浓郁，更接近于野生口蘑，与双孢蘑菇相比，其菌盖不会随时间延长而氧化褐变导致商品性状的下降，因此无需使用化学护色、漂白剂等处理，食品的营养和安全性更能得到保障。
由于消费需求，棕色蘑菇在国内外市场上的份额呈逐年增加的趋势，在亚洲的日本、韩国也有栽培。在我国由于其色泽和气味偏重，一直未被市场广泛接受，仅有福建等地有少量栽培，产品均外销。近些年来，由于棕色蘑菇抗病性强、耐储存、保鲜期长、基本无农药残留等优势，受到市场的欢迎，我国山东、新疆、湖北、宁夏、天津等地也开始进行种植。
棕色蘑菇的培养周期很长，大约6个月左右，因此大大影响了其工业化效率。为了缩短棕色蘑菇的培养周期，可以采用液态棕色蘑菇种子。液态棕色蘑菇种子与传统麦粒种接种方式相比，可以缩短棕色蘑菇种子培育时间大约一个半月，因此在工业化生产中具有巨大的经济价值。
因此本专利获得的高密度生产棕色蘑菇液态菌种的方法具有广阔的市场前景。
发明内容
本发明的目的在于提出了一种新型的棕色蘑菇液态菌种的高密度生产方法。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
一种棕色蘑菇液态菌种的高密度生产方法，包括以下步骤：
1)菌种活化：将棕色蘑菇菌种转接入试管固体培养基斜面中，放入恒温培养箱25℃培养至满管。
2)种子液的制备：取3块0.5cm2新鲜斜面菌种接种于种子培养基(100mL/500mL三角瓶)中，25℃，150r/min摇床培养5d。
所述斜面培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氢钾1，七水硫酸镁1.5，菜园土600，麦粒100，琼脂25。
所述种子培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氢钾2，七水硫酸镁1，谷氨酰胺0.1。
所述发酵培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，磷酸二氢钾2，七水硫酸镁1。
以上培养基配好后，121℃灭菌20min。
3)高密度发酵棕色蘑菇液体菌种：采用5L全自动发酵罐，装液量为3L，初始葡萄糖为50g/L，接种量3％，25℃；在发酵过程，通过自动控制流加2mol/L的氢氧化钠将发酵过程的pH恒定为6.0；第一阶段0-24h结合自动控制通气量调整溶氧控制在50％，搅拌控制在100转/分钟，；第二阶段24h之后停止搅拌，通过控制通气量来实现溶氧控制，溶氧控制在30％，总培养时间100-160小时。
在pH恒定，二阶式控制溶氧策略下，最大菌球数与不控制发酵参数相比提高了300％以上。
有益效果：
本发明利用低转速搅拌结合通气的方式进行高密度发酵，优点在于，棕色蘑菇的菌丝非常脆弱。前期实验证明，转速高于150转/分钟，不锈钢搅拌桨会打碎棕色蘑菇菌丝，造成菌丝死亡，无法继续生长。而0-24小时采用100转/分钟的搅拌速度既可以满足菌丝生长的对氧气、营养传递的需要，同时不至于大量打断菌丝体，造成菌丝死亡。第二阶段的培养过程中，由于对溶氧的需求较低，因此停止搅拌，仅通过控制通气量边可以实现溶氧控制。这样既满足了溶氧和营养传递的需要，又减少了菌丝的损伤，利于实现高密度培养；发酵过程中在pH恒定，二阶式控制溶氧策略下，最大菌球数与不控制发酵参数相比提高了300％以上。
附图说明
图1为棕色蘑菇在二阶式溶氧控制策略下MPN的动力学。
具体实施方式
下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1：
一种新型的棕色蘑菇液态菌种的高密度生产方法。包括以下步骤：
1)菌种活化：将棕色蘑菇菌种(中国农业微生物菌种保藏管理中心ACCC51579)转接入试管固体培养基斜面中，放入恒温培养箱25℃培养至满管。
2)种子液的制备：取3块0.5cm2新鲜斜面菌种接种于种子培养基(100mL/500mL三角瓶)中，25℃，150r/min摇床培养5d。
斜面培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氢钾1，七水硫酸镁1.5，菜园土600，麦粒100，琼脂25。
种子培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氢钾2，七水硫酸镁1，谷氨酰胺0.1。
发酵培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，磷酸二氢钾2，七水硫酸镁1。
以上培养基配好后，121℃灭菌20min。
3)高密度发酵棕色蘑菇液体菌种：采用5L全自动发酵罐，装液量为3L，初始葡萄糖为50g/L，接种量3％，25℃。在发酵过程，通过自动控制流加2mol/L的氢氧化钠将发酵过程的pH恒定为6.0。第一阶段0-24h溶氧控制在50％(搅拌控制在100转/分钟，结合自动控制通气量调整溶氧。)，第二阶段24h之后溶氧控制在30％，总培养时间120小时。
在pH恒定，二阶式控制溶氧策略下，最大菌球数达到了116×103个/L，与不控制发酵参数相比，提高了338％。
实施例2
一种棕色蘑菇液态菌种的高密度生产方法，包括以下步骤：
菌种活化：将棕色蘑菇菌种(中国农业微生物菌种保藏管理中心ACCC51614)转接入试管固体培养基斜面中，放入恒温培养箱25℃培养至满管。
种子液的制备：取3块0.5cm2新鲜斜面菌种接种于种子培养基(100mL/500mL三角瓶)中，25℃，150r/min摇床培养5d。
斜面培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氢钾1，七水硫酸镁1.5，菜园土600，麦粒100，琼脂25。
种子培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氢钾2，七水硫酸镁1，谷氨酰胺0.1。
发酵培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，磷酸二氢钾2，七水硫酸镁1。
以上培养基配好后，121℃灭菌20min。
高密度发酵棕色蘑菇液体菌种：采用5L全自动发酵罐，装液量为3L，初始葡萄糖为50g/L，接种量3％，25℃，通气量为1L/min发酵。在发酵过程，通过自动控制流加2mol/L的氢氧化钠将发酵过程的pH恒定为6.0。第一阶段0-24h溶氧控制在50％(搅拌控制在100转/分钟，结合自动控制通气量调整溶氧。)，第二阶段24h之后溶氧控制在30％，总培养时间100小时。
在pH恒定，二阶式控制溶氧策略下，最大菌球数达到了111×103个/L，与不控制发酵参数相比，提高了338％。
实施例3
一种棕色蘑菇液态菌种的高密度生产方法，包括以下步骤：
菌种活化：将棕色蘑菇菌种(中国农业微生物菌种保藏管理中心ACCC52355)转接入试管固体培养基斜面中，放入恒温培养箱25℃培养至满管。
种子液的制备：取3块0.5cm2新鲜斜面菌种接种于种子培养基(100mL/500mL三角瓶)中，25℃，150r/min摇床培养5d。
斜面培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氢钾1，七水硫酸镁1.5，菜园土600，麦粒100，琼脂25。
种子培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氢钾2，七水硫酸镁1，谷氨酰胺0.1。
发酵培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，磷酸二氢钾2，七水硫酸镁1。
以上培养基配好后，121℃灭菌20min。
高密度发酵棕色蘑菇液体菌种：采用5L全自动发酵罐，装液量为3L，初始葡萄糖为50g/L，接种量3％，25℃，通气量为1L/min发酵。在发酵过程，通过自动控制流加2mol/L的氢氧化钠将发酵过程的pH恒定为6.0。第一阶段0-24h溶氧控制在50％(搅拌控制在100转/分钟，结合自动控制通气量调整溶氧。)，第二阶段24h之后溶氧控制在30％，培养时间160小时。
在pH恒定，二阶式控制溶氧策略下，最大菌球数达到了119×103个/L，与不控制发酵参数相比，提高了338％。

Claims (5)

1.一种棕色蘑菇液态菌种的高密度生产方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)菌种活化：
2)种子液的制备：取斜面培养基上的菌种接种于种子培养基中，摇床培养；
3)高密度发酵棕色蘑菇液体菌种：采用5L全自动发酵罐，发酵培养基的装液量为3L，初始葡萄糖为50g/L，接种量3％，25℃，通过控制通气量调整发酵中的溶氧控制；在发酵过程，通过自动控制流加2mol/L的氢氧化钠将发酵过程的pH恒定为6.0；第一阶段0-24h搅拌控制在100转/分钟，结合自动控制通气量调整溶氧控制在50％，第二阶段24h之后停止搅拌，通过控制通气量来实现溶氧控制，溶氧控制在30％，总培养时间100-160小时。
2.根据权利要求1所述棕色蘑菇液态菌种的高密度生产方法，其特征在于，所述斜面培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氢钾1，七水硫酸镁1.5，菜园土600，麦粒100，琼脂25，121℃灭菌20min。
3.根据权利要求1所述棕色蘑菇液态菌种的高密度生产方法，其特征在于，所述种子培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨2，磷酸二氢钾2，七水硫酸镁1，谷氨酰胺0.1，121℃灭菌20min。
4.根据权利要求1所述棕色蘑菇液态菌种的高密度生产方法，其特征在于，所述发酵培养基(g/L)：葡萄糖20，蛋白胨10，磷酸二氢钾2，七水硫酸镁1，121℃灭菌20min。
5.根据权利要求1-4任一项所述棕色蘑菇液态菌种的高密度生产方法，其特征在于：
所述菌种活化步骤具体为：将棕色蘑菇菌种转接入试管固体培养基斜面中，放入恒温培养箱25℃培养至满管；
所述种子液的制备步骤具体为：取3块0.5cm2新鲜斜面菌种接种于种子培养基中，容器为100mL/500mL三角瓶，25℃，150r/min摇床培养5d；
所述高密度发酵棕色蘑菇液体菌种步骤具体为：总培养时间120小时。
CN201611126524.0A 2016-12-09 2016-12-09 一种棕色蘑菇液体菌种高密度生产方法 Active CN106489536B (zh)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810132231.6A CN108179116B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种蘑菇高密度发酵生产方法
CN201810132340.8A CN108179117B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种高密度发酵生产棕色蘑菇的方法
CN201810132361.XA CN108184548B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种棕色蘑菇高密度液体发酵方法
CN201611126524.0A CN106489536B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种棕色蘑菇液体菌种高密度生产方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611126524.0A CN106489536B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种棕色蘑菇液体菌种高密度生产方法

Related Child Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810132231.6A Division CN108179116B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种蘑菇高密度发酵生产方法
CN201810132361.XA Division CN108184548B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种棕色蘑菇高密度液体发酵方法
CN201810132340.8A Division CN108179117B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种高密度发酵生产棕色蘑菇的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106489536A CN106489536A (zh) 2017-03-15
CN106489536B true CN106489536B (zh) 2018-04-27

Family

ID=58330640

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810132340.8A Active CN108179117B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种高密度发酵生产棕色蘑菇的方法
CN201611126524.0A Active CN106489536B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种棕色蘑菇液体菌种高密度生产方法
CN201810132361.XA Active CN108184548B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种棕色蘑菇高密度液体发酵方法
CN201810132231.6A Active CN108179116B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种蘑菇高密度发酵生产方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810132340.8A Active CN108179117B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种高密度发酵生产棕色蘑菇的方法

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810132361.XA Active CN108184548B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种棕色蘑菇高密度液体发酵方法
CN201810132231.6A Active CN108179116B (zh) 2016-12-09 2016-12-09 一种蘑菇高密度发酵生产方法

Country Status (1)

Country Link
CN (4) CN108179117B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109845586B (zh) * 2019-02-15 2021-05-11 宁德师范学院 一种含高数量菌丝生长点的金针菇液体菌种制备方法
TWI691264B (zh) * 2019-03-20 2020-04-21 四季洋圃生物機電股份有限公司 蕈菇之環保液態體栽培方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101875926A (zh) * 2009-12-22 2010-11-03 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 一种液态纤维素酶的制备方法
CN101933439A (zh) * 2010-07-15 2011-01-05 西南大学 一种利用植物油提高桑黄液体培养菌丝量的方法
CN103155787A (zh) * 2011-12-09 2013-06-19 天津市金三农农业科技开发有限公司 一种用于棕色蘑菇液体菌种培养的培养基质及其配方
CN103159533A (zh) * 2011-12-09 2013-06-19 天津市金三农农业科技开发有限公司 一种棕色蘑菇菜园土发酵培养基的制作方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101235393B (zh) * 2008-02-25 2012-11-14 湖北工业大学 促进灵芝酸和灵芝多糖生物合成的发酵方法
JP2013021966A (ja) * 2011-07-20 2013-02-04 Hiroyuki Obara アミノ酸の製造方法
CN103155785B (zh) * 2011-12-09 2014-04-16 天津市金三农农业科技开发有限公司 一种棕色蘑菇三级菌种扩繁体系的建立方法
CN103155786A (zh) * 2011-12-09 2013-06-19 天津市金三农农业科技开发有限公司 一种棕色蘑菇母种培养基的筛选方法
CN103642703B (zh) * 2013-12-12 2016-10-12 北京林业大学 具有耐受重金属特性的高效解磷日本曲霉菌剂的生产方法
CN105985913A (zh) * 2015-02-06 2016-10-05 上海市农业科学院 一种杏鲍菇液体菌种培养基配方及其制备方法
CN104974966B (zh) * 2015-07-22 2017-12-12 江南大学 一种凝结芽孢杆菌及其高密度发酵方法以及干菌粉制备方法
CN106146179B (zh) * 2016-08-12 2019-11-15 河南农业大学 一种利用双孢蘑菇堆料水浸提液培养双孢蘑菇菌种的方法
CN106086092B (zh) * 2016-08-25 2019-05-10 江南大学 一种α-酮戊二酸和丙酮酸联产的发酵方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101875926A (zh) * 2009-12-22 2010-11-03 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 一种液态纤维素酶的制备方法
CN101933439A (zh) * 2010-07-15 2011-01-05 西南大学 一种利用植物油提高桑黄液体培养菌丝量的方法
CN103155787A (zh) * 2011-12-09 2013-06-19 天津市金三农农业科技开发有限公司 一种用于棕色蘑菇液体菌种培养的培养基质及其配方
CN103159533A (zh) * 2011-12-09 2013-06-19 天津市金三农农业科技开发有限公司 一种棕色蘑菇菜园土发酵培养基的制作方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108179117B (zh) 2020-12-29
CN106489536A (zh) 2017-03-15
CN108179117A (zh) 2018-06-19
CN108184548B (zh) 2020-07-24
CN108184548A (zh) 2018-06-22
CN108179116B (zh) 2020-12-29
CN108179116A (zh) 2018-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104222668A (zh) 一种提高机体免疫力复合鱼饲料
CN108029800B (zh) 一种稳定可控的高品质普洱茶及其发酵生产方法
CN101513161A (zh) 一种北虫草液体菌种培养基配方及培养方法
CN108934785B (zh) 一种黑牛肝菌的液体菌种培养方法及栽培方法
CN100571531C (zh) 一种活性蛋白饲料及其制备方法
CN106489536B (zh) 一种棕色蘑菇液体菌种高密度生产方法
CN105132311B (zh) 利用谷胱甘肽废液生产功能微生物的方法
CN106906160A (zh) 一种用于乳酸菌发酵的增效剂及其发酵方法
CN106036320A (zh) 一种蕈菌类菌丝体发酵液原浆饮料的制备方法
CN108578724B (zh) 一种用于食用菌栽培料的灭菌方法
CN104263653A (zh) 一种醋曲的制作方法及醋曲
CN105493889A (zh) 平菇的种植方法
CN101812491B (zh) 一种发酵生产阿魏菇多糖及其口服液的方法
CN103918481B (zh) 黄伞液体菌种拌菌栽培工艺
CN105420130A (zh) 一种饲用酿酒酵母液固两相发酵方法
CN107602166A (zh) 一种深度发酵秸秆肥的方法
CN102851328A (zh) 一种利用固定化黑曲霉发酵玉米糖液制备柠檬酸的方法
CN107094499B (zh) 一种利用谷元粉为培养基稳定栽培桑黄的方法
CN102498934A (zh) 一种大球盖菇菌种的生产方法
CN108967050A (zh) 一种双孢菇菌种的制备方法
CN108901619A (zh) 一种香菇培养基及其制备方法
CN106497998B (zh) 一种棕色蘑菇多糖深层液态发酵的控制方法
CN105753527A (zh) 一种有机蔬菜无土栽培基质及其制备方法
CN103468629B (zh) 以桔皮为原料发酵木霉菌的生产工艺
CN106701090A (zh) 一种含有枯草芽孢杆菌的土壤改良剂

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant