CN106483260A - 一种八宝丹胶囊质量标准控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种八宝丹胶囊质量标准控制方法，采用以下鉴别和含量测定项目中的至少一项：1)珍珠的鉴别：取本品，置显微镜下观察：不规则碎块无色，半透明，有光泽，有时可见细密波状纹理；2)麝香的检测；3)高效液相色谱法测定方中三七药材中的有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1：每粒含三七以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1两者的总量计,不少于9.1mg。本发明稳定性好，重复性好，回收率高，具有较强的专属性。本发明提高了八宝丹的质量标准。

Description

一种八宝丹胶囊质量标准控制方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体地涉及一种八宝丹胶囊质量标准控制方法。

背景技术

八宝丹具有清利湿热，活血解毒，去黄止痛的功效，适用于湿热蕴结所致发热，黄疸，小便黄赤，恶心呕吐，纳呆，胁痛腹胀，舌苔黄腻或厚腻干白，或湿热下注所致尿道灼热刺痛、小腹胀痛，临床上可用于治疗各种肝胆疾病，泌尿系统疾病。其成分为牛黄、蛇胆、羚羊角、珍珠、三七、麝香等，由于其成分众多，需要具备有效的方法来检测，以稳定其疗效，保证用药质量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种八宝丹胶囊质量标准控制方法，使产品质量得到更好的控制。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种八宝丹胶囊质量标准控制方法，其特征在于，采用以下鉴别和含量测定项目中的至少一项：

1)珍珠的鉴别：取本品，置显微镜下观察：不规则碎块无色，半透明，有光泽，有时可见细密波状纹理；

2)麝香的检测：取本品适量，研细，称取3g，加乙醚15ml浸泡过夜，滤过，取滤液，自然挥干乙醚，加无水乙醇稀释至1ml，取上清夜作为供试品溶液；另取麝香酮对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)试验；以OV-17为固定相，涂布浓度为1.5％，柱温160℃，分别取对照品溶液和供试品溶液2μι，注入气相色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；

3)高效液相色谱法测定方中三七药材中的有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1：

分别制备人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品溶液；

供试品溶液的制备：取八宝丹，研细，取0.4g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，放置过夜，超声提取1小时取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rg1峰计算，应不低于4000；

每粒含三七以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1两者的总量计,不少于9.1mg。

在本发明中，优选采用鉴定以上1)、2)和3)中的至少两项。

在本发明的较佳实施例中，研细为过四号筛。

在本发明的较佳实施例中，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品溶液的制备为：精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.4mg、人参皂苷Rb1 0.4mg的混合溶液，即得。

本发明的优点如下：本发明针对八宝丹，进行了珍珠的显微检测、麝香的检测和三七的Rg1、Rb1的液相色谱鉴别。本发明稳定性好，重复性好，回收率高，具有较强的专属性。通过本发明方法对八宝丹胶囊进行检测，提高了八宝丹胶囊的质量的稳定性和可控性。

附图说明

图1为珍珠的显微鉴别图。

图2为胆红素薄层色谱图；

1胆红素对照品；2八宝丹胶囊060101；3八宝丹胶囊060201；4八宝丹胶囊060301；5缺牛黄、蛇胆阴性样品；6胆酸、去氧胆酸对照品

图3为麝香酮气相色谱图；

1麝香酮对照品；2八宝丹胶囊样品；3缺麝香酮阴性样品

图4为对照光谱扫描图

图5为八宝丹对照品图谱；

图6为八宝丹缺三七阴性样品图谱

图7为八宝丹样品图谱；

图8为对照品线性考察工作曲线图a、人参皂苷Rg1，b、人参皂苷Rb1。

图9为回收率试验(80％)样品(1)图谱；

图10为回收率试验(100％)样品(4)图谱；

图11为回收率试验(120％)样品(7)图谱；

图12为范围考察重复性试验样品050302(低限)图谱；

图13为范围考察重复性试验样品050302(高限)图谱；

图14为范围考察准确度实验样品050302(低限)图谱；

图15范围考察准确度实验样品050302(高限)图谱；

图16为八宝丹胶囊050501样品图谱；

图17为八宝丹胶囊050502样品图谱；

图18为八宝丹胶囊050601样品图谱。

具体实施方式

实施例1

方中珍珠的显微鉴别。该显微特征较明显，(见图1)，经三批样品检验，均符合标准。

实施例2

麝香的检测：取本品适量，研细，称取3g，加乙醚15ml浸泡过夜，滤过，取滤液，自然挥干乙醚，加无水乙醇稀释至1ml，取上清夜作为供试品溶液；另取麝香酮对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)试验；以OV-17为固定相，涂布浓度为1.5％，柱温160℃，分别取对照品溶液和供试品溶液2μι，注入气相色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；经阴性试验及三批样品实验观察，重现性好，阴性无干扰，表明本法可行。(见图3)

实施例3

1、仪器与试药：

岛津LC-2010A高效液相色谱仪。

超声波清洗机(功率250w，频率50KHz)

乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

人参皂苷Rg1对照品批号为110703-200322；人参皂苷Rb1对照品批号为110745-200312，均购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用。对照光谱扫描图见附图4。

2、液相色谱条件与系统适用性试验：

依利特Hypersil ODS25μm 4.6×150mm色谱柱.

流动相：A相为乙腈，B相为水溶液，梯度洗脱程序：0～12min流动相A(％)19，流动相B(％)81；12～60min流动相A(％)19→36，流动相B(％)81→64。；

流速：1.0m1/min

检测波长：203nm

柱温：30℃

进样体积：10ul

理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算，为70000。人参皂苷Rg1与边上杂质峰的分离度为2.22，大于1.5。

4、对照品溶液的制备：

精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品适量，加入甲醇，制成含人参皂苷Rg10.4mg/ml、人参皂苷Rb1 0.4mg/ml的混合溶液，作为对照品溶液。

5、供试品溶液的制备：

为考察提取效果，对多种提取方法进行了比较：取本品内容物粉末(过四号筛)0.4g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，放置过夜，置80℃水浴加热回流2小时或超声提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液进样。具体结果见表1

表1提取方法及时间的比较

实验结果表明：超声提取的方法优于加热回流提取，且超声提取1小时后人参皂苷类已基本提取完全，因此选择超声提取1小时的方法进行提取。

6、空白试验：

6.1、阴性样品溶液的制备：

取缺三七的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制备得阴性样品溶液。

6.2、空白试验：

分别取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品混合溶液、八宝丹胶囊供试品溶液和阴性样品溶液分别注入高效液相色谱仪测定，实验结果：缺三七药材的阴性样品溶液在与对照品相应的保留时间处无峰出现，(见图5、6、7)，表明方中其它各味药材不干扰人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的测定。

7、线性关系的考察：

精密称取人参皂苷Rg1、Rb1对照品适量，加甲醇分别制成每1m1含人参皂苷Rg10.156mg，0.312mg，0.468mg，0.624mg，0.780mg；每1m1含人参皂苷Rb10.0818mg，0.2454mg，0.409mg，0.6135mg，0.818mg的混合溶液，吸取对照品溶液10ul注入高效液相色谱仪，依法测定峰面积，绘制标准曲线，结果见表2。见图8。

表2线性关系考察

结果表明人参皂苷Rg1在1.56～7.80μg范围内呈良好的线性关系，其回归方程为Y＝415899X+45310(r＝0.9999)。

人参皂苷Rb1在0.818～8.18μg范围内呈良好的线性关系，其回归方程为Y＝269749.09X+10165.39(r＝1.0000)。

8、稳定性实验

取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品溶液及供试品(050302)溶液，分别在制备后0小时、8小时、24小时、48小时、72小时，按上述色谱条件测定含量，结果见表3。

表3稳定性实验

结果表明，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1在0～72小时内峰面积的RSD均＜2％，说明人参皂苷Rg1、Rb1对照品溶液及供试品溶液在72小时内稳定。

9、精密度实验

按正文方法，取同一样品(050302)溶液在上述色谱条件下，重复进样5次，求得相对标准偏差RSD均＜2％，结果见表4。

表4精密度实验(n＝5)

结果表明仪器精密度良好。

10、重复性实验

按正文方法，对样品(050302)取6份，进行6次平行提取并测定，结果见表5。

表5重复性实验结果(n＝6)

结果表明，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1相对标准偏差RSD均＜2％，说明本法具有良好的重现性。

11、回收率实验

精密称取已知含量的同一批样品(050302)0.20g，共9份(依照成品重复性测定结果，计算得样品人参皂苷Rg1含量为20.70mg/g，人参皂苷Rb1含量为21.41mg/g)，每份样品分别精密加入一定量的人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品，按正文方法测定其含量，计算回收率(见图9、10、11)，结果见表6、7。

表6人参皂苷Rg1回收率测定结果

表7人参皂苷Rb1回收率测定结果

结果：样品的平均回收率为96.2％、96.9％，相对标准偏差值均小于2％，表明本法具有良好的回收率，方法可行。

12.范围的考察

12.1重复性实验

按正文方法，取样品(050302)0.20g,0.72g各三份(低浓度为限度的70％，高浓度为限度的2.5倍)，按供试品溶液的制备方法进行试验，结果表明重复性良好，见表8(见图12、13)。

表8重复性实验结果(n＝6)

结果表明，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1相对标准偏差RSD均＜2％，说明本法具有良好的重现性。

12.2准确度实验

取已知含量的同一批样品(批号：050302)0.10g，0.36g各三份，共6份，(依照成品重复性测定结果，计算得样品人参皂苷Rg1含量为20.70mg/g，人参皂苷Rb1含量为21.41mg/g)精密称定，分别加入约1：1的对照品。按上述样品制备方法制备供试品溶液，并注入高效液相色谱仪测定，按正文方法测定其含量，计算回收率(见附图14、15)，结果见表9、10。

表9人参皂苷Rg1回收率测定结果

表10人参皂苷Rb1回收率测定结果

结果：样品的平均回收率为98.50％、97.25％，相对标准偏差值均小于2％，表明本法具有良好的回收率，方法可行。

13、耐用性

13.1在实验中试过Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6×150mm，5μm)，依利特HypersilODS2(4.6×150mm，5μm)，和菲罗门kromasil C18柱(4.6×150mm，5μm)。结果表明Agilent ZORBAX SB-C18柱、依利特Hypersil ODS2柱的分离效果最佳，故选择AgilentZORBAX SB-C18柱、依利特Hypersil ODS2柱为本实验色谱柱,而菲罗门kromasil C18柱则因分离效果差,故不能选用。

13.2在实验中，发现Rg₁与旁边相邻的峰在柱效降低时会粘连，此时应充分洗柱再重新进样，或减少进样量，或更换新柱使分离效果好。实验时最好不要使用预柱以降低柱前扩散。

14、样品含量测定

分别对十三批样品按正文方法进行人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量测定，每批平行取两份(见附图16、17、18)，结果见表11。

表11十三批样品的含量测定结果

十批三七药材含量测定结果：

按药典规定，三七药材中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1三者的总量不得少于5.0％，从十批三七药材中得知，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1二者所占的比例平均为89.3％，因此每g制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量理论值为34.2mg，结合制剂工艺的转移率(89.4％)和十批样品的实测值，定本品人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的总量不得少于30.5mg/g，即每粒含人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的总量不得少于9.1mg。

Claims (4)

1.一种八宝丹胶囊质量标准控制方法，其特征在于，采用以下鉴别和含量测定项目中的至少一项：

1)珍珠的鉴别：取本品，置显微镜下观察：不规则碎块无色，半透明，有光泽，有时可见细密波状纹理；

2)麝香的检测：取本品适量，研细，称取3g，加乙醚15ml浸泡过夜，滤过，取滤液，自然挥干乙醚，加无水乙醇稀释至1ml，取上清夜作为供试品溶液；另取麝香酮对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；参照气相色谱法试验；以OV-17为固定相，涂布浓度为1.5％，柱温160℃，分别取对照品溶液和供试品溶液2μι，注入气相色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰；

3)高效液相色谱法测定方中三七药材中的有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1：

分别制备人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品溶液；

供试品溶液的制备：取八宝丹，研细，取0.4g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，放置过夜，超声提取1小时取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rg1峰计算，应不低于4000；

每粒含三七以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1两者的总量计,不少于9.1mg。

2.如权利要求1所述的一种八宝丹胶囊质量标准控制方法，其特征在于：采用鉴别和含量测定项目1)、2)和3)中的至少两项。

3.如权利要求1所述的一种八宝丹胶囊质量标准控制方法，其特征在于：研细为过四号筛。

4.如权利要求1所述的一种八宝丹胶囊质量标准控制方法，其特征在于：人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品溶液的制备为：精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.4mg、人参皂苷Rb10.4mg的混合溶液，即得。