CN106480149B

CN106480149B - 一种从酒糟中提取多肽的方法

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Publication number: CN106480149B
Application number: CN201610953571.6A
Authority: CN
Inventors: 郭鹏; 王轶
Original assignee: Farm Product Processing and Nuclear Agricultural Technology Institute of Hubei Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Farm Product Processing and Nuclear Agricultural Technology Institute of Hubei Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2016-11-03
Filing date: 2016-11-03
Publication date: 2019-10-08
Anticipated expiration: 2036-11-03
Also published as: CN106480149A

Abstract

本发明公开了一种从酒糟中提取多肽的方法。本发明提取方法包括以下步骤：(1)将酒糟进行脱脂；(2)提取水溶性蛋白；(3)采用由里氏木霉菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、巴氏地衣芽孢杆菌所组成的混合菌进行发酵；(4)将经步骤(2)所提取的水溶性蛋白和经步骤(3)处理的酒糟在在蛋白酶下酶解。本发明从酒糟提取多肽的方法中，于蛋白酶酶解之前采用里氏木霉菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、巴氏地衣芽孢杆菌的混合菌进行发酵，可将酒糟中的木质纤维和半纤维等降解为多糖等小分子，从而避免了纤维素和半纤维对蛋白质的束缚，增大蛋白质与蛋白酶的充分接触，提高蛋白质的酶解效果，保证了得率。

Description

一种从酒糟中提取多肽的方法

技术领域

本发明涉及多肽提取的技术领域，具体而言，涉及一种从酒糟中提取多肽的方法。

背景技术

酒糟，又名红糟、酒醅糟、粕等等，是米、麦、高梁等酿酒后剩余的残渣。酒糟中含有丰富的蛋白质，是一种很高的蛋白质的来源。长期以来，大多数厂家主要是将湿糟作为粗饲料直接低价出售，其收益甚微；有少数厂家则是将啤酒糟直接排放，不仅造成严重的环境污染，还导致资源的浪费。因此开发综合利用啤酒糟成为研究人员的重要任务。

多肽是是氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。人体很多活性物质都是以肽的形式存在的。肽涉及人体的激素、神经、细胞生长和生殖各领域，其重要性在于调节体内各个系统和细胞的生理功能，激活体内有关酶系，促进中间代谢膜的通透性，或通过控制DNA转录或影响特异的蛋白合成，最终产生特定的生理效应。肽是涉及人体内多种细胞功能的重要物质。肽可以合成细胞，并调节细胞的功能活动。肽在人体作为神经递质，传递信息。肽可在人体作为运输工具，将人体所食的各种营养物质与各种维生素、生物素、钙及对人体有益的微量元素输送到人体各细胞、器官和组织。肽是人体重要的生理调节物，它可全面调节人体生理功能，增强和发挥人体生理活性，它具有重要的生物学功能。肽对人的细胞活性、功能活动、生命存在太重要了。但现代人因各种因素使人体中的肽流失、损失，合成肽的能力大大减弱，因此现代人体缺乏肽，必须补充人工合成肽，补肽就是补活性，补肽就是补活力，补肽就是补生命。

从粕中提取多肽，在近年来得出现了一些报道。例如中国专利CN101736065A一种利用啤酒麦糟制备多肽的方法。该方法是将湿啤酒糟进行干燥、粉碎和过筛，得到啤酒糟；加入抽提剂，室温下搅拌，过滤去渣，离心，得到蛋自提取液；调节pH4.0～5.0进行沉淀，去上清液，真空冷冻干燥，得到粗多肽；在啤酒糟粗蛋白中加入磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液，调节pH值至6.5～8.5；加入Alcalase碱性蛋白酶，加热至45～65℃，在搅拌条件下水解1～5h；水解完毕之后，于沸水浴灭酶，离心；取离心后的上清液用凝胶柱分离，分别收集各峰后浓缩，冷冻干燥，得到活性多肤。本法未引入有害物质，产品取自天然，来源广泛，使所得天然活性物质经体外试验表明具有明显的降血糖活性。

尽管如此，但以上现有技术中从油粕中制取多肽的得率都较低。

发明内容

有鉴于此，本发明在于提供一种从酒糟提取多肽的方法，该方法所提取的多肽具有较高的得率。

一种从酒糟中提取多肽的方法，包括以下步骤：

(1)将酒糟进行脱脂；

(2)将经步骤(1)处理的酒糟中提取水溶性蛋白；

(3)将经步骤(2)处理所残留的酒糟采用由里氏木霉菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、巴氏地衣芽孢杆菌所组成的混合菌进行发酵；

(4)将经步骤(2)所提取的水溶性蛋白和经步骤(3)处理残留的酒糟在在蛋白酶下酶解。

进一步地，步骤(3)中所述里氏木霉菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、巴氏地衣芽孢杆菌以菌液的形式加入，里氏木霉菌液、解淀粉芽孢杆菌液、枯草芽孢杆菌液、巴氏地衣芽孢杆菌液体积之比为1：0.5～0.8：：2～3：：1～2，所述里氏木霉菌菌液的活菌数为3×10¹⁰～5×10¹⁰cfu/ml，解淀粉芽孢杆菌的活菌数为2×10¹⁰～4×10¹⁰cfu/ml，枯草芽孢杆菌液的活菌数为4×10¹⁰～6×10¹⁰cfu/ml，巴氏地衣芽孢杆菌液的活菌数为3×10¹⁰～5×10¹⁰cfu/ml。

进一步地，步骤(3)中所述发酵的温度为45～55℃，发酵的时间为36～72h。

进一步地，步骤(3)中所述发酵的pH为4.5～5.5。

进一步地，步骤(3)中所述发酵在有氧条件下进行，氧气通入量为0.3～0.6vvm。

进一步地，步骤(2)中所述提取水溶性蛋白的包括：

将酒糟采用碱液溶解于醇水溶液以沉降出固体，得到滤液；

将所述滤液采用400～600目滤膜进行浓缩，再使用400～600目滤膜进行过滤，得到固体组分；

将固体组分溶于水，而后离心。

进一步地，所述醇水溶液的质量分数为50～80wt％。

进一步地，所述碱液的加入量为以pH为8～13的用量。

进一步地，所述过滤在加入酸液的条件下进行，所述酸液的加入量为使pH为2～6的用量。

进一步地，所述酶解在碱性条件下进行。

本发明从酒糟提取多肽的方法中，于蛋白酶酶解之前采用里氏木霉菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、巴氏地衣芽孢杆菌的混合菌进行发酵，可将酒糟中的木质纤维和半纤维等降解为多糖等小分子，从而避免了纤维素和半纤维对蛋白质的束缚，增大蛋白质与蛋白酶的充分接触，提高蛋白质的酶解效果，保证了得率。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面合实施例来进一步说明本发明的技术方案。

如本文所用，术语：

“质量份”指表示多个组分的质量比例关系的基本计量单位，1份可表示任意的单位质量，如可以表示为1g，也可表示2.689g等。假如我们说A组分的质量份为a份，B组分的质量份为b份，则表示A组分的质量和B组分的质量之比a：b。或者地，表示A组分的质量为aK，B组分的质量为bK(K为任意数，表示倍数因子)。不可误解的是，与质量分数不同的是，所有组分的质量份之和并不受限于100份之限制。

“一个”、“一种”和“所述”可交换使用并指一个或多个。

“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如，A和/或B包括(A和B)和(A或B)；

另外，本文中由端点表述的范围包括该范围内所包含的所有数值(例如，1至10包括1.4、1.9、2.33、5.75、9.98等)。

另外，本文中“至少一个”的表述包括一个及以上的所有数目(例如，至少2个、至少4个、至少6个、至少8个、至少10个、至少25个、至少50个、至少100个等)。

本发明从酒糟中提取多肽的方法，包括以下步骤：

(1)将酒糟进行脱脂；

(2)将经步骤(1)处理的酒糟中提取水溶性蛋白；

本发明的上述方法所针对的酒糟可以为一切形式的酒糟，例如啤酒糟和黄酒。

上述发酵所采用的菌种，系由里氏木霉菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、巴氏地衣芽孢杆菌所组成的混合菌。此处，这些菌种的具体亚种或菌株的类型不作限定。对混合菌的加入形式不加限定，例如可以使用经培养后所得菌液添加，也可以将菌株在添加氮源等营养成分的条件下直接接种到该待发酵的原料中。上述菌液可采用常规的种子培养基及培养条件方法来获得。可列举出一种种子培养基的成分，即每升含木糖30～50克，酵母粉5～10克，玉米浆干粉5～15克，磷酸二氢钾4克，乙酸钠2～6克，氯化钾1～2克，硫酸镁0.2克，余量为水，pH为6～7，于115℃灭菌20分钟。应当知道的是，菌液加到待发酵的原料后，可加入发酵基，发酵基的成分可类似于上述培养基，发酵基所含氮源为酵母粉5～20克、蛋白陈5～20克、玉米浆干粉5～20克、大豆肤5～20克、大豆蛋白陈5～20克五种氮源中的至少一种，还可辅助地含有初糖量不少于500克/升，磷酸二氢钾4克，乙酸钠1～6克，氯化钾2克，硫酸镁0.2克，其余为水，pH为6～70，于115℃灭菌20分钟。类推地，对于上述将菌株在添加氮源等营养成分的条件下直接接种到该待发酵的原料，这里的氮源、营养成分可采用上述相同的，在此不再赘述。

前述菌液中，较好地，里氏木霉菌液、解淀粉芽孢杆菌液、枯草芽孢杆菌液、巴氏地衣芽孢杆菌液体积之比为1：0.5～0.8：2～3：1～2，例如1：0.5：2：1、1：0.55：2.1：1.1、1：0.60：2.3：1.2、1：0.60：2.2：1.5、1：0.65：2.5：1.5、1：0.70：2.8：1.8、1：0.75：2.95：1.95、1：0.80：3.0：2等。这里，里氏木霉菌菌液的活菌数以3×10¹⁰～5×10¹⁰cfu/ml为宜，例如3×10¹⁰、3.2×10¹⁰、3.5×10¹⁰、4×10¹⁰、4.5×10¹⁰、4.8×10¹⁰或6×10¹⁰等；解淀粉芽孢杆菌液的活菌数2×10¹⁰～4×10¹⁰cfu/ml，例如2×10¹⁰、2.2×10¹⁰、2.5×10¹⁰、3×10¹⁰、3.4×10¹⁰、3.6×10¹⁰、3.8×10¹⁰或4×10¹⁰等；枯草芽孢杆菌液的活菌数为4×10¹⁰～6×10¹⁰cfu/ml，例如4×10¹⁰、4.2×10¹⁰、4.5×10¹⁰、5×10¹⁰、5.4×10¹⁰、5.6×10¹⁰、5.8×10¹⁰或6×10¹⁰；巴氏地衣芽孢杆菌液的活菌数为3×10¹⁰～5×10¹⁰cfu/ml，例如3×10¹⁰、3.2×10¹⁰、3.5×10¹⁰、4×10¹⁰、4.4×10¹⁰、4.6×10¹⁰、4.8×10¹⁰或5×10¹⁰。当然上述四种菌液的活菌数若过大或过小也可实施本方案，在影响到发酵产物及发酵时间等。应当知晓的是，cfu为菌落形成单位(Colony-Forming Units)指单位体积中的细菌群落总数，在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落，称为菌落形成单位，以其表达活菌的数量。

作为本发明的发酵中，其温度较好地为45～55℃，例如45℃、46℃、48℃、50℃、51℃、52℃、53℃、54.5℃、55℃。已为本领域所熟知的是，根据目标微生物的繁殖情况，可将发酵阶段分为第一发酵阶段(繁殖增大期)和第二发酵阶段(稳定期)两个阶段。在第一发酵阶段，其温度可以控制在45～55℃；在第二发酵阶段，其温度可以控制在48～52℃。本发明中的混合发酵菌，具有上述较高的发酵温度，高于杂菌通常的繁殖代谢温度，从而避免了因选用其它可分解木质纤维素的微生物所导致的发酵杂质较多难去除等问题。于上述发酵温度下，发酵的时间以36～72h，例如36h、38h、43h、50h、60h、65h、68h或70h等。

作为本发明的发酵酸碱度环境，其pH较佳地为4.5～5.5，例如4.5、4.6、4.8、5、5.2或5.5。可以理解的是，调节pH的试剂有很多，譬如硫酸、磷酸等常见酸，以及氢氧化钠、强氧化钾等常见碱。

由于上述里氏木霉菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、巴氏地衣芽孢杆菌可以在有氧及无氧的环境下都可生长。因而，本发明不对发酵的有氧或无氧做特别限定，不过为了将木质纤维素降解为更小的分子，其采用有氧条件下进行。氧气通入量可参考为0.3～0.6vvm，例如0.3vvm、0.35vvm、0.4vvm、0.45vvm、0.5vvm、0.55vvm、0.58vvm或0.6vvm。作为发酵领域较为常见的术语，vvm为通气比，指每分钟通气量与罐体实际料液体积的比值(airvolume/culture volume/min)，通气比＝通气速率(单位：立方米/分钟)/发酵液体积(单位：立方米)。

值得补充的是，前述“经发酵处理的酒糟”指发酵产物，既包括发酵后的固体残渣，也包括发酵液，而不是单纯地指固体残渣。当然，这里发酵产物可以经过固液相分离，分别对液相采用公知的方法对水溶性蛋白提取，对固相可以直接进行酶解。除此，也可不对发酵产物进行固液相分离，直接进行酶解。

为了提高混合菌对其中的木质纤维素的发酵，可较好地将待发酵原料进行预处理。例如，稀酸或稀碱处理。具体地，可在pH为4～5的酸下浸渍4～10h。采用酸或碱处理，可以使得降低木质纤维素的交联化，打断其分子的网状结构，有助于微生物的更好分解。除此，预处理还可以通过高温蒸汽蒸的处理。

作为本发明的脱脂，其可采用本领域通用的用溶剂溶取的方式。这些有机溶剂可列举出丙酮、石油醚、正已烷烃、乙醇、乙酸乙酯等一种或任意组合等。以石油醚和乙醇为例，可先采用石油醚进行溶取，再采用乙醇溶取。石油醚溶取可采用索氏提取器在常温下进行为0.5～1.5h，石油醚的用量为8～12ml，以待脱脂的固体质量为1g计；乙醇溶取可采用索氏提取器在常温下进行为0.5～1h，乙醇的用量为6～10ml(其为质量分数为70～90％的乙醇水溶液)，以待脱脂的固体质量为1g计。上述有机溶剂溶取后，再烘干有机溶剂。

本发明中脱脂优选为采用磷脂酶和脂肪酶进行酶解。酶解避免了采用上述有机溶剂溶取方式的脱脂所导致的对环境的污染，以及后期对有机溶剂回收的麻烦，更重要的是，酶解的转化率较高。本发明不对脂肪酶和磷脂酶的具体种类做特别限定，例如可采用天津诺奥酶制剂有限公司所生产的。

磷脂酶和脂肪酶的用量不做特别严苛的规定，但较好地，磷脂酶可为占待脱脂的油牡丹粕质量的0.3～3‰，例如0.3‰、0.5‰、1‰、1.5‰、2‰、2.5‰、2.8‰或3‰。脂肪酶可占待脱脂的油牡丹粕质量的0.2～2‰，例如0.2‰、0.5‰、1‰、1.5‰、1.8‰、1.9‰或0.2‰。该两种酶过多，不会带来转化率的显著提高；过少则会影响脂类的转化率。

脱脂的酶解的较好的温度为30～40℃，例如30℃、32℃、35℃、38℃、39℃或40℃。于上述酶用量及酶解的温度前提下，酶解的时间为较佳为0.5～5h，例如0.5h、0.75h、1h、2h、3h、4h、4.5h、5h或5h等。

步骤(2)中水溶性蛋白的提取方法很多，可采用公知的植物蛋白提取方法，例如水溶法和/或溶剂法。提取蛋白的次数可根据提取效果选择。水溶法指以水为溶剂，主要包括预处理、水溶、离心处理等。可列举出一种水溶法提取蛋白的实例：首先将待提取原料在50℃下浸泡3～6h，可按照1g/5ml加入水，再加3mol/L氢氧化钠碱溶液调pH至8.5左右，在3500rpm下离心15min，再将上层清液用3mol/L柠檬酸，调pH至4.5，在3500rpm下离心15min，对得到的沉淀进行冷冻干燥。

为了提高水性形蛋白的提取率，本发明中提取水溶性蛋白可以包括：将酒糟采用碱液溶解于醇水溶液以沉降出固体，得到滤液；将该滤液采用400～600目滤膜进行浓缩，再使用400～600目滤膜进行过滤，得到固体组分；最后将固体组分溶于水，而后离心。

此处，醇水溶液中醇可以为乙醇、甲醇、异丙醇等。醇水溶液的质量分数为50～80wt％，例如50wt％、51wt％、52wt％、53wt％、55wt％、60wt％、65wt％、70wt％、75wt％、78wt％、79wt％或80wt％等。

此处，碱液的用量以pH为8～13的用量为佳，如pH为8、8.5、9、10、11、12、12.5或13等。

上述过滤在加入酸液的条件下进行。其中，酸液的加入量可以为使pH为2～6的用量，如pH为2、2.3、2.5、3、4、4.5、5、5.5或6等。

此处，浓缩的体积不做限定，例如可以浓缩至原体积的5～10％。

上述步骤(4)中，酶解可以在碱性条件下进行。例如其碱性的pH可为7～8。碱性酶解的蛋白酶可采用常规的蛋白酶，如碱性蛋白酶，即丝氨酸蛋白酶，可以为Novo蛋白酶或Carsberg蛋白酶，当然还可以为Alcalase碱性蛋白酶等。至于酶解的温度以及时间可以根据蛋白酶的种类作常规调整，于此不详述。

步骤(1)之前还包括对酒糟进行粉碎。粉粹可以至20～30目粒度，所述粉碎采用超微粉粉碎或超声波粉碎。

以上未述及之处适用于现有技术。

实施例1

步骤一、将湿酒糟进行真空冷冻干燥并粉碎。

步骤二、脱脂。用有机溶剂清洗(如丙酮)对上述粉碎的渣进行清洗2-3次即可，风干。

步骤三、水溶性蛋白提取。将酒糟采用碱液溶解于质量分数为80wt％的乙醇醇水溶液，碱液的加入保持pH为13，以离心分离沉降出固体，得到滤液。再将该滤液采用600目滤膜进行浓缩至原体积的10％，再加入酸液调节其pH为6，使用600目滤膜进行过滤，得到固体组分；将固体组分溶于水，而后离心，将固相干燥。

步骤四、上述固体加入发酵罐中，并向发酵罐中加入体积之比为1：0.5：3：1的里氏木霉菌液(活菌数为3×10¹⁰fu/ml)、解淀粉芽孢杆菌液(活菌数为4×10¹⁰cfu/ml)、枯草芽孢杆菌液(活菌数为6×10¹⁰)、巴氏地衣芽孢杆菌液(活菌数为3×10¹⁰cfu/ml)。向发酵罐中通入0.3vvm的氧气，控制pH为4.5，在45℃下发酵72h，分离出发酵残渣和发酵液。发酵液中可能的蛋白进行采用公知的方法进行提取，固体保留以备用。

步骤五、所得固体中加入缓冲溶液，调节pH值至碱性。

步骤六、加入公知的碱性蛋白酶，水解得到水解液。

步骤八、将所得多肽液用Sephadex G15凝胶柱分离并脱盐，分离条件为：上样量5ml，洗脱液为蒸馏水，流速3.0mL/min，收集洗脱时间33min～53min内组分，浓缩，冷冻真空干燥，得到活性多肽。

实施例2

步骤一、将湿酒糟进行真空冷冻干燥并粉碎。

步骤三、水溶性蛋白提取。将酒糟采用碱液溶解于质量分数为50wt％的乙醇醇水溶液，碱液的加入保持pH为8，以离心分离沉降出固体，得到滤液。再将该滤液采用400目滤膜进行浓缩至原体积的5％，再加入酸液调节其pH为2，使用40000目滤膜进行过滤，得到固体组分；将固体组分溶于水，而后离心，将固相干燥。

步骤四、上述固体加入发酵罐中，并向发酵罐中加入体积之比为1：0.8：3：1的里氏木霉菌液(活菌数为5×10¹⁰fu/ml)、解淀粉芽孢杆菌液(活菌数为2×10¹⁰cfu/ml)、枯草芽孢杆菌液(活菌数为6×10¹⁰)、巴氏地衣芽孢杆菌液(活菌数为3×10¹⁰cfu/ml)。向发酵罐中通入0.3vvm的氧气，控制pH为4.5，在55℃下发酵36h，分离出发酵残渣和发酵液。发酵液中可能的蛋白进行采用公知的方法进行提取，固体保留以备用。

步骤五、所得固体中加入缓冲溶液，调节pH值至碱性。

步骤六、加入公知的碱性蛋白酶，水解得到水解液。

实施例3

步骤一、将湿酒糟进行真空冷冻干燥并粉碎。

步骤三、水溶性蛋白提取。将酒糟采用碱液溶解于质量分数为60wt％的乙醇醇水溶液，碱液的加入保持pH为10，以离心分离沉降出固体，得到滤液。再将该滤液采用400目滤膜进行浓缩至原体积的10％，再加入酸液调节其pH为2，使用400目滤膜进行过滤，得到固体组分；将固体组分溶于水，而后离心，将固相干燥。

步骤四、上述固体加入发酵罐中，并向发酵罐中加入体积之比为1：0.8：3：2的里氏木霉菌液(活菌数为5×10¹⁰fu/ml)、解淀粉芽孢杆菌液(活菌数为3×10¹⁰cfu/ml)、枯草芽孢杆菌液(活菌数为6×10¹⁰)、巴氏地衣芽孢杆菌液(活菌数为5×10¹⁰cfu/ml)。向发酵罐中通入0.3vvm的氧气，控制pH为5，在50℃下发酵48h，分离出发酵残渣和发酵液。发酵液中可能的蛋白进行采用公知的方法进行提取，固体保留以备用。

步骤五、所得固体中加入缓冲溶液，调节pH值至碱性。

步骤六、加入公知的碱性蛋白酶，水解得到水解液。

实施例4

步骤一、将湿酒糟进行真空冷冻干燥并粉碎。

步骤三、水溶性蛋白提取。将酒糟采用碱液溶解于质量分数为60wt％的乙醇醇水溶液，碱液的加入保持pH为10，以离心分离沉降出固体，得到滤液。再将该滤液采用500目滤膜进行浓缩至原体积的8％，再加入酸液调节其pH为3，使用500目滤膜进行过滤，得到固体组分；将固体组分溶于水，而后离心，将固相干燥。

步骤四、上述固体加入发酵罐中，并向发酵罐中加入体积之比为1：0.8：2.5：1.5的里氏木霉菌液(活菌数为4×10¹⁰fu/ml)、解淀粉芽孢杆菌液(活菌数为2×10¹⁰cfu/ml)、枯草芽孢杆菌液(活菌数为4×10¹⁰cfu/ml)、巴氏地衣芽孢杆菌液(活菌数为4×10¹⁰cfu/ml)。向发酵罐中通入0.3vvm的氧气，控制pH为5，在50℃下发酵48h，分离出发酵残渣和发酵液。发酵液中可能的蛋白进行采用公知的方法进行提取，固体保留以备用。

步骤五、所得固体中加入缓冲溶液，调节pH值至碱性。

步骤六、加入公知的碱性蛋白酶，水解得到水解液。

实施例5

步骤一、将湿酒糟进行真空冷冻干燥并粉碎。

步骤四、上述固体加入发酵罐中，并向发酵罐中加入体积之比为1：0.60：2.5：1.5的里氏木霉菌液(活菌数为4×10¹⁰fu/ml)、解淀粉芽孢杆菌液(活菌数为3×10¹⁰cfu/ml)、枯草芽孢杆菌液(活菌数为5×10¹⁰)、巴氏地衣芽孢杆菌液(活菌数为4×10¹⁰cfu/ml)。向发酵罐中通入0.3vvm的氧气，控制pH为5，在50℃下发酵48h，分离出发酵残渣和发酵液。发酵液中可能的蛋白进行采用公知的方法进行提取，固体保留以备用。

步骤五、所得固体中加入缓冲溶液，调节pH值至碱性。

步骤六、加入公知的碱性蛋白酶，水解得到水解液。

对比例1

除了不包括发酵的步骤，其它同实施例3。

按照以下方法测量实施例以对比例所得的多肽得率。

多肽得率＝(酶解后过滤液的固含量×过滤液总重量)/(原料使用量×原料粗蛋白含量)。测试结果如下表所示：

由于本发明中所涉及的各工艺参数的数值范围在上述实施例中不可能全部体现，但本领域的技术人员完全可以想象到只要落入上述该数值范围内的任何数值均可实施本发明，当然也包括若干项数值范围内具体值的任意组合。此处，出于篇幅的考虑，省略了给出某一项或多项数值范围内具体值的实施例，此不应当视为本发明的技术方案的公开不充分。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式选择等，落在本发明的保护范围内。

Claims

1.一种从酒糟中提取多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将酒糟进行脱脂；

(2)将经步骤(1)处理的酒糟中提取水溶性蛋白；

(3)将经步骤(2)处理所残留的酒糟采用由里氏木霉菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、巴氏地衣芽孢杆菌所组成的混合菌进行发酵，所述里氏木霉菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、巴氏地衣芽孢杆菌以菌液的形式加入，里氏木霉菌液、解淀粉芽孢杆菌液、枯草芽孢杆菌液、巴氏地衣芽孢杆菌液体积之比为1：0.5～0.8：2～3：1～2，所述里氏木霉菌菌液的活菌数为3×10¹⁰～5×10¹⁰cfu/ml，解淀粉芽孢杆菌液的活菌数为2×10¹⁰～4×10¹⁰cfu/ml，枯草芽孢杆菌液的活菌数为4×10¹⁰～6×10¹⁰cfu/ml，巴氏地衣芽孢杆菌液的活菌数为3×10¹⁰～5×10¹⁰cfu/ml；

(4)将经步骤(2)所提取的水溶性蛋白和经步骤(3)处理的酒糟在蛋白酶下酶解。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述发酵的温度为45～55℃，发酵的时间为36～72h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述发酵的pH为4.5～5.5。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述发酵在有氧条件下进行，氧气通入量为0.3～0.6vvm。

5.根据如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述提取水溶性蛋白的过程包括：

将酒糟采用碱液溶解于醇水溶液以沉降出固体，得到滤液；

将固体组分溶于水，而后离心。

6.根据如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述醇水溶液的质量分数为50～80wt％。

7.根据如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述碱液的加入量为以pH为8～13的用量。

8.根据如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述过滤在加入酸液的条件下进行，所述酸液的加入量为使pH为2～6的用量。

9.根据如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶解在碱性条件下进行。