CN109913388B - 提高玉米浸泡效果的复合菌剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及玉米深加工领域，公开了一种提高玉米浸泡效果的复合菌剂及其应用。所述复合菌剂含有能够产蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶的菌种。本发明利用几种不同功能的微生物发酵产生蛋白酶、半纤维素酶、纤维素酶等功能酶，并将其结合到玉米浸泡工段，基于上述微生物群落集群效应，达到了减少SO2添加量、缩短浸泡时间和提高淀粉收率的效果。
Description
技术领域
本发明涉及玉米深加工领域，具体涉及一种提高玉米浸泡效果的复合菌剂，以及所述复合菌剂在玉米浸泡中的应用和一种提高玉米浸泡效果的方法。
背景技术
玉米淀粉的制备分干法和湿法两类。干法工艺是指靠磨碎、筛分、风选的方法，分离出胚芽和纤维，得到低脂的玉米粉。湿法工艺是玉米经浸泡、粗细研磨，使胚芽、纤维和蛋白质分离出来，得到高纯度的玉米淀粉。目前为获得高纯度的玉米淀粉，一般采用封闭式湿法工艺。
玉米浸泡是湿法生产玉米淀粉工艺中的第一步，也是提取淀粉的首要过程。这一步骤直接影响着淀粉工业各类产品的收率和质量。浸泡的主要目的是使玉米籽粒软化，含水45％左右。浸出的可溶性物质，主要为矿物质、蛋白质和糖等；浸泡过程主要是破坏蛋白质网络结构，使淀粉和蛋白质分离；并且在浸泡的过程中还需要防止杂菌污染，抑制氧化酶反应，避免淀粉变色。常规工艺需向浸泡液中添加2000-5000ppm的高浓度SO2，在48-55℃高温下浸泡48-72h，以充分瓦解包裹在淀粉外侧的蛋白质网，达到较好的玉米浸泡分离效果。含二氧化硫的浸泡水对蛋白质网的分散作用随着二氧化硫含量增加而增强。当二氧化硫浓度为2000-3000ppm时，蛋白质网分散作用适当，淀粉较易分离；而浓度低于1000ppm时，不能发生足够的分散作用，淀粉分离困难。然而，SO2的大量使用会造成环境污染、设备腐蚀和淀粉产品中亚硫酸残留过高等问题。
此外，浸泡在整个生产工艺流程中所占时间最长，消耗能源多，因此浸泡周期过长也是影响玉米淀粉生产效率的瓶颈问题。
目前也有一些新兴的玉米加工方法，例如是用单一或复合酶制剂来辅助玉米浸泡和淀粉生产，但是酶制剂成本相对较高，生产条件不易控制，因此未广泛使用。微生物发酵辅助玉米浸泡是在浸泡液中添加某种微生物或微生物发酵产物，对浸泡过程产生积极效果，目前有报道加入嗜热乳酸菌、烟曲霉、芽孢杆菌等辅助浸泡，但均为单一微生物作用并且有些需要对浸泡流程进行较多改变。
因此，开发能够缩短浸泡时间，减少SO2用量且不需要对现有浸泡流程进行较多改变的新工艺，将对玉米淀粉湿法加工工艺提升起到重要作用。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的上述问题，提供复合菌剂，该复合菌剂的使用能够大大缩短玉米的浸泡时间，减少SO2用量，同时也不需要对玉米的浸泡流程进行改变。
为了实现上述目的，本发明一方面提供一种提高玉米浸泡效果的复合菌剂，所述复合菌剂含有能够产蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶的菌种。
第二方面，本发明提供了如上所述的复合菌剂在玉米浸泡中的应用。
第三方面，本发明提供了一种提高玉米浸泡的方法，该方法包括：将玉米在含有如上所述的复合菌剂的浸泡液中进行浸泡。
本发明利用几种不同功能的微生物发酵产生蛋白酶、半纤维素酶、纤维素酶等功能酶，并将其结合到玉米浸泡工段，基于上述微生物群落集群效应，达到了减少SO2添加量、缩短浸泡时间和提高淀粉收率的效果。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
第一方面，本发明提供一种提高玉米浸泡效果的复合菌剂，所述复合菌剂含有能够产蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶的菌种。
本发明需要说明的是，所述“复合菌剂”并不严格意义上指多种菌种的复合，具体需要根据实际情况而定，例如，当某菌种能够同时产蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶，所述复合菌剂也可以为单一菌种，而当单一菌种不能够同时产蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶时，则需要多菌种的复合。
根据本发明，优选的，为了进一步缩短浸泡时间、降低SO2浓度，同时提高淀粉收率，所述复合菌剂还含有能够产乳酸的菌种。
根据本发明，在玉米浸泡过程中为较好的使浸泡液渗入玉米颗粒、破坏蛋白质网络结构、释放结合在蛋白质或纤维素上的淀粉颗粒，加入产乳酸、蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶的复合菌剂能够会对玉米浸泡产生积极作用，但为了防止产生过多淀粉酶可能造成淀粉质溶出而损失，因此所述复合菌剂优选不产淀粉酶。其中，所述不产淀粉酶是指将菌种在淀粉筛选平板上在48℃下倒置培养24小时后，菌落周围的透明圈直径在菌落直径的1.5倍以内，或者无明显的透明圈。
其中，所述淀粉筛选平板可以为本领域常规使用的适用于相应菌种的淀粉筛选平板，可以通过商购获得，也可以自行配制。
根据本发明，所述复合菌剂中的菌种可以在较宽的范围内进行选择，只要能够满足可以同时产蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶，进一步优选同时产乳酸、蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶即可。然而本发明的发明人在研究中发现，当复合菌剂中的菌种在芽孢杆菌中进行选择时，能够进一步缩短浸泡时间、减少SO2用量以及提高淀粉收率。
优选的，所述芽孢杆菌选自凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。
根据本发明，为了能够在浸泡过程中能够最大作用的发挥微生物间的菌群协同作用，所述复合菌剂中的菌种优选为耐高温，例如，耐受45-60℃高温的微生物。因此，所述凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)优选的为CGMCC No.6382；所述枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)优选为CGMCC No.13139；所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)优选为CGMCC No.13313和CGMCC No.15012。
根据本发明一种特别优选的实施方式，所述复合菌剂含有凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)CGMCC No.6382、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)CGMCCNo.13139、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC No.13313和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC No.15012。
根据本发明，所述复合菌剂可以以固体制剂的形式加入到玉米浸泡液中，也可以以发酵液的形式加入到玉米浸泡液中，根据本发明一种优选的实施方式，所述复合菌剂以发酵液的形式加入到玉米浸泡液中。
其中，所述复合菌剂的发酵液的制备方法可以按照本领域常规的方法进行制备，例如，可以在含有蛋白胨、酵母浸粉、氯化钠、葡萄糖和玉米滤浆液的培养基中进行发酵从而得到发酵液。根据本发明一种优选的情况下，以g/100ml计，所述培养基含有蛋白胨0.8-1.2％，酵母浸粉0.4-0.6％，氯化钠0.4-0.6％，葡萄糖0.8-1.2％，玉米浆滤液4-6％(v/v)，pH5.5-6.5。
其中，玉米浆滤液为干固含量35-45％(g/100ml)的浓玉米浆经过滤去除不溶固体后的溶液，所述玉米浆为玉米浸泡完成后得到的浸泡液，经过浓缩可得到干固含量35-45％(g/100ml)的浓玉米浆。
其中，所述发酵的条件可以为本领域常规的发酵条件，根据本发明一种优选的实施方式，先将菌种在培养基中于45-55℃、120-180rpm的转速下培养20-30小时，然后再接种于培养基中45-55℃、120-180rpm的转速下活化16-20小时。
根据本发明，所述复合菌剂中各菌种的比例可以在较宽的范围内进行选择，只要能够保证加入到浸泡液中能够产生蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶，优选产生乳酸、蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶即可。优选的，当所述复合菌剂含有凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulans)CGMCC No.6382、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)CGMCC No.13139、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC No.13313和地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)CGMCC No.15012时，他们的菌体数比为1:(0.1-10):(0.1-10):(0.1-10)，更优选为1:(0.4-5):(0.4-5):(0.4-5)。在本发明中，所述菌体数以CFU计，菌体数可以按照GB4789.2-94进行测定。
根据本发明，所述复合菌剂可以通过将需要的菌种共同接种到培养基中进行培养获得，也可以将需要的菌种单独接种到培养基中进行培养，然后再将培养后的发酵液混合后获得。
第二方面，本发明提供了如上所述的复合菌剂在玉米浸泡中的应用。
在玉米浸泡的过程中采用本发明提供的复合菌剂，能够减少SO2添加量、缩短浸泡时间和提高淀粉收率的效果。如实施例所示的，可以使浸泡液SO2含量从2000-5000ppm降至400-1200ppm，浸泡时间从48小时缩短至16-30小时。
第三方面，本发明提供了一种提高玉米浸泡的方法，该方法包括：将玉米在含有如上所述的复合菌剂的浸泡液中进行浸泡。
根据本发明，所述浸泡液中还含有SO2，如上所述的，在浸泡过程中加入本发明提供的复合菌剂能够显著的减低SO2的用量，优选的，所述浸泡液中SO2的浓度为400-1200ppm。
本发明需要说明的是，在没有特别说明的情况下，本发明中所指的SO2的浓度是以SO2计的亚硫酸的浓度。
根据本发明，如上所述的，在浸泡过程中加入本发明提供的复合菌剂能够显著缩短浸泡的时间。本发明中，所述浸泡的时间以浸泡后的玉米用手能挤裂并且可将胚芽挤出为准。优选的，所述浸泡的时间为16-30小时。
根据本发明，所述复合菌剂的加入量可在较宽的范围内进行选择，优选的，以发酵后的复合菌剂的发酵液计，所述复合菌剂的加入量为1-3体积％。
根据本发明，所述浸泡的温度可以为本领域常规的温度，例如，48-55℃。
根据本发明，所述浸泡液可以为本领域常规使用的浸泡液，例如，温度为48-55℃的热水，并在其中加入本发明的复合菌剂和亚硫酸。
根据本发明，所述浸泡液的用量也可以为本领域常规的选择，优选的，基于100g的干玉米，所述浸泡液的用量为200-500ml。
实施例
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。但这些实施例仅用于说明本发明而不用来限制本发明的范围。
下述实施例中，除非特别说明，所用试剂、培养基均为市售商品，所用方法均为常规方法。
(1)菌种
·凝结芽孢杆菌CGMCC No.6382，来自专利CN102839140B，一株从玉米浸泡水中分离筛选出的L-乳酸产生菌。
·枯草芽孢杆菌CGMCC No.13139，来自专利申请201611248898.X，一株枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂及其应用、降解呕吐毒素的方法和试剂盒。
·地衣芽孢杆菌CGMCC No.13313，来自专利申请201611246221.2，一株、含有该菌的菌剂及其应用、降解玉米赤霉烯酮的方法和试剂盒。
·地衣芽孢杆菌CGMCC No.15012，来自专利申请201811560739.2，产纤维素酶的地衣芽孢杆菌、其微生物发酵制剂及其应用。
(2)方法
·模拟逆流法浸泡工艺：8组浸泡罐组成一组，维持浸泡温度为50℃，将一定SO2浓度(配制时将亚硫酸换算为SO2浓度)的浸泡液(液体与干玉米比例为3:1(v/m))加入浸泡组最后一份玉米中，每隔6小时，将浸泡液转移至上一份玉米，如此反复，使SO2浓度最高的新浸泡液与浸泡时间最长的玉米接触，新玉米与最后的浸泡液接触。浸泡完成后浸泡液为稀玉米浆，取不同浸泡时间的浸泡液和玉米检测浸泡效果。
·浸泡后玉米水分含量的测定：沥干浸泡后玉米表面上的水分，称取样品20g左右，精确记录湿重，置于烘至恒重的称量瓶中，置于105±2℃的烘箱中，干燥至恒重，放入干燥器内，冷却至室温，称重并计算。
·玉米淀粉得率的测定：取100g浸泡后的玉米，记录实际湿重，经过粉碎机粗磨将玉米破碎，加少量水并搅拌使胚芽悬浮分离，再将去除胚芽后的部分细磨，浆液通过200目筛过滤，过滤后的浆液与滤渣洗涤液混合4℃静置，4000rpm离心3min去除蛋白质，收集下层淀粉，干燥至恒重，称重计算。
(3)培养基
配方中百分数如无说明则均为m/v，也即g/100ml。
·种子培养基：葡萄糖2％，酵母粉1％，稀玉米浆20％(v/v)，pH5-6。
·活化培养基：蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，氯化钠0.5％，葡萄糖1％，玉米浆滤液5％(v/v)，pH6。(玉米浆滤液为干固含量40％的浓玉米浆经过滤去除不溶固体后的溶液)
·碳酸钙筛选平板：蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，氯化钠0.5％，葡萄糖2％，玉米浆滤液2％(v/v)，碳酸钙1％，琼脂2％，pH5。
·脱脂乳筛选平板：脱脂奶粉2％，琼脂2％，pH5。
·半纤维素筛选平板：半纤维素2％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，氯化钠0.5％，琼脂2％，pH5。
·CMC筛选平板：羧甲基纤维素钠(CMC)2％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，氯化钠0.5％，琼脂2％，pH5。
·淀粉筛选平板：玉米淀粉2％，蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，氯化钠0.5％，琼脂2％，pH5。
·产酸培养基：蛋白胨1％，酵母浸粉0.5％，氯化钠0.5％，葡萄糖2％，玉米浆滤液2％(v/v)，pH6。
·高效液相色谱法检测发酵液中的乳酸：色谱仪：Agilent Technologies 1260Infinity II；检出器：RID；分离柱：Aminex HPX-87H Column 300×7.8mm；柱温：55℃；流动相：0.005M硫酸；流量：0.5mL/min；进样量：20μL。乳酸保留时间为14min左右。
测试例
本测试例用于测试本发明使用菌种的性能
各菌株分别接入活化培养基37℃150rpm活化培养16小时，再按1体积％比例接入新的活化培养基50℃150rpm培养16小时，将可生长的菌株的菌液依次点到碳酸钙筛选平板、脱脂乳筛选平板、半纤维素筛选平板、CMC筛选平板和淀粉筛选平板上，48℃静置培养24小时。观察记录各平板上菌落的直径大小。
碳酸钙筛选平板、脱脂乳筛选平板、淀粉筛选平板直接观察记录透明圈直径。
半纤维素筛选平板和CMC筛选平板加入5mL 1％刚果红溶液，室温静置30min后弃掉刚果红溶液，再加入1mol/L氯化钠溶液，室温静置30min后弃掉氯化钠溶液，然后再观察菌落周围的透明圈直径。
其中，透明圈直径/菌落直径3倍以上的记+++，1.5-3倍的记为++，1.5倍以内的记为+，无明显透明圈的记为-，透明圈直径越大说明酶活越强。
碳酸钙平板透明圈较大的菌株使用产酸培养基50℃150rpm活化过夜，再按5体积％比例接入产酸培养基，50℃150rpm培养24h，使用液相色谱检测其产酸是否为乳酸。以+的多少表示产乳酸量的多少，-表示不产乳酸。
各菌种的测试结果如表1所示。
表1
| 保藏号 | 分类 | 产酸 | 蛋白 | 纤维素 | 半纤维素 | 淀粉 |
| CGMCC No.6382 | Bacillus coagulans | +++ | - | + | + | - |
| CGMCC No.13139 | Bacillus subtilis | + | +++ | + | - | - |
| CGMCC No.13313 | Bacillus licheniformis | + | + | + | +++ | + |
| CGMCC No.15012 | Bacillus licheniformis | - | ++ | +++ | ++ | - |
由表1可以看出，CGMCC No.6382、CGMCC No.13139、CGMCC No.13313、CGMCCNo.15012能够耐受50℃的高温，并且可以产乳酸、蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶中的至少一种，但基本上不产淀粉酶。
实施例1
本实施例用于说明4株芽孢杆菌共同作用时的效果
发酵液的获得：将4种菌株分别使用活化培养基50℃150rpm活化24小时后，各3％(v/v)的比例接入种子培养基，50℃震荡培养16-20小时，作为混入浸泡液的混合菌发酵液。
按照表2中SO2和混合菌发酵液加入量对玉米进行浸泡，浸泡后的玉米用手能挤裂并且可将胚芽挤出，种皮能剥离且透亮有光泽的标准决定结束浸泡的时间，此时湿玉米水分符合40-46％标准。
浸泡时间，浸泡后玉米含水量以及淀粉得率如表2所示。
表2
| SO<sub>2</sub>浓度 | 混菌发酵液 | 浸泡时间 | 浸泡后玉米水分 | 淀粉得率 |
| 3000ppm | 0 | 48h | 43％ | 65.1％ |
| 1200ppm | 2％ | 30h | 45％ | 66.1％ |
| 800ppm | 3％ | 24h | 44％ | 65.8％ |
| 400ppm | 5％ | 16h | 43％ | 65.5％ |
结果可以看出，混合菌发酵液能够产生乳酸、蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶等功能因子，这些功能因子协同作用可大幅缩短浸泡时间并提高淀粉得率。
实施例2
本实施例用于说明2株芽孢杆菌共同作用时的效果
发酵液的获得：将CGMCC No.6382和CGMCC No.13139这2种菌株分别使用活化培养基50℃150rpm活化24小时后，各6％(v/v)的比例接入种子培养基，50℃震荡培养16-20小时，作为混入浸泡液的混合菌发酵液。
按照表3中SO2和混合菌发酵液加入量对玉米进行浸泡，浸泡后的玉米用手能挤裂并且可将胚芽挤出，种皮能剥离且透亮有光泽的标准决定结束浸泡的时间，此时湿玉米水分符合40-46％标准。
浸泡时间，浸泡后玉米含水量以及淀粉得率如表3所示。
表3
| SO<sub>2</sub>浓度 | 混菌发酵液 | 浸泡时间 | 浸泡后玉米水分 | 淀粉得率 |
| 3000ppm | 0 | 48h | 43％ | 65.1％ |
| 1200ppm | 2％ | 32h | 44％ | 66.0％ |
| 800ppm | 3％ | 25h | 43％ | 65.6％ |
| 400ppm | 5％ | 18h | 45％ | 65.3％ |
结果可以看出，混合菌发酵液能够产生乳酸、蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶等功能因子，这些功能因子协同作用可大幅缩短浸泡时间并提高淀粉得率，但相较于4种菌种的协作，效果稍差。
实施例3
地衣芽孢杆菌CGMCC No.13313单独作用时的效果：
发酵液的获得：将菌株使用活化培养基50℃150rpm活化24小时后，12％(v/v)比例接入种子培养基，50℃震荡培养16-20小时，作为混入浸泡液的发酵液。
按照表4中SO2和混合菌发酵液加入量对玉米进行浸泡，浸泡后的玉米用手能挤裂并且可将胚芽挤出，种皮能剥离且透亮有光泽的标准决定结束浸泡的时间，此时湿玉米水分符合40-46％标准。
浸泡时间，浸泡后玉米含水量以及淀粉得率如表4所示。
表4
| SO<sub>2</sub>浓度 | 发酵液 | 浸泡时间 | 浸泡后玉米水分 | 淀粉得率 |
| 3000ppm | 0 | 48h | 43％ | 65.1％ |
| 2000ppm | 1％ | 36h | 44％ | 65.4％ |
| 1200ppm | 2％ | 34h | 44％ | 65.8％ |
| 800ppm | 3％ | 28h | 43％ | 65.5％ |
| 400ppm | 5％ | 26h | 42％ | 65.3％ |
结果可以看出，在仅添加地衣芽孢杆菌CGMCC No.13313时，对缩短浸泡时间效果较明显。在SO2浓度1200ppm，菌液添加量2％时浸泡效果最好，在SO2浓度800ppm，菌液添加量3％时达到标准的浸泡时间最短。
实施例4
地衣芽孢杆菌CGMCC No.15012单独作用时的效果
发酵液的获得：将菌株使用活化培养基50℃150rpm活化24小时后，12％(v/v)比例接入种子培养基，50℃震荡培养16-20小时，作为混入浸泡液的发酵液。
按照表5中SO2和混合菌发酵液加入量对玉米进行浸泡，浸泡后的玉米用手能挤裂并且可将胚芽挤出，种皮能剥离且透亮有光泽的标准决定结束浸泡的时间，此时湿玉米水分符合40-46％标准。
浸泡时间，浸泡后玉米含水量以及淀粉得率如表5所示。
表5
| SO<sub>2</sub>浓度 | 发酵液 | 浸泡时间 | 浸泡后玉米水分 | 淀粉得率 |
| 3000ppm | 0 | 48h | 43％ | 65.1％ |
| 2000ppm | 1％ | 36h | 44％ | 65.2％ |
| 1200ppm | 2％ | 35h | 45％ | 65.7％ |
| 800ppm | 3％ | 31h | 45％ | 65.2％ |
| 400ppm | 5％ | 28h | 46％ | 65.0％ |
结果可以看出，在仅添加地衣芽孢杆菌CGMCC No.15012时，对缩短浸泡时间效果较明显，菌液添加较多时对提高淀粉得率也有效果。在SO2浓度1200ppm，菌液添加量2％时浸泡效果最好，在SO2浓度800ppm，菌液添加量3％时达到标准的浸泡时间最短。
对比例1
说明凝结芽孢杆菌CGMCC No.6382单独作用时的效果
发酵液的获得：将菌株使用活化培养基50℃150rpm活化24小时后，12％(v/v)比例接入种子培养基，50℃震荡培养16-20小时，作为混入浸泡液的发酵液。
按照表6中SO2和混合菌发酵液加入量对玉米进行浸泡，浸泡后的玉米用手能挤裂并且可将胚芽挤出，种皮能剥离且透亮有光泽的标准决定结束浸泡的时间，此时湿玉米水分符合40-46％标准。
浸泡时间，浸泡后玉米含水量以及淀粉得率如表6所示。
表6
| SO<sub>2</sub>浓度 | 发酵液 | 浸泡时间 | 浸泡后玉米水分 | 淀粉得率 |
| 3000ppm | 0 | 48h | 43％ | 65.1％ |
| 2000ppm | 1％ | 42h | 45％ | 65.4％ |
| 1200ppm | 2％ | 36h | 46％ | 65.5％ |
| 800ppm | 3％ | 36h | 42％ | 64.8％ |
| 400ppm | 5％ | 38h | 40％ | 64.1％ |
结果可以看出，在仅添加凝结芽孢杆菌CGMCC No.6382时，对缩短浸泡时间效果较好，但也仍不能够将浸泡时间缩短35小时以内。在SO2浓度1200ppm，菌液添加量2％时浸泡效果最好，而SO2添加量较低800ppm时，增加菌液添加量后，虽然也可在较短时间内将玉米泡软，但淀粉得率变低，这个条件下对蛋白质网络结构破坏效果较差，不利于淀粉与蛋白质的分离。
对比例2
说明枯草芽孢杆菌CGMCC No.13139单独作用时的效果
发酵液的获得：将菌株使用活化培养基50℃150rpm活化24小时后，12％(v/v)比例接入种子培养基，50℃震荡培养16-20小时，作为混入浸泡液的发酵液。
按照表7中SO2和混合菌发酵液加入量对玉米进行浸泡，浸泡后的玉米用手能挤裂并且可将胚芽挤出，种皮能剥离且透亮有光泽的标准决定结束浸泡的时间，此时湿玉米水分符合40-46％标准。
浸泡时间，浸泡后玉米含水量以及淀粉得率如表7所示。
表7
| SO<sub>2</sub>浓度 | 发酵液 | 浸泡时间 | 浸泡后玉米水分 | 淀粉得率 |
| 3000ppm | 0 | 48h | 43％ | 65.1％ |
| 2000ppm | 1％ | 42h | 44％ | 65.3％ |
| 1200ppm | 2％ | 42h | 45％ | 65.6％ |
| 800ppm | 3％ | 42h | 44％ | 65.6％ |
| 400ppm | 5％ | 42h | 42％ | 65.1％ |
结果可以看出，在仅添加枯草芽孢杆菌CGMCC No.13139时，虽然对提高淀粉得率效果较好，在SO2浓度1200ppm菌液2％和SO2浓度800ppm菌液3％效果较好，但却不能够有效地降低浸泡时间。
对比例3
按照实施例1的方法进行玉米浸泡，不同的是，将添加的2％的混合发酵液替换为含有乳酸、蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶混合液，其中，混合液中乳酸、蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶的浓度与实施例1中添加2％混合发酵液浸泡结束时体系中乳酸、蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶的浓度相同。浸泡结束后时间为35小时，淀粉得率为65.5％。
采用本发明的复合菌剂可使浸泡液SO2含量从2000-5000ppm降至400-1200，浸泡时间从48小时缩短至35小时以下，同时淀粉得率也能够得到进一步提高。当使用四种菌剂的复合菌剂时，上述效果能够得到进一步提升。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种提高玉米浸泡效果的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂含有能够产乳酸、蛋白酶、纤维素酶和半纤维素酶的菌种；
其中，所述菌种为凝结芽孢杆菌（bacillus coagulans）CGMCC No. 6382、枯草芽孢杆菌（bacillus subtilis）CGMCC No.13139、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）CGMCCNo. 13313和地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）CGMCC No. 15012。
2.根据权利要求1所述的复合菌剂，其中，凝结芽孢杆菌（bacillus coagulans）CGMCCNo. 6382、枯草芽孢杆菌（bacillus subtilis）CGMCC No.13139、地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）CGMCC No. 13313和地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）CGMCC No.15012的菌体数比为1:0.1-10:0.1-10:0.1-10。
3.权利要求1或2所述的复合菌剂在玉米浸泡中的应用。
4.一种提高玉米浸泡效果的方法，其特征在于，该方法包括：将玉米在含有权利要求1或2所述的复合菌剂的浸泡液中进行浸泡。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述浸泡液中还含有二氧化硫，所述二氧化硫的浓度为400-1200ppm。
6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述浸泡的时间为16-30小时。
7.根据权利要求4-6中任意一项所述的方法，其中，以发酵后的复合菌剂的发酵液计，所述复合菌剂的加入量为1-3体积%。
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