CN107285815A - 一种复合氨基酸肥料及其生产方法 - Google Patents

一种复合氨基酸肥料及其生产方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种复合氨基酸肥料及其生产方法。本发明通过将解淀粉芽孢杆菌接种到添加有羽毛的发酵培养基中进行发酵，制备得到复合氨基酸肥料。按照本发明的方法制备得到的复合氨基酸肥料的氨基酸的种类全，达到17种氨基酸，氨基酸含量高达20.9g·kg‑1。本发明的方法具有原料来源广泛、价格低廉，发酵酵周期短，羽毛添加量高，羽毛降解率高等的优点，建立了新型复合氨基酸肥料生产技术，具有显著的经济利益和深远的社会效益。

Description

一种复合氨基酸肥料及其生产方法
技术领域：
本发明属于发酵工程技术领域，具体涉及一种复合氨基酸肥料及其生产方法。
背景技术：
羽毛是家禽处理后剩余的废弃物，在全世界的范围内，每年有数百万吨羽毛废弃物产生，而我国每年产生的废弃羽毛将近70万吨，固体废弃物的管理问题成了家禽屠宰企业亟待解决的问题。然而羽毛废弃物是一种丰富的天然蛋白质资源，其粗蛋白含量高达85％-90％，也含有维生素B和一些未知的生长因子，羽毛蛋白中除赖氨酸、蛋氨酸的含量明显较低外，其它动物必需氨基酸的组成略高于鱼粉，这意味着利用蛋白质水解生产氨基酸作为食品添加剂或氨基酸液体肥具有潜在的经济效益。但禽类羽毛中的蛋白质主要由角质蛋白构成，角蛋白中含有较多的胱氨酸，他们之间形成大量的二硫键，再加上氢键和分子间作用力，很难被普通蛋白酶(如胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶等)水解。利用高温高压蒸煮、酶解法、膨化、酸碱水解和利用氧化剂或者还原剂等传统方法加工处理废弃羽毛导致氨基酸破坏严重、酶制剂成本高、能耗高、污染大等突出的负面问题，而利用微生物对角蛋白进行降解可以提高水解产物的营养价值、降低能耗、成本以及对环境的污染问题，近来受到研究者及企业的青睐。
自然界中有多种微生物可以降解羽毛角蛋白，迄今为止已发现30多种，主要包括细菌类的芽孢杆菌属，真菌类的曲霉属和放线菌的链霉菌属等，但由于生物安全性问题，限制了很多菌株在工农业上的应用。同时由于羽毛的吸水特性，羽毛液体发酵时羽毛一次性添加量不能过多，从而导致产物浓度过低，效率极其低下。因此，为满足工农业生产中低成本、高效率以及安全的需求，需要选择安全的优良菌株，并对其发酵条件进行优化，以期利用最低的成本创造最高的经济价值。
发明内容：
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种复合氨基酸肥料及其生产方法。
本发明是通过以下技术方案实施的：
本发明的第一个目的是提供一种利用解淀粉芽孢杆菌发酵羽毛生产复合氨基酸肥料的方法，其特征在于，包括以下步骤：将解淀粉芽孢杆菌接种到添加有羽毛的发酵培养基中进行发酵，制备得到复合氨基酸肥料。
具体步骤如下：
a、羽毛预处理：将羽毛洗净，经灭菌、自然风干或烘干，然后切碎，得到预处理的羽毛；
b、种子液制备：将解淀粉芽孢杆菌接种到种子培养基中进行发酵，制备得到种子液；
c、发酵羽毛生产复合氨基酸肥料：将预处理的羽毛按照质量百分比0.5％～20％的添加量加入到发酵培养基中，得到添加有羽毛的发酵培养基，然后将种子液按照体积比5％的接种量接种到添加有羽毛的发酵培养基中进行发酵，制备得到复合氨基酸肥料；
所述的发酵培养基的配方为：每升培养基含有NaCl 0.5g、NaH2PO4 0.4g、Na2HPO40.3g和乳糖10g，余量为水；
所述的解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)3-2，该菌株于2017年3月9日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，其保藏编号为：GDMCC No：60160。该解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)3-2是本实验室筛选的一株具有高角蛋白酶活性的生物安全菌株，同时能分泌多种活性物质。
所述的羽毛优选为鸡毛。
优选，步骤a所述的灭菌是将羽毛在135℃，0.4MPa条件下蒸煮30min。
优选，所述的将预处理的羽毛按照质量百分比0.5％～20％的添加量加入到发酵培养基中具体为将预处理的羽毛按照质量百分比10％的添加量加入到发酵培养基中。
所述的种子培养基的配方优选为：每升含有蛋白胨10.0g、牛肉膏粉3.0g和NaCl5.0g，余量为水。
所述的将种子液按照体积比5％的接种量接种到添加有羽毛的发酵培养基中进行发酵，其发酵条件为：37℃，200rpm条件下发酵108h。
本发明的第二个目的是提供一种按照上述的方法制备得到的复合氨基酸肥料。
本发明的第三个目的是提供解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)3-2，其保藏编号为：GDMCC No：60160。
本发明利用解淀粉芽孢杆菌发酵羽毛，通过单因素实验探究不同温度、发酵时间、羽毛含量、单一碳源、复合碳氮源、金属离子等对废弃羽毛降解效果以及发酵液中氨基酸种类和含量的影响，提高羽毛降解率及氨基酸产量，并建立新型复合氨基酸肥料生产技术，具有显著的经济利益和深远的社会效益。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：
(1)与其他羽毛发酵方法相比，本发明所使用的发酵培养基除少量的无机盐和促生作用的乳糖外，不添加额外的碳氮源，发酵培养基组分简单，价格低廉，原料来源广泛、价格低廉。
(2)本发明由于菌种的选用和工艺优化，发酵周期很短，仅为108h。
(3)本发明通过羽毛预处理技术和发酵工艺优化，使得纯羽毛液体发酵羽毛添加量达到了10％。
(4)本发明通过工艺优化后，获得的复合氨基酸肥料的氨基酸的种类最全(富含17种氨基酸)，氨基酸含量高，达到20.9g·kg-1。
附图说明：
图1是羽毛发酵108h后实物图；
图2是羽毛发酵108h后扫描电镜图；
图3是羽毛发酵108h后发酵液中氨基酸谱图。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明作进一步的说明，而不是对本发明的限制。下述实施例中所用的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1：
1、羽毛预处理：将收集到的废弃羽毛(鸡毛)洗净，然后在135℃，0.4MPa条件下蒸煮30min，取出自然风干，最后切碎成0.1-0.5cm长度并收集。
2、菌种活化：将在-80℃冰箱中冷冻保存的解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)3-2(该菌株于2017年3月9日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，其保藏编号为：GDMCC No：60160)划线于NA斜面培养基上，37℃培养12-24h。
3、种子液制备：挑取解淀粉芽孢杆菌3-2单菌落接种到种子培养基中，于37℃、180rpm摇床培养12h，制备得到种子液。
种子培养基的配方为：每升培养基含有蛋白胨10.0g、牛肉膏粉3.0g和NaCl 5.0g，余量为水，pH 7.4±0.2，将上述组分混合均匀后，灭菌备用。
4、发酵羽毛生产复合氨基酸肥料条件优化：
a、温度对羽毛发酵效果的影响
将预处理的羽毛按照质量百分比1％的添加量添加到基础盐培养基中，调节初始pH值为7.0，得到添加有羽毛的基础盐培养基，然后将种子液按照体积比5％的接种量接种到添加有羽毛的基础盐培养基中，分别于25℃、30℃、37℃、42℃，200rpm，发酵96h。设置四个实验组，每个实验组设5个重复，每隔24h取样测定降解率，测定结果见下表1。
表1不同温度下羽毛降解率
由上表1可知，发酵24h后，不同温度的降解率都很低，然后随着发酵时间的增加，4个温度梯度下的降解率快速增加，其中以42℃和37℃两个温度下增幅最大，继续随着发酵时间的增加，42℃条件下的降解率基本不在变化，而25℃、30℃、37℃依旧缓慢增加，在96h后降解率趋于平稳，以37℃条件下降解率最高，为80.19％。
基础盐培养基的配方为：每升培养基含有NaCl 0.5g、NaH2PO4 0.4g和Na2HPO40.3g，余量为水，按100mL培养基/250mL三角瓶进行分装，121℃灭菌20min。
降解率：发酵液(复合氨基酸肥料)经滤纸过滤，过滤后取滤渣105℃烘干至恒重，计算降解率。
羽毛降解率(％)＝(羽毛添加量干重-实验组滤渣干重)/羽毛添加量干重×100％。
b、外加碳源对羽毛发酵效果及产物的影响
为探明其他碳源对解淀粉芽孢杆菌3-2发酵羽毛效果及产物的影响，将预处理的羽毛按照质量百分比1％的添加量添加到基础盐培养基中，再按照质量百分比1％的添加量分别添加葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、可溶性淀粉，调节pH为7.0，得到添加有羽毛的基础盐培养基，然后将种子液按照体积比5％的接种量接种到添加有羽毛的基础盐培养基中，37℃，200rpm，发酵96h后测定其降解率及氨基酸含量，以不添加外加碳源作为对照组，测定结果见下表2。
表2添加不同碳源的羽毛发酵液中氨基酸含量及降解率
由上表2可知，葡萄糖、淀粉、蔗糖、麦芽糖对羽毛发酵有抑制作用，尤其以葡萄糖的抑制作用最为明显(后测定添加葡萄糖的发酵液中活菌数明显高于纯羽毛发酵中数目)，乳糖对羽毛发酵有略微的促进作用，有相关研究表明，外加碳源能促进细菌生长，对产酶影响不大，但某些碳源，特别是较高的浓度对产酶有明显的抑制，本实验结果与其实验结果相吻合。由上表可知乳糖、蔗糖、麦芽糖对于氨基酸的生产和积累有促进作用，以乳糖的效果最为显著。其原因可能是对于解淀粉芽孢杆菌3-2的碳源利用，乳糖优于氨基酸，更先利用。
基础盐培养基的配方为：每升培养基含有NaCl 0.5g、NaH2PO4 0.4g和Na2HPO40.3g，余量为水，按100mL培养基/250mL三角瓶进行分装，121℃灭菌20min。
降解率：发酵液(复合氨基酸肥料)经滤纸过滤，过滤后取滤渣105℃烘干至恒重，计算降解率。
羽毛降解率(％)＝(羽毛添加量干重-实验组滤渣干重)/羽毛添加量干重×100％
游离氨基酸测定：吸取5mL发酵液(复合氨基酸肥料)至10mL比色管中，加ddH2O定容至10mL，静置过夜。吸取2mL上清液至10mL离心管中，准确加入2mL磺基水杨酸，混匀，静置1h使蛋白沉淀。准确加入1mL EDTA和1mL盐酸。4℃，6,000×g，离心15min(或用0.22μm微孔滤膜过滤)。吸取上清液1mL至培养皿中，蒸干。准确加入1mL 20mM HCl溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤。至少吸取500μL至进样瓶。使用日立L-8900全自动氨基酸分析仪进行测定。
c、复合碳氮源对羽毛发酵效果及产物的影响
为研究复合碳源对解淀粉芽孢杆菌3-2发酵羽毛效果及产物的影响，将预处理的羽毛按照质量百分比1％的添加量添加到发酵培养基中，再按照质量百分比1％的添加量分别添加麸皮、玉米粉、豆粕粉、豆饼粉，调节pH为7.0，然后将种子液按照体积比5％的接种量进行接种，37℃，200rpm，发酵96h后测定其测定有效活菌数和氨基酸含量(因为复合碳源的添加导致羽毛降解率无法测定，所以用有效活菌数作为辅助指标)，以不添加复合碳源作为对照组，测定结果见下表3。
表3添加不同复合碳氮源的羽毛发酵液中氨基酸含量及有效活菌数
由上表3可知，麸皮、玉米粉、豆粕粉、豆饼均对菌株的生长有促进作用，尤其是麸皮和玉米的促进效果明显，但这两种复合碳氮源对于氨基酸的生成和积累有抑制作用，而豆粕和豆饼有促进作用。这表明外加复合碳氮源只促进菌体细胞生长，对产酶没有效果，甚至还有一定的抑制作用。分析原因可能是外加碳氮源营养丰富，有利于菌体的生长，但菌体所产生的角蛋白酶属于诱导酶，在存在其他更容易利用的外加营养物质时，菌体会优先利用外加复合碳氮源，而不会产生角蛋白酶去分解利用羽毛。由上表3可知，添加豆粕和豆饼中的发酵液中氨基酸积累量高于纯羽毛发酵液中积累量，分析原因可能是角蛋白酶的底物比较广泛，也能分解利用豆粕和豆饼中蛋白质，从而造成氨基酸的少量积累。
发酵培养基的配方为：每升培养基含有NaCl 0.5g、NaH2PO4 0.4g、Na2HPO4 0.3g和乳糖10g，余量为水，按100mL培养基/250mL三角瓶进行分装，121℃灭菌20min。
降解率：发酵液(复合氨基酸肥料)经滤纸过滤，过滤后取滤渣105℃烘干至恒重，计算降解率。
羽毛降解率(％)＝(羽毛添加量干重-实验组滤渣干重)/羽毛添加量干重×100％
游离氨基酸测定：吸取5mL发酵液(复合氨基酸肥料)至10mL比色管中，加ddH2O定容至10mL，静置过夜。吸取2mL上清液至10mL离心管中，准确加入2mL磺基水杨酸，混匀，静置1h使蛋白沉淀。准确加入1mL EDTA和1mL盐酸。4℃，6,000×g，离心15min(或用0.22μm微孔滤膜过滤)。吸取上清液1mL至培养皿中，蒸干。准确加入1mL 20mM HCl溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤。至少吸取500μL至进样瓶。使用日立L-8900全自动氨基酸分析仪进行测定。
d、金属离子对羽毛发酵效果及产物的影响
将预处理的羽毛按照质量百分比1％的添加量添加到发酵培养基中，再按照质量百分比0.01％的添加量分别添加MgCl2、CaCl2、ZnCl2，调节pH为7.0，然后将种子液按照体积比5％的接种量进行接种，37℃，200rpm，发酵96h后测定其降解率及氨基酸含量，以不添加金属离子作为对照组，测定结果见下表4。
表4添加不同金属离子的羽毛发酵液中氨基酸含量及降解率
由上表4可知，Ca2+、Mg2+和Zn2+对羽毛的降解有抑制作用，尤其是Zn2+具有强烈的抑制作用，且三种金属离子对氨基酸的产生和积累也有抑制作用。
发酵培养基的配方为：每升培养基含有NaCl 0.5g、NaH2PO4 0.4g、Na2HPO4 0.3g和乳糖10g，余量为水，按100mL培养基/250mL三角瓶进行分装，121℃灭菌20min。
降解率：发酵液(复合氨基酸肥料)经滤纸过滤，过滤后取滤渣105℃烘干至恒重，计算降解率。
羽毛降解率(％)＝(羽毛添加量干重-实验组样品干重)/羽毛添加量干重×100％
游离氨基酸测定：吸取5mL发酵液(复合氨基酸肥料)至10mL比色管中，加ddH2O定容至10mL，静置过夜。吸取2mL上清液至10mL离心管中，准确加入2mL磺基水杨酸，混匀，静置1h使蛋白沉淀。准确加入1mL EDTA和1mL盐酸。4℃，6,000×g，离心15min(或用0.22μm微孔滤膜过滤)。吸取上清液1mL至培养皿中，蒸干。准确加入1mL 20mM HCl溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤。至少吸取500μL至进样瓶。使用日立L-8900全自动氨基酸分析仪进行测定。
e、羽毛底物含量对羽毛发酵效果及产物的影响
将预处理的羽毛分别按照质量百分比0.5％、1.0％、2.0％、5％、10％、15％、20％的添加量添加到发酵培养基中，调节pH为7.0，然后将种子液按照体积比5％的接种量进行接种，37℃，200rpm，发酵96h后测定其降解率及氨基酸含量，测定结果见下表5。
表5添加不同羽毛量的羽毛降解率及发酵液中氨基酸含量
由上表5可知，在一定的范围内增加羽毛含量，相当于增加营养物浓度，使得细菌生长增加，有利于羽毛的降解。当羽毛含量达到1％时，羽毛降解率最高，达到81.92％。而随着羽毛含量的增加，羽毛降解率呈下降趋势，当羽毛添加量为20％时，降解率只有45.32％。分析原因可能是产生底物浓度抑制效应，可能是底物浓度过高会影响料液比，使发酵液变得粘稠影响了溶氧，从而不利于菌体生长。从上表可知，氨基酸含量与羽毛降解率有着相反的变化趋势，随着羽毛含量的增加，发酵液中氨基酸含量呈上升趋势，当羽毛添加量为20％时，发酵液中氨基酸含量达到1.838 8％。分析其原因可能是，虽然羽毛降解率降低了，菌体生长和代谢消耗的氨基酸增多了，但羽毛降解的总量增大了，并且其增大的幅度大于氨基酸消耗的幅度，所以发酵液中氨基酸含量增高了。考虑后续大规模工业生产的需求，需综合考虑氨基酸含量和羽毛降解率这两个指标，本实验拟采用氨基酸产率为评价指标。通过计算可知，当羽毛含量为10％时，氨基酸产率最高，为22.32％。
发酵培养基的配方为：每升培养基含有NaCl 0.5g、NaH2PO4 0.4g、Na2HPO4 0.3g和乳糖10g，余量为水，按100mL培养基/250mL三角瓶进行分装，121℃灭菌20min。
降解率：发酵液(复合氨基酸肥料)经滤纸过滤，过滤后取滤渣105℃烘干至恒重，计算降解率。
羽毛降解率(％)＝(羽毛添加量干重-实验组滤渣干重)/羽毛添加量干重×100％
游离氨基酸测定：吸取5mL发酵液(复合氨基酸肥料)至10mL比色管中，加ddH2O定容至10mL，静置过夜。吸取2mL上清液至10mL离心管中，准确加入2mL磺基水杨酸，混匀，静置1h使蛋白沉淀。准确加入1mL EDTA和1mL盐酸。4℃，6,000×g，离心15min(或用0.22μm微孔滤膜过滤)。吸取上清液1mL至培养皿中，蒸干。准确加入1mL 20mM HCl溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤。至少吸取500μL至进样瓶。使用日立L-8900全自动氨基酸分析仪进行测定。
f、时间对羽毛发酵效果及产物的影响
考虑羽毛降解生成氨基酸与氨基酸分解消耗是一个动态过程，为探明其中的关系，将预处理的羽毛按照质量百分比10％的添加量添加到发酵培养基中，调节pH为7.0，然后将种子液按照体积比5％的接种量进行接种，37℃，200rpm，发酵时间分别为36h、48h、60h、72h、84h、96h、108h、120h和132h，测定其降解率及氨基酸含量，测定结果如下表6。
表6不同发酵时间羽毛降解率及氨基酸含量
由上表6可知，羽毛降解率随时间一直在升高，在132h达到最大70.12％，降解速率最快是在48h，然后降解速率开始放慢，当达到120h时，降解速度趋于零。分析原因可能是发酵后期，代谢物积累引起环境改变，从而影响角蛋白酶活性，同时角蛋白酶产生自身水解(主要原因)。而总氨基酸含量在0-108h内随着时间一直在升到，在108h达到最大2.013 3％(所得复合氨基酸肥料见图1，所得发酵液残渣进行扫描电镜图见图2，所得氨基酸谱图见图3)，然后随着时间的增加，总氨基酸含量呈下降趋势。分析原因可能是细菌先将羽毛角蛋白降解为可溶性的蛋白，再继续降解成短肽和氨基酸，最后氨基酸被细菌用于自身的生长代谢所消耗。在发酵后期羽毛降解产生氨基酸的速率低于细菌对氨基酸分解利用速度。
发酵培养基的配方为：每升培养基含有NaCl 0.5g、NaH2PO4 0.4g、Na2HPO4 0.3g和乳糖10g，余量为水，按100mL培养基/250mL三角瓶进行分装，121℃灭菌20min。
降解率：发酵液(复合氨基酸肥料)经滤纸过滤，过滤后取滤渣105℃烘干至恒重，计算降解率。
羽毛降解率(％)＝(羽毛添加量干重-实验组滤渣干重)/羽毛添加量干重×100％
游离氨基酸测定：吸取5mL发酵液(复合氨基酸肥料)至10mL比色管中，加ddH2O定容至10mL，静置过夜。吸取2mL上清液至10mL离心管中，准确加入2mL磺基水杨酸，混匀，静置1h使蛋白沉淀。准确加入1mL EDTA和1mL盐酸。4℃，6,000×g，离心15min(或用0.22μm微孔滤膜过滤)。吸取上清液1mL至培养皿中，蒸干。准确加入1mL 20mM HCl溶液，用0.22μm微孔滤膜过滤。至少吸取500μL至进样瓶。使用日立L-8900全自动氨基酸分析仪进行测定。
5、发酵羽毛生产复合氨基酸肥料的方法的建立
1、羽毛预处理：将收集到的废弃羽毛(鸡毛)洗净，然后在135℃，0.4MPa条件下蒸煮30min，取出自然风干，最后切碎成0.1-0.5cm长度。
2、菌种活化：将在-80℃冰箱中冷冻保存的解淀粉芽孢杆菌3-2(该菌株于2017年3月9日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，其保藏编号为：GDMCC No：60160)划线于NA斜面培养基上，37℃培养12-24h。
3、种子液制备：挑取解淀粉芽孢杆菌3-2单菌落接种到种子培养基中，于37℃、180rpm摇床培养12h，制备得到种子液。种子培养基的配方为：每升培养基含有蛋白胨10.0g、牛肉膏粉3.0g和NaCl 5.0g，余量为水，pH 7.4±0.2；将上述组分混合均匀后，灭菌备用。
4、发酵羽毛生产复合氨基酸肥料：将预处理的羽毛按照质量百分比10％的添加量加入到发酵培养基中，得到添加有羽毛的发酵培养基，然后将种子液按照体积比5％的接种量接种到添加有羽毛的发酵培养基中，在37℃，200rpm条件下摇床发酵108h，制备得到复合氨基酸肥料。发酵培养基的配方为：每升培养基含有NaCl 0.5g、NaH2PO4 0.4g、Na2HPO40.3g和乳糖10g，余量为水。
获得的复合氨基酸肥料的氨基酸的种类最全(富含17种氨基酸)，氨基酸含量最高，达到20.9g·kg-1。

Claims (9)

1.一种利用解淀粉芽孢杆菌发酵羽毛生产复合氨基酸肥料的方法，其特征在于，包括以下步骤：将解淀粉芽孢杆菌接种到添加有羽毛的发酵培养基中进行发酵，制备得到复合氨基酸肥料。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：
a、羽毛预处理：将羽毛洗净，经灭菌、自然风干或烘干，然后切碎，得到预处理的羽毛；
b、种子液制备：将解淀粉芽孢杆菌接种到种子培养基中进行发酵，制备得到种子液；
c、发酵羽毛生产复合氨基酸肥料：将预处理的羽毛按照质量百分比0.5％～20％的添加量加入到发酵培养基中，得到添加有羽毛的发酵培养基，然后将种子液按照体积比5％的接种量接种到添加有羽毛的发酵培养基中进行发酵，制备得到复合氨基酸肥料；
所述的发酵培养基的配方为：每升培养基含有NaCl 0.5g、NaH2PO4 0.4g、Na2HPO4 0.3g和乳糖10g，余量为水；
所述的解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)3-2，其保藏编号为：GDMCC No：60160。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的羽毛为鸡毛。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤a所述的灭菌是将羽毛在135℃，0.4MPa条件下蒸煮30min。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的将预处理的羽毛按照质量百分比0.5％～20％的添加量加入到发酵培养基中具体为将预处理的羽毛按照质量百分比10％的添加量加入到发酵培养基中。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的种子培养基的配方为：每升含有蛋白胨10.0g、牛肉膏粉3.0g和NaCl 5.0g，余量为水。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的将种子液按照体积比5％的接种量接种到添加有羽毛的发酵培养基中进行发酵，其发酵条件为：37℃，200rpm条件下发酵108h。
8.一种按照权利要求1或2所述的方法制备得到的复合氨基酸肥料。
9.解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)3-2，其保藏编号为：GDMCC No：60160。
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