CN106413680A - 用于诱导抗微生物肽生成的烟酰胺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及烟酰胺用于在皮肤上触发AMP（抗微生物肽）生成的新用途。这可应用于改善皮肤、头皮和口腔对抗微生物侵袭的免疫性。

Description

用于诱导抗微生物肽生成的烟酰胺

发明领域

本发明涉及烟酰胺用于在皮肤上触发AMP（抗微生物肽）生成的新用途。这可应用于改善皮肤、头皮和口腔对抗微生物侵袭的免疫性。

发明背景

皮肤是保护人体免受病原体（如病毒和细菌）入侵的首要防线。作为首要防御器官，皮肤组织总是保持与环境的持续接触，因此其必须面对和解决来自入侵病原体的威胁与挑战。暴露的皮肤表面不仅受到致病性外来细菌的挑战，并且还保持与常驻的共生细菌接触并相互作用。尽管存在所有这些来自外来和共生微生物的挑战，健康皮肤保持无感染，并且常驻微生物群落的数量保持恒定。因为皮肤具有复杂的防御策略，皮肤组织与微生物之间的相互作用的这种平衡得以维持，抗微生物肽（AMP）构成该防御策略的重要部分。

AMP构成皮肤自身防御体系的组成部分。AMP初始被发现在昆虫和动物中，自从其最初发现以来，AMP被认为是有前景的抗微生物剂。AMP在自然界中普遍存在，它们通常表现出针对入侵细菌、真菌、包膜病毒和寄生虫的广谱活性（Braff和Gallo, 2006）。AMP通常是短肽，经报道在人体中存在大约90种不同的AMP。AMP通常具有两种主要物理特征，它们是：a）阳离子电荷，和b）显著比例的疏水性残基。AMP的阳离子电荷提高了对带负电荷的微生物细胞质膜的选择性，而疏水性促进了与微生物物种的细胞膜的相互作用。

本发明人一直致力于通过提高皮肤中的AMP水平的途径来向消费者提供卫生益处。他们希望通过使用天然分子来提供这一点，消费者感受到天然分子对皮肤更友好和由此导致刺激性（harsh）较低。为了实现这一目标，测试了各种活性物质，并且在广泛研究后发现使用烟酰胺或维生素B3来提高皮肤上的AMP水平。

烟酰胺或维生素B3是公知的用于数种皮肤护理产品中的皮肤美白活性物质。烟酰胺还被报道为具有各种其它性质，如预防脂肪团、治疗皮肤刺激性和用于改善水在皮肤上的吸收（报道在专利公开EP1063963、EP1063994、EP1063965等等中）。烟酰胺还用于治疗许多炎性皮肤病症如寻常痤疮、牛皮癣和特应性皮炎（Niren, N.M. (2006) Pharmacologicdoses of nicotinamide in the treatment of inflammatory skin conditions: areview. Cutis 77: 11-16.）。

WO 11133692（Cedars-Sinai Medical Centre）公开了C/EBPe在对抗病原体的先天性免疫应答方面的重要作用。具体而言，已经显示，在不存在功能性C/EBPe的情况下，小鼠在它们清除金黄色葡萄球菌感染的能力方面严重受损。中性粒细胞尤其受到影响，并且通过用干扰素-γ（IFN-→）治疗可以调整对金黄色葡萄球菌的易感性。重要的是，提高的C/EBPe活性（通过诱导C/EBPE过度表达或通过施加烟酰胺或其类似物、衍生物或盐）显著提高了金黄色葡萄球菌的免疫杀灭并导致了感染的缓解。

本发明人已经发现，在皮肤（其可以是皮肤本身或头皮或口腔）上施加烟酰胺时，该活性物质诱导AMP的生成，这已知是改善皮肤对抗微生物侵袭的免疫性的重要步骤。由此，消费者所获得的益处在于通过施加包含烟酰胺的组合物来保护皮肤对抗可能在未来侵袭皮肤的病菌。

发明概述

本发明提供了当施加在人体的外表面上时烟酰胺用于诱导抗微生物肽（AMP）分泌的用途。

因此，还提供了当施加在人体的外表面上时用于预防性诱导抗微生物肽（AMP）分泌的烟酰胺。

此外，本发明提供了通过诱导抗微生物肽（AMP）分泌的方式提供对头皮的防护的方法，其包括向个人的头发/头皮施加烟酰胺的步骤。

发明详述

通过阅读以下详述和所附权利要求，这些和其它方面、特征与优点将对本领域普通技术人员变得明显。为了避免疑问，本发明的一个方面的任何特征可以用于本发明的任何其它方面。词语“包含”意在指“包括”，但不一定是“由……组成”或“由……构成”。换言之，列举的步骤或选项无需是穷举的。要注意的是，下面的说明书中给出的实施例意在阐明本发明而非意在将本发明限于这些实施例本身。类似地，除非另行说明，所有百分比是重量/重量百分比。除了在操作和对比实施例中或另有明确说明之处外，表明材料或反应条件、材料的物理性质和/或用途的本说明书中的所有数字应理解为被词语“大约”修饰。以“x至y”格式表示的数值范围理解为包括x和y。当对于特定特征以“x至y”的格式描述多个优选范围时，应当理解还预期了组合不同端点的所有范围。

本文中所用的“皮肤”意在包括哺乳动物，尤其是人类的外表面，包括皮肤、头皮、头发和口腔。所述用途可以通过将烟酰胺混入免洗型或洗除型产品中，其包括施加至人体的任何产品（主要用于美白皮肤，还可以改善外观、清洁、气味控制或一般美观性）。该用途优选通过混入到免洗型组合物中。该组合物可以是液体、乳液、乳膏、泡沫、擦洗剂、凝胶、皂条或爽肤水的形式，或使用器具或经由面膜、化妆棉（pad）或贴剂来施加。此类组合物的非限制性实例包括免洗型皮肤乳液和乳膏、洗发剂、护发素、沐浴露、香皂、止汗剂、除臭剂、脱毛剂、唇膏、粉底、睫毛膏、免晒美黑产品和防晒乳液。

烟酰胺具有下面给出的结构：

。

用于本发明的烟酰胺优选诱导由角质细胞分泌AMP。由此分泌的AMP提供对身体外表面的免疫性的改善。该外表面包括皮肤、头皮或口腔。

通过本发明已经发现，烟酰胺活化角质细胞（其是皮肤表皮中的主要细胞）以提供本发明的益处，即诱导抗微生物肽（AMP）分泌。这导致烟酰胺增强了对抗病菌的防护屏蔽。烟酰胺因此通过增强身体自身的防御来保护身体免受感染。换言之，该活性物质使身体表面准备好病菌防护。这样的优点在于其提供了对抗病菌的长效防护（例如长达24小时的防护）。

其中按照本发明使用烟酰胺的组合物可以包含以下优选特征。烟酰胺优选以该组合物重量的0.1至5%、更优选0.5至5%、再更优选0.5至3%和最佳1.0至3.0%存在。该组合物优选包含化妆上可接受的基料。所述化妆上可接受的基料优选是乳膏、乳液、凝胶或乳状液。

个人护理组合物可以使用不同的化妆上可接受的乳化或非乳化体系和媒介物来制备。优选的化妆上可接受的基料包含1至25%的脂肪酸。进一步优选的方面提供包含0.1至10%的皂。高度合适的基料是乳膏。雪花膏是尤其优选的。雪花膏基料通常包含5至25重量%的脂肪酸和0.1至10重量%的皂。雪花膏基料向皮肤提供深受青睐的亚光感觉。C₁₂至C₂₀脂肪酸在雪花膏基料中是尤其优选的，再更优选的是C₁₄至C₁₈脂肪酸。最优选的脂肪酸是硬脂酸。该脂肪酸还可以是棕榈酸和硬脂酸的混合物。该组合物中的脂肪酸更优选以组合物的5至20重量%的量存在。雪花膏基料中的皂类包括脂肪酸的碱金属盐，如钠盐或钾盐，最优选为硬脂酸钾。雪花膏基料中的皂通常以该组合物的0.1至10重量%、更优选0.1至3重量%的量存在。当配制为雪花膏时，个人护理组合物优选包含60至85重量%、更优选65至80重量%的水。水通常存在于按照本发明制备的许多组合物中，并通常以该组合物重量的40至85%存在。

本发明的组合物可以包含其它任选成分，如皮肤美白剂，和一种或多种UV遮光剂。根据本发明的组合物还可以包含其它稀释剂。稀释剂充当该组合物中存在的其它材料的分散剂或载体，以便在将该组合物施加至皮肤时促进其分布。除水之外的稀释剂可以包括液体或固体润肤剂、溶剂、湿润剂、增稠剂和粉末。

该组合物可以任选作为除臭剂递送。除臭剂指的是在棒式、滚搽式或推进式介质中的产品，其用于个人除臭益处，例如施加在腋下区域，其可以含有或不含有止汗剂活性物质。

除臭剂组合物通常可以为坚实固体、软固体、凝胶、乳膏和液体形式，并且使用适于该组合物的物理特性的施涂器（applicator）来分配。

该组合物可包含范围广泛的其它任选组分。CTFA Cosmetic IngredientHandbook, 第二版, 1992（其经此引用以其全文并入本文）描述了各种各样的通常用于皮肤护理行业中的非限制性化妆品和药物成分，其适用于本发明的组合物。实例包括：抗氧化剂、粘合剂、生物添加剂、缓冲剂、着色剂、增稠剂、聚合物、收敛剂、香料、湿润剂、遮光剂、调理剂、去角质剂、pH调节剂、防腐剂、天然提取物、精油、皮肤感觉剂（sensates）、皮肤舒缓剂和皮肤修复剂。

该组合物以任何已知形式配制，如洗发剂、免洗型乳膏、乳液、补剂或精华，更优选的形式是洗发剂、乳膏或乳液。

本发明的再一方面涉及通过诱导抗微生物肽（AMP）分泌的方式向头皮提供防护的方法，其包括向个人的头发/头皮施加烟酰胺的步骤。烟酰胺优选以治疗量施加从而诱导抗微生物肽的分泌。

因AMP的分泌引起的对头皮的防护优选导致对头皮的延长防护或更持久的防护以对抗头皮相关问题如头皮屑。由于增强的AMP分泌，使用烟酰胺可替代地提供优异的头皮屑控制。此外，通过这种机制，赋予头皮以优异的头皮屑控制，并在某些情况下赋予头皮以对抗反复产生的头皮屑的抵抗性。

因此，由于施加烟酰胺而增强的AMP分泌提供了增强的防护/防御、对头皮屑的抵抗性以及深层（advanced）的营养益处。为头皮屑或头皮干燥和瘙痒而感到苦恼的人可以感受到本发明的益处。

根据一个优选的方面，通过本发明的烟酰胺的用途优选是非治疗性的。

现在通过下列非限制性实施例进一步描述本发明。

实施例

实施例1至6：证明烟酰胺诱导LL-37基因表达但不改变牛皮癣素（psoriasin）表达 的实施例

制备如表1中所示的下列样品以便测量它们对牛皮癣素表达和表达的牛皮癣素AMP（LL-37）的作用。

表1

实施例	样品
		1	用于LL-37基因表达的对照物
2	用于LL-37基因表达的阳性对照物LPS（25↘g/ml）
		3	用于LL-37基因表达的烟酰胺（1.22 mg/ml）
4	用于牛皮癣素基因表达的对照物
		5	用于牛皮癣素基因表达的阳性对照物LPS（25↘g/ml）
6	用于牛皮癣素基因表达的烟酰胺（1.22 mg/ml）

下面给出了用于测量各基因表达的材料和程序。

材料

正常人类新生儿表皮原代角质细胞（NHEK）、角质细胞生长培养基（KGM）和生长补充剂、抗生素（青霉素和链霉素）、大肠杆菌菌株（ATCC菌株10536）、来自大肠杆菌 055:B5菌株的脂多糖（LPS）、1X磷酸盐缓冲盐水、10 mM磷酸钠缓冲液、烟酰胺、无菌杯（两端均为开口的桶形状，开放端面积为2.27 cm²，杆为硬质Teflon制成的圆形尖端）（附录1）、凡士林成分（附录2）、牛皮癣素（S100A7）（CircuLex）和LL-37 ELISA试剂盒（Hycult）、Macconkey琼脂培养基、TSA培养基（Unilever研究报告编号：BL 11 0086）。

人类原代皮肤角质细胞的刺激

由新生儿包皮制备的人类原代角质细胞获自（Lonza India）并在含有限定的生长补充剂（Invitrogen）的无血清的角质细胞生长培养基中培养。角质细胞在12和24孔组织培养板（BD Falcon）中培养并在60-70%的融合处处理细胞。在KGM中用生长补充剂进行角质细胞刺激，所有实验在第3至5代之间进行。

RNA分离和定量实时聚合酶链反应（PCR）

NHEK在12孔板（BD, Falcon）中以每孔6 × 10⁴个细胞进行培养。在温育24小时后，50%的培养基用新鲜培养基替换。在第3天，细胞用不同浓度的烟酰胺与新鲜培养基处理16-18小时。在RLT缓冲液（Qiagen）中收获细胞，样品在-70℃下储存直到用于RNA分离。

根据制造商的说明书，使用来自Qiagen的RNeasy Mini试剂盒分离总RNA。使用NanoDrop（Thermo scientific）仪器检查纯度和RNA浓度。将RNA样品装载在1%琼脂糖凝胶上，使用UV透射照明灯（Bangalore Genie, India）观察提取的质量。将RNA样品等分并储存在-70℃下。通过使用iScript cDNA合成试剂盒（Bio-Rad, USA），总RNA的等分试样（250至500 ng）用于制造cDNA。cDNA合成程序为65℃下5分钟，接着25℃下5分钟。cDNA合成在42℃下进行30分钟，最后在85℃下变性5分钟，接着在4℃下直到被取出。

采用SYBR green法按照制造商（Bio-Rad, USA）的说明书使用热控制Chromo4机器（Bio-Rad, USA）来进行实时PCR。通过使用标准化PCR程序（即94℃下5分钟，随后50个“94℃下15秒、60℃下30秒、72℃下30秒的循环）在各反应中使用5微升1:10稀释的cDNA样品和1.5皮摩尔的特异性引物，结果通过使用2^−ΔΔCT方法来分析。

牛皮癣素和LL-37 ELISA

原代角质细胞在12孔板（BD falcon）中接种。在60至70%融合时，细胞用不同浓度的烟酰胺处理72小时。在温育72小时后，将细胞培养上清液储存在-70℃下直到用于ELISA。在测定前使所有ELISA试剂和样品达到室温。细胞培养上清液样品在使用前在5000 rpm下离心10分钟。100↘l的细胞培养上清液的未稀释样品用于通过使用来自CircuLex的ELISA试剂盒检查牛皮癣素水平。临床样品在稀释缓冲液中稀释至1:25并使用100↘l稀释样品以便用于通过ELISA检查牛皮癣素水平。在LL-37的情况下，100↘l来自体外的未稀释样品以及临床样品用于通过ELISA（Hycult Biotech）检查LL-37水平。

将角质细胞中牛皮癣素和LL-37 AMP的基因表达用烟酰胺处理18小时。LPS（20微克/毫升）用作阳性对照物以触发牛皮癣素的基因表达，并使用上面给出的程序研究18小时后在原代角质细胞中的LL-37 AMP。倍数变化方面的结果在下表2中给出。

表2

实施例	样品	倍数变化
			1	用于LL-37基因表达的对照物	1.0
2	用于LL-37基因表达的阳性对照物LPS（25↘g/ml）	3.9
			3	用于LL-37基因表达的烟酰胺（1.22 mg/ml）	2.4
4	用于牛皮癣素基因表达的对照物	1.0
			5	用于牛皮癣素基因表达的阳性对照物LPS（25↘g/ml）	2.3
6	用于牛皮癣素基因表达的烟酰胺（1.22 mg/ml）	1.1

上表2中的数据表明，即使在非常高的浓度（1.22 mg/ml）下，烟酰胺也不能诱导牛皮癣素基因表达，但是令人惊讶地，烟酰胺能够诱导牛皮癣素AMP的分泌，这使用ELISA技术来检测。

实施例7至12：采用含有烟酰胺的皮肤乳液的体内实验以证明在皮肤上诱导的牛 皮癣素和LL-37的分泌

为了证实来自体外实验的发现，在体内测试了烟酰胺对健康人类志愿者的作用。要求志愿者在他们的前臂上每天两次施加含有和不含有烟酰胺（3%）的乳液。在施加7天后，在PBS中提取斑点（spots）并进行ELISA以检测牛皮癣素和LL-37 AMP。

体内研究程序

大肠杆菌培养物制备

大肠杆菌（10536）的甘油储备液在30毫升TSB培养基中接种并将培养物在振荡培养箱中在37℃下温育整夜。将过夜培养物在TSA斜面上传代培养并在37℃下温育过夜，随后将该斜面储存在4℃下（一旦到15天，新鲜制备斜面）。

来自斜面的大肠杆菌培养物在TSA板上传代培养并在37℃下温育过夜。将过夜生长的大肠杆菌的板培养物悬浮在6至7毫升的磷酸钠缓冲液（10 mM）中。使用分光光度计将培养物的密度调节至1 OD₆₂₀并用于临床研究。

提取的杯擦洗法

该技术包括在ASTM方法E2752-10（用于评价抗菌剂残留效力的标准指南）中。杯和棒由Teflon制成，杯的面积为2.84 cm²。该杯用于将缓冲液保持在皮肤上，棒用于擦洗，以便更好地从皮肤上回收皮肤AMP和/或残留细菌。擦洗的持续时间为1分钟。提取的样品收集在1.5毫升的微量离心管中用于分析（附录1）。

通过杯擦洗法估计牛皮癣素与LL-37 AMP并对来自人类皮肤的残留大肠杆菌进行 计数

将10微升1 OD₆₂₀大肠杆菌培养物施加在前臂上的标记区域上的2.27 cm²面积上（无乳膏、基料乳膏和烟酰胺乳膏施加的斑点）。培养物均匀地铺展在各斑点上。在15分钟接触时间后，通过杯擦洗法在1毫升PBS中提取样品。样品收集在无菌微量离心管中。

在提取的样品中，800↘l用于通过标准微生物方法（在MacConkey琼脂板上通过平板涂布法将100↘l未稀释的、-1和-2稀释样品进行铺板）对残留大肠杆菌进行计数。剩余的200↘l样品用于通过ELISA使用标准化试剂盒分析牛皮癣素和LL-37水平。纯净样品用于检查样品中LL-37的水平。在牛皮癣素的情况下，样品在稀释缓冲液（其与试剂盒一起提供）中稀释至1:25并使用100↘l的稀释样品用于分析。

体内研究设计

1．要求志愿者每天早晨在洗浴后到达研究现场。

2．使用标记笔和标尺在内前臂上标记6.25 cm²面积（2.5×2.5厘米）的区域。在前臂上标记三个区域，不包括手腕（距手掌基部5厘米）。（如果标记变得暗淡或被擦除，给每个志愿者一支标记笔以标记该区域）。

3．将制剂的62.5 mg的等分试样在无菌容器（35毫米塑料圆盘）中称重并给予志愿者。

4．要求志愿者在前臂上的圈定斑点中施加该制剂（62.5 mg/6.25 cm²面积）。（施加顺序为基料制剂，随后是含有活性物质的制剂）。每次将该制剂铺展在区域上大约30秒。

5．在施加每种制剂后，用无菌面巾纸擦拭手指。

6．在无菌的35毫米塑料培养皿中称重62.5 mg制剂的类似等分试样，用石蜡膜密封并给予各志愿者以便在晚上施加（在睡前）。

7．对于7天研究，将步骤3至6重复7天。在一天研究的情况下，在第二天进行评估。

8．在第8天，要求志愿者在不洗涤他们的前臂的情况下在早晨到达研究现场。

9．用非抗菌皂（Lux肥皂）（由研究者）洗涤志愿者的前臂。

10．通过用无菌面巾纸轻拍干燥除去过量的水。

11．要求志愿者等待6小时，不得触碰前臂。

12．使用模板在各乳膏施加斑点上标记2.27 cm²的圆形区域，并将10微升对应于1×10⁸至1×10⁹个细胞/毫升的大肠杆菌10536培养物添加至各圆形区域并均匀地铺展。

13．在15分钟的接触时间后，使用1毫升的1X PBS通过杯擦洗法回收大肠杆菌。提取的持续时间为1分钟。

14．通过平板涂布法在MacConkey's琼脂上分析样品的细菌计数。

在各种实验中在前臂区域中大肠杆菌的残留对数总结在下表3和表4中：

表3：在施加组合物一天后测得的大肠杆菌残留对数（n=28）

实施例	样品	倍数变化
			7	大肠杆菌的基础残留对数	4.21
8	施加不含烟酰胺的乳液时的残留对数	3.44
			9	施加含有3%烟酰胺的乳液时的残留对数	2.31

表4：在施加组合物7天后测得的大肠杆菌残留对数（n=34）

实施例	样品	倍数变化
			10	大肠杆菌的基础残留对数	4.41
11	施加不含烟酰胺的乳液时的残留对数	3.56
			12	施加含有3%烟酰胺的乳液时的残留对数	2.39

上表3中的数据表明，包含烟酰胺的组合物甚至在使用一天后也能够减少细菌，而表4表明，这种效果保持很长一段时间（7天施加）。

实施例13：确定通过烟酰胺诱导分泌的抗微生物肽（AMP）的类型和量的实验

下列程序用于确定在角质细胞上因烟酰胺而诱导的AMP。

1．用1毫升KGM完全培养基将原代角质细胞接种在12孔板中。（在第4代接种60,000个细胞/孔）。

2．将板在CO₂培养箱中温育48小时。

3．在温育48小时后，在一式两份的孔中用和不用1毫克/毫升浓度的烟酰胺处理细胞（新鲜培养基用于处理）。

4．在温育72小时后，将细胞培养物上清液分别转移到1.5毫升微量离心管中。

5．随后使样品通过20 kDa截止过滤器以除去高分子量蛋白质。

6．将含有<20kDa蛋白质的洗脱样品转移到15毫升无菌离心管中。

7．随后，向洗脱样品中加入冷丙酮（HPLC级）（1毫升样品:4毫升丙酮）

8．将管转移至-20℃下24小时以沉淀蛋白质。

9．在24小时后，将管在4℃下在14000 g下离心40分钟。

10．弃去上清液，采用用于蛋白质的质谱法分析蛋白质颗粒。

关于提高的各种AMP的分泌水平的数据列举在表5中。提高的AMP分泌水平通过PSM值（肽光谱匹配评分函数）来度量，其为分泌蛋白质组中肽的丰度的相对量度。

表5

分泌的AMP	未经烟酰胺处理的PSM值（对照样品）	经烟酰胺处理的PSM值
			乳铁蛋白	1	7
脂质运载蛋白-2	1	4
			S-100-A8	1	3
S-100-A11	2	5
			弹力素	1	3
溶菌酶C	2	4
			S100-A9	2	4
脂质运载蛋白-1	0	2

表5中的数据表明，由于使用烟酰胺，存在明显高水平的各种AMP的分泌。

实施例14-17：对皮肤防御自身对抗感染的能力的人类志愿者研究

进行采用下列方案的实验：

1．给予志愿者Lux^TM肥皂以便使用，并要求在研究开始前7天在他们的前臂上不使用任何其它肥皂或保湿剂。

2．要求志愿者在前臂上的不同斑点处施加Vaseline^TM健康白色基料乳膏和用烟酰胺（1%、2%和3%）配制的Vaseline^TM健康白色乳膏。

3．要求志愿者每天重复步骤1两次，持续1天，早晨在洗浴后，和晚上临睡觉前。要求志愿者在晚上施加制剂后不得洗涤前臂。

4．在第2天，由研究者用非抗菌皂条洗涤前臂，并要求志愿者在受控条件（24±2℃和45%±5% RH）下等待6小时。

5．在等待6小时后，在前臂上分别向各个斑点施加~10⁶个大肠杆菌。大肠杆菌在皮肤上的接触时间为15分钟。

6．在15分钟后，使用杯-棒法从前臂提取样品。

7．使用标准微生物方法对大肠杆菌进行计数。

各处理的大肠杆菌计数的数据总结在表6中。

表6

实施例	样品	大肠杆菌的残留对数
			15	对照物	4.3
16	1%烟酰胺	3.5
			17	2%烟酰胺	3.0
18	3%烟酰胺	2.7

表6中的数据表明使用烟酰胺增强了皮肤对抗入侵细菌的固有免疫性。

本发明由此提供了迄今未知的烟酰胺的新用途，当施加在人体外表面上时其诱导抗微生物肽（AMP）的分泌。

Claims (7)

1.当施加在人体的外表面上时，烟酰胺用于诱导抗微生物肽（AMP）分泌的用途。

2.如权利要求1中所要求保护的用途，其中烟酰胺诱导AMP从角质细胞中分泌。

3.如权利要求1中所要求保护的用途，用于改善所述外表面的免疫性。

4.如权利要求1或2中所要求保护的用途，其中所述外表面包括皮肤、头皮或口腔。

5.如权利要求1至4任一项中所要求保护的用途，其中所述用途是非治疗性用途。

6.当施加在人体的外表面上时，用于预防性诱导抗微生物肽（AMP）分泌的烟酰胺。

7.通过诱导抗微生物肽（AMP）分泌的方式向头皮提供防护的方法，其包括向个人的头发/头皮施加烟酰胺的步骤。