EA009169B1 - Препарат, содержащий аллицин, для преодоления множественной лекарственной резистентности у бактерий - Google Patents
Препарат, содержащий аллицин, для преодоления множественной лекарственной резистентности у бактерий Download PDFInfo
- Publication number
- EA009169B1 EA009169B1 EA200400451A EA200400451A EA009169B1 EA 009169 B1 EA009169 B1 EA 009169B1 EA 200400451 A EA200400451 A EA 200400451A EA 200400451 A EA200400451 A EA 200400451A EA 009169 B1 EA009169 B1 EA 009169B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- allicin
- resistant
- vancomycin
- concentration
- ppm
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/095—Sulfur, selenium, or tellurium compounds, e.g. thiols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к аллицину. В частности, изобретение относится к противобактериальным, противовирусным, антибиотическим, противомикробным, противогрибковым, противопротозойным, инсектицидным, ларвицидным, овицидным и педикулоцидным препаратам, содержащим аллицин или метаболит аллицина и фармацевтически приемлемый наполнитель. Также установлено синергическое действие аллицина в препаратах, содержащих кроме него по крайней мере одно другое противобактериальное, противовирусное, антибиотическое, противомикробное, противогрибковое, противопротозойное, инсектицидное, ларвицидное, овицидное или педикулоцидное средство. Также описано применение аллицина в лекарственных препаратах для преодоления множественной лекарственной резистентности у бактерий.
Description
Настоящее изобретение относится к аллицину.
Полагают, что аллицин, соединение серы, имеющее формулу
II О представляет собой основное активное соединение, характеризующееся многочисленными терапевтическими свойствами, которые описаны для чеснока (ЛШит кайушт). В естественном состоянии чеснок содержит не аллицин, а его предшественник - аллиин [(+)8-аллил-Ь-цистеинсульфоксид]. Аллиин превращается в аллицин в результате действия фермента аллиназы или аллиинлиазы, также компонента чеснока. Аллиин и аллиназу получают вместе, когда разрезают или дробят чесночные зубки. Следующее уравнение представляет схему синтеза.
аллиназа/НдО аллиин аллицин п ирови н огради ая кислота
Однако аллиназа быстро и необратимо инактивируется продуктом ее реакции, аллицином, а также инактивируется в кислых условиях, таких как в желудке. Поэтому на практике выход аллицина из зубков чеснока оказывается значительно ниже теоретического максимума. Действительно, выход обычно составляет порядка 0,3-0,5%.
В \У097/39115 описан непрерывный способ синтеза аллицина, который включает приготовление колонки, содержащей аллиназу, иммобилизованную на твердом носителе, пропускание раствора аллиина через колонку и получение раствора аллицина в вытекающей жидкости.
Кроме того, авторы настоящей заявки получали аллицин в высушенной распылением форме и приобретали в капсулах от фирмы АШсш 1п(егпа(1опа1 Ытйеб оГ На1Г Ноике, Мййагу Коаб, Куе, ЕаД Зиккех, ΤΝ31 7ΝΥ, иийеб Кшдбот, под товарным наименованием аллимакс (АББ1МАХ).
Настоящее изобретение основано на исследованиях новых терапевтических свойств аллицина.
В наиболее важном аспекте в настоящем изобретении представляют противобактериальный, противовирусный, антибиотический, противомикробный, противогрибковый, противопротозойный, инсектицидный, ларвицидный, овицидный или педикулоцидный препарат, содержащий аллицин или метаболит аллицина и фармацевтически приемлемый наполнитель.
Предпочтительно препарат содержит по крайней мере одно другое противобактериальное, противовирусное, противомикробное, противогрибковое, противопротозойное, инсектицидное, ларвицидное, овицидное или педикулоцидное средство.
Более предпочтительно другое средство выбирают из (1) пенициллинов, включая ампициллин, пиперациллин, карбенициллин, амоксициллин, метициллин и пенициллин О; (ίί) аминогликозидаз, включающих в себя гентамицин, тобрамицин, стрептомицин и амикацин; (ΐΐΐ) тетрациклинов; (ίν) макролидов, включая эритромицин; (ν) цефалоспоринов и цефамицинов, включающих в себя цефуроксим, цефамандол и моксалактам; и (νί) фузидиновой кислоты, рифампицина, новобиоцина, ванкомицина, ципрофлоксацина, хлорамфеникола и метронидазола.
Соответственно, метаболит аллицина представляет собой по крайней мере один из ΌΑΌ8 (диаллилдисульфид), ΌΑΤ8 (диаллилтрисульфид), эдзоена, аллитридия или винилдитиина.
В одном аспекте в настоящем изобретении предлагают применение аллицина для получения лекарственного средства для преодоления множественной лекарственной резистентности у бактерий. Соответственно, множественная лекарственная резистентность у бактерий представляет собой МК8А (метициллинрезистентные 81арйу1ососси8 ашеик); ΜΌΚΤΒ (множественная лекарственная резистентность микобактерий туберкулеза), УК8А (устойчивость 81арйу1ососси5 аигеик к ванкомицину), МК8Е (метициллинрезистентные 81арйу1ососси5 ер1бепшб15). РК8Р (устойчивость 81гер1ососси5 риеитоиеае к пенициллину), УКЕ (устойчивость энтерококков к ванкомицину) или У18А (промежуточная резистентность 81арйу1ососси5 аигеик к ванкомицину).
Предпочтительно для перорального введения или введения в виде суппозитория, вагинального суппозитория или назального препарата фармацевтически приемлемый наполнитель представляет собой твердую композицию, на которую присоединяют аллицин или его метаболит. Более предпочтительно, если требуется, твердая композиция содержит средство, увеличивающее объем, такое как лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или дикальцийфосфат; загуститель, такой как смола или крахмал; дезинтегрирующий агент, такой как натрий-гликолят крахмала или поперечно-сшитый повидон; способствующее высвобождению средство, такое как стеарат магния; эмульгатор; поверхностно-активное вещество и подсластители, ароматизаторы и красители. Наиболее предпочтительно аллицин связывают способом распылительной сушки, а твердая композиция содержит модифицированный крахмал, такой как мальтодекстрин, аравийская камедь, диоксид кремния, и эмульгатор, такой как стеарат магния.
Соответственно, для местного применения фармацевтически приемлемый наполнитель входит в со
- 1 009169 став крема или мыла. Альтернативно, наполнитель может представлять собой лосьон, мазь, зубную пасту, жидкость для полоскания рта или препарат для волос, такой как шампунь, гель для укладки волос или кондиционер. Если уместно, такие препараты могут включать в себя комбинации следующих веществ: поверхностно-активных веществ, ароматизаторов, красителей, стабилизаторов, антиоксидантов, эмульгаторов, загустителей, восков, глицеринов, жиров, веществ, способствующих суспендированию, дефлокулирующих веществ и антиоксидантов, все из которых могут быть, а могут и не быть гипоаллергенами. Предпочтительно крем-наполнитель содержит белый полутвердый парафин, эмульгатор, такой как стеарат, предпочтительно стеарат магния, глицерин, воду, желтый полутвердый парафин и стабилизатор, такой как цитрат калия. Наиболее предпочтительно крем-наполнитель представляет собой водный крем, предпочтительно водный крем ВР. Соответственно, наполнитель-мыло содержит эфир серной кислоты, кокамид и кокобетаин. Возможно, наполнитель, кроме того, может включать в себя ароматизаторы и красители.
Предпочтительно для перорального, парентерального или местного применения отношение аллицина к наполнителю является таким отношением, которое обеспечивает концентрацию аллицина от 1 до 2000 ч./млн, предпочтительно от 50 до 1000 ч./млн, более предпочтительно от 250 до 500 ч./млн.
Приведенные выше и другие аспекты изобретения в дальнейшем описывают более подробно с ссылкой на следующие примеры только как показательный пример.
1. Противомикробные свойства одного аллицина.
Определение минимальной ингибиторной концентрации (М1С) методом пробирочного разведения Используя асептический способ, 1 мл питательной среды двойной концентрации разливали в каждую из 11 пробирок Кана (Кйап). В первую пробирку, пробирка 1, (обозначенная контроль) добавляли 1 мл стерильной деионизованной воды. Во вторую пробирку, пробирка 2, добавляли 1 мл аллицина (2000 ч./млн в водном растворе), смешивали, используя механический смеситель, и 1 мл переносили из пробирки 2 в пробирку 3. Процесс повторяли последовательно до пробирки 11. Следовательно, получали серию двойных разведений между 1/2 и 1/1024. 4 мкл культуры, выращенной в течение ночи на питательной среде, использовали для инокулирования каждой пробирки. Содержимое пробирок смешивали и инкубировали при 37°С в течение 24 ч. Наблюдали за помутнением в пробирках и самую низкую концентрацию без помутнения регистрировали как М1С.
Определение минимальной бактерицидной концентрации (МВС)
Из каждой из пробирок М1С-серии, в которых не было обнаружено никакого помутнения, отбирали 100 мкл и рассеивали на поверхности чашки питательного агара, используя стерильный стеклянный шпатель. Чашки инкубировали при 37°С в течение 24 ч и следили за появлением бактериальных колоний. Самую низкую концентрацию, при которой не наблюдали никаких жизнеспособных бактерий, регистрировали как МВС.
Определение М1С с использованием многоточечного инокулятора
Исходный раствор аллицина 1/4 об./об. готовили добавлением 5 мл аллицина (2000 ч./млн в водном растворе) к 15 мл стерильной воды. Отбирали 10 мл приготовленного раствора, добавляли к 10 мл расплавленного, охлажденного питательного агара двойной концентрации, смешивали и использовали для приготовления чашки с разведением 1/8 об./об. Оставшиеся 10 мл аллицина (1/4) разбавляли 10 мл стерильной воды, чтобы получить раствор с разведением 1/8 об./об. 10 мл 1/8-раствора использовали для приготовления 1 чашки с разведением 1/16 об./об. Серийное разведение продолжали до тех пор, пока не получали чашки с разведением аллицина 1/1024 об./об. Чашки оставляли для уравновешивания и высушивали при 44°С в течение 15 мин.
Тестируемые микроорганизмы (табл. 1) культивировали на питательном бульоне при 37°С в течение 18 ч. 0,3 мкл неразведенных культур засевали на поверхность приготовленных высушенных чашек, используя многоточечный инокулятор. Чашки инкубировали при 37°С в течение 24 ч и наблюдали за ростом. Общее количество жизнеспособных организмов определяли по способу Милеса-Мисра (М11екМ1кга).
Таблица 1
| Грамположительные бактерии | Грамотрицательные бактерии | Дрожжи |
| ВасШик киЬййк | ЛегоШопак йубторЫ1а | Сапбгба а1Ысаи8 |
| Еп1егососик ГаесаКк | ЕксйепсШа со11 ЫСТС 10418 | |
| Ы81ет1а шопосу1одепек | Ркеибошопак аетидшока | |
| Ме1ЫбШш Ре5181ап1 | 8а1шопе11а (урЫшигшш | |
| 81арйу1ососси8 аигеик (МК.8Л) 81арйу1ососси8 аигеик ИСТС 6571 | Уегкгша еШетосоййса |
Минимальные ингибиторные концентрации, установленные методом пробирочного разведения
Из тестируемых микроорганизмов Ркеибошопак аетидшока оказался наименее чувствительным к аллицину, а СапФба а1Ысапк был наиболее чувствительным (табл. 3). Были рассчитаны величины М1С и МВС для аллицина и представлены в табл. 2. Полученный образец аллицина анализировали при концентрации 2000 частей.
- 2 009169
Минимальные ингибиторные концентрации, установленные с помощью многоточечного инокулятора
М1С определяли, используя многоточечный инокулятор (табл. 3). Величины М1С вычисляли, используя аллицин при концентрации 2000 ч./млн, и результаты хорошо согласовались с результатами, полученными способом пробирочного разведения.
Противомикробную активность аллицина продемонстрировали в отношении 11 микробных видов. Относительные чувствительности микроорганизмов отличались, Ркеибошопак аегидшока оказался наименее чувствительным, а СапбИа а1Ыеап8 был наиболее чувствительным.
Стафилококки являются одним из наиболее важных видов бактерий, вызывающих заболевание у человека. Они являются нормальными обитателями верхних дыхательных путей, кожи, вагины и кишечника. Они являются представителями группы, называемой пиогенными кокками (гноеродными). Стафилококк легко передается от бессимптомных носителей (без признаков заболевания) или от субъектов с заболеванием через кожный контакт, аэрозоли или от неживых объектов. Стафилококк может вызывать патологический процесс почти в каждом органе и ткани организма.
Таблица 2
М1С и МВС, определенные методом пробирочного разведения
| З.аигеиз ЫСТС 6571 | 03/04/01 | 06/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С | 1/128 | 1/64 | 1/64 | 23 |
| МВС | 1/4 | 1/8 | 1/4 | 375 |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 1,43x10е | 2,3x10е | 1,43x10е | |
| Е. соИ ЫСТС 10418 | 03/04/01 | 06/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С | 1/128 | 1/64 | 1/32 | 28 |
| МВС | 1/32 | 1/16 | 1/16 | 94 |
| Общее количество жизн е спо собных (КОЕ/мл) | 1,13x10’ | 6,75x10е | 1,О5х1О10 | |
| Е.£аеса11з | 03/04/01 | 06/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С | 1/16 | 1/32 | 1/32 | 75 |
| МВС | 1/4 | 1/2 | 1/4 | 600 |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 1,80x10е | 1,63x10е | 7,75х107 | |
| А. ЬубгорНИа | 03/04/01 | 06/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С | 1/64 | 1/16 | 1/256 | 49 |
| МВС | 1/32 | 1/16 | 1/32 | 75 |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 2,55x10е | 4,25x10е | 2,33x10“ | |
| 5. СурМтигтит М1С | 03/04/01 1/64 | 06/04/01 1/64 | 18/04/01 1/32 | Концентрация (частей на миллион) 31 |
| МВС | 1/16 | 1/16 | 1/8 | 150 |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 8,80x10е | 6,00x10® | 1,80x10’ | |
| Υ. епСегосоНЫса | 03/04/01 | 06/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С | 1/512 | 1/64 | 1/128 | 15 |
| МВС | 1/64 | 1/64 | 1/64 | 28 |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 9,50х107 | 1,70x10е | 2,18х1О10 |
- 3 009169
| ь. топосубодепез | 03/04/01 | 06/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С | 1/64 | 1/128 | 1/64 | 23 |
| мвс | 1/8 | 1/4 | 1/16 | 262 |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 2,30х108 | 7,75x10’ | 1,15х108 | |
| ΜΚ8Ά | 03/04/01 | 06/04/01 | Концентрация (частей на миллион) | |
| МТС | 1/64 | 1/64 | 28 | |
| мвс | 1/4 | 1/2 | 675 | |
| Общее количество жизнеспособных | 9, 00x10’ | 9,75x10’ | ||
| (КОЕ/мл) Р.аегид1пова | 03/04/01 | 06/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С | 1/8 | 1/8 | 1/8 | 225 |
| МВС | 1/8 | 1/4 | 1/4 | 375 |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 5,25х10а | 1,25x10’ | 3,75x10’ | |
| С. а1Ысапз | 03/04/01 | 06/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С | 1/512 | >1/512 | 1/512 | >3,5 |
| МВС | 1/128 | 1/32 | 1/64 | 33 |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 3, 40x10е | 3,05x10е | 3, 00x10’ |
Таблица 3
М1С, определенная с помощью многоточечного инокулятора
| 8.аигеиз ЫСТС 6571 | 03/04/01 | 06/04/01 | 12/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С (Серия 1} | <1/40 | 1/128 ' | 1/128 | 1/128 | 14 |
| М1С (Серия 2) | <1/40 | 1/128 | 1/128 | 1/128 | |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 1,43x10’ | 2,3x10’ | 1,43x10’ | ||
| Е. со11 ЫСТС 10418 | 03/04/01 | 06/04/01 | 12/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| МТС (Серия 1) | <1/40 | 1/128 | 1/128 | 1/128 | 14 |
| М1С (Серия 2) | <1/40 | 1/128 | 1/128 | 1/128 | |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 1,13x10’ | 6,75x10’ | 1,05x1ο10 | ||
| Е. ГаесаИз | 03/04/01 | 06/04/01 | 12/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С (Серия 1) | <1/40 | 1/32 | 1/32 | 1/32 | 56 |
| М1С (Серия 2) | <1/40 | 1/32 | 1/32 | 1/32 | |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 1,80x10’ | 1,63x10’ | 7,75x10’ |
- 4 009169
| А. ЬуйгорЬИа | 03/04/01 | 06/04/01 | 12/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С (Серия 1) | <1/40 | 1/128 | 1/256 | 1/128 | 12 |
| М1С (Серия 2) | <1/40 | 1/128 | 1/256 | 1/128 | |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 2,55x10е | 4,25x10’ | 2,33x10’ | ||
| 3.СурЫтигаит | 03/04/01 | 06/04/01 | 12/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С (Серия 1) | <1/40 | 1/64 | 1/64 | 1/64 | 28 |
| М1С (Серия 2) | <1/40 | 1/64 | 1/64 | 1/64 | |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 8,80x10’ | 6,00x10* | 1,80x10’ | ||
| Υ. еп^егосо11С1са | 03/04/01 | 06/04/01 | 12/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С (Серия 1) | <1/40 | 1/128 | 1/256 | 1/128 | 12 |
| М1С (Серия 2) | <1/40 | 1/128 | 1/256 | 1/128 | |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 9,50x107 | 1,70x10е | 2,18х101и | ||
| ь. топосуСодепез | 03/04/01 | 06/04/01 | 12/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С (Серия 1) | <1/40 | 1/64 | 1/128 | 1/64 | 21 |
| М1С (Серия 2) | <1/40 | 1/128 | 1/128 | 1/64 | |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 2,30x10’ | 7,75x10’ | 1,15x10’ | ||
| МНЗА | 03/04/01 | 06/04/01 | 12/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С (Серия 1) | <1/40 | 1/64 | 1/128 | 1/64 | 26 |
| М1С (Серия 2) | <1/40 | 1/64 | 1/64 | 1/64 | |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 9,00X10’ | 9,75x10’ | 7,50x10’ | ||
| Р.аегидгпоза | 03/04/01 | 06/04/01 | 12/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С (Серия 1) | 1/15 | >1/8 | 1/8 | >1/8 | >197 |
| М1С (Серия 2) | 1/15 | >1/8 | 1/8 | >1/3 | |
| Общее количество жизне спос обных (КОЕ/мл) | 5,25x10’ | 1,25x10’ | 3,75x10’ |
- 5 009169
| С. а1Ь1сапа | 03/04/01 | 06/04/01 | 12/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С (Серия 1) | <1/40 | 1/256 | 1/512 | 1/256 | >5 |
| М1С (Серия 2) | <1/40 | 1/512 | 1/512 | 1/256 | |
| Общее количество жизнеспособных (КОЕ/мл) | 3,40х106 | 3,05х106 | 3,00х105 | ||
| В.зиЬЫПз | 03/04/01 | 06/04/01 | 12/04/01 | 18/04/01 | Концентрация (частей на миллион) |
| М1С (Серия 1) | <1/40 | 1/256 | 1/512 | 1/64 | >2 |
| М1С (Серия 2) | <1/40 | 1/512 | 1/64 | 1/64 |
Метициллин (или его родственные антибиотики) является одним из основных лекарственных средств, используемых для лечения инфекционных заболеваний, вызванных 81арйу1ссоссиз аигеиз. Метициллинрезистентные 81арйу1ососсиз аигеиз (МК8А) являются основной нозокомиальной проблемой (инфекции, вызванные штаммами, приобретенными в больнице). Большинство из названных штаммов являются резистентными к большому разнообразию антибиотиков (включая некоторые из наиболее последних). Некоторые штаммы также являются резистентными к агентам, таким как мупироцин, используемый в настоящее время для борьбы с бессимптомным носительством и образованием колоний в больницах. В некоторых отделениях интенсивной терапии 10-20% пациентов может быть заражено МК8А.
С помощью диффузионных тестов определяют чувствительность изолятов к противомикробным средствам, измеряя зоны ингибирования вокруг совокупного показателя противомикробного средства. Однако названные тесты являются наиболее общими тестами, используемыми для обследования на противомикробную резистентность. Зоны ингибирования не менее 6 мм, которые меньше зон известного контрольного штамма, указывают на бактериальную чувствительность к противомикробному средству. Размеры зон 12 мм или меньше обычно указывают на резистентность, также между указанными уровнями существует промежуточная резистентная группа.
Используя приведенные выше критерии, в следующих примерах при сравнении размеров зон с размерами зон чувствительного к антибиотику контроля клинические изоляты классифицировали как (ί) резистентные к мупироцину, (ίί) промежуточно резистентные и (ш) чувствительные к мупироцину.
Бактериальные штаммы клинических изолятов и один контрольный штамм 81арй аигеиз (Оксфордский штамм, ΝΟΤΟ 6571) тестировали в фазе 1 испытаний. Все штаммы были предоставлены Королевскими госпиталями (Коуа1 Ьопбоп и 81 Ваг1йо1отете'з) в Лондоне и были идентифицированы как имеющие множественную резистентность к антибиотикам. Впоследствии 17 из названных штаммов плюс контроль были отобраны для фазы 2 испытаний.
Фаза 1. Диффузионный анализ.
Первоначально упомянутые испытания проводили, чтобы тестировать эффективность кремов. Однако результаты исследования кремов сравнивали с результатами тестирования чесночной и аллициновой жидкости, используя способы стандартных агаровых лунок. Резистентность к мупироцину подтверждали, используя диффузионный тест со стандартным бумажным диском (ИгараЛ Ыб.). Чашки с агаром МюллераГинтона (Ми11ег-Нш1оп) засевали (газонный слой) стандартизированной концентрацией 81арй. аигеиз. Чашки оставляли для высушивания на воздухе. Круглые лунки стандартного размера вырезали в агаровой культуральной среде и заполняли одинаковым количеством (100 мкл) крема или раствора. Противобактериальную активность определяли при измерении зон ингибирования, образовавшихся вокруг каждой лунки.
Чувствительность к мупироцину
Оксфордский 81арй. аигеиз образовывал зону размером 35 мм. 5 штаммов идентифицировали как полностью чувствительные (размеры зон от 33 до 45 мм), 12 зон показали промежуточную чувствительность (размеры зон между 12 и 23 мм), и 13 штаммов оказались резистентными (никакой зоны ингибирования).
Активность раствора аллицина
Показано, что водный раствор жидкости аллицина является высокоактивным в отношении всех штаммов 81арй. аигеиз, тестированных вплоть до уровней 250 ч./млн (фиг. 1).
Активность аллицинового крема
Когда составляли обычный водный крем, обнаружили, что аллицин является высокоактивным в отношении всех штаммов при концентрациях 500 ч./млн. Указанные концентрации соответствуют подходящим уровням для применения как местного средства (фиг. 2).
Фаза 2. Минимальные ингибиторные концентрации (М1С) и минимальные бактерицидные концентрации (МВС) для аллицина в отношении 81арйу1ососсиз аигеиз.
Тестировали 17 клинических изолятов (выбранных из группы штаммов фазы 1) и 1 контрольный
- 6 009169 штамм (Оксфордский штамм, ΝΟΤΟ 6571) 81арй аигеик. Каждый штам культивировали в течение ночи при 37°С в бульоне Мюллера-Гинтона (Охо1й Ый. СМ405). Культуры разводили названным бульоном, чтобы получить концентрацию Ьод 7 КОЕ/мл, использовали десятикратную конечную концентрацию.
мл водного раствора аллицина (в концентрации 5000 ч./млн) добавляли к 8 мл бульона МюллераГинтона (бульон концентрировали, чтобы избежать эффекта разведения среды) и вдвое разводили, чтобы получить область концентраций между 1000 и 1 ч./млн (мкг/мл) плюс 0 ч./млн (мкг/мл) в отрицательном контроле. 1 мл каждой смеси отбирали из каждой среды и добавляли 1 мл бактериального концентрата, достигая конечной концентрации приблизительно Ьод 6 КОЕ/мл.
Названные бульонные культуры инкубировали в течение ночи при 37°С. На следующий день бульоны исследовали относительно роста (мутные культуры). Наиболее низкую концентрацию, не показавшую никакого роста (прозрачную), рассматривали как М1С.
Культуру, содержащую М1С и все вышеприведенные концентрации, субкультивировали на чашках с питательным агаром (Охо1й Ый., СМ3), чтобы определить МВС. Отбирали 0,1 мл каждой культуры и культивировали. Культуру с наиболее высокой концентрацией, при которой наблюдали рост (мутность) при исследовании М1С, также субкультивировали как позитивный контроль. Чашки инкубировали в течение ночи при 37°С. Наиболее высокую концентрацию, при которой наблюдали рост (видимые бактериальные колонии), рассматривали как МВС.
Для приготовления крема или раствора для клинического применения против §1арйу1ососси5 аигеик важно установить оптимальные концентрации противомикробного средства, которое проявляет активность в отношении тестируемых штаммов. Результаты сопоставлены в табл. 4 ниже.
Исследованный контрольный штамм (Оксфордский 81арй аигеик) показал М1С 32 мкг/мл и МВС 256 мкг/мл. М1Ск для 17 тестированных клинических изолятов составляли или 16, или 32 мкг/мл, МВСк составляли или 128, или 256 мкг/мл. Большинство клинических изолятов имели М1Ск 16 мкг/мл и МВСк 128 мкг/мл, см. табл. 5.
88% клинических изолятов имели М1Ск 16 мкг/мл, и 88% клинических изолятов имели МВСк 128 мкг/мл, см. фиг. 3. Из 17 тестированных штаммов 3 оказались чувствительными к мупироцину (как показано дисковым диффузионным тестом), 8 проявили промежуточную чувствительность и 6 оказались резистентными. Все 6 резистентных к мупироцину штаммов имели М1Ск 16 мкг/мл, 4 штамма имели МВСк 128 мкг/мл, и 2 имели МВСк 256 мкг/мл.
Таблица 4 МЭСз (АЛЛИ МАКС)
| ЗДарЬ.ТЧо | Разведение (частей (+) ' рост | 0- нет роста | (ох)- оксфордский контроль | ||||||||
| на миллион) | |||||||||||
| 1000 500 | 250 | 125 62.5 31.25 | 15.6 | 13 | 3.7 | 1.8 | 0.9 | 0 ΚΐΏρΙι.Νο | М1С | ||
| 525(ох) | 6)00 0 | (-)(-) | 0000(-)(-) | (-)(+) | (+)(+) | (+Х+) | (+)(+) | (+)(+) | (+Х+) | ох | 32 |
| 867 | О 000 | (-)(-) | 00000(-) | 00 | (+)(+) | (+Х+) | (+Х+) | (+Х+) | (+Х+) | 867 | 16 |
| 868 | 0 00 0 | 00 | (-)000(-)0 | 00 | (+Х+) | (+Х+) | (+)(+) | (+Х+) | (+Х+) | 868 | 16 |
| 869 | 0 000 | (·)() | 000000 | 00 | (-Х+) | (+)(+) | (+)(+) | (+Х+) | (+Х+) | 869 | 16 |
| 870 | 0000 | (-)(-) | (-)(-)(-)00(-) | (-)(-) | ()(+) | (+)(+) | (+Х+) | (+Х+) | (+)(+) | 870 | 16 |
| 872 | 0006) | (-)(-) | 0000(-)(-) | (-Х+) | (+Х+) | (+)(+) | (+Х+) | (+)(+) | (+)(+) | 872 | 32 |
| 873 | 0 000 | 00 | (-)(-)(-)(-)(-) (-) | 00 | (-Х+) | (+)(+) | (+Х+) | (+Х+) | (+)(+) | 873 | 16 |
| 874 | 0 00 0 | 00 | (-)(-)000(-) | (-Х-) | (-Х+) | (+Х+) | (+)(+) | (+Х+) | (+)(+) | 874 | 16 |
| 575 | 0000 | 00 | (-)(-)(-)(-)(-)(-) | (-Х+) | (+Х+) | (+Х+) | (+)(+) | (+)(+) | (+)(+) | 875 | 32 |
| 876 | 0(-)00 | 00 | 0(-)(-)00(-) | 00 | (+Х+) | (+Х+) | (+)(+) | (+)(+) | (+)(+) | 876 | 16 |
| 878 | 000 0 | (-) (-) | 000000 | 00 | (-)(+) | (+Х+) | (+)(+) | (+Х+) | (+Х+) | 878 | 16 |
| 880 | 0000 | (-)(-) | 00(-)00(-) | (-)(-) | (-Х+) | (+Х+) | (+)(+) | (+)(+) | (+)(+) | 880 | 16 |
| 885 | 0000 | ()(-) | 00(-)(-)(-)0 | (-Х-) | (-)(+) | (+Х+) | (+Х+) | (+Х+) | (+)(+) | 885 | 16 |
| 886 | (-)(-)(-)(-) | (-)(-) | (-)(-)(-) 00 (-) | 00 | (-Х+) | (+Х+) | (+Х+) | (+Х+) | (+)(+) | 886 | 16 |
| 888 | 0000 | (-)(-) | (-)0000 0 | (-Х-) | (-Х+) | (+)(+) | (+Х+) | (+Х+) | (+Х+) | 888 | 16 |
| 889 | 0000 | (-) (-) | 0 000(-)(-) | 00 | (-Х+) | (+)(+) | (+)(+) | (+Х+) | (+Х+) | 889 | 16 |
| 890 | 0(-)00 | (-)(-) | 000000 | (-)(-) | (-Х+) | (+Х+) | (+)(+) | (+)(+) | (+)(+) | 890 | 16 |
| 891 | 0000 | 00 МВ Св | 0 0000(-) | (-)(-) | (+)(+) | (+Х+) | (+Х+) | (+Х+) | (-+)(+) | 891 | 16 |
| (АЛЛИМАКС) | (+)= рост | (-)= нет роста | |||||||||
| Разведение (частей | (ох) - оксфордский контроль | ||||||||||
| ЗДарЫЧо | на миллион) | δΙβρΕΝο | |||||||||
| 1000 500 | 250- | 125 62.5 31.25 | 15.6- | 7.3 | 3.7 | 1.8 | 0.9 | 0 | МВС | ||
| 825(ох) | 0000 | (-Х-) | (+)(+)(+Х+)(+)(+) | (+)(+) | (+Х+) | — | — | 825 | 250 | ||
| 867 | 0(-)00 | 00 | 00 (+Х+) (+)(+) | (+)(+) | (+Х+) | — | — | — | 567 | 128 | |
| 868 | 0000 | 00 | 00 (-)(+) (+Х+) | (+Х+) | (+Х+) | — | — | — | 868 | 128 | |
| 869 | (-)(-)(-)(-) | (-Х-) | 00 0(+) (+Х+) | (+Х+) | (+)(+) | — | — | 869 | 128 | ||
| 870 | 0000 | (-)(-) | (-Х-) (+)(+)(+)(+) | (+Х+) | (+Х+) | — | — | — | — | 870 | 128 |
| 872 | 0(-)00 | 00 | (-Х-) (+Х-Х+Х+) | (+Х+) | (+Х+) | — | — | 872 | 128 | ||
| 873 | 0000 | (-Х-) | 00 (+Х+Х+Х+) | (+Х+) | (+Х+) | — | — | — | 873 | 128 | |
| 874 | 0000 | (-Х-) | 00 (+)(+) (+Х+) | (+Х+) | (+Х+) | — | — | 874 | 128 | ||
| 875 | 06)00 | 00 | (-)(-) (+Х-) (+)(+) | (+)(+) | (+Х+) | „— | — | 875 | 128 | ||
| 876 | 00(-)0 | 00 | 00 (+)(+) (+Х+) | (+Х+) | (+)(+) | —— | — | — | 576 | 128 | |
| 877 | (-Х-) (-)(-) | (-)(-) | (-)(-) (+Х-Н+Х+) | (+)(+) | (+)(+) | — | — | — | 577 | 128 | |
| 878 | (-)(-)(-)(-) | (-)() | (-Х-) (+)(+)(+)(+) | (+)(+) | (+Х+) | — | — | 578 | 128 | ||
| 880 | 0(-)0(-) | (-Х-) | (-Х-) (+)(+) (+)(+) | (+)(+) | (+Х+) | — | 880 | 128 | |||
| 885 | 0000 | (-)(-) | (-)(-) (+)(+)(+)(+) | (+Х+) | (+)(+) | — | — | 585 | 128 | ||
| 886 | 0(-)0(-) | (-)(-) | 00 (+)(+)(+)(+) | (+Х+) | (+Х+) | — | — | 886 | 128 | ||
| 888 | 00(-)(-) | (-)(-) | (-)() (+)(+) (+Х+) | (+Х+) | (+Х+) | — | .— | 588 | 128 | ||
| 889 | 0000 | 00 | 0(+) (+)(-) (+Х+) | (+Х+) | (+)(+) | — | — | 389 | 256 | ||
| 890 | (-Х-) (-)(-) | (-Х-) | (-Х+) (+)(+)(+)(+) | (+)(+) | (+Х+) | — | — | — | —- | 590 | 256 |
| 891 | 0(-)(-)0 | (-)(-) | (-Х-) (-)(-) (+Х-) | (+Х+) | (+Х+) | — | — | 891 | 128 |
- 7 009169
Таблица 5
| М1С 16 | М1С 32 | ВСЕГО | |
| МВС 128 | 13 | 2 | 15 |
| МВС 256 | 2 | 0 | 2 |
| ВСЕГО | 15 | 2 | 17 |
На основании полученных результатов оказалось очевидным, что:
активность аллицина в концентрации 500 и 1000 ч./млн соответствовала активности 1 к 10 и 1 к 5 разведениям грубого экстракта чеснока;
88% штаммов показали минимальные ингибиторные концентрации для аллицина 16 мкг/мл и 100% штаммов ингибировались аллицином при концентрации 32 мкг/мл;
88% штаммов показали минимальные бактерицидные концентрации для аллицина 128 мкг/мл и 100% штаммов уничтожались аллицином при концентрации 256 мкг/мл;
аллицин оказался высокоэффективным в отношении как охарактеризованных. так и диких штаммов МКЗЛ.
Кроме определения минимальной ингибиторной концентрации (М1С). проводили тестирование аллицина в отношении ряда грамположительных и грамотрицательных бактериальных видов относительно селекции 9 бактериальных изолятов при более близких разведениях водных растворов аллицина (аллимакс). Результаты представлены в табл. 6. Использовали изоляты:
Грамположительные
ЗБарйу1ососсиз аитеик: Оксфордский контрольный штамм (ОХ) и 2 лаб. изолята МК5Л (102 & 103) (кокки)
ЗБарйу1ососсик ерБйетшБбБк (кокки)
ЗБарйу1ососсик ругодепек (кокки)
ЗеттаББа шетсексеик (палочки)
Грамотрицательные
За1топе11а БурЫшийиш (палочки)
Ркеийошоиак аетидБиока (палочки)
ЕксйейсЫа сой (палочки)
Оксфордскую изочувствительную агаровую среду стерилизовали и охлаждали приблизительно до 45-50°С перед применением. Получали серийные разведения водного аллицина (аллимакс) в концентрации 5000 ч./млн в изочувствительном бульоне.
Таблица 6
Грамположительные
ЗБарйу1ососсик аитеик (ОХ. 102 и 103) и ЗБарйу1ососсик ерБйетшБбБк (ЗЕ) ЗйерБососсик руодепек (ЗР) и Зеттайа шатсексеик (ЗМ)
| аллицин,частей на миллион | ох | МК5А 102 | МЕЗА 103 | ЗЕ | ЗР | ЗМ |
| 0 | 4- 4- | + + | + 4- | 4- + | 4- 4- | + + |
| 10 | + + | + + | 4- + | 4- 4- | 4- 4- | 4· 4- |
| 15 | + + | + + | + 4* | 4- 4- | 4- + | |
| 20 | + 4- | Ч- + | + + | 4- 4- | 4- + | |
| 23 | + + | 4- + | + 4- | 4- + | 4- + | |
| 25 | + ч- | + Έ ' | 4- + | 4- + | + 4- | |
| 30 | + + | + 4* | 4- 4- | 4- 4- | 4- 4- | |
| 35 | + + | 4- 4- | + + | 4- 4- | ||
| 41 | 4- 4- | 4- 4- | ||||
| 47 | + + | 4- 4- | ||||
| 50 | 4- 4- | .4- + | ||||
| 55 | 4- 4- | 4- 4- | ||||
| 52 | 4- + | + 4- | ||||
| 70 | 4- 4- | |||||
| 83 | + 4- | |||||
| 94 | 4- + | |||||
| 100 | + + | |||||
| 110 | 4- 4- | |||||
| 125 | 4- 4- | |||||
| 135 | 4- 4- | |||||
| 145 | 4- 4- | |||||
| 167 | 4- 4- | |||||
| 170 | ||||||
| 188 | ||||||
| 200 | ||||||
| 225 | ||||||
| 250 | ||||||
| 334 | ||||||
| 375 | ||||||
| 378 | ||||||
| 400 | ||||||
| 500 | ||||||
| М1С | 35 | 41 | 41 | 15 | 70 | 170 |
- 8 009169
Грамотрицательные
8а1топе11а 1урЫтитшт (8Т), Ркеиботопак аегидшока (РА), ЕксйепсЫа сой (ЕС)
мл из каждого разведения аллицина добавляли в каждую стерильную чашку Петри (каждый тест проводили в двух копиях). 18 мл охлажденной среды добавляли к аллицину и смешивали и оставляли для охлаждения и затвердевания. Бактериальные образцы готовили как посевной материал 106 КОЕ/мл и 0,02 мл засевали на каждую чашку, используя многоточечный инокулятор. В каждую серию опытов включали отрицательные контроли.
Проведенные исследования выявили ряд М1Ск среди выбранных образцов грамположительных и грамотрицательных видов бактерий, наиболее чувствительными видами были стафилококки, характеризующиеся М1С между 15 и 41 ч./млн.
Наиболее резистентным грамотрицательным видом оказался Ркеиботопак аетидшока (М1С 378 ч./млн), и наиболее резистентным грамположительным видом оказалась палочка 8еггайа тагсексепк (М1С 170 ч./млн).
Жидкие экстракты аллицина были высокоактивными в отношении клинических изолятов 81арЬу1ососсик аитеик, с множественной резистентностью к антибиотикам, включая те штаммы, которые были идентифицированы как резистентные к мупироцину.
Крем-препараты показали подходящие уровни активности при концентрации 500 мкг/мл, что подтверждает применение аллицинового крема как местного средства против мупироцинрезистентных и мупироцинчувствительных штаммов 81арйу1ососси8 аигеик с множественной резистентностью к антибиотикам.
Следуя аналогичной методике, подобные испытания проводили также для сравнения эффективности аллицина с эффективностью стрептомицина в отношении 6 штаммов ΜΌΚ.ΤΒ (множественная лекарственная резистентность туберкулеза). Результаты представлены в табл. 7.
- 9 009169
Таблица 7
| Штамм МОКТВ | Колониеобразующие единицы | ||
| Контроль | Стрептомицин | Аллицин | |
| 5221 | 100 | 200 | 0 |
| 31222 | 147 | 1 | 0 |
| 5632 | 37 | 29 | 0 |
| 37018 | 300 | 9 | 0 |
| 37010 | 350 | 6 | 0 |
| 57007 | 65 | 2 | 0 |
В присутствии противомикробного средства любой рост микобактерий туберкулеза оказывается очень важным. Из полученных результатов понятно, что, в то время как отмечали рост на всех скошенных агарах, на которых штаммы обрабатывали стрептомицином, не обнаруживали никакого роста ни на одном из скошенных агаров, обработанных аллицином (водный раствор при концентрации 500 ч./млн).
Кроме того, затем проводили исследования инсектицидных свойств аллицина, в частности его педикулоцидной активности в отношении головных вшей (Реб1си1и8 йишапиз). Контроль заражения головными вшами по традиции осуществляли, используя обычные инсектициды с некоторым избытком. Однако в некоторых частях мира появились штаммы головных вшей, которые устойчивы к одному или более из названных инсектицидов.
В испытании взрослых самцов и самок вшей использовали приблизительно в равном количестве. Вшей кормили в начале испытания и оставляли минимально на 4 ч для акклиматизации, время, в течение которого они могли выделить избыток воды, поглощенной с насасываемой ими порцией крови. В экспериментальные серии включали по 20 вшей и помещали их на квадраты открытой сетчатой нейлоновой ткани (тюль), как на субстрат. Каждую серию размещали на маркированной 30 мм пластиковой чашке Петри. Аликвоту приблизительно 5-10 мл аллицина в концентрации 5000 ч./млн в водном растворе наливали на основание чистой 30 мм пластиковой чашки Петри. Ткань, несущую вшей, погружали в жидкость на 10 с, во время которых ткань вращали по крайней мере дважды, чтобы обеспечить удаление пузырьков воздуха. После удаления из жидкости ткань и насекомых слегка промокали, чтобы устранить избыток жидкости, и возвращали в маркированную чашку Петри. Процедуру повторяли на других подобных квадратах ткани в той серии.
Тканевые квадраты, несущие вшей, инкубировали при нормальных условиях содержания (30°±2°, Саиб 50%±15% повышенная влажность) в течение ночи. В конце периода экспозиции насекомых и ткань промывали, используя мягкий косметический шампунь (Βοοΐδ® Егес.|иеп1 ^азй 8йашроо), разведенный 1 часть шампуня к 14 частям воды, после чего их 3 раза промывали, используя 250 мл теплой водопроводной воды (34°С), которую наливали через или на тканевые квадраты. Затем тканевые квадраты промокали досуха, используя медицинскую ткань для вытирания, и инкубировали при нормальных условиях содержания в чистой пластиковой чашке Петри соответствующего размера в течение 1 ч. Обеспечивали порцией крови. Вшей оставляли на 4 ч для восстановления, прежде чем еще раз обрабатывали, как описано выше. Результаты трех испытаний представлены в табл. 8 в сравнении с контрольными сериями, которые обрабатывали 60% изопропиловым спиртом через 24 и 48 ч.
Таблица 8
| Тест | Мертвые | Живые | Болезненные | Смертность |
| День 1 | ||||
| А1 | 5 | 11 | 7 | 52,2% |
| А2 | 9 | 7 | 5 | 66,7% |
| АЗ | 7 | 9 | 4 | 55,0% |
| Всего | 21 | 27 | 16 | 57,8% |
| С1 | 2 | 18 | 0 | 11,0% |
| День 2 | ||||
| А1 | 22 | 1 | 1 | 95,8% |
| А2 | 19 | 0 | 2 | 100% |
| АЗ | 15 | 0 | 5 | 100% |
| Всего | 56 | 1 | 8 | 98,4% |
| С1 | 4 | 14 | 0 | 28,6% |
Как можно видеть, аллицин показывает приемлемую эффективность в течение ночи при общей смертности 57,8% по сравнению со смертностью контроля 11%. Однако после порции насасываемой крови и второй обработки эффективность аллицина становится 98,4% против контроля 28,6%.
2. Синергическое действие аллицина в комбинации с другими противомикробными средствами.
Для оценки активности аллицина в отношении контрольных штаммов и клинических изолятов 81арйу1ососси8 ашеиз и ЕзсйепсЫа сой обследовали большое разнообразие антибиотиков, используя способы
- 10 009169 диффузии в чашках, относительно резистентности к антибиотикам и чувствительности к антибиотикам бактерий. Использовали оксфордскую изочувствительную среду (Ι8Α, СМ471, Οχοίά, Ва8ш§81оке, ИК). Названная среда рекомендована для тестирования противомикробной чувствительности Британским обществом противомикробной химиотерапии (В8АС). Использовали способы, предписанные В8АС (В8АС, 2001). Для каждой серии опытов проводили предварительные тесты, чтобы оптимизировать посевной материал, концентрацию аллицина и расстояние на чашке между тестируемыми агентами.
Бактериальные штаммы: один чувствительный к антибиотику контроль (81ар11. аигеиз, ИСТС 6571), 2 метициллинрезистентных 81ар11. аигеиз (МК.8А) и Е сой, К12.
Антибиотики: тестировали 22 антибиотика; см. табл. 9. Процедура: для каждого теста (проводили в трех копиях):
1. приготовить культуру, выращенную в течение ночи;
2. приготовить посевной материал, чтобы получить плотный, но не сплошной рост на стандартизированных 25 мл чашках агара. Высушить поверхность чашки;
3. применение 6 мм стерильного пробкового бура, чтобы вырезать лунки в чашке, добавить 150 мкл аллицина;
4. добавить антибиотический диск;
5. инокулировать в течение ночи при 37°С;
6. оценить синергизм (слияние зон), антагонизм (снижение в зоне ингибирования) или отсутствие эффекта. Получить большое количество результатов, чтобы выбрать те комбинации, которые следует тестировать в фазе 2 испытаний.
Результаты
Первую серию экспериментов проводили, чтобы определить, оказывает ли изменение концентрации аллицина какое-либо влияние на возможный синергизм. В табл. 10 показано взаимодействие 8 антибиотиков с аллицином при двух концентрациях (500 и 250 ч./млн). Размеры зон даны в мм.
81ар11. аигеиз: размеры зон для концентрации аллицина 250 ч./млн были между 5 и 9 мм и были меньше, чем размеры зон для 500 ч./млн аллицина.
Е. сой: размеры зон для концентрации аллицина 250 ч./млн составляли между 1 и 12 мм и были меньше, чем размеры зон для 500 ч./млн аллицина. Вообще, размеры зон были меньше, чем размеры, полученные с 81арй. аигеиз.
Концентрацию 500 ч./млн выбрали для дальнейших испытаний, чтобы область взаимодействия между аллицином и антибиотиком была больше. Также не выявили никаких неубедительных результатов при использовании концентрации 500 ч./млн, но которые получали при использовании концентрации 250 ч./млн (табл. 10 - результаты отмечены «?»).
Результаты, представленные в табл. 9, демонстрируют комбинации антибиотиков, выбранные для дальнейших исследований. Выбрали двенадцать комбинаций, все из которых имели оценку степени реакции больше 5. Комбинации с оценками выше 5, которые не были выбраны, содержали антибиотики, относящиеся к уже исследованной группе (например, группе аминогликозидаз). Гентамицин и тобрамицин, оба были выбраны, вследствие их обычного употребления при лечении пациентов и их высоких оценок степени.
В табл. 9 представлены результаты исследования сравнительной синергической активности 22 антибиотиков с аллицином в концентрации 500 ч./млн. Оценки степени реакции связывали с возможной степенью синергизма, который определяли, используя тесты диффузии в агаре.
Таблица 9
| Антибиотик | Оксфорд | ΜΚ3Α103 | МИ5А102 | Е οοΐΐ | Оцен -ка | Тест | Замечай. |
| Тетрациклин | 3 | 3 | 3 | 2 | 11 | да | |
| Гентамицин | 3 | 3 | 3 | 1 | 10 | Да | аминогликозидаза |
| Фузидиновая кислота | 3 | 3 | 3 | 0 | 9 | Да | |
| Рифампицин | 3 | 3 | 3 | 0 | 9 | да | |
| Тобрамицин | 3 | 2 | 3 | 1 | 9 | да | аминогликозидаза |
| Новобиоцин | 3 | 3 | 3 | 0 | 9 | да | |
| Амикацин | 3 | 3 | 2 | 0 | 8 | аминогликозидаза | |
| Ванкомицин | 2 | 3 | 2 | 0 | 7 | да | |
| Ципрофлоксацин | 3 | 3 | 0 | 0 | 8 | да | |
| Эритромицин | 3 | 0 | 3 | 0 | 6 | да | |
| Цефуроксим | 3 | 2 | 0 | 0 | 5 | да | |
| Моксолактам | 3 | 2 | 0 | 0 | 5 | да | |
| Пиперациллин | 3 | 1 | 0 | 1 | 5 | да | |
| Стрептомицин | 1 | 1 | 2 | 0 | 4 | аминогликозидаза | |
| Ампициллин | 3 | 1 | 0 | 0 | 4 | ||
| Карбенициллин | 3 | 1 | 0 | 0 | 4 | ||
| Цефамандол | 3 | 1 | 0 | 0 | 4 | ||
| Хлорамфеникол | 3 | 1 | 0 | 0 | 4 | ||
| Амоксициллин | 3 | 0 | 0 | 0 | 3 | ||
| Метициллин | 3 | 0 | 0 | 0 | 3 | ||
| Пенициллин С | 3 | 0 | 0 | 0 | 3 | ||
| Метронццазол | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
- 11 009169
Хотя чувствительный к антибиотикам контрольный штамм (Оксфорд) показал наибольшее число высоких оценок степени реакции, штаммы МК8А также показали хороший потенциал и отмечен возможный синергизм тетрациклина с Е. сой. На фиг. 5-9 продемонстрировано, как различные синергические взаимодействия распределились по степени.
Данные испытания четко продемонстрировали потенциал противомикробного синергического действия аллицина и большого разнообразия антибиотиков в отношении 8!арйу1ососсик аигеик, включая МК8А.
Таблица 10
Ме№-Ме
| микроорганизм | чашка | СЫогагпр-С | ЕгуЩ-Е | Риз асйРА | |||
| С | А/ Я | Е | А1 К | РА | А1 К | ||
| Οχΐοίό 5а | 250 | 31 | 38 N | 26 | 38? | 35 | 39 5 |
| 500 | 25 | 48? | 26 | 48 N | 33 | 43 5 | |
| ΙΑΗ5Α 102 | 250 | 22 | 40 N | 24 | 37? | 32 | 37 5 |
| 500 | 26 | 48 5 | 25 | 43 ? | 32 | 453 | |
| МЙ8А103 | 250 | 25 | 40 5 | 10 | 42 N | 33 | 40 5 |
| 500 | 25 | 47 5 | 10 | 48 N | 37 | 47 5 | |
| Е соП К12 | 250 | 20 | 23 N | 0 | 23 N | 14 | 23 N |
| 500 | 25 | 26 N | 25 | 26 N | 25 | 26 N |
О
Ме А/ К δ
3
Ν ?
Ν
Ν
Ν
Ν микроорганизм
ОхТогб 5а
ΜΒ5Α102
ΜΚ5Α103
Ε αοίί Κ12
3!гер-3!
Реп <3·ΡΘ чашка
250
ΝονοϋΝο
| Νο | ΑΙ Й | РО | А1 Й | 3! | А/ Н |
| 29 | 38 5 | 32 | 38 5 | 20 | 39 N |
| 33 | 455 | 38 | 45 5 | 20 | 45 N |
| 26 | 40? · | 0 | 37 N | 15 | 36 N |
| 31 | 45 5 | 0 | 43 N | 18 | 42 N |
| 28 | 40 5 | 0 | 40 N | 18 | 40 5 |
| 30 | 45 6 | 0 | 44 N | 18 | 46 3 |
| 20 | 14 N | 20 | 14 N | 17 | 23 N |
| 25 | 26 N | 27 | 26 N | 18 | 24 N |
ΤβΙτ
ΑΙ К
33Ν
5 δ
5 ?
5
Ν
Ν
СЫоташр - хлорамфеникол; Ету!й - эритромицин; Гик асШ -фузидиновая кислота; Ме1й - метициллин; Νονοό - новобиоцин; Реп О - пенициллин О; 8йер - стрептомицин; Те! - тетрациклин.
К = результат, А1 = размер зоны аллицина.
Результаты - 8 = синергизм, N = нет синергизма, ? = неубедительные данные, А = возможный антагонизм.
Claims (14)
1. Препарат для преодоления множественной лекарственной резистентности у бактерий, включающий аллицин или метаболит аллицина.
2. Препарат по п.1, в котором бактерии представляют собой МК8А (метициллинрезистентные
- 12 009169
81арйу1ососси5 аигеиз); ΜΌΚ.ΤΒ (микобактерии туберкулеза с множественной лекарственной резистентностью); ΥΒδΑ (81ар11у1ососси5 аигеиз, резистентные к ванкомицину); ΜΚ.8Ε (метициллинрезистентные 81ар11у1ососси5 ер1бегт1б18); РК.8Р (81герЮсосси5 рпеитопеае, резистентные к пенициллину); ΥΒΕ (энтерококки, резистентные к ванкомицину) или νίδΆ (81арйу1ососси5 аигеиз с промежуточной резистентностью к ванкомицину).
3. Препарат по п.1 или 2, дополнительно содержащий по крайней мере одно дополнительное противобактериальное, противовирусное, противомикробное, противогрибковое, противопротозойное, инсектицидное, ларвицидное, овицидное или педикулоцидное средство.
4. Препарат по п.3, в котором дополнительное средство выбрано из (ί) пенициллина, (ίί) аминогликозидов, (ίίί) тетрациклинов, (ίν) макролидов, (ν) цефалоспоринов и цефамицинов и (νί) фузидиновой кислоты, рифампицина, новобиоцина, ванкомицина, ципрофлоксацина, хлорамфеникола или метронидазола.
5. Препарат по любому из пп.1-4, в котором метаболит аллицина выбран из ΌΑΌ8 (диаллилдисульфида), ΌΑΤ8 (диаллилтрисульфида), эдзоена, аллитридия и винилдитиинов.
6. Препарат по любому из пп.1-5, дополнительно содержащий фармацевтически приемлемый наполнитель в форме твердой композиции, на которой иммобилизован аллицин.
7. Композиция по п.6, в которой твердая композиция содержит модифицированный крахмал, такой как мальтодекстрин, аравийскую камедь, диоксид кремния и эмульгатор, такой как стеарат магния.
8. Препарат по любому из пп.1-5, дополнительно содержащий фармацевтически приемлемый наполнитель в форме крема или мыла.
9. Препарат по п.8, в котором наполнитель включает белый полутвердый парафин, эмульгатор, глицерин, воду, желтый полутвердый парафин и стабилизатор.
10. Препарат по п.9, в котором эмульгатор представляет собой стеарат, предпочтительно стеарат магния.
11. Препарат по п.8, в котором наполнитель содержит эфир серной кислоты, кокамид и кокобетаин.
12. Препарат по любому из пп.6-11, в котором отношение аллицина к наполнителю является таким, которое обеспечивает концентрацию аллицина от 1 до 2000 ч./млн, предпочтительно от 50 до 1000 ч./млн, более предпочтительно от 250 до 500 ч./млн.
13. Применение аллицина для получения лекарственного средства для преодоления множественной лекарственной резистентности у бактерий.
14. Применение по п.13, в котором бактерии представляют собой ΜΚ.8Α (метициллинрезистентные 81ар11у1ососси5 аигеиз); ΜΌΚ.ΤΒ (микобактерии туберкулеза с множественной лекарственной резистентностью); νΚ8Α (81ар11у1ососси5 аигеиз, резистентные к ванкомицину); ΜΚ.8Ε (метициллинрезистентные 81ар11у1ососси5 ер1бегт1б18); РК.8Р (81гер1ососси5 рпеитопеае, резистентные к пенициллину); ΥΒΕ (энтерококки, резистентные к ванкомицину) или νίδΑ (81ар11у1ососси5 аигеиз с промежуточной резистентностью к ванкомицину).
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB0122793.3A GB0122793D0 (en) | 2001-09-21 | 2001-09-21 | Allicin |
| PCT/GB2002/004309 WO2003024437A1 (en) | 2001-09-21 | 2002-09-23 | Allicin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200400451A1 EA200400451A1 (ru) | 2004-12-30 |
| EA009169B1 true EA009169B1 (ru) | 2007-10-26 |
Family
ID=9922476
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200700663A EA013519B1 (ru) | 2001-09-21 | 2002-09-23 | Противобактериальный или педикулоцидный препарат, содержащий аллицин |
| EA200400451A EA009169B1 (ru) | 2001-09-21 | 2002-09-23 | Препарат, содержащий аллицин, для преодоления множественной лекарственной резистентности у бактерий |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200700663A EA013519B1 (ru) | 2001-09-21 | 2002-09-23 | Противобактериальный или педикулоцидный препарат, содержащий аллицин |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1435928A1 (ru) |
| AU (1) | AU2002334074B2 (ru) |
| EA (2) | EA013519B1 (ru) |
| GB (1) | GB0122793D0 (ru) |
| WO (1) | WO2003024437A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA200403002B (ru) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2003226613A1 (en) * | 2002-04-25 | 2003-11-10 | Yeda Research And Development Co. Ltd | Use of allicin as insect repellent and insecticide in agricultural crops |
| EP1398034A1 (en) * | 2002-09-13 | 2004-03-17 | Vicente Teofilo Roldan | Topical application composition for preventing and treating pediculosis, method of elaboration and uses thereof |
| GB0307079D0 (en) * | 2003-03-27 | 2003-04-30 | Stone Island Holdings Ltd | Allicin |
| JP6088433B2 (ja) * | 2010-12-08 | 2017-03-01 | ダンマークス テクニスク ユニバーシテット | アホエン誘導体を製造するためのプロセス |
| US9145506B2 (en) * | 2013-07-01 | 2015-09-29 | Jr Co., Ltd. | Natural adhesive |
| FR3023716A1 (fr) * | 2014-07-18 | 2016-01-22 | Univ Aix Marseille | Compose et association de composes pour le traitement des poux |
| CN104434781A (zh) * | 2014-11-08 | 2015-03-25 | 新疆埃乐欣药业有限公司 | 大蒜辣素注射液作为制备治疗真菌/细菌引起感染性疾病药物的应用 |
| CN113209072A (zh) * | 2021-04-29 | 2021-08-06 | 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) | 二烯丙基三硫醚在制备抑制铜绿假单胞菌分泌系统制剂中的应用 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2061987A (en) * | 1978-12-12 | 1981-05-20 | Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet | Cyclodextrin complexes, their preparation, and pharmaceutical compositions containing them |
| JPS57149226A (en) * | 1981-03-10 | 1982-09-14 | Riken Kagaku Kogyo Kk | Prevention of leucocytozoonosis |
| EP0305968A2 (en) * | 1987-08-31 | 1989-03-08 | Yeda Research And Development Company Limited | Compositions against protozoal diseases |
| DE4012884A1 (de) * | 1990-04-23 | 1991-10-24 | Lichtwer Pharma Gmbh | Alliinhaltiger knoblauchtrockenextrakt und ein verfahren zu seiner herstellung |
| DE4024155A1 (de) * | 1990-07-30 | 1992-02-06 | Marcela Dipl Ing Holzhey | Erweiterung der verwendung eines - nur fuer den externen, antibakteriellen gebrauch bekannten - allicin-urotropin produktes fuer den bereich der inneren behandlung (oral, injektionen und dauertropfinfusionen) von menschen und tiere bei bakteriell-, viren-, pilz-- und krebserkrankungen |
| FR2706307A1 (fr) * | 1993-06-18 | 1994-12-23 | Pelletier Jacques | Formule pour traitement du sida. |
| DE19633444A1 (de) * | 1996-08-20 | 1997-05-22 | Holzhey Marcela Dipl Ing | Verwendung eines "Allicin-Urotropin" Produktes für den Bereich der inneren Behandlung (oral. Injektionen und Dauertropfinfusionen) von Menschen und Tieren bei Bakteriellerkrankungen |
| WO1997039115A1 (en) * | 1996-04-16 | 1997-10-23 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Immobilized alliinase and continuous production of allicin |
| US5705152A (en) * | 1990-10-26 | 1998-01-06 | Interprise Limited | Antimicrobial composition |
| WO1999066798A1 (en) * | 1998-06-25 | 1999-12-29 | John Stephen Middleton | Garlic pour-on cattle and sheep anthelmintic |
-
2001
- 2001-09-21 GB GBGB0122793.3A patent/GB0122793D0/en not_active Ceased
-
2002
- 2002-09-23 AU AU2002334074A patent/AU2002334074B2/en not_active Ceased
- 2002-09-23 EA EA200700663A patent/EA013519B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-09-23 EP EP02798782A patent/EP1435928A1/en not_active Ceased
- 2002-09-23 WO PCT/GB2002/004309 patent/WO2003024437A1/en active IP Right Grant
- 2002-09-23 EA EA200400451A patent/EA009169B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-04-20 ZA ZA2004/03002A patent/ZA200403002B/en unknown
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2061987A (en) * | 1978-12-12 | 1981-05-20 | Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet | Cyclodextrin complexes, their preparation, and pharmaceutical compositions containing them |
| JPS57149226A (en) * | 1981-03-10 | 1982-09-14 | Riken Kagaku Kogyo Kk | Prevention of leucocytozoonosis |
| EP0305968A2 (en) * | 1987-08-31 | 1989-03-08 | Yeda Research And Development Company Limited | Compositions against protozoal diseases |
| DE4012884A1 (de) * | 1990-04-23 | 1991-10-24 | Lichtwer Pharma Gmbh | Alliinhaltiger knoblauchtrockenextrakt und ein verfahren zu seiner herstellung |
| DE4024155A1 (de) * | 1990-07-30 | 1992-02-06 | Marcela Dipl Ing Holzhey | Erweiterung der verwendung eines - nur fuer den externen, antibakteriellen gebrauch bekannten - allicin-urotropin produktes fuer den bereich der inneren behandlung (oral, injektionen und dauertropfinfusionen) von menschen und tiere bei bakteriell-, viren-, pilz-- und krebserkrankungen |
| US5705152A (en) * | 1990-10-26 | 1998-01-06 | Interprise Limited | Antimicrobial composition |
| FR2706307A1 (fr) * | 1993-06-18 | 1994-12-23 | Pelletier Jacques | Formule pour traitement du sida. |
| WO1997039115A1 (en) * | 1996-04-16 | 1997-10-23 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Immobilized alliinase and continuous production of allicin |
| DE19633444A1 (de) * | 1996-08-20 | 1997-05-22 | Holzhey Marcela Dipl Ing | Verwendung eines "Allicin-Urotropin" Produktes für den Bereich der inneren Behandlung (oral. Injektionen und Dauertropfinfusionen) von Menschen und Tieren bei Bakteriellerkrankungen |
| WO1999066798A1 (en) * | 1998-06-25 | 1999-12-29 | John Stephen Middleton | Garlic pour-on cattle and sheep anthelmintic |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| DATABASE WPI, Section Ch, Week 198242, Derwent Publications Ltd., London, GB; Class B04, AN 1982-89553E, XP002223376 & JP 57 149226 A (RIKA KAGAKU KOGYO K), 14 September 1982 (1982-09-14), abstract * |
| FARBMAN K.S.: "ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF GARLIC AND ONIONS: A HISTORICAL PERSPECTIVE", PEDIATRIC INFECTIOUS DISEASE JOURNAL, WILLIAMS & WILKINS, BALTIMORE, MD, US, vol. 12, no. 7, 1 July 1993 (1993-07-01), pages 613-614, XP002051069, ISSN: 0891-3668, the whole document * |
| MIRON T. ET AL.: "The mode of action of allicin: its ready permeability through phospholipid membranes may contribute to its biological activity", BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA. BIOMEMBRANES, AMSTERDAM, NL, vol. 1463, no. 1, 15 January 2000 (2000-01-15), pages 20-30, XP004273122, ISSN: 0005-2736 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2003024437A1 (en) | 2003-03-27 |
| ZA200403002B (en) | 2005-06-29 |
| AU2002334074B2 (en) | 2006-11-09 |
| EP1435928A1 (en) | 2004-07-14 |
| EA200700663A1 (ru) | 2007-12-28 |
| EA200400451A1 (ru) | 2004-12-30 |
| GB0122793D0 (en) | 2001-11-14 |
| EA013519B1 (ru) | 2010-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11839208B2 (en) | Cannabidiol compositions and uses thereof | |
| US9370476B2 (en) | Compositions and methods for altering human cutaneous microbiome to increase growth of Staphylococcus epidermidis and reduce Staphylococcus aureus proliferation | |
| ES2907991T3 (es) | Composición de bacterias lácticas para el uso en el tratamiento de infecciones debidas a Propionibacterium acnes y en particular para el acné | |
| JP2008535814A (ja) | 抗微生物剤 | |
| US20220331386A1 (en) | Anti-microbial seaweed extracts, compositions and uses thereof | |
| EA009169B1 (ru) | Препарат, содержащий аллицин, для преодоления множественной лекарственной резистентности у бактерий | |
| RU2628312C2 (ru) | Композиция антибактериальная для профилактики или лечения госпитальных инфекций (варианты), штаммы бактериофагов, используемые для получения такой композиции | |
| KR101390084B1 (ko) | 슈퍼박테리아에 대한 항균 활성 및 항염증 활성을 나타내는 냉이 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물 | |
| KR101689033B1 (ko) | 여드름균을 사멸시키는 여드름균 특이적 박테리오파지 | |
| EA011631B1 (ru) | Аллицин | |
| JPH07108857B2 (ja) | 炎症過程及びアレルギー性疾患の予防及び治療のための細菌性製剤 | |
| KR101501346B1 (ko) | 왕머루포도나무 뿌리 추출물 및 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 반코마이신 내성 장구균 감염증 예방 또는 치료용 조성물 | |
| AU2002334074A1 (en) | Allicin | |
| CN112724198A (zh) | 一种抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抗菌肽及其制备方法和应用 | |
| EP4038084B1 (en) | Lipopeptides, pharmaceutical composition, cosmetic composition, and lipopeptides for use as a drug | |
| JP4542644B2 (ja) | 抗菌作用の増強方法 | |
| US11260091B2 (en) | Red seaweed extracts, formulations and anti-microbial uses thereof | |
| BR102021022320A2 (pt) | Fio de sutura cirúrgico com ação antimicrobiana por incorporação combinada de antibiótico ampicilina e óleo essencial de alecrim-pimenta | |
| WO2018220544A1 (en) | Xibornol for use in the treatment of acne vulgaris | |
| CN107987073A (zh) | 一种药物组合物及其制备方法和应用 | |
| CN107118129A (zh) | 一种抗菌药物组合物及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): KZ RU |