CN106399569A

CN106399569A - C21orf82在制备胰腺癌预后评估产品中的应用

Info

Publication number: CN106399569A
Application number: CN201611088263.8A
Authority: CN
Inventors: 刘昊
Original assignee: Beijing Zhicheng Biomedical Technology Co Ltd
Current assignee: Beijing Zhicheng Biomedical Technology Co Ltd
Priority date: 2016-12-01
Filing date: 2016-12-01
Publication date: 2017-02-15

Abstract

本发明公开了一种检测胰腺癌的分子标记物，所述标记物为C21orf82。本发明进一步公开了所述的分子标记物在制备胰腺癌预后评估产品中的应用。本发明还公开了一种胰腺癌预后评估的试剂盒，所述试剂盒包括特异性扩增C21orf82的引物序列。利用上述分子标记物可以进行胰腺癌的诊断、治疗、监控及预后，对胰腺癌的预后和治疗具有重要意义。

Description

C21orf82在制备胰腺癌预后评估产品中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及分子标记物在制备胰腺癌预后评估产品中的应用。

背景技术

胰腺癌是恶性程度最高的肿瘤之一，在西方国家恶性肿瘤死亡率第四位,全球每年约250万人死于胰腺癌。我国胰腺癌发病率逐年上升，近20年增长迅速。胰腺癌的治疗主要为手术、化疗和放疗相结合的综合治疗，其五年生存率小于5％。由于胰腺的解剖学位置较深，腹部疼痛、体重减轻、黄疸等临床特异性的症状不易被发现，多数患者确诊时已发生癌症转移。胰腺癌发生肝转移较早，早期诊断、根治性手术切除是胰腺癌患者获得长期存活的唯一希望，但80％以上的患者就诊时已经失去了根治性切除的机会。因此，提高胰腺癌的早期诊断率，抑制肿瘤的生长和转移，提高药物的治疗效果，成为改善胰腺癌患者预后的关键因素。

目前临床上常用的胰腺癌肿瘤学标志物是CA19-9。CA19-9单独作为诊断胰腺癌的指标尚不精确，敏感性较低，并且在其他消化道肿瘤及良性疾病中也有升高，因此对胰腺癌早期诊断的价值有限。另外，一些基因肿瘤标志物也用于临床胰腺癌的早期诊断，但始终未能达到诊断的目的。

因此，需要更迫切地寻找一些敏感性或特异性更好的标志物用于胰腺癌的早期诊断、疗效评估或转移复发的监控。

发明内容

为了实现胰腺癌的早期诊断，预后评估，复发监控，个体化治疗，本发明的目的之一在于提供一种检测胰腺癌的分子标记物。

本发明的目的之二是在于提供所述分子标记物在制备胰腺癌预后评估产品中的应用。

本发明的目的之三在于提供一种胰腺癌预后评估的试剂盒。

为实现上述目的，本发明首先提供一种检测胰腺癌的分子标记物，所述标记物为C21orf82，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

进一步地，本发明提供了所述的分子标记物在制备胰腺癌预后评估产品中的应用。

优选地，所述产品为芯片或试剂盒。

优选地，所述芯片为基因芯片。优选的，所述基因芯片包括固相载体以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于C21orf82核苷酸的部分或全部序列。

进一步地，本发明提供一种胰腺癌预后评估的试剂盒，所述试剂盒包括：

(1)组织或血液样品提取总RNA试剂；

(2)反转录试剂；

(3)定量PCR试剂。

优选地，组织或血液样品提取总RNA试剂包括TRizol、三氯甲烷、异丙醇、75％乙醇和无酶水；所述反转录试剂包括5xPrimerScript Buffer、PrimeScript RT Enzyme Mix I、OligodT Primer、Random 6mers和RNase Free dH₂O。

优选地，所述定量PCR试剂包括特异性扩增C21orf82的引物序列。优选地，所述引物序列包括SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3。

优选地，所述的引物序列适用于SYBR Green、TaqMan探针、双杂交探针、复合探针的检测。

优选地，所述定量PCR试剂还包括10×Buffer、dNTP、MgCl₂、Taq酶和SYBR Green荧光染料。

优选地，所述试剂盒含有阳性对照和阴性对照；所述阳性对照为人正常的胰腺组织或细胞的总RNA或DNA；所述阴性对照为蒸馏水。

进一步地，本发明提供了一种评估胰腺癌治疗效果的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)获取受试者的样品；

(2)检测受试者样品中C21orf82的表达水平；

(3)将测得的C21orf82的表达水平与受试者的患病与否关联起来判断治疗效果。

判断标准如下：治疗后C21orf82表达水平与治疗前相比，比值P≤1判断为治疗无效，1<P<1.5判断为病情改善，1.5＜P判断为治疗显著。

优选地，所述受试者样品包括胰腺癌组织样品和血液样品；所述受试者样品为治疗前的或治疗后的样品。优选地，所述治疗包括施用手术干涉，化疗，放疗，药物治疗或其组合。

本发明的有益效果如下：

本发明公开了一种与胰腺癌相关的lncRNA C21orf82，并且通过单因素Cox回归分析了C21orf82为胰腺癌保护性因素。利用C21orf82检测胰腺癌不仅能够快速有效的做到早期检测、预后评估，其精确度大大提高，而且为基因治疗、药物治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。

附图说明

图1 C21orf82表达水平对胰腺癌患者总生存期的影响。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用的试剂可以商业购买得到。

实施例中未注明具体条件的实验方法，通常为本领域常规方法，如按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆，实验手册(第三版)(科学出版社，2002)中的所述条件，或按照试剂制造厂家所建议的条件。

本发明基于TCGA数据库信息中160个胰腺癌患者的数据进行胰腺癌的生存分析筛选相关基因，筛选得到与生存时间相关C21orf82，通过单因素Cox回归分析发现C21orf82为保护性因素。

进一步通过定量PCR检测胰腺癌患者C21orf82表达量，并分析与总生存时间的关系。

本发明所述的基因是在本发明之前的已知基因，均来源于人类基因组。Genebank登录号：C21orf82：Gene ID:114036。

C21orf82又名LINC00310(long intergenic non-protein coding RNA 310，长链非编码蛋白质的RNA 310)，位于21号染色体上。

在本发明中，“预后”是指癌症患者在通过手术、化疗、药物治疗或其组合处理等抑制或缓解肿瘤生长后的过程或结果。预后可以是通过手术、化疗、药物治疗或其组合处理抑制或缓解胰腺癌生长后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20年或更久时的生机状态。预后可以通过检查标志物来评估，所述的标记物为一个或多个基因。预后评估可以这样进行：根据标志物的有或无，或者升高或降低，确定患者的预后是良好还是不良，或者确定良好预后或不良预后的概率。

本发明中，TNM分期是目前国际上最为通用的肿瘤分期系统。目前他已经成为临床医生和医学科学工作者对于恶性肿瘤进行分期的标准方法。国际TNM分期系统各不相同，因此TNM分期中字母和数字的含义在不同肿瘤所代表的意思不同。TNM分期中T，N，M确定后就可以得出相应的总的分期，即I期，II期，III期，IV期等。I期的肿瘤通常是相对早期的肿瘤有着相对较好的预后。分期越高意味着恶性肿瘤程度越高。本发明参考胰腺癌AJCC TNM分期。

如：胰腺癌AJCC2002年(第6版)TNM分期：

原发肿瘤(T)

T_X原发肿瘤不能确定；T0未见原发肿瘤；Tis原位癌；T1肿瘤限于胰腺内，最大径≤2cm；T2肿瘤限于胰腺内，最大径＞2cm；T3肿瘤侵犯至胰腺外，未累及腹腔干或肠系膜上动脉；T4肿瘤累及腹干轴或肠系膜上动脉。

区域淋巴结(N)

Nx区域淋巴结不能确定；N0无区域淋巴结转移；N1有区域淋巴结转移。

远处转移(M)

Mx远处转移不能确定；M0无远处转移；M1有远处转移。

临床分期：

0期Tis N0M0；IA期T1N0M0，IB期T2N0M0；IIA期T3N0M0，IIB期T1N1M0，T2N1M0，T3N1M0；Ⅲ期T4任何N M0；Ⅳ期任何T任何N M1。

实施例1基于TCGA数据库信息进行胰腺癌的生存分析筛选相关基因

1、临床信息筛选

检索TCGA数据库中的胰腺癌患者临床信息，截至2015年12月10日，TCGA数据库中总共记载了185例胰腺癌临床病例。对这些数据进行筛选，共有160例患者纳入研究。筛选时排除具有其他恶性肿瘤病史、曾接受过放疗或化疗的患者，同时纳入研究的患者需含临床信息和mRNA数据。

2、生存期研究样本统计

160例胰腺癌患者生存时间的统计结果如下表所示:

表1 160例胰腺癌患者生存时间统计

生存期时间t(年)	期初进入研究人数	期内死亡人数	期内失访人数
				t<1	160	27	74
1≤t<2	59	22	15
				2≤t<3	22	10	2
3≤t<4	10	2	2
				4≤t<5	6	0	1
5≤t	5	4	1

3、mRNA表达数据生存分析研究方案

(1)对胰腺癌高通量mRNA转录组数据检索、数据下载及样本挑选和归类。由下载的转录组数据通过生物信息学分析筛选得出与胰腺癌生存时间相关的mRNA。

(2)用Cytoscape软件构建由mRNAs组成的生物信息网络，通过DAVID对生物信息网络中与胰腺癌生存时间相关的mRNA进行GO分析和Pathway分析。

4、胰腺癌mRNA表达数据的生存分析结果

将胰腺癌组织的转录组数据下载后，去除read count＝0小于20％的mRNA后用做下一步分析，包括17100个mRNA。提取mRNA基因表达量和胰腺癌TCGA数据库生存时间数据，采用survival包的coxph函数完成，经单因素Cox回归分析，筛选得到单因素Cox回归中p值<0.05的mRNA有580个，包括328个风险性mRNA和252个保护性mRNA。Coef值是回归系数，HR＞1为风险性因素，HR＜1为保护性因素。

为了更好的研究与生存时间相关的mRNA的功能，我们通过GORILLA和GeneCodis软件对胰腺癌生存时间相关的mRNA进行GO功能富集和KEGG通路富集，筛选标准皆为FDR<0.05。其中C21orf82的p值为0.002901，HR<1为胰腺癌保护性lncRNA。

实施例2胰腺癌组织中C21orf82与胰腺癌临床病理特点及预后相关性

1、受试者

病理组织标本来自中国医学科学院北京协和医院。样本纳入和排除标准如下：

(1)入选标准：接受外科手术切除病例，术后病理诊断为胰腺癌；

(2)排除标准：病例资料不完整，无病理学以及随访资料；肿瘤未切除、或仅行肿瘤的穿刺活检术，未获得完整组织学标本。

本实施例纳入55例胰腺癌患者，其中男性患者34例，女性患者21例，年龄<65岁35人，年龄>65岁20人；低、中分化32例，高分化23例；肿瘤TNM分期1～2期为41例，3～4期为14例。参与本研究的患者手术前均未接受化、放疗以及免疫治疗。本研究通过北京协和医院理论委员会审核。

2、方法

2.1对组织样本进行总RNA提取

依据编号分别对55例胰腺癌组织及18例癌旁组织进行总RNA提取，采用Reagent(invitrogen，货号15596-018)进行样本RNA提取，实验操作按产品说明书进行，具体操作如下：

收集样本后冻存于液氮，取出后把组织放入已预冷的研钵中进行研磨，待组织样本成粉末状后：

①加入Trizol，室温保存5分钟；

②加氯仿0.2mL，用力振荡离心管，充分混匀，室温下放置5分钟-10分钟；

③12000rpm高速离心15分钟后吸取上层水相(吸70％)到另一新离心管管中，注意不要吸到两层水相之间的蛋白物质。移入新管，加入等体积的-20℃预冷异丙醇，充分颠倒混匀，置于冰上10分钟；

④12000rpm高速离15分钟后小心弃掉上清液，按1mL/mL Trizol的比例加入75％DEPC乙醇洗漆沉淀(4℃保存)，洗漆沉淀物，振荡混合，4℃下12000rpm高速离心5分钟；

⑤弃去乙醇液体，室温下放置5分钟以充分晾干沉淀，加入DEPC处理过的水溶解沉淀；

⑥用Nanodrop2000紫外分光光度计测量RNA纯度及浓度，冻存于-80℃。RNA质量判定标准：RNA样本的OD260/OD280值为1.7-2.2之间；总RNA电泳图谱有清晰的28S、18S条带；70℃水浴保温1小时后的电泳图谱与水浴保温前的图谱无明显差异。

2.2 RNA样品的质量分析

RNA提取后琼脂糖凝胶电泳，从电泳结果可以初步判定提取的RNA样品质量合格与否。进而通过NanoDrop1000分光光度计检测RNA样品要求：OD260/OD280为1.8-2.2。

2.3逆转录合成cDNA

采用 III Reverse Transcriptase(invitrogen，货号18080-044)进行cDNA反转录，实验操作按产品说明书进行，具体操作如下：

使用逆转录试剂盒，用逆转录缓冲液对lμg总RNA进行逆反录合成cDNA。采用25μL反应体系，每个样品取1μg总RNA作为模板RNA。获得的cDNA保存放-20℃冰箱备用。

2.4 Real-Time PCR

2.4.1仪器及分析方法

用ABI 7500型荧光定量PCR仪，采用2^-ΔΔCt法进行数据相对定量分析。

采用在线软件设计引物，基因序列参照NCBI：NR_027266.1(C21orf82)，内参选GAPDH，引物设计后由invitrogen公司合成。具体引物序列如表2所示：

表2引物序列

操作过程如下：

表3 Real Time反应体系

组分	加入量
		2×mix	10μL
上游引物(10uM)	0.5μL
		下游引物(10uM)	0.5μL
模板	2μL
		加入灭菌蒸馏水	至25μL

(一)反应体系：用Power Green PCR Master Mix(invitrogen，货号4367659)进行扩增，实验操作按产品说明书进行。

扩增程序为：95℃5min，(95℃15sec，60℃45sec，72℃35sec)×40个循环。

(二)引物筛选

将各样本cDNA混合后，以此为模板进行5倍梯度稀释，稀释后样品各取2μL作模板，分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增，同时在60-95℃进行融解曲线分析，根据扩增效率高和溶解曲线单峰原则进行引物筛选。

(三)样品Real Time-PCR检测

将各样品cDNA 10倍稀释后取2μL作模板，分别用目的基因引物和内参基因引物进行扩增。同时在60-95℃进行溶解曲线分析。

2.4.2数据统计分析

收集临床病理资料和表达结果，进行统计分析。采用统计学软件SPSS19.0，统计学显著差异定义为<0.05。胰腺癌组织中C21orf82表达水平与临床病理参数的相关性采用卡方或者Fisher’s精确检验法。用Kaplan-meier方法进行生存时间分析，拟合总生存时间曲线，应用Long-rank检验比较不同组间的生存曲线差异；应用Cox比例风险回归模型分析预后因素。以p<0.05为有统计学意义。

3、实验结果

(1)C21orf82在胰腺癌组织表达情况

实时定量PCR扩增曲线拐点清楚，扩增曲线整体平行性好，表明各反应管的扩增效率相近，极限平而无上扬现在，曲线指数期斜率较大，说明扩增效率较高；样本扩增产物溶解曲线都是单峰，说明扩增产物只有一条，为特异性扩增；根据qRT-PCR的相对定量公式：2^-ΔΔCt×100％，比较C21orf82在胰腺癌组织和癌旁组织中的表达水平。结果显示：qRT-PCR扩增结果稳定，其中C21orf82在胰腺癌患组织中的表达水平低于癌旁组织，差异具有统计学意义(p<0.01)。

(2)人胰腺癌组织中C21orf82表达水平与临床特征的关系

根据上述标准划分胰腺癌组织中C21orf82表达水平的高低，采用统计学软件SPSS19.0，统计学显著性差异定义为P<0.05。对胰腺癌组织中C21orf82的表达水平与胰腺癌病例的临床病理参数进行分析，详情见表4。结果发现胰腺癌组织C21orf82的表达与淋巴结转移相关(p<0.05)。

表4胰腺癌组织C21orf82表达水平与临床指标的相关性

¹依据WHO分级；²依据TNM分期；*p<0.05。

(3)C21orf82表达水平与胰腺癌患者的总体生存预后关系

应用Kaplan-Meier方法进行生存检测胰腺癌组织中C21orf82表达水平高低对患者总生存时间的影响。根据C21orf82表达量将患者分成两组，C21orf82高表达组定义为高表达C21orf82的前40％的患者(22例)，剩余60％患者定义为C21orf82的低表达组(33例)。结果如图1所示，C21orf82低表达患者的总生存期(中位生存时间27个月)短于C21orf82高表达的患者(中位生存时间45个月)，C21orf82高表达患者具有更久的生存期，p<0.01，差异具有统计学意义。提示胰腺癌组织中C21orf82异常表达与患者的预后有关。

对C21orf82表达水平和临床病理特征对患者总体生存期的影响进行单因素和多因素分析(Cox回归模型)，结果表明C21orf82表达水平是影响胰腺癌患者预后的独立保护因素(p<0.01)。

实施例3试剂盒制备

本实施例提供了用于胰腺癌疗效评估的试剂盒，该试剂盒包括

(1)RNA提取试剂包括TRizol、三氯甲烷、异丙醇、75％乙醇和无酶水；

(2)反转录试剂包括5xPrimerScript Buffer、PrimeScript RT Enzyme Mix I、OligodT Primer、Random 6mers和RNase Free dH₂O；

(3)定量PCR试剂包括特异扩增C21orf82的引物序列如表2所示。

和特异扩增管家基因(GAPDH)的引物对如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示；还包括SYBR Green聚合酶链式反应体系，如PCR缓冲液、SYBR Green荧光染料、dNTPs。所述PCR缓冲液的成分为25mM KCl，2.5mM MgCl₂，200mM(NH₄)₂SO₄；还包括胰腺正常组织cDNA：作为阴性对照与检测样本cDNA共同定量PCR检测，每个反应体系使用与检测样本cDNA相同量。

反转录体系如表5所示。

反应程序为：37℃孵育15min，85℃灭活5s。

表5反转录体系

组分	加入量
		5xPrimerScript Buffer	2μL
PrimeScript RT Enzyme Mix I	0.5μL
		OligodT Primer(50μM)	0.5μL
Random6mers(100μM)	0.5μL
		Total RNA	1ul
RNase Free dH₂O	至10μL

定量PCR反应体系如表6所示。

反应程序为：95℃预变性5min，(95℃变性15sec，60℃退火45sec，72℃延伸35sec)×40个循环，72℃延伸15min。

表6定量PCR反应体系

实施例4 C21orf82检测用于胰腺癌疗效评估

2010年10月至2015年12月从北京协和医院收集10例胰腺癌患者治疗前和治疗后的血液样品，利用实施例3所述的试剂盒分检测C21orf82表达含量，根据以下公式计算P值：P＝治疗后/治疗前，P≤1判断为治疗无效，1<P≤1.5判断为病情改善，1.5＜P判断为治疗显著，将P值判断结果与这10名患者的临床评价结果进行比较，考察C21orf82检测用于胰腺癌疗效评估的效果。结果如下：

由表7可知，试剂盒用于胰腺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达100％。

表7 C21orf82检测用于胰腺癌疗效评估

患者编号	P值	P值判断结果	临床评价结果
				1	1.45	病情改善	病情改善
2	0.49	治疗无效果	治疗无效果
				3	1.21	病情改善	病情改善
4	0.45	治疗无效果	治疗无效果
				5	1.69	疗效显著	疗效显著
6	0.54	治疗无效果	治疗无效果
				7	1.36	病情改善	病情改善
8	0.98	治疗无效果	治疗无效果
				9	1.15	病情改善	病情改善
10	0.78	治疗无效果	治疗无效果

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 北京致成生物医学科技有限公司

<120> C21orf82在制备胰腺癌预后评估产品中的应用

<130> p16yxa74

<160> 5

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1269

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

gcagattctt ggcagacctc tgttgttttt ctagagttgt aggcaagtag ttggacaaaa 60

agcaagaagc tgatcgatgt tgctggcttt ggattctttg tgaacaaatg agacaagccc 120

cttttgtcta aaatagtgat gtacattaaa tgcaaagggc aaatggaacc attgaaaagt 180

actttttgca tccaaaacag ccaacgcttt ggtgcctgct atgtgtcaga cactgattct 240

tctgtcatcc ttattctact gatgaggcaa ctgaggcagc ttcagagagt tcgagtaacc 300

tgcggatcac acaactagga agtaagagag ctggaacttg acgttgggct gttgacctcc 360

agaaatggtg ttttttccag tactcagtgc tgcctctgac tccattgtga tggttgattt 420

tatgtgtcaa cttgactggg cccaggggta cccagatatt tggtcaaaca ttattctggg 480

tgtttctgtg agggcgtttt gggtgagatt aacatttaaa ttggtagact gagtaaagca 540

gatggccctc tatgatatgg ccaggcctca tccaatccat tgaaagcctg aatggaacaa 600

aaaggccaac cctccctcag taggaggaaa tttcgtctgc ttgactgcat tcaaactagg 660

acgtcaactt tttcctgcct ttggacttga atagaaacat cagctcttcc tagatcttca 720

acctgccagg cttcagattg aagtttatac catcagctct cttggttctt gggcctttgg 780

acccagactg taagtgcacc atccgttctc ttgggtcttg cttgctgact caccctgcag 840

atttggggac ttatcagcct ctaattctgt gagccaattc cttctaatat atctctctat 900

acgcatcctg tctcactgga agaaccctga tacggttagg ctttgtgtcc tcattcaaat 960

ctcatcttga attgtaaatc ccataatccc cataatcccc atgtgtcagg ggagggatca 1020

ggtggaggta attgcatcat gggagcagtt tcccctgtgc tcttctcacg atagtgaaag 1080

agttctcaca agatctgatg gttttataag gggctcttcc ccctttgctc tgcacttccc 1140

cttcctgctg ccttgtggcc ttgtgaagaa ggtgtcttgc ttcccctttg ccctcctcca 1200

tgattgtaag tttcctgagg cctccccagt catgcagaac tgtgagtcaa ttaaacctct 1260

gtcctttat 1269

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gatcgatgtt gctggctttg g 21

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

acagcccaac gtcaagttcc 20

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

ggagcgagat ccctccaaaa t 21

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ggctgttgtc atacttctca tgg 23

Claims

1.一种检测胰腺癌的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物为C21orf82。

2.如权利要求1所述的分子标记物，其特征在于，所述的C21orf82在胰腺癌组织中表达下调。

3.如权利要求1或2所述的分子标记物在制备胰腺癌预后评估产品中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂盒或芯片。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述芯片为基因芯片；所述基因芯片包括寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于C21orf82核苷酸的部分或全部序列。

6.一种胰腺癌预后评估的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

(1)组织或血液样品提取总RNA试剂；

(2)反转录试剂；

(3)定量PCR试剂。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述定量PCR试剂包括特异性扩增C21orf82的引物序列。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述C21orf82的引物序列包括SEQ IDNO.2和SEQ ID NO.3。

9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述的引物序列适用于SYBR Green、TaqMan探针、双杂交探针、复合探针的检测。