CN106381342A - 用于胰腺癌诊断或预后的生物标记 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了用于胰腺癌预后诊断的分子标记物，所述分子标记物为CHKB‑CPT1B和/或DDX11L2。本发明进一步公开了所述的分子标记物在制备胰腺癌预后诊断试剂或试剂盒中的应用，所述试剂盒包括特异性扩增CHKB‑CPT1B和/或DDX11L2的引物序列。利用本发明的分子标记物监测胰腺癌预后，不仅精确度大大提高，同时对后续临床研究的开展具有指导意义。

Description

用于胰腺癌诊断或预后的生物标记
技术领域
本发明涉及生物检测领域，具体涉及与胰腺癌诊断或预后相关的分子标记物及其应用。
背景技术
胰腺癌是一种消化道常见肿瘤，是预后最差的恶性肿瘤之一。根据最新流行病学调查，胰腺癌位居欧美等发达国家恶性肿瘤死亡率第四位，全球每年约250万人死于胰腺癌。近20年来我国胰腺癌的发病率持续增高，目前胰腺癌位居恶性肿瘤死亡率第五位。在胰腺癌的治疗中，早期诊断困难，其起病隐匿，缺乏典型临床症状，且预后极差，其术后1年生存率不到20％，5年生存率仅为4％，早期确诊率低和术后转移是胰腺癌死亡率高的主要原因。因此，胰腺癌的早期诊断和早期治疗是提高和改善胰腺癌预后的关键，尤其是发现一种特有的、可用于早期诊断和预后的标记物和靶向分子，对于战胜胰腺癌具有重要意义，成为目前国内外肿瘤专家的研究热点。
近年来，随着分子生物学技术的发展，在癌症疾病的相关研究中，越来越多的非编码基因或非编码RNA被报道，如lncRNA、micRNA、假基因等。
非编码RNA(ncRNAs)是一类具有重要生物学功能的RNA，参与基因组印记、染色体沉默、染色质修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等多种重要的调控过程，在细胞分化和发育、基因转录和翻译、遗传和表观遗传等生命活动中均发挥重要的调控作用。越来越多的权威研究表明lncRNA在肿瘤的发生发展中起着抑制或促进肿瘤的作用。目前己有较多lncRNAs被证实在包括乳腺癌、前列腺、黑色素瘤、肝癌、结肠癌、膀胱癌等在内的人类多种肿瘤中存在差异表达并执行重要的调控功能。
假基因则是一段具有与正常功能基因相似的序列，但是与正常的基因存在结构上的差异。这些差异包括在不同部位上程度不等的核苷酸缺失或插入，在基因内含子和外显子连接区发生序列变化，在编码序列当中含有终止密码子，或在转录启动区出现缺陷等。这些变化使此类基因不能转录翻译，或者产生有缺陷的蛋白质从而失去原有的生物学功能。长期以来，人们认为假基因是貌似正常、却没有功能的“死亡基因”，近来关于假基因的讨论日益增多，越来越多的试验证实假基因能够转录并且表达。假基因在基因表达调控、基因组进化等方面发挥着重要作用。
对于胰腺癌这类发病隐匿、进展快且预后极差的疾病，更需要使用准确、灵敏、特异性强的标记物来辅助胰腺癌的诊断或预后，lncRNAs或者假基因表达分析研究或许可以帮助我们发现一些新的生物标记物。
发明内容
为了实现胰腺癌的早期发现，早期干预，本发明的目的在于提供用于胰腺癌诊断或预后的分子标记物。
本发明的还一目的是提供所述分子标记物在胰腺癌诊断或预后产品中的应用。
为实现上述目的，本发明首先提供用于胰腺癌诊断或预后的分子标记物，所述分子标记物为CHKB-CPT1B(NR_027928.2,lncRNA)和/或DDX11L2(NR_024004.1,pseudogene)。
本发明经进一步验证发现CHKB-CPT1B(NR_027928.2,lncRNA)和/或DDX11L2(NR_024004.1,pseudogene)在胰腺癌患者生物学样品中表达下调。
优选的，所述生物学样本选自组织、血液、血浆、血清、胰腺分泌物和胰腺细胞。
进一步地，本发明提供了所述分子标记物在胰腺癌诊断或预后产品中的应用。
优选的，所述诊断或预后为诊断、疗效评估或转移复发监控。
优选的，所述产品包括:通过real-time PCR、Northern blot、Southern blot、基因芯片、原位杂交或RNA酶保护实验方法检测CHKB-CPT1B和/或DDX11L2的表达来进行胰腺癌的诊断或预后的产品。
进一步地，本发明提供了一种用于胰腺癌诊断或预后的试剂盒，所述试剂盒包括检测CHKB-CPT1B和/或DDX11L2的表达水平的试剂。
优选的，所述试剂包括检测CHKB-CPT1B和/或DDX11L2的引物或探针。
优选的，所述引物包括：
CHKB-CPT1B的引物对：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；
和/或DDX11L2的引物对：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。
优选的，所述试剂盒的组分包括：
(1)组织样本或血液中总RNA提取试剂：Trizol、氯仿、异丙醇和75％乙醇等。
(2)反转录试剂：逆转录缓冲液、M-MLV逆转录酶、热稳定DNA聚合酶活性的酶、RNA酶抑制剂和T重复寡核苷酸OligodT。
(3)定量PCR试剂：PCR缓冲液、SYBR Green荧光染料、d NTPs组成的SYBR Green聚合酶链式反应体系，引物和R Nase Free H2O。
进一步地，本发明提供了所述的试剂盒在胰腺癌患者预后中的应用。
本发明的有益效果如下：
本发明公开了与胰腺癌相关的基因CHKB-CPT1B和DDX11L2，并进一步证实所述基因可以作为胰腺癌预后诊断的分子标记物。利用本发明的分子标记物诊断胰腺癌或监测胰腺癌预后，不仅精确度大大提高，同时对后续临床研究的开展具有指导意义。
附图说明
图1 CHKB-CPT1B、DDX11L2在胰腺癌组织和癌旁组织中的表达水平。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用的试剂可以商业购买得到。
实施例中未注明具体条件的实验方法，通常为本领域常规方法，如按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆，实验手册(第三版)(科学出版社，2002)中的所述条件，或按照试剂制造厂家所建议的条件。
本发明的发明人基于TCGA数据库信息进行胰腺癌的生存分析，筛选2个候选基因：CHKB-CPT1B和DDX11L2，现有研究中并没有关于上述基因和胰腺癌相关的报道。进一步，发明人对于从确诊的胰腺癌患者采集的血液样本作为待测样品进行研究，通过使用RNA提取和定量PCR对胰腺癌患者血液中上述基因的表达水平进行检测，结合胰腺癌患者的跟踪随访资料，采用统计学分析，显示上述基因与胰腺癌患者预后有密切的关系。上述基因的表达与胰腺癌患者的生存状况有一定的相关性。提示上述基因可能具有很好的辅助诊断价值，可成为胰腺癌标志物。
CHKB-CPT1B(CHKB-CPT1B readthrough(NMD candidate)，基因CHKB和基因CPT1B的通读基因，lncRNA,又名LINC00899)，位于第22号染色体上。基因CHKB和基因CPT1B位于第22号染色体上的相邻位置，通读片段包含两个基因位点的外显子。该通读片段最后参与无意义密码子介导的mRNA降解NMD(nonsense-mediated mRNA decay)，该NMD产物不编码蛋白。NMD是细胞内一种重要的mRNA转录后调节机制。不仅能够发现和摧毁异常的mRNA，而且在调节mRNA寿命和控制基因活性的过程中起到十分重要的作用。
DDX11L2(DEAD/H-box helicase 11 like 2，DExD/H-box RNA解旋酶11类2，假基因)，位于第2号染色体上。DExD/H-box蛋白是一类重要的RNA解旋酶家族，在涉及RNA的各种细胞进程中发挥作用，与癌症的致病过程相关。部分DExD/H-box蛋白在NMD过程中也发挥作用。
本发明所述的基因是在本发明之前的已知基因，其基本信息可以在Genbank中查到，来源于人类基因组。
本发明采用RT-PCR方法检测上述基因在胰腺癌患者生物学样品中的表达情况。
本发明的基因核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据已公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA作为模板，扩增而得到有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次扩增，然后再将多次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
在本发明中，“预后”是指癌症患者在通过手术、化疗、药物治疗或其组合处理等抑制或缓解肿瘤生长后的过程或结果。预后可以是通过手术、化疗、药物治疗或其组合处理抑制或缓解肿瘤生长后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20年或更久时的生机状态。预后可以通过检查标志物来评估，所述的标记物选自CHKB-CPT1B和/或DDX11L2。预后评估可以这样进行：根据标志物的有或无，或者升高或降低，确定患者的预后是良好还是不良，或者确定良好预后或不良预后的概率。
在根据本发明方法使用前，任选地(但优选)将收集的生物学样品保存在低温如4℃下。在一些实施方案中，在第一时间根据本发明方法使用样品的一部分，而将一个或多个剩余的样品部分保存一段时间以备后用。该段时间可以是1小时或更长、1天或更长、1周或更长、1月或更长、1年或更长或不确定。就长期保存而言，可以使用本领域熟知的保存方法，例如在冷冻温度(如低于-80℃)保存。
实施例1基于TCGA数据库信息进行胰腺癌的生存分析筛选相关基因
1、临床信息筛选
检索TCGA数据库中的胰腺癌患者临床信息，截至2015年12月10日，TCGA数据库中总共记载了185例胰腺癌临床病例。对这些数据进行筛选，共有160例患者纳入研究。筛选时排除具有其他恶性肿瘤病史、曾接受过放疗或化疗的患者，同时纳入研究的患者需含临床信息和mRNA数据。
2、生存期研究样本统计
160例胰腺癌患者生存时间的统计结果如下表所示:
表1 160例胰腺癌患者生存时间统计
生存期时间t(年) 期初进入研究人数 期内死亡人数 期内失访人数
t<1 160 27 74
1≤t<2 59 22 15
2≤t<3 22 10 2
3≤t<4 10 2 2
4≤t<5 6 0. 1
5≤t 5 4 1
3、mRNA表达数据生存分析研究方案
(1)对胰腺癌高通量mRNA转录组数据检索、数据下载及样本挑选和归类。由下载的转录组数据通过生物信息学分析筛选得出与胰腺癌生存时间相关的mRNA。
(2)用Cytoscape软件构建由mRNAs组成的生物信息网络，通过DAVID对生物信息网络中与胰腺癌生存时间相关的mRNA进行GO分析和Pathway分析。
4、胰腺癌mRNA表达数据的生存分析结果
将胰腺癌组织的转录组数据下载后，去除read count＝0小于20％的mRNA后用做下一步分析，包括17100个mRNA。提取mRNA基因表达量和胰腺癌TCGA数据库生存时间数据，采用survival包的coxph函数完成，经单因素Cox回归分析，筛选得到单因素Cox回归中p值<0.05的mRNA有580个，包括328个风险性mRNA和252个保护性mRNA。
为了更好的研究与生存时间相关的mRNA的功能，我们通过GORILLA和GeneCodis软件对胰腺癌生存时间相关的mRNA进行GO功能富集合KEGG通路富集，筛选标准皆为FDR<0.05。筛选出2个基因CHKB-CPT1B(P＝0.045，HR＝0.80，95％CI＝0.65-0.99)和DDX11L2(P＝0.016，HR＝0.80，95％CI＝0.67-0.96)，均为保护性mRNA(HR<1)。
实施例2胰腺癌临床预后诊断分子标记物的鉴定
1、材料
1.1组织样本
收集经外科手术切除、并经病理学检查确诊的50例胰腺癌患者胰腺癌组织及对应癌旁组织标本。取样来源于北京协和医院2012年10月到2015年12月期间确诊为胰腺癌并接受外科术切除的病人。手术切除组织后在病理科医生的指导下立即取胰腺癌组织及癌旁组织放入液氮，编号后置-80℃低温冰箱保存。
1.2纳入标准如下：
(1)患者均未接受过术前新辅助治疗。
(2)患者切除手术后均未进行任何辅助治疗。
(3)癌旁组织定义为距肿瘤边缘3cm以外的胰腺组织。
1.3收集纳入病例的临床病理资料，具体内容如下：
(1)病例的基本信息：病人姓名、病案编号、病人年龄、病人性别、联系方式；
(2)病理学信息：肿瘤位置、病理分级、肿瘤增殖活性、肿瘤分期、淋巴结转移情况。
(3)分期标准：纳入病例的胰腺癌病理分级依据1987年国际抗癌联盟(UICC)制定的胰腺癌病理分级标准；TNM分期依据美国肿瘤联合委员会2009年公布的TNM分期系统(第7版)。
(4)结局：患者的年龄34-80岁，平均年龄60.3±10.22，中位年龄61岁，临床病理资料及随访资料完整。其中男28例，女22例；年龄<50岁7例，≥50岁43例。参照国际抗癌联盟(UICC)制定的胰腺癌病理分级标准，Ⅰ级13例，Ⅱ级18例，Ⅲ级19例；50例中低增殖活性12例，高增殖活性38例；TNM分期Ⅰ-Ⅱ期20例、Ⅲ-Ⅳ期30例；有局部淋巴结及远处转移者32例，无转移者18例；生存期>1年者15例，<1年者35例。
2、CHKB-CPT1B、DDX11L2在胰腺癌及癌旁组织中的表达检测
2.1对组织样本进行RNA提取
依据编号分别对胰腺癌组织及对应的癌旁组织进行RNA提取，每例病人的胰腺癌组织和对应癌旁组织编为一组，胰腺癌组织作为实验样本，对应的癌旁组织作为对照样本，50例病人编为50组。采用Reagent(invitrogen，货号15596-018)对50组样本进行RNA提取，实验操作按产品说明书进行，每组实验的具体操作如下：
收集样本后冻存于液氮，取出后把组织样本放入已预冷的研钵中进行研磨，待组织样本成粉末状后：
(1)加入1mLTrizol，室温保存5分钟；
(2)加氯仿0.2mL，用力振荡离心管，充分混匀，室温放置5-10分钟；
(3)12000rpm高速离心15分钟后吸取上层水相(吸70％)到另一新离心管管中，注意不要吸到两层水相之间的蛋白物质。移入新管，加入等体积的-20℃预冷异丙醇，充分颠倒混匀，置于冰上10分钟；
(4)12000rpm高速离15分钟后小心弃掉上清液，按1mL/mL Trizol的比例加入75％DEPC乙醇洗漆沉淀(4℃保存)，洗漆沉淀物，振荡混合，4℃下12000rpm高速离心5分钟；
(5)弃去乙醇液体，室温下放置5分钟以充分晾干沉淀，加入DEPC处理过的水溶解沉淀；
(6)用Nanodrop2000紫外分光光度计测量RNA纯度及浓度，冻存于-80℃。RNA质量判定标准：RNA样本的OD260/OD280值为1.7-2.2之间；总RNA电泳图谱有清晰的28S、18S条带；70℃水浴保温1小时后的电泳图谱与水浴保温前的图谱无明显差异。
2.2RNA样品的质量分析
RNA提取后琼脂糖凝胶电泳，从电泳结果可以初步判定提取的RNA样品质量合格与否，是否可以用于进一步的转录组分析。进而通过NanoDrop1000分光光度计检测RNA样品的提取情况，RNA-seq测序的样品要求：OD260/OD280为1.8-2.2。
2.3逆转录合成cDNA
采用III Reverse Transcriptase(invitrogen，货号18080-044)进行cDNA反转录，具体操作为：使用逆转录试剂盒，用逆转录缓冲液对lμg总RNA进行逆反录合成cDNA。采用25μL反应体系，每个样品取1μg总RNA作为模板RNA。获得的cDNA保存放-20℃冰箱备用。
2.4Real-Time PCR
采用在线引物设计软件，基因序列参照CHKB-CPT1B(NR_027928.2,lncRNA)、DDX11L2(NR_024004.1,pseudogene)，内参选GAPDH，引物设计后由invitrogen公司合成。具体引物序列如表2所示：
表2 引物序列
反应体系：用PowerGreen PCR Master Mix(invitrogen，货号4367659)进行扩增，实验操作按产品说明书进行。扩增程序为：95℃预变性5min，(95℃变性15sec，Tm退火45sec，72℃延伸35sec)×40个循环，具体Tm参照表2。
表3 RealTime反应体系
组分 加入量
2×mix 10μL
上游引物(10μM) 0.5μL
下游引物(10μM) 0.5μL
模板 2μL
加入灭菌蒸馏水 至25μL
3、数据处理
ABI 7500型荧光定量PCR仪，采用2-△△Ct法进行数据的相对定量分析。实时定量PCR扩增曲线拐点清楚，扩增曲线整体平行性好，表明各反应管的扩增效率相近，极限平而无上扬现在，曲线指数期斜率较大，说明扩增效率较高；样本扩增产物溶解曲线都是单峰，说明扩增产物只有一条，为特异性扩增；根据qRT-PCR的相对定量公式：2-ΔΔCt×100％，计算基因在胰腺癌患者组织样本中的相对表达量。数据应用统计学软件SPSS 17.0，计量资料以X±S表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
4、结果分析
4.1CHKB-CPT1B、DDX11L2在胰腺癌及癌旁组织中的表达
RT-QPCR结果显示，CHKB-CPT1B在胰腺癌和癌旁组织中的平均表达水平分别为8.75±0.78、18.09±0.64，DDX11L2在胰腺癌胰腺癌和癌旁组织中的平均表达水平分别为3.41±1.06、10.06±0.58，差异均有统计学意义，说明CHKB-CPT1B、DDX11L2在胰腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织，表达下调，见图1。
4.2CHKB-CPT1B、DDX11L2在胰腺癌组织和癌旁组织中的表达与胰腺癌临床病理特征的关系
RT-QPCR结果显示，CHKB-CPT1B在低增殖活性组和高增殖活性组中表达下调的比例分别为33.33％、84.21％，差异有统计学意义(P<0.05)；CHKB-CPT1B在TNM分期Ⅰ-Ⅱ期组和Ⅲ-Ⅵ期组中表达下调的比例分别为40.00％、90.00％，差异有统计学意义(P<0.05)；CHKB-CPT1B在无远处转移组和有远处转移组中表达下调的比例分别为38.89％、90.62％，差异有统计学意义(P<0.05)。DDX11L2在病理分级Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级中表达下调的比例分别为21.43％、38.89％、70.00％，差异有统计学意义(P<0.05)；DDX11L2在无远处转移组和有远处转移组中表达下调的比例分别为27.78％、62.50％，差异有统计学意义(P<0.05)。CHKB-CPT1B、DDX11L2在胰腺癌组织和癌旁组织中的表达均与胰腺癌患者的年龄、性别、肿瘤位置无关(P>0.05)。见表4。
表4 胰腺癌组织中CHKB-CPT1B和DDX11L2表达及临床和生物学参数
4.3胰腺癌组织CHKB-CPT1B与DDX11L2表达的相关性
50例胰腺癌组织中，CHKB-CPT1B表达下调的有35例，DDX11L2表达下调的有23例，CHKB-CPT1B与DDX11L2均表达下调的有21例。Speaman相关分析显示，CHKB-CPT1B与DDX11L2表达具有正相关性(r＝0.326，P<0.05)。
4.4CHKB-CPT1B、DDX11L2表达与胰腺癌患者预后的关系
通过对50例胰腺癌患者的跟踪随访发现，预后>1年和预后≤1年的患者CHKB-CPT1B平均表达水平分别为(6.78±0.76)和(9.65±0.61)，平均生存时间分别为(23.12±2.13)个月、(10.23±1.32)个月，差异有统计学意义(P<0.05)。预后>1年和预后≤1年的患者DDX11L2平均表达水平分别为(3.77±0.54)和(2.53±0.93)，平均生存时间分别为(21.12±2.43)个月、(9.78±1.53)个月，差异有统计学意义(P<0.05)。说明LOC100271722、PI4KAP1表达水平高的患者平均生存时间明显高于LOC100271722、PI4KAP1表达水平低的患者。提示CHKB-CPT1B、DDX11L2可以作为判断胰腺癌预后的重要参考指标。
实施例3试剂盒的制备
基于实施例2得到的引物组，组装本发明所述用于胰腺癌预后诊断的试剂盒，所述试剂盒包括特异扩增CHKB-CPT1B和/或DDX11L2的引物对如表2所示，具体为：
1、试剂盒1包括特异性扩增CHKB-CPT1B的引物对；
2、试剂盒2包括特异性扩增CHKB-CPT1B和DDX11L2的引物对。
和特异扩增管家基因(GAPDH)的引物对如SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6所示；还包括SYBR Green聚合酶链式反应体系，如PCR缓冲液、SYBRGreen荧光染料、dNTPs。所述PCR缓冲液的成分为25mM KCl，2.5mMMgCl2，200mM(NH4)2SO4。通过对引物浓度和退火温度的优化，最终确定反应体系如表5所示：
表5 PCR反应体系
组分 加入量
SYBR Green聚合酶链式反应体系 12.5μL
上游引物(10μM) 0.5μL
下游引物(10μM) 0.5μL
模板cDNA 2.0μL
加入灭菌蒸馏水 至25μL
最佳反应条件为：95℃预变性5min，(95℃变性15sec，53℃退火45sec，72℃延伸35sec)×40个循环，72℃延伸15min。
实施例4试剂盒监控胰腺癌转移复发
选取10例经病理学检查确诊为胰腺癌的患者，对其进行跟踪随访。患者样本来源于北京协和医院就诊的胰腺癌患者，所有收集的患者均经过有效治疗，临床资料及随访资料完整。首先采集10例胰腺癌患者治疗后六周首次采集患者血液，检测血液中相应基因的表达量，以后每三个月检测一次，跟踪九个月，共检测四次。
利用实施例3所述的两种试剂盒检测10例胰腺癌患者血液中相应基因的相对表达量。具体实施方法同实施例2。根据胰腺癌患者治疗后6周、3个月、6个月、9个月时血液样本中相应基因的相对表达量与治疗前相比变化的水平来判断胰腺癌患者是否发生转移复发。利用P＝(治疗值-第一值)/第一值，计算腺癌阈值P。治疗值为治疗后6周、3个月、6个月、9个月时样本中基因的相对表达量，第一值为治疗前样本中基因的相对表达量。判断标准定为：当P<-0.1时，指示所述受试者胰腺癌转移复发。
两种试剂盒的检测判断结果如表6和表7所示。同时，医生根据临床症状判断这10例患者治疗9个月后是否转移复发的结果也列在表6和表7中。如下表所示：试剂盒1为包括特异性扩增CHKB-CPT1B的试剂盒；试剂盒2为包括特异性扩增CHKB-CPT1B和DDX11L2的试剂盒。试剂盒2中基因的相对表达量为CHKB-CPT1B和DDX11L2相对表达量的平均值。
表6 试剂盒1监控胰腺癌转移复发结果
患者编号 6周 3个月 6个月 9个月 临床评价
1 0.20 0.18 0.19 0.17 无进展生存
2 0.22 0.12 -0.19 -0.37 转移复发
3 0.25 0.23 0.21 0.20 无进展生存
4 0.17 0.10 0.07 0.03 转移复发
5 0.24 0.23 0.20 0.19 无进展生存
6 0.18 0.17 0.09 0.02 无进展生存
7 0.19 0.12 0.03 -0.52 转移复发
8 0.23 0.18 0.15 0.12 无进展生存
9 0.15 0.06 0.22 -0.45 转移复发
10 0.20 0.16 0.03 -0.33 转移复发
表7 试剂盒2监控胰腺癌转移复发结果
患者编号 6周 3个月 6个月 9个月 临床评价
1 0.18 0.16 0.12 0.18 无进展生存
2 0.20 0.12 0.23 -0.42 转移复发
3 0.23 0.17 0.19 0.22 无进展生存
4 0.15 0.10 -0.13 -0.12 转移复发
5 0.21 0.20 0.18 0.15 无进展生存
6 0.16 0.14 0.10 -0.06 无进展生存
7 0.19 0.10 -0.02 -0.54 转移复发
8 0.22 0.15 0.13 0.10 无进展生存
9 0.16 0.03 -0.20 -0.50 转移复发
10 0.19 0.14 -0.03 -0.32 转移复发
由表7和表8可知，临床诊断结果显示10例胰腺癌患者中有5例治疗后出现转移复发，5例无进展生存。试剂盒1检测的结果显示10例胰腺癌患者中有4例治疗后出现转移复发，6例无进展生存。其中编号为4的患者试剂盒检测结果与临床诊断结果有误；试剂盒2检测结果显示10例胰腺癌患者中有5例治疗后出现转移复发，其余5例无进展生存，试剂盒检测结果与临床诊断一致。据此推断，试剂盒2比试剂盒1检测准确性更高。并且使用本发明的试剂盒监控胰腺癌，可早于临床症状和体征发现，为医生提前进行干预提供参考。
综上所述，CHKB-CPT1B、DDX11L2可以作为诊断和预示胰腺癌的标记物，并且同时检测2个标记物的准确性高于检测单一标志物。对CHKB-CPT1B、DDX11L2表达水平的检测对早期诊断胰腺癌、判断病情进展及预后有重要的指导价值。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 北京致成生物医学科技有限公司
<120> 用于胰腺癌诊断或预后的生物标记
<130> P16yxa75
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
tagcagatga tggctatgga 20
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ctttgcggat gtggtttc 18
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
aacccaatct gtcttccatc 20
<210> 4
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
tgctccgtct cgcttcta 18
<210> 5
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
ggagtccact ggcgtctt 18
<210> 6
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
ggagtccact ggcgtctt 18

Claims (10)

1.用于胰腺癌诊断或预后的分子标记物，其特征在于，所述的分子标记物为CHKB-CPT1B和/或DDX11L2。
2.如权利要求1所述的分子标记物，其特征在于，所述CHKB-CPT1B和/或DDX11L2在胰腺癌患者生物学样品中表达下调。
3.如权利要求1或2所述的分子标记物在胰腺癌诊断或预后产品中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述诊断或预后为诊断、疗效评估或转移复发监控。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括:通过real-time PCR、Northern blot、Southern blot、基因芯片、原位杂交或RNA酶保护实验方法检测CHKB-CPT1B和/或DDX11L2的表达来进行胰腺癌的诊断或预后的产品。
6.一种用于胰腺癌诊断或预后的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测CHKB-CPT1B和/或DDX11L2的表达水平的试剂。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括检测CHKB-CPT1B和/或DDX11L2的引物或探针。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述引物包括：
CHKB-CPT1B的引物对：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；
和/或DDX11L2的引物对：SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。
9.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括RNA提取试剂、反转录试剂、定量PCR试剂。
10.如权利要求6～9任一项所述的试剂盒在胰腺癌患者预后判断中的应用。
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