CN106380493B - 一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，首次采用大孔树脂吸附分离方法和工业色谱纯化方法为核心的成套技术从金银花提取物中分离纯化了开联番木鳖苷酸，建立了一条从金银花提取物中分离、纯化开联番木鳖苷酸的工艺路线。该工艺分离纯化开联番木鳖苷酸的平均纯度达到96.53％，平均转移率达到92.13％，过程简单，溶剂方便回收，并且可以大批量工业化生产，具有很强的实用价值。

Description

一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法
技术领域
本发明涉及中药提取分离技术领域，尤其涉及从中药金银花或其基源植物忍冬或同属其他植物中制备的提取物中分离纯化开联番木鳖苷酸的方法。
背景技术
金银花(Lonicera japonica Thunb)，又名忍冬，为忍冬科忍冬属多年生常绿缠绕灌木植物。忍冬的干燥花蕾或带初开的花，是我国常用的清热解毒传统中药，它性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪。金银花既能宣散风热，还善清解血毒，常用于治疗丹毒、热毒疮痈、风热感冒、发热、咽喉肿痛等症状。
化学成分研究表明金银花等忍冬科植物中主要含有挥发油、有机酸、环烯醚萜苷、黄酮类化合物、三萜皂苷等成分。实验研究表明金银花具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、保肝、免疫调节等药理活性。目前，金银花研究主要以绿原酸类化合物为主，通常通过绿原酸含量的高低来评价金银花质量的优劣，而国内外公开从金银花中提取分离开联番木鳖苷酸的报道数量相对较少，尤其是提取分离高纯度的开联番木鳖苷酸的报道，因此，选择从金银花等植物中制备高纯度的开联番木鳖苷酸具有较大的资源优势。
开联番木鳖苷酸属于环烯醚萜苷类化合物，环烯醚萜苷类化合物普遍存在于植物界，忍冬科植物中含量较高。目前已报道从天然药物中提取分离环烯醚萜苷类化合物的主要方法有溶剂提取法、活性炭吸附法、乙酸乙酯萃取法、硅胶柱层析法、大孔树脂法等。上述提取分离方法中存在一些问题，如活性炭吸附法活性炭不能重复利用、选择性差；乙酸乙酯萃取法转移率低、操作过程不安全、毒性大等。因此，研究一条开联番木鳖苷酸转移率高、过程简单、溶剂毒性小且能被方便回收的提取分离路线具有重要的实用经济意义。
发明内容
本发明提出一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，解决了现有技术中的提取分离开联番木鳖苷酸方法效率低、有机试剂用量大、纯度低、收率低等问题。
本发明的技术方案是这样实现的：一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，包括如下步骤：
(1)向提取物中加入3～10倍的纯化水溶解；
(2)步骤(1)得到的提取物溶液通过大孔树脂进行吸附分离，大孔树脂以湿法装柱，柱子径高比为1:3～1:10，上样量为提取物与大孔树脂的重量之比为1:1～1:8，上样流速为0.5～3BV/h，上完样后，先以0.5～5BV的纯化水以0.5～4BV/h的流速冲洗，然后用质量分数为10％～60％的乙醇4～8BV以1～4BV/h的速度洗脱，收集洗脱液；
(3)将洗脱液浓缩至原体积的1/4～1/10，过滤后采用工业色谱纯化方法，以质量分数为10％～50％的乙醇作为洗脱剂，流速为10～50ml/min，收集流经色谱填料的开联番木鳖苷酸目标峰洗脱液，洗脱液减压干燥即得开联番木鳖苷酸产品。
优选的，所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，所述步骤(1)中，提取物中开联番木鳖苷酸含量大于2.0％。
优选的，所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，所述步骤(1)中，向提取物中加入7倍纯化水溶解。
优选的，所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，所述步骤(2)中，大孔树脂为HPD-100、JD-1、AB-8、HPD-750、D101、ADS-7、DM80、D1400中的至少一种。
更优的，所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，所述大孔树脂为D101。
优选的，所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，所述步骤(2)中大孔树脂以湿法装柱，其径高比为1:5～1:10。
优选的，所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，所述步骤(2)中上样量为提取物与大孔树脂的重量之比为1:8，上样流速为0.5BV/h，上完样后，先以0.5BV的纯化水以1BV/h的流速冲洗，然后用质量分数为20％的乙醇6BV以2BV/h的速度洗脱，收集洗脱液。
优选的，所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，所述步骤(3)中，色谱填料为PIPO-02、UniPS40-300、NM100、CT-25-1、UniPSA30-300、UniQ-50、UniPSN30-300中至少一种。
更优的，所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，所述色谱填料为UniPS40-300。
优选的，所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，步骤(3)中，将大孔树脂洗脱液浓缩至原体积的1/8，以质量分数为20％的乙醇为洗脱剂，流速为20ml/min。
本发明的有益效果为：本发明首次采用大孔树脂吸附分离方法和工业色谱纯化方法为核心的成套技术从金银花提取物中分离纯化了开联番木鳖苷酸，建立了一条从金银花提取物中分离、纯化开联番木鳖苷酸的工艺路线。该工艺分离纯化开联番木鳖苷酸的平均纯度达到96.53％，平均转移率达到92.13％，过程简单，溶剂方便回收，并且可以大批量工业化生产，具有很强的实用价值。
具体实施方式
为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。
实施例1
本发明从金银花提取物中分离纯化开联番木鳖苷酸的方法如下：
(1)向金银花提取物(开联番木鳖苷酸含量2.0％)中加入3倍纯化水溶解；
(2)将步骤(1)得到的提取物溶液通过HPD-750大孔树脂进行吸附分离，大孔树脂以湿法装柱，柱子径高比为1:3，上样量为提取物与大孔树脂的重量之比为1:1，上样流速为1BV/h，上完样后，先以5BV的纯化水以4BV/h的流速冲洗，然后用质量分数为10％的乙醇8BV以4BV/h的速度洗脱，收集洗脱液；
(3)将洗脱液浓缩至原体积的1/4，过滤后采用工业色谱纯化方法，色谱填料为PIPO-02，以质量分数为10％的乙醇作为洗脱剂，流速为10ml/min，收集开联番木鳖苷酸目标峰洗脱液，洗脱液减压干燥得开联番木鳖苷酸产品。
实施例2
本发明从金银花提取物中分离纯化开联番木鳖苷酸的方法如下：
(1)向金银花提取物(开联番木鳖苷酸含量2.5％)中加入10倍纯化水溶解；
(2)将步骤(1)得到的提取物溶液通过ADS-7大孔树脂进行吸附分离，大孔树脂以湿法装柱，柱子径高比为1:5，上样量为提取物与大孔树脂的重量之比为1:5，上样流速为3BV/h，上完样后，先以2BV的纯化水以0.5BV/h的流速冲洗，然后用质量分数为60％的乙醇4BV以1BV/h的速度洗脱，收集洗脱液；
(3)将洗脱液浓缩至原体积的1/10，过滤后采用工业色谱纯化方法，色谱填料为NM100，以质量分数为50％的乙醇作为洗脱剂，流速为50ml/min，收集开联番木鳖苷酸目标峰洗脱液，洗脱液减压干燥得开联番木鳖苷酸产品。
实施例3
本发明的从金银花提取物中分离纯化开联番木鳖苷酸的方法如下：
(1)向金银花提取物(开联番木鳖苷酸含量3.1％)中加入7倍纯化水溶解；
(2)将步骤(1)得到的提取物溶液通过D101大孔树脂进行吸附分离，大孔树脂以湿法装柱，柱子径高比为1:10，上样量为提取物与大孔树脂的重量之比为1：8，上样流速为0.5BV/h，上完样后，先以0.5BV的纯化水以1BV/h的流速冲洗，然后用质量分数为20％的乙醇6BV以2BV/h的速度洗脱，收集洗脱液；
(3)将洗脱液浓缩至原体积的1/8，过滤后采用工业色谱纯化方法，色谱填料为UniPS40-300，以质量分数为20％的乙醇作为洗脱剂，流速为20ml/min，收集开联番木鳖苷酸目标峰洗脱液，洗脱液减压干燥得开联番木鳖苷酸产品。大孔树脂吸附分离试验的计算说明
溶液中开联番木鳖苷酸总量(mg)＝C×V1
开联番木鳖苷酸纯度(％)＝(C×V2/W1)×100％
转移率(％)＝洗脱量/上样量×100％
C：根据线性回归方程计算所得溶液中开联番木鳖苷酸浓度(mg/ml)
V1：洗脱液体积(ml)
V2：溶解洗脱液浸膏的溶液体积(ml)
W1：洗脱液浸膏取样量(mg)
在大孔树脂吸附分离试验中，开联番木鳖苷酸纯度指洗脱液干燥成浸膏中开联番木鳖苷酸的纯度。
在大孔树脂吸附分离试验中，转移率指开联番木鳖苷酸大孔树脂吸附分离工艺的转移率。
对实施例1～3的大孔树脂吸附分离过程的纯度和转移率进行计算，结果如表1所示。
表1：
本发明在生产成本低廉的条件下，使提取液中的开联番木鳖苷酸尽可能的转移到洗脱溶剂中，并使洗脱溶剂中的杂质成分尽可能减少。由表1可以看出，本发明的大孔树脂吸附分离开联番木鳖苷酸的平均转移率为95.30％，说明此大孔树脂吸附分离方法可行。
工业色谱纯化的计算说明
溶液中开联番木鳖苷酸总量(mg)＝C×V0
转移率(％)＝洗脱量/进样量×100％
开联番木鳖苷酸纯度(％)＝(C×V1/W1)×100％
C：根据线性回归方程计算所得溶液中开联番木鳖苷酸浓度(mg/ml)
V0：大孔树脂洗脱液体积(ml)
V1：溶解工业色谱纯化干粉的溶液体积(ml)
W1：取工业色谱纯化干粉的重量(mg)
进样量为在最优大孔树脂吸附工艺条件下所得洗脱液中开联番木鳖苷酸的总量。
洗脱量为经过工业色谱纯化后所得的收集液中开联番木鳖苷酸的总量。
在工业色谱纯化试验中，纯度是指纯化收集液经减压干燥成干粉中开联番木鳖苷酸的纯度。
在工业色谱纯化试验中，转移率指工业色谱纯化工艺的转移率。
对实施例1～3的工业色谱纯化过程的纯度和转移率进行计算，结果如表2所示。
表2：
本发明在生产成本低廉的条件下，使大孔树脂洗脱液中的开联番木鳖苷酸尽可能的转移到工业色谱洗脱溶剂中，并使洗脱溶剂中的其他杂质成分尽可能减少。由表2可以看出，本发明的开联番木鳖苷酸经过工业色谱纯化后，平均纯度为96.53％，平均转移率为92.13％，说明此技术方法可行。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)向金银花提取物中加入3～10倍的纯化水溶解；
(2)步骤(1)得到的提取物溶液通过大孔树脂进行吸附分离，大孔树脂以湿法装柱，柱子径高比为1:3～1:10，上样量为提取物与大孔树脂的重量之比为1:1～1:8，上样流速为0.5～3BV/h，上完样后，先以0.5～5BV的纯化水以0.5～4BV/h的流速冲洗，然后用质量分数为10％～60％的乙醇4～8BV以1～4BV/h的速度洗脱，收集洗脱液；
(3)将洗脱液浓缩至原体积的1/4～1/10，过滤后采用工业色谱纯化方法，以质量分数为10％～50％的乙醇作为洗脱剂，流速为10～50ml/min，收集流经色谱填料的开联番木鳖苷酸目标峰洗脱液，洗脱液减压干燥即得开联番木鳖苷酸产品。
2.根据权利要求1所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，金银花提取物中开联番木鳖苷酸含量大于2.0％。
3.根据权利要求1所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，向金银花提取物中加入7倍纯化水溶解。
4.根据权利要求1所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，大孔树脂为HPD-100、JD-1、AB-8、HPD-750、D101、ADS-7、DM80、D1400中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，其特征在于：所述大孔树脂为D101。
6.根据权利要求1所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，其特征在于：所述步骤(2)中大孔树脂以湿法装柱，其径高比为1:5～1:10。
7.根据权利要求6所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，其特征在于：所述步骤(2)中上样量为提取物与大孔树脂的重量之比为1:8，上样流速为0.5BV/h，上完样后，先以0.5BV的纯化水以1BV/h的流速冲洗，然后用质量分数为20％的乙醇6BV以2BV/h的速度洗脱，收集洗脱液。
8.根据权利要求1所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，色谱填料为PIPO-02、UniPS40-300、NM100、CT-25-1、UniPSA30-300、UniQ-50、UniPSN30-300中至少一种。
9.根据权利要求8所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，其特征在于：所述色谱填料为UniPS40-300。
10.根据权利要求1所述的一种分离纯化开联番木鳖苷酸的方法，其特征在于：步骤(3)中，将大孔树脂洗脱液浓缩至原体积的1/8，以质量分数为20％的乙醇为洗脱剂，流速为20ml/min。
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