CN106349162A - 一种从蛇足石杉叶中提取石杉碱甲的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种石杉碱甲的提取方法，包括以下步骤：蛇足石杉叶发酵处理、乙醚浸泡、离心、水浴蒸发、降温结晶。采用本发明所使用的方法，可以极大的提高石杉碱甲的收率和提取纯度，并且生产成本低，适合工业化生产。

Description

一种从蛇足石杉叶中提取石杉碱甲的方法
技术背景
石杉碱甲（Huperzine A，简称Hup A），又名福定碱，是从石杉科石杉属蛇足杉(千层塔)中分离得到的一种天然生物碱，属强效的可逆性乙酰胆碱酯酶（AChE）抑制剂，对早老性痴呆症，单纯记忆障碍以及重症肌无力症治疗有显著疗效，且药效持续时间较长，无严重不良反应，是目前国内外上述病症最有效的药物，深受关注。由于它的治疗指数高，且作用时间长，在国际上已被列为第二代胆碱酯酶的抑制剂之一。但Hup A在自然界中存在量极低，且含有大量杂质,至今国内外有大量研究人员正在探索寻找理想的分离方法。曾有人利用溶剂萃取、硅胶柱层析等方法进行分离，虽然能获得少量产品，但终因费时(一个生产周期超过一个月)，得率低（低于百万分之一），难于规模化生产，而人工合成品难于获得理想的疗效。因此急需寻求一个得率高、适合规模化生产的方法。
发明内容
本发明的目的在于，针对上述存在的问题，提出一种从蛇足石杉叶中提取石杉碱甲的方法，具体如下：
将蛇足石杉叶洗净晒干后，放入发酵罐中，加入表面活化剂和发酵菌后进行24小时发酵处理；之后将发酵后的蛇足石杉叶放入75%-95%的乙醚中，并同时加入10%-30%的2,5-二羟基苯甲酸，浸泡2小时后对溶液进行离心，得到滤渣再次放入75%-95%的乙醚中，并同时加入10%-30%的2,5-二羟基苯甲酸，浸泡1小时后再次离心，将两次离心上清液混合，向其中加入活性炭，处理10-15分钟后，去掉活性炭，对溶液进行水浴加热至70℃-80℃，直至溶液变成粘稠状时，停止加热，将溶液搅拌均匀后，降温至0℃以下得到晶体。
上述加入的表面活化剂是脂肪酸山梨坦和聚山梨酯的混合物，其与蛇足石杉叶的比重为脂肪酸山梨坦：聚山梨酯：蛇足石杉叶=2:1:100-150。
上述加入的发酵菌种由以下质量份数组成，枯草芽孢杆菌5份，地衣芽孢杆菌2份，发酵乳杆菌1份，发酵前需要按照比例配制成0.3%菌种含量的接种液，接种量为0.1%。
上述蛇足石杉叶与乙醚的质量体积比1:20-30。
上述加入的2,5-二羟基苯甲酸与乙醚的体积比为1:50-80。
本发明的有益效果为：
其一、本发明采用合理配比的菌种发酵，相比于常用的从蛇足石杉粉末中提取石杉碱甲，可以将蛇足石杉叶中的石杉碱甲变得益于溶于提取液中，从而可以极大的提高收率。
其二、本发明在浸提阶段加入10%-30%的2,5-二羟基苯甲酸，此种酚酸物质，可以使石杉碱甲被高效的提取出来。
其三、本发明采用活性炭脱色除杂，相比于常用的大孔吸附树脂脱色，更省时省力，并能达到很好的脱色效果，由于在脱色之前加入了2,5-二羟基苯甲酸，此种酚酸可以酸化活性炭，使活性炭的脱色效果更明显。
具体实施方式
实施例1
将蛇足石杉叶洗净晒干后，放入发酵罐中，加入表面活化剂和发酵菌后进行24小时发酵处理，其中表面活化剂是脂肪酸山梨坦和聚山梨酯的混合物，其与蛇足石杉叶的比重为脂肪酸山梨坦：聚山梨酯：蛇足石杉叶=2:1:100；之后将发酵后的蛇足石杉叶放入75%乙醚中，并同时加入10%的2,5-二羟基苯甲酸，浸泡2小时后对溶液进行离心，得到滤渣再次放入75%的乙醚中，并同时加入10%的2,5-二羟基苯甲酸，浸泡1小时后再次离心，将两次离心上清液混合，向其中加入活性炭，处理10分钟后，去掉活性炭，对溶液进行水浴加热至70℃，直至溶液变成粘稠状时，停止加热，将溶液搅拌均匀后，降温至0℃得到晶体。本实施例中，石杉碱甲的收率为75%，纯度为99.2%。
实施例2
将蛇足石杉叶洗净晒干后，放入发酵罐中，加入表面活化剂和发酵菌后进行24小时发酵处理，其中表面活化剂是脂肪酸山梨坦和聚山梨酯的混合物，其与蛇足石杉叶的比重为脂肪酸山梨坦：聚山梨酯：蛇足石杉叶=2:1:150；之后将发酵后的蛇足石杉叶放入80%乙醚中，并同时加入20%的2,5-二羟基苯甲酸，浸泡2小时后对溶液进行离心，得到滤渣再次放入95%的乙醚中，并同时加入30%的2,5-二羟基苯甲酸，浸泡1小时后再次离心，将两次离心上清液混合，向其中加入活性炭，处理15分钟后，去掉活性炭，对溶液进行水浴加热至80℃，直至溶液变成粘稠状时，停止加热，将溶液搅拌均匀后，降温至-4℃以下得到晶体。本实施例中，石杉碱甲的收率为80%，纯度为99.8%。

Claims (5)

1.一种从蛇足石杉叶中提取石杉碱甲的方法，其特征在于包括以下步骤：
将蛇足石杉叶洗净晒干后，放入发酵罐中，加入表面活化剂和发酵菌后进行24小时发酵处理；之后将发酵后的蛇足石杉叶放入75%-95%的乙醚中，并同时加入10%-30%的2,5-二羟基苯甲酸，浸泡2小时后对溶液进行离心，得到滤渣再次放入75%-95%的乙醚中，并同时加入10%-30%的2,5-二羟基苯甲酸，浸泡1小时后再次离心，将两次离心上清液混合，向其中加入活性炭，处理10-15分钟后，去掉活性炭，对溶液进行水浴加热至70℃-80℃，直至溶液变成粘稠状时，停止加热，将溶液搅拌均匀后，降温至0℃以下得到晶体。
2.根据权利要求1中所述的一种从蛇足石杉叶中提取石杉碱甲的方法，其特征在于：加入的表面活化剂是脂肪酸山梨坦和聚山梨酯的混合物，其与蛇足石杉叶的比重为脂肪酸山梨坦：聚山梨酯：蛇足石杉叶=2:1:100-150。
3.根据权利要求1中所述的一种从蛇足石杉叶中提取石杉碱甲的方法，其特征在于：加入的发酵菌种由以下质量份数组成，枯草芽孢杆菌5份，地衣芽孢杆菌2份，发酵乳杆菌1份，发酵前需要按照比例配制成0.3%菌种含量的接种液，接种量为0.1%。
4.根据权利要求1中所述的一种从蛇足石杉叶中提取石杉碱甲的方法，其特征在于：蛇足石杉叶与乙醚的质量体积比1:20-30。
5.根据权利要求1中所述的一种从蛇足石杉叶中提取石杉碱甲的方法，其特征在于：加入的2,5-二羟基苯甲酸与乙醚的体积比为1:50-80。
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