CN102876651A - 一种生产降纤酶的工艺方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种生产降纤酶的工艺方法，包括DFAE-sephadex A50平衡，线性梯度洗脱，收集洗脱液三个步骤。本发明的通过蛇毒提取降纤酶的工艺方法相较于原工艺分离时间短、试剂用量小、工艺简单，收率高、质量稳定。
Description
技术领域
本发明涉及一种生产降纤酶的工艺方法，具体涉及一种通过蛇毒提取降纤酶的工艺方法。
背景技术
降纤酶，曾用名蝮蛇抗栓酶、精制腹腔蛇抗栓酶、江浙腹蛇抗栓酶、去纤酶等，是作为治疗脑梗塞、血栓闭塞性脉管炎、股动脉栓塞、肺栓塞等疾病的药物。降纤酶是取自尖吻蝮蛇，又名蕲蛇、五步蛇的蛇毒，蛇毒经分离、提纯，冻干等工序，制成规格每支含1个单位的成品。目前生产降纤酶的一般工艺分为DEAE-sephadex A50(葡萄糖凝胶)平衡、线性梯度洗脱、DEAE-cellulose D52(DEAE-纤维素)平衡、线性梯度洗脱、搜集洗脱液五个步骤，在实践中发现原工艺分离时间长、试剂用量大、工艺繁琐，不易掌握，收率较低、质量不稳定等问题。
发明内容
本发明为了解决上述生产降纤酶的工艺方法中的分离时间长、试剂用量大、工艺繁琐，不易掌握，收率较低、质量不稳定问题，提出一种通过蛇毒提取降纤酶的新工艺方法。
本发明为解决上述提出的问题所采用的解决方案为：
一种生产降纤酶的工艺方法，包括DEAE-sephadex A50平衡，线性梯度洗脱，收集洗脱液，具体如下：
(1)DEAE-sephadex A50平衡方法：取DEAE-sephadex A50适量，加入新鲜蒸馏水，加热煮沸15min，放至室温，加pH值7.0～7.8，0.05mol/L Tris缓冲液搅拌，放置数小时，弃去上清液，再加入pH值7.0～7.8，0.05mol/L Tris缓冲液，如此反复数次，测pH值＝7.0～7.8。
(2)线性洗脱方法：蛇毒均匀加在DEAE-sephadex A50柱中，第1梯度，在搅拌瓶中加pH值7.0～7.8，0.1mol/LNaCl Tris缓冲液1000ml，以15～20滴/分速度洗脱。第2梯度在搅拌瓶中加pH值7.0～7.8，0.1mol/LNaCl Tris缓冲液1000ml，贮存瓶中加pH值7.0～7.8，0.8mol/LNaCl Tris缓冲液2000ml，以15～20滴/分速度洗脱。共分离出9个峰，将合格峰合峰。
优选地，pH值为7.6。
本发明具有的优点和积极效果是：
本发明的通过蛇毒提取降纤酶的工艺方法相较于原工艺分离时间短、试剂用量小、工艺简单，收率高、质量稳定。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但不能作为本发明的限定。
实例1：
蛇毒取自尖吻蝮蛇，昆明动物研究所提供。
一种生产降纤酶的工艺方法，包括DEAE-sephadex A50平衡，线性梯度洗脱，收集洗脱液，具体如下：
(1)DEAE-sephadex A50平衡方法：取DEAE-sephadex A5020g，加入新鲜蒸馏水，加热煮沸15min，放至室温，加pH值7.6，0.05mol/L Tris缓冲液搅拌，放置数小时，弃去上清液，再加入pH值7.6，0.05mol/L Tris缓冲液，如此反复数次，测pH值＝7.6。
(2)线性洗脱方法：蛇毒2g，均匀加在DEAE-sephadex A50柱中，第1梯度，在搅拌瓶中加pH值7.6，0.1mo1/LNaCl Tris缓冲液1000ml，以15～20滴/分速度洗脱。第2梯度在搅拌瓶中加pH值7.6，0.1mol/LNaCl Tris缓冲液1000ml，贮存瓶中加pH值7.6，0.8mol/LNaCl Tris缓冲液2000ml，以15～20滴/分速度洗脱。共分离出9个峰，将合格峰合峰。
Claims (2)
1.一种生产降纤酶的工艺方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)DEAE-sephadex A50平衡方法：取DEAE-sephadex A50适量，加入新鲜蒸馏水，加热煮沸15min，放至室温，加pH值7.0～7.8，0.05mol/L Tris缓冲液搅拌，放置数小时，弃去上清液，再加入pH值7.0～7.8，0.05mol/L Tris缓冲液，如此反复数次，测pH值＝7.0～7.8；
(2)线性洗脱方法：蛇毒均匀加在DEAE-sephadex A50柱中，第1梯度，在搅拌瓶中加pH值7.0～7.8，0.1mol/LNaCl Tris缓冲液1000ml，以15～20滴/分速度洗脱；第2梯度在搅拌瓶中加pH值7.0～7.8，0.1mol/L NaCl Tris缓冲液1000ml，贮存瓶中加pH值7.0～7.8，0.8mol/LNaCl Tris缓冲液2000ml，以15～20滴/分速度洗脱；共分离出9个峰，将合格峰合峰。
2.根据权利要求1所述的一种生产降纤酶的工艺方法，其特征在于：pH值＝7.6。
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104498463A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-04-08 | 青岛康原药业有限公司 | 一种从蛇毒中提取降纤酶的方法 |
| CN104593457A (zh) * | 2014-12-30 | 2015-05-06 | 唯美度科技（北京）有限公司 | 一种具有清除自由基功能的小分子多肽 |
| CN105349514A (zh) * | 2015-12-14 | 2016-02-24 | 辽宁省血栓病中西医结合医疗中心 | 快速简易分离纯化降纤酶的方法 |
| CN107384901A (zh) * | 2017-08-17 | 2017-11-24 | 芜湖通全科技有限公司 | 一种酶的工艺方法 |
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2011
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|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130116 |