CN106226273A - 一种microRNA的快速检测方法 - Google Patents

一种microRNA的快速检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106226273A
CN106226273A CN201610525863.XA CN201610525863A CN106226273A CN 106226273 A CN106226273 A CN 106226273A CN 201610525863 A CN201610525863 A CN 201610525863A CN 106226273 A CN106226273 A CN 106226273A
Authority
CN
China
Prior art keywords
microrna
excitation wavelength
quick
taqman probe
measured
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201610525863.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN106226273B (zh
Inventor
杨承健
韩志君
王舒雅
刘肖肖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuxi No 2 Peoples Hospital
Original Assignee
Wuxi No 2 Peoples Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuxi No 2 Peoples Hospital filed Critical Wuxi No 2 Peoples Hospital
Priority to CN201610525863.XA priority Critical patent/CN106226273B/zh
Publication of CN106226273A publication Critical patent/CN106226273A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106226273B publication Critical patent/CN106226273B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6432—Quenching
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/324—Coronary artery diseases, e.g. angina pectoris, myocardial infarction

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

本发明涉及一种microRNA的快速检测方法，属于生物检测技术领域，该microRNA的快速检测方法根据待测靶标microRNA的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列，而后在单链DNA序列两端分别修饰荧光基团和荧光淬灭基团，从而获得与待测靶标microRNA相对应的Taqman探针，而后将患者血清、RNase‑free水、DSN酶、Taqman探针和RNA酶抑制剂按照一定的比例在特定的条件下进行反应，在激光的激发作用下，检测出反应液的荧光强度，即得到待测靶标microRNA的检测结果，该检测方法大大缩短了四个心肌损伤标志物的检测时间，在保证检测质量的基础上，提高了检测效率。

Description

一种microRNA的快速检测方法
技术领域
本发明涉及生物检测领域，尤其涉及一种microRNA的快速检测方法。
背景技术
急性心肌梗死是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死。临床上多有剧烈而持久的胸骨后疼痛，休息及硝酸酯类药物不能完全缓解，伴有血清心肌酶活性增高及进行性心电图变化，可并发心律失常、休克或心力衰竭，常可危及生命。该病在欧美最为常见，美国每年约有150万人发生心肌梗死。中国近年来呈明显上升趋势，每年新发至少50万，现患至少200万。
由此可见，急性心肌梗死的早期检测是尤为重要的，在现有的研究中，急性心肌梗死的早期检测包括对microRNA-499的检测、microRNA-208b的检测、microRNA-1的检测以及microRNA-133a的检测。
现有技术中，对上述四个心肌损伤标志物的检测通常需要采用1小时的microRNA的抽提、1.5小时的逆转录以及1.5小时的Real-time PCR(荧光定量聚合酶链反应)，一个心肌损伤标志物的检测时间至少要4个小时，从检测开始到得到检测结果的时间很长，众所周知的，对人体疾病的检测，时间的长短尤为重要；另外，现有技术中，对上述四个心肌损伤标志物的检测步骤也较为繁琐，工作量非常大；漫长的检测过程不仅仅会让病人等待的更为烦躁，也让检测的医护人员感到身心俱疲。
发明内容
针对上述存在的问题，本发明提供一种microRNA的快速检测方法，应用于急性心肌梗死的四个心肌损伤标志物的检测中，以克服采用现有技术中的检测方法检测microRNA-499、microRNA-208b、microRNA-1以及microRNA-133a这四个心肌损伤标志物导致检测时间很长、工作量较大的问题，从而大大缩短了上述四个心肌损伤标志物的检测时间，并且简化了上述四个心肌损伤标志物的检测方法，在保证检测质量的基础上，提高了检测效率。
为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种microRNA的快速检测方法，其中，包括：
备料：准备好患者血清、RNase-free水、浓度为19～21uM/uL(如：19uM/uL、20uM/uL、21uM/uL)的RNA酶抑制剂以及浓度为0.19～0.21uM/uL(如：0.19uM/uL、0.20uM/uL、0.21uM/uL)的DSN酶；
设计探针：根据待测靶标microRNA的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列，而后在所述单链DNA序列两端分别修饰荧光基团和荧光淬灭基团，获得浓度为195～205nmol/uL(如：195nmol/uL、198nmol/uL、200nmol/uL、203nmol/uL、205nmol/uL)的Taqman探针；
反应：将所述患者血清、所述RNase-free水、所述DSN酶、所述Taqman探针和所述RNA酶抑制剂按照100:278:2:20:1的配比进行混合，在60～80℃(如：60℃、65℃、70℃、75℃、80℃)的反应温度下反应25～35分钟(如：25min、28min、30min、32min、35min)；
检测：根据相应Taqman探针设置反应所需的激发波长和发射波长，使用全自动酶标仪检测反应步骤中的反应液的荧光强度，即得到所述患者血清中的microRNA的检测结果。
上述的microRNA的快速检测方法，其中，所述患者血清的收集包括：获取患者的静脉血4～6mL(如：4mL、4.5mL、5mL、5.5mL、6mL)，以3000rpm离心10min，分离血清用于检测。
上述的microRNA的快速检测方法，其中，当所述待测靶标microRNA为microRNA-499时，所述Taqman探针为：5'-Cy3-TTAAAC ATCACT GCAAGT CTT AA–BHQ2-3'；
其中，Cy3染料的激发波长为550nM，发射波长为570nM，且检测步骤中的激发波长和发射波长与所述Cy3染料的激发波长和发射波长相同。
上述的microRNA的快速检测方法，其中，当所述待测靶标microRNA为microRNA-208b时，所述Taqman探针为：5'-TAMRA-ACAAAC CTT TTG TTC GTC TTAT-Eclipse-3'；
其中，TAMRA染料的激发波长为542nM、发射波长为568nM，且检测步骤中的激发波长和发射波长与所述TAMRA染料的激发波长和发射波长相同。
上述的microRNA的快速检测方法，其中，当所述待测靶标microRNA为microRNA-1时，所述Taqman探针为：5'-Cy5-ATACATACT TCT TTACAT TCC A-BHQ-3'；
其中，Cy5染料的激发波长为649nM，发射波长670nM，且检测步骤中的激发波长和发射波长与所述Cy5染料的激发波长和发射波长相同。
上述的microRNA的快速检测方法，其中，当所述待测靶标microRNA为microRNA-133a时，所述Taqman探针为：5'-FAM-CAG CTG GTT GAA GGG GAC CAAA-Eclipse-3'；
其中，FAM染料的激发波长492nM、发射波长518nM，且检测步骤中的激发波长和发射波长与所述FAM染料的激发波长和发射波长相同。
上述技术方案具有如下优点或者有益效果：
本发明提供的microRNA的快速检测方法，根据待测靶标microRNA的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列，而后在单链DNA序列两端分别修饰荧光基团和荧光淬灭基团，从而获得与待测靶标microRNA相对应的Taqman探针，而后将患者血清、RNase-free水、DSN酶、Taqman探针和RNA酶抑制剂按照一定的比例在特定的条件下进行反应，在激光的激发作用下，检测出反应液的荧光强度，即得到待测靶标microRNA的检测结果，该检测方法极为简单，且用时较少，从而克服了采用现有技术中的检测方法检测microRNA-499、microRNA-208b、microRNA-1以及microRNA-133a这四个心肌损伤标志物导致检测时间很长、工作量较大的问题，大大缩短了上述四个心肌损伤标志物的检测时间，在保证检测质量的基础上，提高了检测效率。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明及其特征、外形和优点将会变得更加明显。在全部附图中相同的标记指示相同的部分。并未刻意按照比例绘制附图，重点在于示出本发明的主旨。
图1是本发明实施例1提供的microRNA-499的快速检测方法中不同浓度的microRNA-499标准品荧光强度的变化示意图；
图2是本发明实施例1提供的microRNA-499的快速检测方法中microRNA-499标准品浓度与荧光强度的相关性示意图；
图3是本发明实施例2提供的microRNA-208b的快速检测方法中不同浓度的microRNA-208b标准品荧光强度的变化示意图；
图4是本发明实施例2提供的microRNA-208b的快速检测方法中microRNA-208b标准品浓度与荧光强度的相关性示意图；
图5是本发明实施例3提供的microRNA-1的快速检测方法中不同浓度的microRNA-1标准品荧光强度的变化示意图；
图6是本发明实施例3提供的microRNA-1的快速检测方法中microRNA-1标准品浓度与荧光强度的相关性示意图；
图7是本发明实施例4提供的microRNA-133a的快速检测方法中不同浓度的microRNA-133a标准品荧光强度的变化示意图；
图8是本发明实施例4提供的microRNA-133a的快速检测方法中microRNA-133a标准品浓度与荧光强度的相关性示意图；
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，但是不作为本发明的限定。
实施例1：
本发明实施例1提供的microRNA的快速检测方法包括：
备料：准备好患者血清、RNase-free水、浓度为20uM/uL的RNA酶抑制剂以及浓度为0.2uM/uL的DSN酶；
设计探针：根据待测靶标microRNA——microRNA-499的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列(TTAAAC ATCACT GCAAGT CTTAA)，而后在单链DNA序列两端分别修饰荧光基团(5'-Cy3)和荧光淬灭基团(BHQ2-3')，获得浓度为200nmol/ul的Taqman探针——ProbemicroRNA-499：5'-Cy3-TTA AAC ATCACT GCAAGT CTT AA-BHQ2-3'；
反应：将50ul的患者血清、139ul的RNase-free水、1ul的DSN酶、10ul的Taqman探针Probe microRNA-499和0.5ul的RNA酶抑制剂进行混合配置成反应体积，在80℃的反应温度下反应30分钟；
检测：由于Taqman探针Probe microRNA-499中的Cy3染料的激发波长为550nM、发射波长为570nM，故设置反应所需的激发波长为550nM、发射波长570nM，使用全自动酶标仪检测反应步骤中的反应液的荧光强度，即得到患者血清中的microRNA的检测结果。
在本发明实施例1提供的microRNA的快速检测方法中，患者血清的收集包括：获取患者的静脉血5mL，将静脉血放置于4℃冰箱中静置30min，以3000rpm离心10min，而后收集上清液于无菌RNA-free的EP管中，存储于-80℃的冰箱中备用，用于检测。
图1是本发明实施例1提供的microRNA-499的快速检测方法中不同浓度的microRNA-499标准品荧光强度的变化示意图；由图可知，发射波长在570nM左右时，不同浓度的microRNA-499标准品荧光强度均处于峰值，因此，在发射波长为570nM时，可以很好的检测到反应液中的荧光强度。
图2是本发明实施例1提供的microRNA-499的快速检测方法中
microRNA-499标准品浓度与荧光强度的相关性示意图；由图可知，浓度范围在1E-11Mol～1E-6Mol的microRNA-499标准品，荧光强度的变化是呈线性变化的。
实施例2：
本发明实施例2提供的microRNA的快速检测方法包括：
备料：准备好患者血清、RNase-free水、浓度为20uM/uL的RNA酶抑制剂以及浓度为0.2uM/uL的DSN酶；
设计探针：根据待测靶标microRNA——microRNA-208b的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列(ACAAAC CTT TTG TTC GTC TTAT)，而后在单链DNA序列两端分别修饰荧光基团(5'-TAMRA)和荧光淬灭基团(Eclipse-3')，获得浓度为200nmol/ul的Taqman探针——Probe microRNA-208b：5'-TAMRA-ACAAAC CTT TTG TTC GTC TTAT-Eclipse-3'；
反应：将50ul的患者血清、139ul的RNase-free水、1ul的DSN酶、10ul的Taqman探针Probe microRNA-208b和0.5ul的RNA酶抑制剂进行混合配置成反应体积，在80℃的反应温度下反应30分钟；
检测：由于Taqman探针Probe microRNA-208b中的TAMRA染料的激发波长为542nM、发射波长为568nM，故设置反应所需的激发波长为542nM、发射波长568nM，使用全自动酶标仪检测反应步骤中的反应液的荧光强度，即得到患者血清中的microRNA的检测结果。
在本发明实施例2提供的microRNA的快速检测方法中，患者血清的收集包括：获取患者的静脉血5mL，将静脉血放置于4℃冰箱中静置30min，以3000rpm离心10min，而后收集上清液于无菌RNA-free的EP管中，存储于-80℃的冰箱中备用，用于检测。
图3是本发明实施例2提供的microRNA-208b的快速检测方法中不同浓度的microRNA-208b标准品荧光强度的变化示意图；由图可知，发射波长在568nM左右时，不同浓度的microRNA-208b标准品荧光强度均处于峰值，因此，在发射波长为568nM时，可以很好的检测到反应液中的荧光强度。
图4是本发明实施例2提供的microRNA-208b的快速检测方法中microRNA-208b标准品浓度与荧光强度的相关性示意图；由图可知，浓度范围在1E-12Mol～1E-6Mol的microRNA-208b标准品，荧光强度的变化是呈线性变化的。
实施例3：
本发明实施例3提供的microRNA的快速检测方法包括：
备料：准备好患者血清、RNase-free水、浓度为20uM/uL的RNA酶抑制剂以及浓度为0.2uM/uL的DSN酶；
设计探针：根据待测靶标microRNA——microRNA-1的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列(ATACATACT TCT TTACAT TCC A)，而后在单链DNA序列两端分别修饰荧光基团(5'-Cy5)和荧光淬灭基团(BHQ-3')，获得浓度为200nmol/ul的Taqman探针——ProbemicroRNA-1：5'-Cy5-ATACATACT TCT TTACAT TCC A-BHQ-3'；
反应：将50ul的患者血清、139ul的RNase-free水、1ul的DSN酶、10ul的Taqman探针Probe microRNA-1和0.5ul的RNA酶抑制剂进行混合配置成反应体积，在80℃的反应温度下反应30分钟；
检测：由于Taqman探针Probe microRNA-1中的Cy5染料的激发波长为649nM、发射波长为670nM，故设置反应所需的激发波长为649nM、发射波长670nM，使用全自动酶标仪检测反应步骤中的反应液的荧光强度，即得到患者血清中的microRNA的检测结果。
在本发明实施例3提供的的microRNA的快速检测方法中，患者血清的收集包括：获取患者的静脉血5mL，将静脉血放置于4℃冰箱中静置30min，以3000rpm离心10min，而后收集上清液于无菌RNA-free的EP管中，存储于-80℃的冰箱中备用，用于检测。
图5是本发明实施例3提供的microRNA-1的快速检测方法中不同浓度的microRNA-1标准品荧光强度的变化示意图；由图可知，发射波长在670nM左右时，不同浓度的microRNA-1标准品荧光强度均处于峰值，因此，在发射波长为670nM时，可以很好的检测到反应液中的荧光强度。
图6是本发明实施例3提供的microRNA-1的快速检测方法中microRNA-1标准品浓度与荧光强度的相关性示意图；由图可知，浓度范围在1E-11Mol～1E-6Mol的microRNA-1标准品，荧光强度的变化是呈线性变化的。
实施例4：
本发明实施例4提供的microRNA的快速检测方法包括：
备料：准备好患者血清、RNase-free水、浓度为20uM/uL的RNA酶抑制剂以及浓度为0.2uM/uL的DSN酶；
设计探针：根据待测靶标microRNA——microRNA-133a的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列(CAG CTG GTT GAA GGG GAC CAAA)，而后在单链DNA序列两端分别修饰荧光基团(5'-FAM)和荧光淬灭基团(Eclipse-3')，获得浓度为200nmol/ul的Taqman探针——Probe microRNA-133a：5'-FAM-CAG CTG GTT GAA GGG GAC CAAA-Eclipse-3'；
反应：将50ul的患者血清、139ul的RNase-free水、1ul的DSN酶、10ul的Taqman探针Probe microRNA-133a和0.5ul的RNA酶抑制剂进行混合配置成反应体积，在80℃的反应温度下反应30分钟；
检测：由于Taqman探针Probe microRNA-133a中的FAM染料的激发波长为492nM、发射波长为518nM，故设置反应所需的激发波长为492nM、发射波长518nM，使用全自动酶标仪检测反应步骤中的反应液的荧光强度，即得到患者血清中的microRNA的检测结果。
在本发明实施例4提供的microRNA的快速检测方法中，患者血清的收集包括：获取患者的静脉血5mL，将静脉血放置于4℃冰箱中静置30min，以3000rpm离心10min，而后收集上清液于无菌RNA-free的EP管中，存储于-80℃的冰箱中备用，用于检测。
图7是本发明实施例4提供的microRNA-133a的快速检测方法中不同浓度的microRNA-133a标准品荧光强度的变化示意图；由图可知，发射波长在518nM左右时，不同浓度的microRNA-133a标准品荧光强度均处于峰值，因此，在发射波长为518nM时，可以很好的检测到反应液中的荧光强度。
图8是本发明实施例4提供的microRNA-133a的快速检测方法中microRNA-133a标准品荧光强度的变化示意图；由图可知，浓度范围在1E-10Mol～1E-6Mol的microRNA-133a标准品下，荧光强度的变化是呈线性变化的。
综上所述，本发明实施例提供的microRNA的快速检测方法，根据待测靶标microRNA的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列，而后在单链DNA序列两端分别修饰荧光基团和荧光淬灭基团，从而获得与待测靶标microRNA相对应的Taqman探针，而后将患者血清、RNase-free水、DSN酶、Taqman探针和RNA酶抑制剂按照一定的比例在特定的条件下进行反应，在激光的激发作用下，检测出反应液的荧光强度，即得到待测靶标microRNA的检测结果，该检测方法极为简单，且用时较少，从而克服了采用现有技术中的检测方法检测microRNA-499、microRNA-208b、microRNA-1以及microRNA-133a这四个心肌损伤标志物导致检测时间很长、工作量较大的问题，大大缩短了上述四个心肌损伤标志物的检测时间，在保证检测质量的基础上，提高了检测效率。
本领域技术人员应该理解，本领域技术人员结合现有技术以及上述实施例可以实现所述变化例，在此不予赘述。这样的变化例并不影响本发明的实质内容，在此不予赘述。
以上对本发明的较佳实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式；任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案作出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例，这并不影响本发明的实质内容。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。

Claims (6)

1.一种microRNA的快速检测方法，其特征在于，包括：
备料：准备好患者血清、RNase-free水、浓度为19～21uM/uL的RNA酶抑制剂以及浓度为0.19～0.21uM/uL的DSN酶；
设计探针：根据待测靶标microRNA的序列设计出与其完全互补的单链DNA序列，而后在所述单链DNA序列两端分别修饰荧光基团和荧光淬灭基团，获得浓度为195～205nmol/uL的Taqman探针；
反应：将所述患者血清、所述RNase-free水、所述DSN酶、所述Taqman探针和所述RNA酶抑制剂按照100:278:2:20:1的配比进行混合，在60～80℃的反应温度下反应25～35分钟；
检测：根据相应Taqman探针设置反应所需的激发波长和发射波长，使用全自动酶标仪检测反应步骤中的反应液的荧光强度，即得到所述患者血清中的microRNA的检测结果。
2.如权利要求1所述的microRNA的快速检测方法，其特征在于，所述患者血清的收集包括：获取患者的静脉血4～6mL，以3000rpm离心10min，分离血清用于检测。
3.如权利要求1所述的microRNA的快速检测方法，其特征在于，当所述待测靶标microRNA为microRNA-499时，所述Taqman探针为：5'-Cy3-TTAAACATCACT GCAAGT CTTAA–BHQ2-3'；
其中，Cy3染料的激发波长为550nM，发射波长为570nM，且检测步骤中的激发波长和发射波长与所述Cy3染料的激发波长和发射波长相同。
4.如权利要求1所述的microRNA的快速检测方法，其特征在于，当所述待测靶标microRNA为microRNA-208b时，所述Taqman探针为：5'-TAMRA-ACA AAC CTT TTG TTC GTCTTAT-Eclipse-3'；
其中，TAMRA染料的激发波长为542nM、发射波长为568nM，且检测步骤中的激发波长和发射波长与所述TAMRA染料的激发波长和发射波长相同。
5.如权利要求1所述的microRNA的快速检测方法，其特征在于，当所述待测靶标microRNA为microRNA-1时，所述Taqman探针为：5'-Cy5-ATACATACT TCT TTACAT TCC A-BHQ-3'；
其中，Cy5染料的激发波长为649nM，发射波长670nM，且检测步骤中的激发波长和发射波长与所述Cy5染料的激发波长和发射波长相同。
6.如权利要求1所述的microRNA的快速检测方法，其特征在于，当所述待测靶标microRNA为microRNA-133a时，所述Taqman探针为：5'-FAM-CAGCTG GTT GAA GGG GACCAAA-Eclipse-3'；
其中，FAM染料的激发波长492nM、发射波长518nM，且检测步骤中的激发波长和发射波长与所述FAM染料的激发波长和发射波长相同。
CN201610525863.XA 2016-07-05 2016-07-05 一种microRNA的快速检测方法 Active CN106226273B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610525863.XA CN106226273B (zh) 2016-07-05 2016-07-05 一种microRNA的快速检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610525863.XA CN106226273B (zh) 2016-07-05 2016-07-05 一种microRNA的快速检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106226273A true CN106226273A (zh) 2016-12-14
CN106226273B CN106226273B (zh) 2018-09-25

Family

ID=57519544

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610525863.XA Active CN106226273B (zh) 2016-07-05 2016-07-05 一种microRNA的快速检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106226273B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108841923A (zh) * 2018-06-07 2018-11-20 南京邮电大学 一种基于DSN酶的量子点-磁珠miRNA传感器及其制备方法和检测方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1281901A (zh) * 1999-07-22 2001-01-31 厦门泰伦生物工程有限公司 均相荧光探针pcr结核杆菌检测方法
CN1515687A (zh) * 2003-01-12 2004-07-28 虹 王 Hiv-1/hiv-2通用探针及引物pcr检测技术
US20090317803A1 (en) * 2008-04-26 2009-12-24 Valeri Golovlev Enzymatic time-resolved luminescent assay for nucleic acids quantitation
CN102301011A (zh) * 2009-02-02 2011-12-28 埃克西库恩公司 对小rna进行定量的方法
CN102586412A (zh) * 2011-01-18 2012-07-18 上海市第一人民医院 一种MicroRNA特异表达谱及其应用
CN102925577A (zh) * 2012-11-14 2013-02-13 广东省人民医院 一种微小rna实时定量pcr检测方法及其应用
CN105200157A (zh) * 2015-11-04 2015-12-30 中国人民解放军总医院 胃癌的血浆miRNA生物标志物组合、其应用及胃癌早期诊断试剂盒

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1281901A (zh) * 1999-07-22 2001-01-31 厦门泰伦生物工程有限公司 均相荧光探针pcr结核杆菌检测方法
CN1515687A (zh) * 2003-01-12 2004-07-28 虹 王 Hiv-1/hiv-2通用探针及引物pcr检测技术
US20090317803A1 (en) * 2008-04-26 2009-12-24 Valeri Golovlev Enzymatic time-resolved luminescent assay for nucleic acids quantitation
CN102301011A (zh) * 2009-02-02 2011-12-28 埃克西库恩公司 对小rna进行定量的方法
CN102586412A (zh) * 2011-01-18 2012-07-18 上海市第一人民医院 一种MicroRNA特异表达谱及其应用
CN102925577A (zh) * 2012-11-14 2013-02-13 广东省人民医院 一种微小rna实时定量pcr检测方法及其应用
CN105200157A (zh) * 2015-11-04 2015-12-30 中国人民解放军总医院 胃癌的血浆miRNA生物标志物组合、其应用及胃癌早期诊断试剂盒

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108841923A (zh) * 2018-06-07 2018-11-20 南京邮电大学 一种基于DSN酶的量子点-磁珠miRNA传感器及其制备方法和检测方法
CN108841923B (zh) * 2018-06-07 2021-05-18 南京邮电大学 一种基于DSN酶的量子点-磁珠miRNA传感器及其制备方法和检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN106226273B (zh) 2018-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109576352A (zh) 单管检测多个待测目标核酸序列的方法、探针及其试剂盒
CN102260737B (zh) 一组引物及其在家蚕微孢子虫的快速检测方面的应用
CN106119374A (zh) 一种microRNA‑133a的快速检测方法
CN104805221B (zh) 用于以rt‑lamp法快速检测香蕉病毒的引物及方法
EP3237636A1 (en) Dual quenching assay for multiplex detection of target nucleic acids
CN106148519A (zh) 一种microRNA‑499的快速检测方法
CN106591474A (zh) 一种虾肝肠微孢子虫lamp检测试剂盒
KR102375106B1 (ko) 핵산 검출 시스템
CN111394431A (zh) 一种使用双重实时荧光等温扩增技术检测核酸的方法
CN106226273A (zh) 一种microRNA的快速检测方法
CN109280715A (zh) 一种检测花生黑腐病菌的lamp引物组及其快速检测方法和试剂盒
CN110295255B (zh) 一种基于rt-lamp-lfd检测猕猴桃褪绿环斑相关病毒的快速检测方法
CN108034761A (zh) 一种用于fmdv和sva鉴别的试剂、方法及应用
CN109022617A (zh) 鱼呼吸道与肠道病毒、感染性胰脏坏死病毒、鲑鱼甲病毒、感染性鲑鱼贫血病毒检测方法
CN106191234A (zh) 一种microRNA‑208b的快速检测方法
CN106119368A (zh) 一种microRNA‑1的快速检测方法
JP7478734B2 (ja) カンジダ・アウリス（ｃａｎｄｉｄａ ａｕｒｉｓ）の検出のための組成物および方法
CN108060272A (zh) 一种快速区分猪德尔塔冠状病毒和猪嵴病毒的多重pcr检测引物组及试剂盒
CN108384893A (zh) 用于检测口蹄疫病毒和塞尼卡谷病毒的实时荧光定量rt-pcr试剂盒及其应用
CN112410468A (zh) 一种用于检测草莓斑驳病毒的专用引物、试剂盒及检测方法
CN106471135A (zh) 肠道病毒和双埃柯病毒的分子检测
CN109154023B (zh) 用于检测阴道毛滴虫的组合物和方法
WO2011160887A1 (en) Soluble quencher to reduce background in qpcr assays
CN103276088B (zh) 同时检测三种腹泻原虫的试剂盒及检测方法
CN109983138A (zh) 用于检测bk病毒的组合物和方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant