CN106222163A - Rna提取用溶液及提取方法 - Google Patents

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李�杰
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor

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Abstract

本发明公开了一种RNA提取用溶液，包括以下体积份数的物质：氯仿：70～75％；75％乙醇：10～13％；异戊醇：2～5％；异硫氰酸胍：5～8％；十二烷基硫酸钠：1～2％；柠檬酸钠：3～5％。本发明还公开了一种RNA提取方法，包括以下步骤：样本预处理、样本振荡处理、样本离心处理、RNA沉淀、RNA洗涤、RNA溶解。使用本发明的RNA提取用溶液能够很方便地从生物组织中提取RNA，并且提取过程简单快速、提纯度高。

Description

RNA提取用溶液及提取方法
技术领域
本发明涉及RNA提取技术领域，特别涉及一种RNA提取用溶液及提取方法。
背景技术
含有遗传信息的DNA以其中一条链为模板，按照碱基互补配对原则合成RNA，而RNA通过种类、表达量对生物的表型起到重要作用，为了进行基因表达分析，非常有必要从生物材料中提取较高纯度的RNA。
目前所采用的RNA提出方法有以下几种：酚溶液提取、离液盐溶液沉淀以及硅胶膜吸附，而上述方法都存在一定的弊端，酚溶液提取耗时长、提取效率低，离液盐溶液沉淀和硅胶膜吸附的工艺复杂、提取纯度不高，因此，亟需研发一种操作简单、提纯度高的RNA提取方法。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明公开了一种RNA提取用溶液，包括以下体积份数的物质：
氯仿：70～75％；
75％乙醇：10～13％；
异戊醇：2～5％；
异硫氰酸胍：5～8％；
十二烷基硫酸钠：1～2％；
柠檬酸钠：3～5％。
作为本发明的进一步改进，所述异硫氰酸胍的体积摩尔浓度为0.2～0.4M。
作为本发明的进一步改进，所述十二烷基硫酸钠的体积摩尔浓度为1～1.5M。
作为本发明的进一步改进，所述柠檬酸钠的体积摩尔浓度为0.6～0.8M。
本发明还公开了一种RNA提取方法，包括以下步骤：
a、样本预处理：取50～100mg生物样本组织置于离心管内，加入1～2ml本发明的RNA提取用溶液充分匀浆，室温静置5min，使核酸蛋白复合物完全分离；
b、样本振荡处理：再向离心管内加入0.2～0.5ml氯仿，振荡15～20s，然后静置2min；
c、样本离心处理：离心处理10000g×10min，离心管内的液体形成上层无色水相、中层白色蛋白、底层黄色有机相，用试管取上层无色水相备用；
d、RNA沉淀：向上层无色水相内加入0.5～0.6ml异戊醇，将试管中的液体轻轻混匀，室温静置10～12min，使液体中的RNA沉淀在水相中；
e、RNA洗涤：4℃离心处理10000g×10min，舍弃上层无色水相，向剩余沉淀中加入等体积的75％乙醇，轻轻洗涤沉淀；
f、RNA溶解：室温干燥沉淀3～5min，加入RNA酶溶解沉淀，待沉淀完全溶解后置于-80℃的环境中保存。
本发明的有益效果是：
使用本发明的RNA提取用溶液能够很方便地从生物组织中提取RNA，并且提取过程简单快速、提纯度高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的RNA提取方法工艺流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例一：
本发明的RNA提取用溶液，包括以下体积份数的物质：
氯仿：70％；
75％乙醇：13％；
异戊醇：2％；
异硫氰酸胍：8％；
十二烷基硫酸钠：2％；
柠檬酸钠：5％。
其中，异硫氰酸胍的体积摩尔浓度为0.2M；十二烷基硫酸钠的体积摩尔浓度为1.5M；柠檬酸钠的体积摩尔浓度为0.8M。
如图1所示，本发明还公开了一种RNA提取方法，包括以下步骤：
a、样本预处理：取50mg生物样本组织置于离心管内，加入1ml本发明的RNA提取用溶液充分匀浆，室温静置5min，使核酸蛋白复合物完全分离；
b、样本振荡处理：再向离心管内加入0.2ml氯仿，振荡15s，然后静置2min；
c、样本离心处理：离心处理10000g×10min，离心管内的液体形成上层无色水相、中层白色蛋白、底层黄色有机相，用试管取上层无色水相备用；
d、RNA沉淀：向上层无色水相内加入0.5ml异戊醇，将试管中的液体轻轻混匀，室温静置10min，使液体中的RNA沉淀在水相中；
e、RNA洗涤：4℃离心处理10000g×10min，舍弃上层无色水相，向剩余沉淀中加入等体积的75％乙醇，轻轻洗涤沉淀；
f、RNA溶解：室温干燥沉淀3min，加入RNA酶溶解沉淀，待沉淀完全溶解后置于-80℃的环境中保存。
实施例二：
RNA提取用溶液，包括以下体积份数的物质：
氯仿：75％；
75％乙醇：10％；
异戊醇：5％；
异硫氰酸胍：5％；
十二烷基硫酸钠：1％；
柠檬酸钠：4％。
其中，异硫氰酸胍的体积摩尔浓度为0.4M；十二烷基硫酸钠的体积摩尔浓度为1M；柠檬酸钠的体积摩尔浓度为0.6M。
本发明的RNA提取方法，包括以下步骤：
a、样本预处理：取100mg生物样本组织置于离心管内，加入2ml本发明的RNA提取用溶液充分匀浆，室温静置5min，使核酸蛋白复合物完全分离；
b、样本振荡处理：再向离心管内加入0.5ml氯仿，振荡20s，然后静置2min；
c、样本离心处理：离心处理10000g×10min，离心管内的液体形成上层无色水相、中层白色蛋白、底层黄色有机相，用试管取上层无色水相备用；
d、RNA沉淀：向上层无色水相内加入0.6ml异戊醇，将试管中的液体轻轻混匀，室温静置12min，使液体中的RNA沉淀在水相中；
e、RNA洗涤：4℃离心处理10000g×10min，舍弃上层无色水相，向剩余沉淀中加入等体积的75％乙醇，轻轻洗涤沉淀；
f、RNA溶解：室温干燥沉淀5min，加入RNA酶溶解沉淀，待沉淀完全溶解后置于-80℃的环境中保存。
使用本发明的RNA提取用溶液能够很方便地从生物组织中提取RNA，并且提取过程简单快速、提纯度高。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.RNA提取用溶液，其特征在于，包括以下体积份数的物质：
氯仿：70～75％；
75％乙醇：10～13％；
异戊醇：2～5％；
异硫氰酸胍：5～8％；
十二烷基硫酸钠：1～2％；
柠檬酸钠：3～5％。
2.根据权利要求1所述的RNA提取用溶液，其特征在于，所述异硫氰酸胍的体积摩尔浓度为0.2～0.4M。
3.根据权利要求1所述的RNA提取用溶液，其特征在于，所述十二烷基硫酸钠的体积摩尔浓度为1～1.5M。
4.根据权利要求1所述的RNA提取用溶液，其特征在于，所述柠檬酸钠的体积摩尔浓度为0.6～0.8M。
5.RNA提取方法，包括以下步骤：
a、样本预处理：取50～100mg生物样本组织置于离心管内，加入1～2ml权利要求1-4任一项所述的RNA提取用溶液充分匀浆，室温静置5min，使核酸蛋白复合物完全分离；
b、样本振荡处理：再向离心管内加入0.2～0.5ml氯仿，振荡15～20s，然后静置2min；
c、样本离心处理：离心处理10000g×10min，离心管内的液体形成上层无色水相、中层白色蛋白、底层黄色有机相，用试管取上层无色水相备用；
d、RNA沉淀：向上层无色水相内加入0.5～0.6ml异戊醇，将试管中的液体轻轻混匀，室温静置10～12min，使液体中的RNA沉淀在水相中；
e、RNA洗涤：4℃离心处理10000g×10min，舍弃上层无色水相，向剩余沉淀中加入等体积的75％乙醇，轻轻洗涤沉淀；
f、RNA溶解：室温干燥沉淀3～5min，加入RNA酶溶解沉淀，待沉淀完全溶解后置于-80℃的环境中保存。
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CN1220995A (zh) * 1997-12-23 1999-06-30 陈铁骅 总rna提取试剂及其制造方法以及提取总rna的方法
CN1699566A (zh) * 2005-05-20 2005-11-23 上海中医药大学 内源基因超量表达技术提高黄芪甲苷含量
CN103013978A (zh) * 2011-09-27 2013-04-03 苏兆明 一种植物rna的提取工艺
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Title
夏世钧，吴中亮: "《分子毒理学基础》", 31 May 2001 *

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