CN106148278A - 一种间充质干细胞培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种间充质干细胞培养基，包括：DMEM培养基，羟乙基淀粉，人血清白蛋白，氯化钾，亚硒酸钠，转铁蛋白，谷胱甘肽，成纤维细胞因子，人胰岛素生长因子，辅酶I，硫辛酸，维生素，抗生素，黄芪多糖，黄精多糖，大枣提取物。本发明提出的间充质干细胞培养基，无动物源成分，不会造成残留或者污染，细胞贴壁性好，增殖速度快，提高培养基的抗病原微生物作用，同时降低了培养基成本。

Description

一种间充质干细胞培养基
技术领域
本发明涉及干细胞培养基技术领域，尤其涉及一种间充质干细胞培养基。
背景技术
人脐带间充质干细胞来源于脐带华通胶，是具有明显可塑性和多向分化潜能的一种成体干细胞，在不同生长因子的调节下，可分化成来源与3个胚层的不同组织细胞类型，如脂肪细胞、成骨细胞、肝样细胞、心肌样细胞、神经胶质细胞、神经元细胞等。
现有技术中的干细胞培养基往往采用胎牛血清，由于使用动物源的胎牛血清，导致干细胞培养基中掺入非人源物质，造成残留或者污染，而且现有的干细胞培养基存在细胞贴壁性差，细胞增殖速度不够理想等问题。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种间充质干细胞培养基，无动物源成分，不会造成残留或者污染，细胞贴壁性好，增殖速度快，提高培养基的抗病原微生物作用，同时降低了培养基成本。
本发明提出的一种间充质干细胞培养基，包括：DMEM培养基，羟乙基淀粉，人血清白蛋白，氯化钾，亚硒酸钠，转铁蛋白，谷胱甘肽，成纤维细胞因子，人胰岛素生长因子，辅酶I，硫辛酸，维生素，抗生素，黄芪多糖，黄精多糖，大枣提取物。
优选地，羟乙基淀粉的浓度为1.5～2g/L，人血清白蛋白的浓度为1.8～2.3g/L，氯化钾的浓度为0.6～1.1g/L，亚硒酸钠的浓度为0.2～0.5μg/L，转铁蛋白的浓度为50～100mg/L，谷胱甘肽的浓度为50～80mg/L，成纤维细胞因子的浓度为10～20μg/L，人胰岛素生长因子的浓度为15～25mg/L，辅酶I的浓度为80～200μg/L，硫辛酸的浓度为15～25mg/L，维生素的浓度为50～100mg/L，抗生素的浓度为2～8g/L，黄芪多糖的浓度为20～40mg/L，黄精多糖的浓度为30～60mg/L，大枣提取物的浓度为40～80mg/L。
优选地，抗生素按重量份包括：庆大霉素2～3份，青霉素4～5份，链霉素1～2份。
优选地，维生素按重量份包括：维生素A 5～8份，维生素E 9～12份，维生素B族13～16份，维生素C 12～15份。
优选地，维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素中的一种或两种以上组合物。
优选地，羟乙基淀粉、人血清白蛋白、转铁蛋白、成纤维细胞因子、人胰岛素生长因子的浓度为1.6×106～1.8×106：1.9×106～2.1×106：6×104～8×104：12～18：1.8×104～2.2×104。
优选地，黄芪多糖、黄精多糖、大枣提取物的浓度比为25～35：40～50：50～70。
优选地，羟乙基淀粉的浓度为1.6～1.8g/L，人血清白蛋白的浓度为1.9～2.1g/L，氯化钾的浓度为0.8～1g/L，亚硒酸钠的浓度为0.3～0.4μg/L，转铁蛋白的浓度为60～80mg/L，谷胱甘肽的浓度为60～70mg/L，成纤维细胞因子的浓度为12～18μg/L，人胰岛素生长因子的浓度为18～22mg/L，辅酶I的浓度为120～160mg/L，硫辛酸的浓度为17～23mg/L，维生素的浓度为70～90mg/L，抗生素的浓度为4～6g/L，黄芪多糖的浓度为25～35mg/L，黄精多糖的浓度为40～50mg/L，大枣提取物的浓度为50～70mg/L。
本发明采用DMEM培养基、羟乙基淀粉、人血清白蛋白、转铁蛋白、谷胱甘肽、成纤维细胞因子、人胰岛素生长因子、辅酶I、硫辛酸和维生素相互配合，能滋养间充质干细胞，促进间充质干细胞保持细胞的活性；其中DMEM培养基、羟乙基淀粉、人血清白蛋白、转铁蛋白、硫辛酸和维生素为间充质干细胞提供营养成分；而谷胱甘肽、辅酶I、硫辛酸和维生素相互配合，可以清理细胞内自由基，保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基，有利于酶活性的发挥，并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶重新恢复活性，降低细胞发生凋亡的概率；成纤维细胞因子、人胰岛素生长因子能使间充质干细胞在增殖的过程中进行缓慢修复，维持细胞活性；羟乙基淀粉、人血清白蛋白、氯化钾、亚硒酸钠、转铁蛋白、谷胱甘肽相互配合，维持细胞的渗透平衡，抗生素可以对可能发生的污染进行预防或者提示已经发生的污染；同时大枣提取物、黄精多糖、黄芪多糖相互配合，替代特殊抗体因子，增强细胞的新陈代谢，促进间充质干细胞快速大量增殖，还能提高培养基的抗病原微生物作用，同时降低了培养基成本。
本发明培养间充质干细胞，使间充质干细胞的贴壁率达到90％以上，死细胞较少，大大提高了细胞的数量。本发明培养间充质干细胞生长至平台期需要49～52h，而现有技术中的培养基最快需要54h，常规干细胞培养基则需要至少66h，由此可知本发明能够提高间充质干细胞的生长速率。同时本发明经流式细胞表型检测，发现本发明所得间充质干细胞与常规培养基所得间充质干细胞的细胞表型无统计学差异。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
本发明提出的一种间充质干细胞培养基，包括：DMEM培养基，羟乙基淀粉，人血清白蛋白，氯化钾，亚硒酸钠，转铁蛋白，谷胱甘肽，成纤维细胞因子，人胰岛素生长因子，辅酶I，硫辛酸，维生素，抗生素，黄芪多糖，黄精多糖，大枣提取物。
实施例2
本发明提出的一种间充质干细胞培养基，包括：DMEM培养基，羟乙基淀粉，人血清白蛋白，氯化钾，亚硒酸钠，转铁蛋白，谷胱甘肽，成纤维细胞因子，人胰岛素生长因子，辅酶I，硫辛酸，维生素，抗生素，黄芪多糖，黄精多糖，大枣提取物。
其中，羟乙基淀粉的浓度为1.5g/L，人血清白蛋白的浓度为2.3g/L，氯化钾的浓度为0.6g/L，亚硒酸钠的浓度为0.5μg/L，转铁蛋白的浓度为50mg/L，谷胱甘肽的浓度为80mg/L，成纤维细胞因子的浓度为10μg/L，人胰岛素生长因子的浓度为25mg/L，辅酶I的浓度为80μg/L，硫辛酸的浓度为25mg/L，维生素的浓度为50mg/L，抗生素的浓度为8g/L，黄芪多糖的浓度为20mg/L，黄精多糖的浓度为60mg/L，大枣提取物的浓度为40mg/L。
实施例3
本发明提出的一种间充质干细胞培养基，包括：DMEM培养基，羟乙基淀粉，人血清白蛋白，氯化钾，亚硒酸钠，转铁蛋白，谷胱甘肽，成纤维细胞因子，人胰岛素生长因子，辅酶I，硫辛酸，维生素，抗生素，黄芪多糖，黄精多糖，大枣提取物。
其中，羟乙基淀粉的浓度为2g/L，人血清白蛋白的浓度为1.8g/L，氯化钾的浓度为1.1g/L，亚硒酸钠的浓度为0.2μg/L，转铁蛋白的浓度为100mg/L，谷胱甘肽的浓度为50mg/L，成纤维细胞因子的浓度为20μg/L，人胰岛素生长因子的浓度为15mg/L，辅酶I的浓度为200μg/L，硫辛酸的浓度为15mg/L，维生素的浓度为100mg/L，抗生素的浓度为2g/L，黄芪多糖的浓度为40mg/L，黄精多糖的浓度为30mg/L，大枣提取物的浓度为80mg/L。
抗生素按重量份包括：庆大霉素2份，青霉素5份，链霉素1份。
维生素按重量份包括：维生素A 8份，维生素E 9份，维生素B族16份，维生素C 12份。维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素的组合物。
实施例4
本发明提出的一种间充质干细胞培养基，包括：DMEM培养基，羟乙基淀粉，人血清白蛋白，氯化钾，亚硒酸钠，转铁蛋白，谷胱甘肽，成纤维细胞因子，人胰岛素生长因子，辅酶I，硫辛酸，维生素，抗生素，黄芪多糖，黄精多糖，大枣提取物。
其中，羟乙基淀粉的浓度为1.6g/L，人血清白蛋白的浓度为2.1g/L，氯化钾的浓度为0.8g/L，亚硒酸钠的浓度为0.4μg/L，转铁蛋白的浓度为60mg/L，谷胱甘肽的浓度为70mg/L，成纤维细胞因子的浓度为12μg/L，人胰岛素生长因子的浓度为22mg/L，辅酶I的浓度为120mg/L，硫辛酸的浓度为23mg/L，维生素的浓度为70mg/L，抗生素的浓度为6g/L，黄芪多糖的浓度为25mg/L，黄精多糖的浓度为50mg/L，大枣提取物的浓度为50mg/L。
抗生素按重量份包括：庆大霉素3份，青霉素4份，链霉素2份。
维生素按重量份包括：维生素A 5份，维生素E 12份，维生素B族13份，维生素C 15份。维生素B族为吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素的组合物。
实施例5
本发明提出的一种间充质干细胞培养基，包括：DMEM培养基，羟乙基淀粉，人血清白蛋白，氯化钾，亚硒酸钠，转铁蛋白，谷胱甘肽，成纤维细胞因子，人胰岛素生长因子，辅酶I，硫辛酸，维生素，抗生素，黄芪多糖，黄精多糖，大枣提取物。
其中，羟乙基淀粉的浓度为1.8g/L，人血清白蛋白的浓度为1.9g/L，氯化钾的浓度为1g/L，亚硒酸钠的浓度为0.3μg/L，转铁蛋白的浓度为80mg/L，谷胱甘肽的浓度为60mg/L，成纤维细胞因子的浓度为18μg/L，人胰岛素生长因子的浓度为18mg/L，辅酶I的浓度为160mg/L，硫辛酸的浓度为17mg/L，维生素的浓度为90mg/L，抗生素的浓度为4g/L，黄芪多糖的浓度为35mg/L，黄精多糖的浓度为40mg/L，大枣提取物的浓度为70mg/L。
抗生素按重量份包括：庆大霉素2.5份，青霉素4.5份，链霉素1.5份。
维生素按重量份包括：维生素A 7份，维生素E 11份，维生素B族15份，维生素C 13份。维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸的组合物。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种间充质干细胞培养基，其特征在于，包括：DMEM培养基，羟乙基淀粉，人血清白蛋白，氯化钾，亚硒酸钠，转铁蛋白，谷胱甘肽，成纤维细胞因子，人胰岛素生长因子，辅酶I，硫辛酸，维生素，抗生素，黄芪多糖，黄精多糖，大枣提取物。
2.根据权利要求1所述间充质干细胞培养基，其特征在于，羟乙基淀粉的浓度为1.5～2g/L，人血清白蛋白的浓度为1.8～2.3g/L，氯化钾的浓度为0.6～1.1g/L，亚硒酸钠的浓度为0.2～0.5μg/L，转铁蛋白的浓度为50～100mg/L，谷胱甘肽的浓度为50～80mg/L，成纤维细胞因子的浓度为10～20μg/L，人胰岛素生长因子的浓度为15～25mg/L，辅酶I的浓度为80～200μg/L，硫辛酸的浓度为15～25mg/L，维生素的浓度为50～100mg/L，抗生素的浓度为2～8g/L，黄芪多糖的浓度为20～40mg/L，黄精多糖的浓度为30～60mg/L，大枣提取物的浓度为40～80mg/L。
3.根据权利要求1或2所述间充质干细胞培养基，其特征在于，抗生素按重量份包括：庆大霉素2～3份，青霉素4～5份，链霉素1～2份。
4.根据权利要求1-3任一项所述间充质干细胞培养基，其特征在于，维生素按重量份包括：维生素A5～8份，维生素E 9～12份，维生素B族13～16份，维生素C 12～15份。
5.根据权利要求1-4任一项所述间充质干细胞培养基，其特征在于，维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素中的一种或两种以上组合物。
6.根据权利要求1-5任一项所述间充质干细胞培养基，其特征在于，羟乙基淀粉、人血清白蛋白、转铁蛋白、成纤维细胞因子、人胰岛素生长因子的浓度为1.6×106～1.8×106：1.9×106～2.1×106：6×104～8×104：12～18：1.8×104～2.2×104。
7.根据权利要求1-6任一项所述间充质干细胞培养基，其特征在于，黄芪多糖、黄精多糖、大枣提取物的浓度比为25～35：40～50：50～70。
8.根据权利要求1-7任一项所述间充质干细胞培养基，其特征在于，羟乙基淀粉的浓度为1.6～1.8g/L，人血清白蛋白的浓度为1.9～2.1g/L，氯化钾的浓度为0.8～1g/L，亚硒酸钠的浓度为0.3～0.4μg/L，转铁蛋白的浓度为60～80mg/L，谷胱甘肽的浓度为60～70mg/L，成纤维细胞因子的浓度为12～18μg/L，人胰岛素生长因子的浓度为18～22mg/L，辅酶I的浓度为120～160mg/L，硫辛酸的浓度为17～23mg/L，维生素的浓度为70～90mg/L，抗生素的浓度为4～6g/L，黄芪多糖的浓度为25～35mg/L，黄精多糖的浓度为40～50mg/L，大枣提取物的浓度为50～70mg/L。
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