CN106222136A - 一种用于脂肪干细胞的培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于脂肪干细胞的培养基，包括RPMI‑1640培养基，还包括：D‑葡萄糖2～2.5g/L，胆固醇30～45mg/L，氯化钾0.5～0.8g/L，亚硒酸钠0.1～0.3μg/L，牛磺酸8～10μg/L，肝素钙10～20μg/L，人血清白蛋白2.2～2.5g/L，血管内皮细胞生长因子20～50mg/L，纤维细胞生长因子3～6mg/L，血小板衍生生长因子40～80mg/L，谷胱甘肽20～40mg/L，维生素50～100mg/L，植物提取物100～200mg/L。本发明无动物源成分，不会造成残留或者污染，细胞贴壁性好，增殖速度快，提高培养基的抗病原微生物作用，同时降低了培养基成本。

Description

一种用于脂肪干细胞的培养基
技术领域
本发明涉及干细胞培养基技术领域，尤其涉及一种用于脂肪干细胞的培养基。
背景技术
现有技术中的脂肪干细胞培养基往往采用胎牛血清，由于使用动物源的胎牛血清，导致干细胞培养基中掺入非人源物质，造成残留或者污染，而且现有的脂肪干细胞培养基存在细胞贴壁性差，细胞增殖速度不够理想等问题。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种用于脂肪干细胞的培养基，无动物源成分，不会造成残留或者污染，细胞贴壁性好，增殖速度快，提高培养基的抗病原微生物作用，同时降低了培养基成本。
本发明提出的一种用于脂肪干细胞的培养基，包括RPMI-1640培养基，还包括：D-葡萄糖2～2.5g/L，胆固醇30～45mg/L，氯化钾0.5～0.8g/L，亚硒酸钠0.1～0.3μg/L，牛磺酸8～10μg/L，肝素钙10～20μg/L，人血清白蛋白2.2～2.5g/L，血管内皮细胞生长因子20～50mg/L，纤维细胞生长因子3～6mg/L，血小板衍生生长因子40～80mg/L，谷胱甘肽20～40mg/L，维生素50～100mg/L，植物提取物100～200mg/L。
优选地，氯化钾、亚硒酸钠、牛磺酸、肝素钙的浓度比为6×105～7×105：0.15～0.25：8.5～9.5：12～16。
优选地，人血清白蛋白、血管内皮细胞生长因子、纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、谷胱甘肽、维生素、植物提取物的浓度比为2300～2400：30～40：4～5：50～70：25～35：60～80：120～180。
优选地，D-葡萄糖2.2～2.4g/L，胆固醇35～40mg/L，氯化钾0.6～0.7g/L，亚硒酸钠0.15～0.25μg/L，牛磺酸8.5～9.5μg/L，肝素钙12～16μg/L，人血清白蛋白2.3～2.4g/L，血管内皮细胞生长因子30～40mg/L，纤维细胞生长因子4～5mg/L，血小板衍生生长因子50～70mg/L，谷胱甘肽25～35mg/L，维生素60～80mg/L，植物提取物120～180mg/L。
优选地，植物提取物按重量份包括：黄连素1～3份，大枣多糖15～17份，薏苡仁多糖4～6份，人参皂苷13～15份，芡实甲醇提取物3～5份。
优选地，维生素按重量份包括：维生素C 16～18份，维生素B族19～21份，维生素E11～13份。
优选地，维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素中的一种或两种以上组合物。
本发明采用RPMI-1640培养基、D-葡萄糖、胆固醇、牛磺酸、肝素钙、人血清白蛋白、血管内皮细胞生长因子、纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、谷胱甘肽、维生素相互配合，能滋养脂肪干细胞，促进脂肪干细胞保持细胞的活性；其中RPMI-1640培养基、D-葡萄糖、胆固醇、人血清白蛋白、血管内皮细胞生长因子、纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、谷胱甘肽、维生素为脂肪干细胞提供营养成分；而谷胱甘肽和维生素相互配合，可以清理细胞内自由基，保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基，有利于酶活性的发挥，并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶重新恢复活性，降低细胞发生凋亡的概率；氯化钾、亚硒酸钠、牛磺酸、肝素钙、人血清白蛋白、血管内皮细胞生长因子、纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子相互配合，维持细胞的渗透平衡；血管内皮细胞生长因子、纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子相互配合，能使脂肪干细胞在增殖的过程中进行缓慢修复，维持细胞活性；同时牛磺酸、谷胱甘肽和植物提取物相互配合，可以部分替代特殊抗体因子，增强细胞的新陈代谢，促进脂肪干细胞快速大量增殖，降低了培养基成本；而采用黄连素、大枣多糖、薏苡仁多糖、人参皂苷、芡实甲醇提取物作为植物提取物，不仅提高培养基的抗病原微生物作用，提高干细胞的存活率，而且进一步提高脂肪干细胞的增殖速度，提高脂肪干细胞的活性。
本发明培养脂肪干细胞，使脂肪干细胞的贴壁率达到92％以上，死细胞较少，大大提高了细胞的数量。本发明培养脂肪干细胞生长至平台期需要49～52h，而现有技术中的培养基最快需要54h，常规干细胞培养基则需要至少66h，由此可知本发明能够提高脂肪干细胞的生长速率。同时本发明经流式细胞表型检测，发现本发明所得脂肪干细胞与常规培养基所得脂肪干细胞的细胞表型无统计学差异。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
本发明提出的一种用于脂肪干细胞的培养基，包括RPMI-1640培养基，还包括：D-葡萄糖2g/L，胆固醇45mg/L，氯化钾0.5g/L，亚硒酸钠0.3μg/L，牛磺酸8μg/L，肝素钙20μg/L，人血清白蛋白2.2g/L，血管内皮细胞生长因子50mg/L，纤维细胞生长因子3mg/L，血小板衍生生长因子80mg/L，谷胱甘肽20mg/L，维生素100mg/L，植物提取物100mg/L。
实施例2
本发明提出的一种用于脂肪干细胞的培养基，包括RPMI-1640培养基，还包括：D-葡萄糖2.5g/L，胆固醇30mg/L，氯化钾0.8g/L，亚硒酸钠0.1μg/L，牛磺酸10μg/L，肝素钙10μg/L，人血清白蛋白2.5g/L，血管内皮细胞生长因子20mg/L，纤维细胞生长因子6mg/L，血小板衍生生长因子40mg/L，谷胱甘肽40mg/L，维生素50mg/L，植物提取物200mg/L。
植物提取物按重量份包括：黄连素1份，大枣多糖17份，薏苡仁多糖4份，人参皂苷15份，芡实甲醇提取物3份。
实施例3
本发明提出的一种用于脂肪干细胞的培养基，包括RPMI-1640培养基，还包括：D-葡萄糖2.4g/L，胆固醇35mg/L，氯化钾0.7g/L，亚硒酸钠0.15μg/L，牛磺酸9.5μg/L，肝素钙12μg/L，人血清白蛋白2.4g/L，血管内皮细胞生长因子30mg/L，纤维细胞生长因子5mg/L，血小板衍生生长因子50mg/L，谷胱甘肽35mg/L，维生素60mg/L，植物提取物180mg/L。
植物提取物按重量份包括：黄连素3份，大枣多糖15份，薏苡仁多糖6份，人参皂苷13份，芡实甲醇提取物5份。
维生素按重量份包括：维生素C 16份，维生素B族21份，维生素E 11份；维生素B族为核黄素、泛酸、氰钴胺、生物素的组合物。
实施例4
本发明提出的一种用于脂肪干细胞的培养基，包括RPMI-1640培养基，还包括：D-葡萄糖2.2g/L，胆固醇40mg/L，氯化钾0.6g/L，亚硒酸钠0.25μg/L，牛磺酸8.5μg/L，肝素钙16μg/L，人血清白蛋白2.3g/L，血管内皮细胞生长因子40mg/L，纤维细胞生长因子4mg/L，血小板衍生生长因子70mg/L，谷胱甘肽25mg/L，维生素80mg/L，植物提取物120mg/L。
植物提取物按重量份包括：黄连素2份，大枣多糖16份，薏苡仁多糖5份，人参皂苷14份，芡实甲醇提取物4份。
维生素按重量份包括：维生素C 18份，维生素B族19份，维生素E 13份；维生素B族为硫胺素、烟酸、吡哆醇、叶酸的组合物。
实施例5
本发明提出的一种用于脂肪干细胞的培养基，包括RPMI-1640培养基，还包括：D-葡萄糖2.2～2.4g/L，胆固醇35～40mg/L，氯化钾0.6～0.7g/L，亚硒酸钠0.15～0.25μg/L，牛磺酸8.5～9.5μg/L，肝素钙12～16μg/L，人血清白蛋白2.3～2.4g/L，血管内皮细胞生长因子30～40mg/L，纤维细胞生长因子4～5mg/L，血小板衍生生长因子50～70mg/L，谷胱甘肽25～35mg/L，维生素60～80mg/L，植物提取物120～180mg/L。
植物提取物按重量份包括：黄连素1.5份，大枣多糖16.5份，薏苡仁多糖4.5份，人参皂苷14.5份，芡实甲醇提取物4.5份。
维生素按重量份包括：维生素C 17份，维生素B族20份，维生素E 12份；维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素中的组合物。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种用于脂肪干细胞的培养基，包括RPMI-1640培养基，其特征在于，还包括：D-葡萄糖2～2.5g/L，胆固醇30～45mg/L，氯化钾0.5～0.8g/L，亚硒酸钠0.1～0.3μg/L，牛磺酸8～10μg/L，肝素钙10～20μg/L，人血清白蛋白2.2～2.5g/L，血管内皮细胞生长因子20～50mg/L，纤维细胞生长因子3～6mg/L，血小板衍生生长因子40～80mg/L，谷胱甘肽20～40mg/L，维生素50～100mg/L，植物提取物100～200mg/L。
2.根据权利要求1所述用于脂肪干细胞的培养基，其特征在于，氯化钾、亚硒酸钠、牛磺酸、肝素钙的浓度比为6×105～7×105：0.15～0.25：8.5～9.5：12～16。
3.根据权利要求1或2所述用于脂肪干细胞的培养基，其特征在于，人血清白蛋白、血管内皮细胞生长因子、纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子、谷胱甘肽、维生素、植物提取物的浓度比为2300～2400：30～40：4～5：50～70：25～35：60～80：120～180。
4.根据权利要求1-3任一项所述用于脂肪干细胞的培养基，其特征在于，D-葡萄糖2.2～2.4g/L，胆固醇35～40mg/L，氯化钾0.6～0.7g/L，亚硒酸钠0.15～0.25μg/L，牛磺酸8.5～9.5μg/L，肝素钙12～16μg/L，人血清白蛋白2.3～2.4g/L，血管内皮细胞生长因子30～40mg/L，纤维细胞生长因子4～5mg/L，血小板衍生生长因子50～70mg/L，谷胱甘肽25～35mg/L，维生素60～80mg/L，植物提取物120～180mg/L。
5.根据权利要求1-4任一项所述用于脂肪干细胞的培养基，其特征在于，植物提取物按重量份包括：黄连素1～3份，大枣多糖15～17份，薏苡仁多糖4～6份，人参皂苷13～15份，芡实甲醇提取物3～5份。
6.根据权利要求1-5任一项所述用于脂肪干细胞的培养基，其特征在于， 维生素按重量份包括：维生素C 16～18份，维生素B族19～21份，维生素E 11～13份。
7.根据权利要求1-6任一项所述用于脂肪干细胞的培养基，其特征在于，维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素中的一种或两种以上组合物。
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