CN106148275A - 一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基，包括：DMEM培养基，海藻糖，转铁蛋白，纤维连接蛋白，生长激素，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷胱甘肽，黄体酮，辅酶Q10，硫辛酸，维生素，白藜芦醇，枸杞多糖，黄精多糖。本发明提出的提高表皮干细胞贴壁性的培养基，细胞贴壁性好，增殖速度快，而且无动物源成分，不会造成残留或者污染，同时能提高培养基的抗病原微生物作用，降低了培养基成本。

Description

一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基
技术领域
本发明涉及干细胞培养基技术领域，尤其涉及一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基。
背景技术
现有技术中的表皮干细胞培养基往往采用胎牛血清，由于使用动物源的胎牛血清，导致干细胞培养基中掺入非人源物质，造成残留或者污染，而且现有的表皮干细胞培养基存在细胞贴壁性差，细胞增殖速度不够理想等问题。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基，细胞贴壁性好，增殖速度快，而且无动物源成分，不会造成残留或者污染，同时能提高培养基的抗病原微生物作用，降低了培养基成本。
本发明提出的一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基，包括：DMEM培养基，海藻糖，转铁蛋白，纤维连接蛋白，生长激素，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷胱甘肽，黄体酮，辅酶Q10，硫辛酸，维生素，白藜芦醇，枸杞多糖，黄精多糖。
优选地，维生素按重量份包括：维生素B族31～33份，维生素C 33～35份，维生素E18～20份。
优选地，维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素中两种以上组合物。
优选地，海藻糖的浓度为3～4g/L，转铁蛋白的浓度为1.5～2.5g/L，纤维连接蛋白的浓度为10～15mg/L，生长激素的浓度为8～13μg/L，氯化钾的浓度为1～1.5g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.2～0.4μg/L，谷氨酰胺的浓度为60～90mg/L，黄体酮的浓度为15～30mg/L，辅酶Q10的浓度为50～70μg/L，硫辛酸的浓度为20～35mg/L，维生素的浓度为80～120mg/L，白藜芦醇的浓度为5～10mg/L，枸杞多糖的浓度为30～60mg/L，黄精多糖的浓度为40～55mg/L。
优选地，海藻糖、转铁蛋白、氯化钾的浓度比为3.2～3.6：1.7～2.1：1.2～1.4。
优选地，硫辛酸、维生素、白藜芦醇、枸杞多糖、黄精多糖的浓度比为25～30：90～110：6～8：40～50：45～50。
优选地，海藻糖的浓度为3.2～3.6g/L，转铁蛋白的浓度为1.7～2.1g/L，纤维连接蛋白的浓度为11～13mg/L，生长激素的浓度为10～12μg/L，氯化钾的浓度为1.2～1.4g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.25～0.35μg/L，谷氨酰胺的浓度为70～80mg/L，黄体酮的浓度为20～25mg/L，辅酶Q10的浓度为55～65μg/L，硫辛酸的浓度为25～30mg/L，维生素的浓度为90～110mg/L，白藜芦醇的浓度为6～8mg/L，枸杞多糖的浓度为40～50mg/L，黄精多糖的浓度为45～50mg/L。
本发明采用DMEM培养基、海藻糖、转铁蛋白、纤维连接蛋白、生长激素、氨基酸螯合硒、谷胱甘肽、辅酶Q10、硫辛酸和维生素相互配合，能滋养表皮干细胞，促进表皮干细胞保持细胞的活性；其中DMEM培养基、海藻糖、转铁蛋白、纤维连接蛋白、硫辛酸和维生素为表皮干细胞提供营养成分；而谷胱甘肽、辅酶Q10、硫辛酸和维生素相互配合，可以清理细胞内自由基，保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基，有利于酶活性的发挥，并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶重新恢复活性，降低细胞发生凋亡的概率；谷胱甘肽、黄体酮、辅酶Q10能使表皮干细胞在增殖的过程中进行缓慢修复，维持细胞活性；海藻糖、转铁蛋白、纤维连接蛋白、氯化钾、氨基酸螯合硒、谷胱甘肽相互配合，维持细胞的渗透平衡；同时生长激素、黄体酮、白藜芦醇、枸杞多糖、黄精多糖相互配合，增强细胞的新陈代谢，促进表皮干细胞快速大量增殖，还能提高培养基的抗病原微生物作用，同时降低了培养基成本。
本发明培养表皮干细胞，使表皮干细胞的贴壁率达到90％以上，死细胞较少，大大提高了细胞的数量。本发明培养表皮干细胞生长至平台期需要48～50h，而现有技术中的培养基最快需要52h，常规干细胞培养基则需要至少60h，由此可知本发明能够提高表皮干细胞的生长速率。同时本发明经流式细胞表型检测，发现本发明所得表皮干细胞与常规培养基所得表皮干细胞的细胞表型无统计学差异。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
本发明提出的一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基，包括：DMEM培养基，海藻糖，转铁蛋白，纤维连接蛋白，生长激素，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷胱甘肽，黄体酮，辅酶Q10，硫辛酸，维生素，白藜芦醇，枸杞多糖，黄精多糖。
实施例2
本发明提出的一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基，包括：DMEM培养基，海藻糖，转铁蛋白，纤维连接蛋白，生长激素，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷胱甘肽，黄体酮，辅酶Q10，硫辛酸，维生素，白藜芦醇，枸杞多糖，黄精多糖。
其中海藻糖的浓度为3g/L，转铁蛋白的浓度为2.5g/L，纤维连接蛋白的浓度为10mg/L，生长激素的浓度为13μg/L，氯化钾的浓度为1g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.4μg/L，谷氨酰胺的浓度为60mg/L，黄体酮的浓度为30mg/L，辅酶Q10的浓度为50μg/L，硫辛酸的浓度为35mg/L，维生素的浓度为80mg/L，白藜芦醇的浓度为10mg/L，枸杞多糖的浓度为30mg/L，黄精多糖的浓度为55mg/L。
实施例3
本发明提出的一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基，包括：DMEM培养基，海藻糖，转铁蛋白，纤维连接蛋白，生长激素，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷胱甘肽，黄体酮，辅酶Q10，硫辛酸，维生素，白藜芦醇，枸杞多糖，黄精多糖。
其中海藻糖的浓度为4g/L，转铁蛋白的浓度为1.5g/L，纤维连接蛋白的浓度为15mg/L，生长激素的浓度为8μg/L，氯化钾的浓度为1.5g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.2μg/L，谷氨酰胺的浓度为90mg/L，黄体酮的浓度为15mg/L，辅酶Q10的浓度为70μg/L，硫辛酸的浓度为20mg/L，维生素的浓度为120mg/L，白藜芦醇的浓度为5mg/L，枸杞多糖的浓度为60mg/L，黄精多糖的浓度为40mg/L。
维生素按重量份包括：维生素B族31份，维生素C 35份，维生素E 18份。维生素B族为吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素的组合物。
实施例4
本发明提出的一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基，包括：DMEM培养基，海藻糖，转铁蛋白，纤维连接蛋白，生长激素，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷胱甘肽，黄体酮，辅酶Q10，硫辛酸，维生素，白藜芦醇，枸杞多糖，黄精多糖。
其中海藻糖的浓度为3.2g/L，转铁蛋白的浓度为2.1g/L，纤维连接蛋白的浓度为11mg/L，生长激素的浓度为12μg/L，氯化钾的浓度为1.2g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.35μg/L，谷氨酰胺的浓度为70mg/L，黄体酮的浓度为25mg/L，辅酶Q10的浓度为55μg/L，硫辛酸的浓度为30mg/L，维生素的浓度为90mg/L，白藜芦醇的浓度为8mg/L，枸杞多糖的浓度为40mg/L，黄精多糖的浓度为50mg/L。
维生素按重量份包括：维生素B族33份，维生素C 33份，维生素E 20份。维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸的组合物。
实施例5
本发明提出的一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基，包括：DMEM培养基，海藻糖，转铁蛋白，纤维连接蛋白，生长激素，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷胱甘肽，黄体酮，辅酶Q10，硫辛酸，维生素，白藜芦醇，枸杞多糖，黄精多糖。
其中海藻糖的浓度为3.6g/L，转铁蛋白的浓度为1.7g/L，纤维连接蛋白的浓度为13mg/L，生长激素的浓度为10μg/L，氯化钾的浓度为1.4g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.25μg/L，谷氨酰胺的浓度为80mg/L，黄体酮的浓度为20mg/L，辅酶Q10的浓度为65μg/L，硫辛酸的浓度为25mg/L，维生素的浓度为110mg/L，白藜芦醇的浓度为6mg/L，枸杞多糖的浓度为50mg/L，黄精多糖的浓度为45mg/L。
维生素按重量份包括：维生素B族32份，维生素C 34份，维生素E 19份。维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素的组合物。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种提高表皮干细胞贴壁性的培养基，其特征在于，包括：DMEM培养基，海藻糖，转铁蛋白，纤维连接蛋白，生长激素，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷胱甘肽，黄体酮，辅酶Q10，硫辛酸，维生素，白藜芦醇，枸杞多糖，黄精多糖。
2.根据权利要求1所述提高表皮干细胞贴壁性的培养基，其特征在于，维生素按重量份包括：维生素B族31～33份，维生素C 33～35份，维生素E 18～20份。
3.根据权利要求1或2所述提高表皮干细胞贴壁性的培养基，其特征在于，维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素中两种以上组合物。
4.根据权利要求1-3任一项所述提高表皮干细胞贴壁性的培养基，其特征在于，海藻糖的浓度为3～4g/L，转铁蛋白的浓度为1.5～2.5g/L，纤维连接蛋白的浓度为10～15mg/L，生长激素的浓度为8～13μg/L，氯化钾的浓度为1～1.5g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.2～0.4μg/L，谷氨酰胺的浓度为60～90mg/L，黄体酮的浓度为15～30mg/L，辅酶Q10的浓度为50～70μg/L，硫辛酸的浓度为20～35mg/L，维生素的浓度为80～120mg/L，白藜芦醇的浓度为5～10mg/L，枸杞多糖的浓度为30～60mg/L，黄精多糖的浓度为40～55mg/L。
5.根据权利要求1-4任一项所述提高表皮干细胞贴壁性的培养基，其特征在于，海藻糖、转铁蛋白、氯化钾的浓度比为3.2～3.6：1.7～2.1：1.2～1.4。
6.根据权利要求1-5任一项所述提高表皮干细胞贴壁性的培养基，其特征在于，硫辛酸、维生素、白藜芦醇、枸杞多糖、黄精多糖的浓度比为25～30：90～110：6～8：40～50：45～50。
7.根据权利要求1-6任一项所述提高表皮干细胞贴壁性的培养基，其特征在于，海藻糖的浓度为3.2～3.6g/L，转铁蛋白的浓度为1.7～2.1g/L，纤维连接蛋白的浓度为11～13mg/L，生长激素的浓度为10～12μg/L，氯化钾的浓度为1.2～1.4g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.25～0.35μg/L，谷氨酰胺的浓度为70～80mg/L，黄体酮的浓度为20～25mg/L，辅酶Q10的浓度为55～65μg/L，硫辛酸的浓度为25～30mg/L，维生素的浓度为90～110mg/L，白藜芦醇的浓度为6～8mg/L，枸杞多糖的浓度为40～50mg/L，黄精多糖的浓度为45～50mg/L。
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