CN106282114A - 一种快速增殖神经干细胞培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速增殖神经干细胞培养基，包括：RPMI‑1640培养基，海藻糖，重组人胰岛素，人胰岛素生长因子，内皮细胞生长因子，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黄体酮，辅酶I，硫辛酸，维生素，黄精多糖，党参多糖，人参皂苷。本发明提出的快速增殖神经干细胞培养基，细胞贴壁性好，增殖速度快，而且无动物源成分，不会造成残留或者污染，同时能提高培养基的抗病原微生物作用，降低了培养基成本。

Description

一种快速增殖神经干细胞培养基
技术领域
本发明涉及干细胞培养基技术领域，尤其涉及一种快速增殖神经干细胞培养基。
背景技术
现有技术中的神经干细胞培养基往往采用胎牛血清，由于使用动物源的胎牛血清，导致干细胞培养基中掺入非人源物质，造成残留或者污染，而且现有的神经干细胞培养基存在细胞贴壁性差，细胞增殖速度不够理想等问题。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种快速增殖神经干细胞培养基，增殖速度快，细胞贴壁性好，而且无动物源成分，不会造成残留或者污染，同时能提高培养基的抗病原微生物作用，降低了培养基成本。
本发明提出的一种快速增殖神经干细胞培养基，包括：RPMI-1640培养基，海藻糖，重组人胰岛素，人胰岛素生长因子，内皮细胞生长因子，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黄体酮，辅酶I，硫辛酸，维生素，黄精多糖，党参多糖，人参皂苷。
优选地，海藻糖的浓度为2.5～3.5g/L，重组人胰岛素的浓度为2～3g/L，人胰岛素生长因子的浓度为20～30mg/L，内皮细胞生长因子的浓度为15～25μg/L，氯化钾的浓度为0.8～1.3g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.4～0.6μg/L，谷氨酰胺的浓度为50～80mg/L，黄体酮的浓度为10～20mg/L，辅酶I的浓度为80～200μg/L，硫辛酸的浓度为15～25mg/L，维生素的浓度为50～100mg/L，黄精多糖的浓度为15～30mg/L，党参多糖的浓度为20～40mg/L，人参皂苷的浓度为30～50mg/L。
优选地，维生素按重量份包括：维生素E 15～17份，维生素C 20～24份，维生素B族23～25份。
优选地，维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素中两种以上组合物。
优选地，重组人胰岛素、人胰岛素生长因子和内皮细胞生长因子的浓度比为2.3×105～2.7×105：2.4×103～2.8×103：2～2.2。
优选地，黄精多糖、党参多糖和人参皂苷的浓度比为20～25：25～35：35～45。
优选地，海藻糖的浓度为2.8～3.2g/L，重组人胰岛素的浓度为2.3～2.7g/L，人胰岛素生长因子的浓度为24～28mg/L，内皮细胞生长因子的浓度为20～22μg/L，氯化钾的浓度为1～1.2g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.45～0.55μg/L，谷氨酰胺的浓度为60～70mg/L，黄体酮的浓度为13～17mg/L，辅酶I的浓度为120～160μg/L，硫辛酸的浓度为18～22mg/L，维生素的浓度为60～80mg/L，黄精多糖的浓度为20～25mg/L，党参多糖的浓度为25～35mg/L，人参皂苷的浓度为35～45mg/L。
本发明采用RPMI-1640培养基、海藻糖、重组人胰岛素、人胰岛素生长因子、内皮细胞生长因子、氨基酸螯合硒、谷氨酰胺、黄体酮、辅酶I、硫辛酸和维生素相互配合，能滋养神经干细胞，促进神经干细胞保持细胞的活性；其中RPMI-1640培养基、海藻糖、重组人胰岛素、人胰岛素生长因子、内皮细胞生长因子、氨基酸螯合硒、硫辛酸和维生素为神经干细胞提供营养成分；而海藻糖、辅酶I、硫辛酸和维生素相互配合，一方面可以在细胞表面能形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质分子不变性失活，从而维持细胞活性，另一方面能保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基，有利于酶活性的发挥，同时加速神经干细胞对营养物质的吸收利用，提高神经干细胞的新陈代谢的速率，从而提高神经干细胞的增殖速率；海藻糖、重组人胰岛素、氯化钾、氨基酸螯合硒、谷氨酰胺相互配合，维持细胞的渗透平衡；人胰岛素生长因子、内皮细胞生长因子、黄精多糖、党参多糖、人参皂苷相互配合，一方面增强细胞的新陈代谢，促进神经干细胞快速大量增殖，另一方面提高培养基的抗病原微生物作用，还能使神经干细胞在增殖的过程中进行缓慢修复，维持细胞活性，同时降低了培养基成本。
本发明培养神经干细胞，使神经干细胞的贴壁率达到90％以上，死细胞较少，大大提高了细胞的数量。本发明培养神经干细胞生长至平台期只需要49～50h，而现有技术中的培养基最快需要52h，常规干细胞培养基则需要至少60h，由此可知本发明能够提高神经干细胞的生长速率。同时本发明经流式细胞表型检测，发现本发明所得神经干细胞与常规培养基所得神经干细胞的细胞表型无统计学差异。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
本发明提出的一种快速增殖神经干细胞培养基，包括：RPMI-1640培养基，海藻糖，重组人胰岛素，人胰岛素生长因子，内皮细胞生长因子，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黄体酮，辅酶I，硫辛酸，维生素，黄精多糖，党参多糖，人参皂苷。
实施例2
本发明提出的一种快速增殖神经干细胞培养基，包括：RPMI-1640培养基，海藻糖，重组人胰岛素，人胰岛素生长因子，内皮细胞生长因子，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黄体酮，辅酶I，硫辛酸，维生素，黄精多糖，党参多糖，人参皂苷。
其中，海藻糖的浓度为2.5g/L，重组人胰岛素的浓度为3g/L，人胰岛素生长因子的浓度为20mg/L，内皮细胞生长因子的浓度为25μg/L，氯化钾的浓度为0.8g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.6μg/L，谷氨酰胺的浓度为50mg/L，黄体酮的浓度为20mg/L，辅酶I的浓度为80μg/L，硫辛酸的浓度为25mg/L，维生素的浓度为50mg/L，黄精多糖的浓度为30mg/L，党参多糖的浓度为20mg/L，人参皂苷的浓度为50mg/L。
实施例3
本发明提出的一种快速增殖神经干细胞培养基，包括：RPMI-1640培养基，海藻糖，重组人胰岛素，人胰岛素生长因子，内皮细胞生长因子，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黄体酮，辅酶I，硫辛酸，维生素，黄精多糖，党参多糖，人参皂苷。
其中，海藻糖的浓度为3.5g/L，重组人胰岛素的浓度为2g/L，人胰岛素生长因子的浓度为30mg/L，内皮细胞生长因子的浓度为15μg/L，氯化钾的浓度为1.3g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.4μg/L，谷氨酰胺的浓度为80mg/L，黄体酮的浓度为10mg/L，辅酶I的浓度为200μg/L，硫辛酸的浓度为15mg/L，维生素的浓度为100mg/L，黄精多糖的浓度为15mg/L，党参多糖的浓度为40mg/L，人参皂苷的浓度为30mg/L。
维生素按重量份包括：维生素E 17份，维生素C 20份，维生素B族25份；维生素B族为核黄素、泛酸、氰钴胺、生物素的组合物。
实施例4
本发明提出的一种快速增殖神经干细胞培养基，包括：RPMI-1640培养基，海藻糖，重组人胰岛素，人胰岛素生长因子，内皮细胞生长因子，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黄体酮，辅酶I，硫辛酸，维生素，黄精多糖，党参多糖，人参皂苷。
其中，海藻糖的浓度为2.8g/L，重组人胰岛素的浓度为2.7g/L，人胰岛素生长因子的浓度为24mg/L，内皮细胞生长因子的浓度为22μg/L，氯化钾的浓度为1g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.55μg/L，谷氨酰胺的浓度为60mg/L，黄体酮的浓度为17mg/L，辅酶I的浓度为120μg/L，硫辛酸的浓度为22mg/L，维生素的浓度为60mg/L，黄精多糖的浓度为25mg/L，党参多糖的浓度为25mg/L，人参皂苷的浓度为45mg/L。
维生素按重量份包括：维生素E 15份，维生素C 24份，维生素B族23份；维生素B族为硫胺素、烟酸、吡哆醇、叶酸的组合物。
实施例5
本发明提出的一种快速增殖神经干细胞培养基，包括：RPMI-1640培养基，海藻糖，重组人胰岛素，人胰岛素生长因子，内皮细胞生长因子，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黄体酮，辅酶I，硫辛酸，维生素，黄精多糖，党参多糖，人参皂苷。
其中，海藻糖的浓度为3.2g/L，重组人胰岛素的浓度为2.3g/L，人胰岛素生长因子的浓度为28mg/L，内皮细胞生长因子的浓度为20μg/L，氯化钾的浓度为1.2g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.45μg/L，谷氨酰胺的浓度为70mg/L，黄体酮的浓度为13mg/L，辅酶I的浓度为160μg/L，硫辛酸的浓度为18mg/L，维生素的浓度为80mg/L，黄精多糖的浓度为20mg/L，党参多糖的浓度为35mg/L，人参皂苷的浓度为35mg/L。
维生素按重量份包括：维生素E 16份，维生素C 22份，维生素B族24份；维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素的组合物。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种快速增殖神经干细胞培养基，其特征在于，包括：RPMI-1640培养基，海藻糖，重组人胰岛素，人胰岛素生长因子，内皮细胞生长因子，氯化钾，氨基酸螯合硒，谷氨酰胺，黄体酮，辅酶I，硫辛酸，维生素，黄精多糖，党参多糖，人参皂苷。
2.根据权利要求1所述快速增殖神经干细胞培养基，其特征在于，海藻糖的浓度为2.5～3.5g/L，重组人胰岛素的浓度为2～3g/L，人胰岛素生长因子的浓度为20～30mg/L，内皮细胞生长因子的浓度为15～25μg/L，氯化钾的浓度为0.8～1.3g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.4～0.6μg/L，谷氨酰胺的浓度为50～80mg/L，黄体酮的浓度为10～20mg/L，辅酶I的浓度为80～200μg/L，硫辛酸的浓度为15～25mg/L，维生素的浓度为50～100mg/L，黄精多糖的浓度为15～30mg/L，党参多糖的浓度为20～40mg/L，人参皂苷的浓度为30～50mg/L。
3.根据权利要求1或2所述快速增殖神经干细胞培养基，其特征在于，维生素按重量份包括：维生素E 15～17份，维生素C 20～24份，维生素B族23～25份。
4.根据权利要求3所述快速增殖神经干细胞培养基，其特征在于，维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素中两种以上组合物。
5.根据权利要求1-4任一项所述快速增殖神经干细胞培养基，其特征在于，重组人胰岛素、人胰岛素生长因子和内皮细胞生长因子的浓度比为2.3×105～2.7×105：2.4×103～2.8×103：2～2.2。
6.根据权利要求1-5任一项所述快速增殖神经干细胞培养基，其特征在于，黄精多糖、党参多糖和人参皂苷的浓度比为20～25：25～35：35～45。
7.根据权利要求1-6任一项所述快速增殖神经干细胞培养基，其特征在于，海藻糖的浓度为2.8～3.2g/L，重组人胰岛素的浓度为2.3～2.7g/L，人胰岛素生长因子的浓度为24～28mg/L，内皮细胞生长因子的浓度为20～22μg/L，氯化钾的浓度为1～1.2g/L，氨基酸螯合硒的浓度为0.45～0.55μg/L，谷氨酰胺的浓度为60～70mg/L，黄体酮的浓度为13～17mg/L，辅酶I的浓度为120～160μg/L，硫辛酸的浓度为18～22mg/L，维生素的浓度为60～80mg/L，黄精多糖的浓度为20～25mg/L，党参多糖的浓度为25～35mg/L，人参皂苷的浓度为35～45mg/L。
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