CN106138101B - 一种鸡胚胎提取物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种鸡胚胎提取物的制备方法。本发明将鸡胚胎用醇液进行渗漉提取，生产工艺比较简单，既克服了高温提取破坏有效成分的缺点，又克服了以往工艺复杂、低温操作不易控制，设备要求高的缺点。所述鸡胚胎提取物可用于中药组方或单独使用，本发明的提取物用于抗疲劳、提高免疫力，具有生物利用度高，适合规模化大生产的优点。

Description

一种鸡胚胎提取物的制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种鸡胚胎提取物的制备方法。
背景技术
鸡胚胎是受精的鸡蛋，通过人工或鸡本身孵化培育出来的未孵化出小鸡之前的一种动物胚胎。鸡胚胎在血管全部形成后，呈现似肉非肉，似蛋非蛋的状态，具有丰富的营养物质，自古以来被称为“大众的补养品”，其含有丰富的蛋白质、十八种氨基酸、多种微量元素。
近年来人们对鸡胚胎或鸡胚胎素多有研究，中国发明专利CN1226401A，申请号为98100528.4，发明名称为“‘凤凰胎’保健食品及其制作方法”中就公开了一种活的胚胎龄为7～9日的鸡胚胎、蛋黄为主要原料的保健食品，该保健食品是由鸡胚胎、蛋黄加一定比例的蒸馏水和适量盐，搅拌、蒸煮、定量分装、封盖、杀菌、包装而成；中国发明专利CN1324625A，申请号为00107555.1，发明名称为“鸡胚胎精华素的制作方法”中公开了一种鸡胚胎素的制备工艺，该工艺是将鸡胚胎蒸汽提取后加中药制成液体，浓缩后得到精华素。然而上述两种方法均具有高温提取容易破坏鸡胚胎中有效营养成分的缺点。
中国发明专利CN100455294C，专利号为ZL200510017995.3，发明名称为“鸡胚胎素的制备方法”中公开了一种将鸡胚胎低温粉碎，离心，超滤，制备鸡胚胎素的方法，该方法具有工艺复杂、低温操作不易控制和设备要求高的缺点。
发明内容
为解决上述已有工艺中存在的问题，本发明提供了一种鸡胚胎提取物的制备方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种鸡胚胎提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)鸡胚胎去壳；
(2)将去壳的鸡胚胎干燥，进行粉碎；
(3)粉碎的鸡胚胎加醇进行渗漉，收集渗漉液，渗漉液回收醇液并浓缩；
(4)浓缩的渗漉液加白陶土静置，滤过；
(5)白陶土滤过的滤液加活性炭放置，滤过。
作为优选，所述步骤(2)中将去壳的鸡胚胎粉碎至20～80目。
作为优选，所述步骤(3)中粉碎的鸡胚胎加乙醇浸泡，乙醇的体积比为70％。
作为优选，所述步骤(3)中粉碎的鸡胚胎加醇浸泡的时间5～10天。
作为优选，所述步骤(3)中粉碎的鸡胚胎加醇浸泡，然后按照每公斤鸡胚胎加2～10升醇液进行渗漉。
作为优选，所述步骤(3)中粉碎的鸡胚胎加醇浸泡，进行渗漉时渗漉液的流速为每公斤鸡胚胎1～10毫升/分钟。
作为优选，所述步骤(3)中渗漉液回收醇液并浓缩时，采用真空减压浓缩，真空度控制在-0.02～-0.10Mpa，浓缩温度70℃～90℃，回收醇至无醇味，同时渗漉液在80℃测量时，相对密度为0.80～1.50。
作为优选，所述步骤(4)中将浓缩的渗漉液称重，得到重量A，边搅拌边加入60～80℃纯化水，直至总重量达到1.2～3.0倍A重量，得到重量B，搅拌均匀，加入0.02～0.20倍B重量的白陶土，充分搅匀，使渗漉液温度降至1～4℃，保温静置，除去渗漉液表面的悬浮物，过滤至澄清。
作为优选，所述步骤(5)中将白陶土滤过的滤液称重，得到重量C，加入C重量0.5％～5％已活化好的活性炭，充分搅拌，煮沸，然后降温，过滤至澄清。
作为优选，所述鸡胚胎提取物添加医学上的常规辅料制成片剂或胶囊或口服液。
本发明的有益效果为：
(1)本发明将鸡胚胎用醇液进行渗漉提取，生产工艺比较简单，既克服了高温提取破坏有效成分的缺点，又克服了以往工艺复杂、低温操作不易控制，设备要求高的缺点。本发明保留了鸡胚胎的有效成分，同时也适合大批量工业生产。
(2)本发明用白陶土和活性炭对鸡胚胎渗漉液进行除杂、除异味，使制得的鸡胚胎提取物杂质含量少，而且无异味，服用口感较佳。
(3)本发明一种鸡胚胎提取物的制备方法制得的鸡胚胎提取物保留了鸡胚胎中的各类生物活性物质，各类营养物质也得到有效提取，生物利用度高，具有抗疲劳、提高免疫力、补气血的功效，可单独使用，也可应用于中药组方、保健品或化妆品领域。
附图说明
附图1为空白对照色谱，图中1为乙醇空白对照溶液、2为鸡胚胎提取物溶液、3为鸭胚胎提取物溶液；
附图2为雏凤精口服液鉴别色谱，图中1为乙醇空白对照溶液、2为鸡胚胎提取物溶液、3为鸭胚胎提取物溶液，4～6为3个批次雏凤精口服液供试品溶液。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的技术方案做进一步具体说明。
实施例1
一种鸡胚胎提取物的制备方法，包括以下步骤：
a取鸡胚胎，去壳；
b去壳的鸡胚胎，干燥，用粉碎机，进行粉碎，得到20目粉末1kg；
c鸡胚胎粗粉放入拌药槽内，加入70％乙醇搅拌，充分润湿，装入提取罐内，然后加入70％乙醇至浸没粗粉表面，浸泡5昼夜后，以每公斤粗粉1毫升/分钟的流速渗漉，共用70％乙醇2升进行渗滤。收集渗滤液至储罐内，合并后放置浓缩器内，真空减压浓缩，真空度控制在-0.02～-0.04Mpa，浓缩温度70℃～80℃，回收乙醇至无醇味，渗漉液在80℃测量时，相对密度为0.80～1.00；
d将浓缩的渗漉液称重，得到0.18kg，至于储罐中，边搅拌边加入60℃纯化水，直至总重量达到0.20kg，搅拌均匀，加入4g白陶土，充分搅匀，使药液温度降至1℃，保温静置8小时，除去药液表面的悬浮物，过滤至澄清；
e白陶土滤过的滤液，称重，得到重量0.18kg，加入1g已活化好的767型针用活性炭，充分搅拌，放入罐内，煮沸5分钟，降温至45～50℃，过滤至澄清。
实施例2一种鸡胚胎提取物的制备方法：
a取鸡胚胎，去壳；
b去壳的鸡胚胎，干燥，用粉碎机，进行粉碎，得到80目粉末1kg；
c鸡胚胎粗粉放入拌药槽内，加入70％乙醇搅拌，充分润湿，装入提取罐内，然后加入70％乙醇至浸没粗粉表面，浸泡10昼夜后，以每公斤粗粉10毫升/分钟的流速渗漉，共用70％乙醇10升进行渗滤。收集渗滤液至储罐内，合并后放置浓缩器内，真空减压浓缩，真空度控制在-0.06～-0.10Mpa，浓缩温度80℃～90℃，回收乙醇至无醇味，渗漉液在80℃测量时，相对密度为1.20～1.50；
d将浓缩的渗漉液称重，得到0.87kg，至于储罐中，边搅拌边加入80℃纯化水，直至总重量达到2.60kg，搅拌均匀，加入520g白陶土，充分搅匀，使药液温度降至4℃，保温静置24小时，除去药液表面的悬浮物，过滤至澄清；
e白陶土滤过的滤液，称重，得到重量2kg，加入100g已活化好的767型针用活性炭，充分搅拌，放入罐内，煮沸20分钟，降温至45～50℃，过滤至澄清。
实施例3一种鸡胚胎提取物的制备方法：
a取鸡胚胎，去壳；
b去壳的鸡胚胎，干燥，用粉碎机，进行粉碎，得到60目粉末1kg；
c鸡胚胎粗粉放入拌药槽内，加入70％乙醇搅拌，充分润湿，装入提取罐内，然后加入70％乙醇至浸没粗粉表面，浸泡8昼夜后，以每公斤粗粉5毫升/分钟的流速渗漉，共用70％乙醇5升进行渗滤。收集渗滤液至储罐内，合并后放置浓缩器内，真空减压浓缩，真空度控制在-0.04～-0.08Mpa，浓缩温度75℃～85℃，回收乙醇至无醇味，渗漉液在80℃测量时，相对密度为1.00～1.20；
d将浓缩的渗漉液称重，得到0.44kg，至于储罐中，边搅拌边加入70℃纯化水，直至总重量达到0.88kg，搅拌均匀，加入88g白陶土，充分搅匀，使药液温度降至2℃，保温静置12小时，除去药液表面的悬浮物，过滤至澄清；
e白陶土滤过的滤液，称重，得到重量0.6kg，加入15g已活化好的767型针用活性炭，充分搅拌，放入罐内，煮沸10分钟，降温至45～50℃，过滤至澄清。
本发明实施例1～3所制得的鸡胚胎提取物的质量标准和各种营养成分含量指标：
表1.所得鸡胚胎提取物的重金属含量测试结果
(按照2015年版《中国药典》第四部通则2321项下方法测定)
项目 实施例1 实施例2 实施例3
铅 ＜10ppm ＜10ppm ＜10ppm
镉 ＜10ppm ＜10ppm ＜10ppm
砷 ＜10ppm ＜10ppm ＜10ppm
铜 ＜10ppm ＜10ppm ＜10ppm
汞 ＜10ppm ＜10ppm ＜10ppm
由表1可以看出，本发明实施例所制得的鸡胚胎提取物的重金属含量较低，符合国家安全标准规定，可以安全食用。
表2.所得鸡胚胎提取物的微生物指标
项目 实施例1 实施例2 实施例3
菌落总数 ≤20cfu/ml ≤20cfu/ml ≤20cfu/ml
大肠菌群 未检出 未检出 未检出
由表2可以看出，本发明实施例所得鸡胚胎提取物的微生物指标符合规定，可以安全食用。
表3.所得鸡胚胎提取物的必需氨基酸含量(每百克含量)
表4.所得鸡胚胎提取物的矿物质及微量元素含量
表5.所得鸡胚胎提取物的维生素含量(每百克中的含量)
由表3、表4、表5可以看出，本发明一种鸡胚胎提取物的制备方法制得的鸡胚胎提取物，保留了鸡胚胎中的有效成分，各类营养物质也得到了有效提取，生物利用度高，用本发明的方法制得的鸡胚胎提取物中富含丰富的氨基酸、维生素、矿物质和微量元素，具有较高的营养价值。
与其他方法相比，用本发明的方法制得的鸡胚胎提取物中的氨基酸、维生素、矿物质和微量元素的含量都有一定的提高。本发明一种鸡胚胎提取物的制备方法将鸡胚胎用醇液进行渗漉提取，把鸡胚胎中的氨基酸、微量元素等营养成分有效提取的同时，也保留了鸡胚胎中的各类生物活性物质，使得某些活性蛋白的含量得到了提高。本发明既克服了高温提取破坏有效成分的缺点，又克服了以往工艺复杂、低温操作不易控制，设备要求高的缺点，本发明保留了鸡胚胎的有效成分，同时也适合大批量工业生产。
本发明实施例所制得的鸡胚胎提取物的感官指标：
邀请50名专业人员(按照食品感官评定方法选取)进行感官品评，根据滋味和气味、杂质含量、风味与整体口感等标准，对本发明所制得的鸡胚胎提取物进行感官评价，评价表明本发明所制得的鸡胚胎提取物无动物的腥味，杂质含量少，而且无异味，服用口感较佳。说明本发明采用白陶土和活性炭对鸡胚胎渗漉液进行除杂、除异味的方法，使制得的鸡胚胎提取物中的杂质和异味得到有效的去除。
本发明实施例1所制得的鸡胚胎提取物的医疗保健性能测试：
对免疫功能低下小鼠免疫器官重量的影响：取昆明种小鼠24只，雌雄各半，体重15～19g，随机分为三组，第一组小鼠每日以5.0g/kg剂量灌服鸡胚胎素提取物(实施例1制备的鸡胚胎素提取物组)，第二组(模型组)和第三组(正常组)小鼠均灌服等体积生理盐水，连续灌胃15天，在灌服鸡胚胎素第10天开始，第一、二组小鼠腹腔注射60mg/ml环磷酰胺(Cy)，连续4天，第三组小鼠同途径注射等量生理盐水作为空白对照。于最后一天灌胃和注射Cy2小时后，处死动物，称体重，迅速剖取胸腺、脾脏组织，用滤纸吸去其表面附着的血液，立即在精密扭力天平上称其湿重，详细结果参见表6。
表6鸡胚胎素提取物对小鼠免疫器官重量的影响(x±s)(n＝8)
组别 胸腺指数(mg/10g) 脾指数(mg/10g)
第一组 19.89±2.12** 48.24±5.85**
第二组 12.87±1.44 31.01±5.02
第三组 20.88±2.49 49.86±6.73
与第二组比较：**P＜0.01
从表6可知，第一组与第二组比较，其胸腺指数和脾指数明显升高(P＜0.01，P＜0.01)，说明用本发明的方法所制备的鸡胚胎提取物对于环磷酰胺造成的免疫器官重量及其免疫功能下降具有明显的改善作用。通过该方法制备的鸡胚胎提取物具有一定的活性。
对血虚模型小鼠红细胞及血红蛋白的影响：取昆明种小鼠24只，雌雄各半，体重15～19g，随机分为两组，先测出各鼠给药前红细胞(RBC)及血红蛋白(Hb)，然后尾部放血法造成失血性血虚模型(RBC及Hb均明显低于正常值)后，第一组每天灌喂本发明实施例1制得的鸡胚胎提取物，第二组每天灌喂生理盐水，连续给药14天，末次给药2小时后，尾部采血测RBC及Hb值，详细结果参见表7。
表7鸡胚胎素提取物对小鼠RBC及Hb的影响(x±s)(n＝10)
组别 RBC增值(万/mm<sup>3</sup>) Hb增值(g％)
第一组 398.27±37.78** 5.03±0.63**
第二组 220.73±39.23 3.21±0.47
与第二组比较：**P＜0.01
由表7可以看出，第一组服用本发明所得的鸡胚胎提取物的小鼠的RBC及Hb值明显高于第二组，说明本发明所得的鸡胚胎提取物具有较好的补血作用。
鉴别本发明与鸭胚胎提取物、含本发明提取物的雏凤精口服液的方法：
取雏凤精口服液10ml，加乙醇溶液10ml稀释，作为供试品溶液。另分别取本发明样品、按照实施例1制备的鸭胚胎提取物样品冷冻，粉碎，取约3g，加乙醇溶液150ml，滤过，滤液浓缩至20ml，作为鸡胚胎对照溶液和鸭胚胎对照溶液。乙醇溶液为空白对照。照薄层色谱法(2015年版四部通则0502)试验，吸取上述四种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰乙酸-水(4:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1％茚三酮乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照样品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，色谱分别见附图1、附图2。
由附图1可知，鸡胚胎提取物和鸭胚胎提取物都含有氨基酸，但鸡胚胎提取物氨基酸斑点明显比鸭胚胎提取物斑点清晰，鸭胚胎提取物斑点非常不清晰，仅隐约可见，由斑点颜色深浅可以看出鸡胚胎提取物比鸭胚胎提取物氨基酸含量高；由附图2可知，雏凤精口服液样品可以鉴别出鸡胚胎提取物，而不是鸭胚胎提取物，因此可以避免生产厂家使用廉价的鸭胚胎替代鸡胚胎，可以用于防伪。
本发明实施例所得的鸡胚胎提取物的常规制剂为：
(1)片剂：以本发明所得鸡胚胎提取物为主料，辅以有关片剂常规辅料，每片含鸡胚胎提取物0.2～0.7g。
(2)胶囊：以本发明所得鸡胚胎提取物为主料，辅以有关胶囊剂常规辅料，每粒胶囊含鸡胚胎提取物0.2～0.7g。
(3)软胶囊：以本发明所得鸡胚胎提取物为主料，辅以不饱和植物油和有关软胶囊剂常规辅料，每粒软胶囊含鸡胚胎提取物0.2～0.7g。
(4)口服液：以本发明所得鸡胚胎提取物为主料，辅以防腐剂等其他辅料，配置成200～700mg：10ml/瓶浓度的口服液。

Claims (7)

1.一种鸡胚胎提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)鸡胚胎去壳；
(2)将去壳的鸡胚胎干燥，进行粉碎；
(3)粉碎的鸡胚胎加乙醇进行浸泡、渗漉，浸泡的时间5～10天，然后按照每公斤鸡胚胎加2～10升乙醇液进行渗漉，乙醇的体积比为70％，收集渗漉液，渗漉液回收乙醇液并浓缩；
(4)浓缩的渗漉液加白陶土静置，滤过；
(5)白陶土滤过的滤液加活性炭放置，滤过。
2.根据权利要求1所述的鸡胚胎提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中将去壳的鸡胚胎粉碎至20～80目。
3.根据权利要求1或2所述的鸡胚胎提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中粉碎的鸡胚胎加乙醇浸泡，进行渗漉时渗漉液的流速为每公斤鸡胚胎1～10毫升/分钟。
4.根据权利要求1或2所述的鸡胚胎提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中渗漉液回收乙醇液并浓缩时，采用真空减压浓缩，真空度控制在-0.02～-0.10Mpa，浓缩温度70℃～90℃，回收乙醇至无乙醇味，同时渗漉液在80℃测量时，相对密度为0.80～1.50。
5.根据权利要求1或2所述的鸡胚胎提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中将浓缩的渗漉液称重，得到重量A，边搅拌边加入60～80℃纯化水，直至总重量达到1.2～3.0倍A重量，得到重量B，搅拌均匀，加入0.02～0.20倍B重量的白陶土，充分搅匀，使渗漉液温度降至1～4℃，保温静置，除去渗漉液表面的悬浮物，过滤至澄清。
6.根据权利要求1或2所述的鸡胚胎提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中将白陶土滤过的滤液称重，得到重量C，加入C重量0.5％～5％已活化好的活性炭，充分搅拌，煮沸，然后降温，过滤至澄清。
7.根据权利要求1或2所述的鸡胚胎提取物的制备方法得到的鸡胚胎提取物添加医学上的常规辅料制成的片剂或胶囊或口服液。
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