CN104274509B

CN104274509B - 含有虫草和杜仲雄花的健康品组合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN104274509B
Application number: CN201410543583.2A
Authority: CN
Inventors: 张耿元; 王保红; 白东跃; 唐湘成
Original assignee: FUZHOU QIANZHENG PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: Anhui Quankang Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2014-10-15
Filing date: 2014-10-15
Publication date: 2018-05-25
Anticipated expiration: 2034-10-15
Also published as: CN104274509A

Abstract

本发明提供含有虫草和杜仲雄花的组合物，虫草和杜仲雄花具有良好的协同增效的作用，所述虫草和杜仲雄花还包括它们的提取物，其中虫草与杜仲雄花是以粉末粒度大于800目、重量比为1：（0.1～10）的比例组合，所述虫草与杜仲雄花以复方制剂的形式存在，并且是药剂学上可以接受的任何药物剂型，或者将虫草与杜仲雄花分别制成单独的制剂，并且将两种单独的制剂包装在同一个药盒中；本发明还提供上述药物组合物的制备方法，以及在制备延缓衰老、调节免疫力、滋补养生、治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用，在制备对脑损伤保护的药物中的应用，在制备降低发生心肌梗死、脑卒中或心血管疾病导致的风险的药物中的应用。

Description

含有虫草和杜仲雄花的健康品组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种滋补养生的健康品组合物，及其制备方法，具体是杜仲雄花和虫草的组合物，以及其制备方法和应用。

背景技术

虫草是指包括冬虫夏草在内的广义的虫草属真菌的总称，虫草真菌属于生物界中真菌界、真菌门、子囊菌亚门、核菌纲、麦角菌目、麦角菌科、虫草属，寄生在昆虫、蛛类、大团囊菌以及麦角菌上并形成子实体，构成了种类繁多的一大类群，在世界范围内分布广泛。虫草分很多种，分别有冬虫夏草、蛹虫草、广东虫草、新疆虫草、分枝虫草、藿克虫草等多种，主要常见品种有蛹虫草、冬虫夏草、广东虫草。

蛹虫草，又名北冬虫夏草、北虫草等，世界性分布天然资源数量很少；冬虫夏草是特指以青藏高原为主产地、中国特有的冬虫夏草。虫草是一种传统的名贵滋补养生的中药材，有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效，中医认为，虫草性味甘平，入肺肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，调节脏腑功能，强壮补虚与平衡调理，益精气，补命门，治诸虚百损，愈病、防病，益寿延年，主治肾虚，阳痿遗精，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，劳咳痰血，自汗盗汗等，是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。

杜仲雄花，杜仲雄花是杜仲雄树开的花，杜仲是雌雄双株的树，杜仲雄花是我国独有的药用花粉资源，弥足珍贵，素有“百草之中，杜仲为贵，杜仲上下，雄花为尊”之美誉，具有强筋骨、抗疲劳、保肝、补肾、通便、安神助眠、降三高（高血脂、高血糖、高血压）、排除毒素、更年期综合症的作用尤为显著。

中国专利申请号201310192959.5、201210372052.2、201010172282.5公开了虫草的一些一些药物组合物。

发明内容

发明人惊喜地发现，虫草和杜仲雄花具有良好的协同增效的作用。本发明的目的是提供一种含有虫草和杜仲雄花的药物组合物，所述虫草和杜仲雄花还包括它们的提取物。

本发明的另一个目的是提供上述药物组合物的制备方法；

本发明还涉及上述药物组合物在药物中的应用、医药用途。

本发明所述的虫草，包括冬虫夏草在内的广义的虫草属真菌的总称，例如蛹虫草、冬虫夏草、广东虫草、新疆虫草、分枝虫草、藿克虫草等，特别的，本发明所述虫草包括蛹虫草、冬虫夏草或广东虫草，或者蛹虫草、冬虫夏草或广东虫草中任意两种的组合,还包括所述虫草的提取物，例如含有虫草素、虫草酸、虫草多糖或虫草腺苷的虫草提取物，或者虫草中的虫草花或虫草蛹。虫草或杜仲雄花通常以完整的干品或者其提取物的粉末形态使用。

本发明组合物包括两种组合方式：

一种组合方式是将虫草与杜仲雄花以复方制剂的形式存在，并且所述药物的剂型是药剂学上可以接受的任何药物剂型。使用相应的药用载体或辅料，采用不同的制备工艺可制成不同的复方药物制剂。应当理解的，复方制剂是指将虫草与杜仲雄花作为药物活性成份而制成单独的制剂，可以是药剂学上能够接受的任何药物剂型，优选口服制剂，例如片剂(包括口含片、咀嚼片、分散片、肠溶片、口腔崩解片、泡腾片、双层片，等)、硬胶囊剂(包括肠溶胶囊)、软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸剂(包括肠溶微丸)、滴丸剂、干混悬剂、口服溶液剂、干糖浆剂、散剂、口服混悬液、以及口服的速释或缓释或控释等剂型。特别地,按本领域已知方法制备,优选用于制备药剂学上使用的片剂(包括口含片、咀嚼片、分散片、缓控释片、肠溶片、泡腾片、口腔崩解片、异型片、双层片)、胶囊剂(包括胃溶、肠溶、缓释胶囊)、口服溶液剂、口服用粉末剂；

另一种组合方式是将虫草与杜仲雄花分别制成单独的制剂,在使用时,患者可以先后依次用药,也可以将分开的虫草的制剂与杜仲雄花的制剂混合后同时用药,以最终达到使用本发明所述的组合药物的目的,必须的,为了方便患者用药和表示药物组合的特征,应当将两种单独的制剂包装在同一个药盒中；进一步的，虫草与杜仲雄花是单独制剂时，两者的药物剂型可以相同，也可以是不同的，如虫草片和杜仲雄花片药物组合物、虫草胶囊和杜仲雄花胶囊药物组合物、虫草片和杜仲雄花胶囊药物组合物、虫草胶囊和杜仲雄花片药物组合物，也可以是以上各种剂型的速释、缓释、控释等剂型,例如口服的口含片、分散片、缓释片、缓释胶囊、肠溶片、泡腾片、口腔崩解片、异型片、胞腾颗粒,等等。特别地,按本领域已知方法制备,优选用于制备药剂学上使用的片剂(包括口含片、分散片、缓控释片、咀嚼片、肠溶片、泡腾片、口腔崩解片、异型片)、胶囊剂(包括胃溶、肠溶、缓释胶囊)、口服用粉末剂、口服溶液剂等。

应当理解,可同时或顺次给予本发明组合的化合物，这些组合化合物可以为同一或不同的药物组合物。如果顺次给药，第二种活性组分的延迟给药不应降低该活性成分组合之间的协同治疗作用或者协同的药物作用机理的效果。还应当理解，无论同时或顺次给药，虫草和杜仲雄花都可以以单独或任何组合形式给药，优选将虫草和杜仲雄花同时给药或以单独药剂形式顺次给药，最优选同时给药。

优选以单一组合制剂形式给予本发明的药物组合，例如片剂，片剂中特殊的是双层片，再如胶囊剂、粉剂或颗粒剂、液体制剂、茶剂，等等。

特别的，本发明提供的含有虫草和杜仲雄花的药物组合物，当药物剂型是片剂、胶囊剂、粉剂或颗粒剂等固体制剂时，其中虫草或杜仲雄花是以微粉形式制成的组合物，优选是虫草达到虫破膜、草破壁的细微粉末，和/或者杜仲雄花达到破壁的细微粉末而制成的组合物，例如虫草和杜仲雄花是通过低温气流破壁粉碎技术进行粉碎，其粉末粒度大于800目，优选粉末粒度在800～1000目，乃至优选粉末的粒度大于1000目。

本发明的另一方面提供虫草与杜仲雄花以任意比例的组合，优选以协同作用的药物剂量的比率存在的本发明组合，例如虫草与杜仲雄花以重量比为1：（0.1～10）的比例组合，优选虫草与杜仲雄花以重量比为1：（0.3～3.5）的比例组合，最优选虫草与杜仲雄花以重量比为1：（0.6～1.5）的比例组合，例如优选虫草与杜仲雄花以重量比为1：1的比例组合。

另一方面，本发明提供了含有虫草与杜仲雄花的组合物的制备方法，它包括把虫草和杜仲雄花进行粉碎，使其粉末粒度均大于800目，再将虫草和杜仲雄花粉末混合；例如使用相应的药用载体或辅料，采用不同的制备工艺制成药物上可以接受的任何药物制剂，如片剂(包括口含片、咀嚼片、茶剂、分散片、肠溶片、口腔崩解片、泡腾片、双层片，等)、硬胶囊剂(包括肠溶胶囊)、软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸剂(包括肠溶微丸)、滴丸剂、干混悬剂、口服溶液剂、干糖浆剂、散剂、口服混悬液、以及口服的速释或缓释或控释等剂型。特别地,按本领域已知方法制备,优选用于制备药剂学上使用的片剂(包括口含片、咀嚼片、分散片、缓控释片、肠溶片、泡腾片、口腔崩解片、异型片、双层片)、胶囊剂(包括胃溶、肠溶、缓释胶囊)、口服溶液剂、口服用粉末剂；

或者，本发明提供的含有虫草与杜仲雄花的组合物的制备方法，它包括把虫草和杜仲雄花进行粉碎，使其粉末粒度均大于800目，使用相应的药用载体或辅料，采用不同的制备工艺将虫草与杜仲雄花分别制成单独的制剂,在使用时,患者可以先后依次用药,也可以将分开的虫草的制剂与杜仲雄花的制剂混合后同时用药,以最终达到使用本发明所述的组合药物的目的,必须的,为了方便患者用药和表示药物组合的特征,应当将两种单独的制剂包装在同一个药盒中；应当理解，虫草与杜仲雄花是单独制剂时，两者的药物剂型可以相同，也可以是不同的，如虫草片和杜仲雄花片药物组合物、虫草胶囊和杜仲雄花胶囊药物组合物、虫草片和杜仲雄花胶囊药物组合物、虫草胶囊和杜仲雄花片药物组合物，也可以是以上各种剂型的速释、缓释、控释等剂型,例如口服的口含片、分散片、缓释片、缓释胶囊、肠溶片、泡腾片、口腔崩解片、异型片、胞腾颗粒,等等。特别地,按本领域已知方法制备,优选用于制备药剂学上使用的片剂(包括口含片、分散片、缓控释片、咀嚼片、肠溶片、泡腾片、口腔崩解片、异型片)、胶囊剂(包括胃溶、肠溶、缓释胶囊)、口服溶液剂等。

进一步的，本发明还提供含有虫草与杜仲雄花的组合物用于制备延缓衰老、调节免疫力、体虚病弱人群的滋补养生、治疗或预防心脑血管疾病的药物中的应用，在制备对脑损伤保护的药物中的应用；以及在制备降低发生心肌梗死、脑卒中或心血管疾病导致的风险的药物中的应用。

应当理解的，本发明含有虫草与杜仲雄花的组合物，视需要还可以含有其它药物功效成分，例如人参、维生素C、益生菌、双歧杆菌等营养或有益健康的成等。

具体实施方式在本发明的实施过程中,本领域普通技术人员在不脱离本发明的范围和精神实质的基础上产生的各种实施方案和修饰是显而易见的并且是容易进行的。通过下面的实施例来对本发明的应用等做进一步具体说明,但并不表示实施例对本发明的限制。

实施例1、蛹虫草杜仲雄花片及其制备方法

处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草 40%，

杜仲雄花 26%，

木糖醇 30%，

羧甲基纤维素钠 3%，

天然香料 0.5%，

硬脂酸镁 0.5%；

制备：将蛹虫草、杜仲雄花、木糖醇、羧甲基纤维素钠分别采用低温气流粉碎技术粉碎达1000目，等量递增混合均匀，将天然香料溶解于纯化水，湿法制粒，干燥,整粒后加入硬脂酸镁混匀,压片，即得蛹虫草杜仲雄花片。用于口腔含服或咀嚼食用，或者吞服。

实施例2、蛹虫草杜仲雄花提取物片及其制备方法

处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草提取物 40%，

杜仲雄花提取物 40%，

微晶纤维素 10%，

预胶化淀粉 8%，

交联羧甲基纤维素钠 1%，

硬脂酸镁 1%；

制备：将蛹虫草提取物、杜仲雄花提取物、微晶纤维素、预胶化淀粉、羧甲基纤维素钠分别采用低温气流粉碎技术粉碎达1000目，等量递增混合均匀，用乙醇溶液湿法制粒，干燥,整粒后加入硬脂酸镁混匀,压片，即得蛹虫草杜仲雄花提取物片。用于口腔含服或咀嚼食用，或者吞服。

其中，所述蛹虫草提取物的制法如下：取蛹虫草粉碎，加入蛹虫草重量5～8倍的纯化水浸泡 30 分钟后，煎煮二次，每次1.2～1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50～80℃相对密度为1.1～1.5的稠膏，冷却后加入乙醇使含醇量达50～75%，充分搅拌，静置8～10小时，取上清液，滤过，取滤液，回收乙醇至无醇味，得浓缩液，减压干燥或喷雾干燥得到固体颗粒，粉碎成细粉，即得蛹虫草提取物；

所述杜仲雄花提取物的制法如下：取杜仲雄花粉碎，加入杜仲雄花重量5～9倍的纯化水浸泡30分钟后，煎煮二次，每次1.2～1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50～80℃相对密度为1.1～1.5的清膏，冷却后加入乙醇使含醇量达50～75%，充分搅拌，静置8～10小时，取上清液，滤过，取滤液，回收乙醇至无醇味，得浓缩液，减压干燥或喷雾干燥得到固体颗粒，粉碎成细粉，即得杜仲雄花提取物。

实施例3、蛹虫草杜仲雄花双层片及其制备方法

处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草 40%，

杜仲雄花 26%，

木糖醇 30%，

羧甲基纤维素钠 3%，

天然香料 0.5%，

硬脂酸镁 0.5%；

制备：将蛹虫草、杜仲雄花、木糖醇、羧甲基纤维素钠分别采用低温气流粉碎技术粉碎达1000目；另将蛹虫草、10%的木糖醇、1%的羧甲基纤维素钠等量递增混合均匀，将天然香料溶解于纯化水，湿法制粒，干燥,整粒后加入0.25%硬脂酸镁混匀，待用；另将杜仲雄花、20%的木糖醇、2%的羧甲基纤维素钠等量递增混合均匀，湿法制粒，干燥,整粒后加入0.25%硬脂酸镁混匀；采用双层片压片机，将第一层物料填充、定量、预压,第二层物料填充、定量、主压、出片等工序压制而成，即得蛹虫草杜仲雄花双层片，用于口腔含服或咀嚼食用，或者吞服。

实施例4、蛹虫草杜仲雄花纯粉剂及其制备方法

处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草 55%，

杜仲雄花 45%，

制备：将蛹虫草、杜仲雄花分别采用低温气流粉碎技术粉碎达1000目，混合均匀，真空干燥至水分含量小于5%,灌装于玻璃瓶中，即得蛹虫草杜仲雄花纯粉剂。用于冲服或者泡酒冲服。

实施例5、蛹虫草杜仲雄花胶囊剂及其制备方法

处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草 55%，

杜仲雄花 44.5%，

硬脂酸镁 0.5%，

制备:将蛹虫草、杜仲雄花分别采用低温气流粉碎技术粉碎达1000目，混合均匀，以75%乙醇水溶液湿法制软材,30目筛制粒,烘干,整粒,加入硬脂酸镁,混匀,将所得颗粒灌装至空心胶囊,即得，口服使用。

实施例6、蛹虫草片与杜仲雄花片的组合用药物及其制备方法

蛹虫草片处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草 70%，

木糖醇 28%，

交联羧甲基纤维素钠 1.5%，

硬脂酸镁 0.5%，

蛹虫草片制备方法:取处方量的蛹虫草、木糖醇粉碎过300目筛，以交联羧甲基纤维素钠的水溶液湿法制软材,30目筛制粒,烘干,整粒,加入硬脂酸镁,混匀,压片,即得蛹虫草片；

杜仲雄花片处方量以重量百分比计，含有：

杜仲雄花 55%，

木糖醇 43%，

交联羧甲基纤维素钠 1.5%，

硬脂酸镁 0.5%，

杜仲雄花片制备方法:取处方量的杜仲雄花、木糖醇粉碎过300目筛，以交联羧甲基纤维素钠的水溶液湿法制软材,30目筛制粒,烘干,整粒,加入硬脂酸镁,混匀,压片,即得杜仲雄花片；

将制得的蛹虫草片和杜仲雄花片用铝塑包装,每板铝塑分别包10片蛹虫草片和10片杜仲雄花片片,并将铝塑板装入同一盒中,患者使用时可以将蛹虫草片和杜仲雄花片一起口服,也可以先后依次口服使用。

实施例7、将实施例1至实施例6中的蛹虫草片，改为使用冬虫夏草，其它均不变，即可分别制得冬虫夏草杜仲雄花片、冬虫夏草杜仲雄花提取物片、冬虫夏草杜仲雄花双层片、冬虫夏草杜仲雄花纯粉剂、冬虫夏草杜仲雄花胶囊剂、冬虫夏草片与杜仲雄花片组合用药物。

实施例8、蛹虫草花杜仲雄花茶剂及其制备方法

处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草花 50%，

杜仲雄花 50%，

制备：将蛹虫草花、杜仲雄花分别低温干燥至水分含量小于5%,将蛹虫草花和杜仲雄花的干品混合均匀，灌装于玻璃瓶中，即得蛹虫草花杜仲雄花茶剂。用于开水冲泡饮冲服。

实施例9、蛹虫草杜仲雄花组合物的抗衰老作用

取蛹虫草和杜仲雄花的超微粉末组合物，与蛹虫草超微粉末组、杜仲雄花超微粉末组比较，采用以衰老的自由基和免疫学理论为指导，研究上述各组对衰老小鼠抗氧化酶活性、过氧化脂质水平的影响。

实验动物：自然衰老的昆明种小鼠，14月龄，体重（48±5）g；正常雌性小鼠，2月龄，体重（20±2）g。

方法：正常青年龄小鼠对照组（正常饮食喂饲，不添加喂饲药物粉末）、正常老龄小鼠随机分为对照组（正常饮食喂饲，不添加喂饲药物粉末）、蛹虫草超微粉末组（正常饮食中添加蛹虫草超微粉0.5g/kg喂饲）、杜仲雄花超微粉末组（正常饮食中添加杜仲雄花超微粉0.5g/kg喂饲）、蛹虫草杜仲雄花的超微粉末组合物组（正常饮食中添加蛹虫草和杜仲雄花的超微粉末组合物0.5g/kg喂饲），每组10只，均在正常饮食中喂饲各药物粉末，每日一次，连续给药60d,于末次给药1.5h后，摘眼球取血，分离血清，并取脏器样品，存于-20℃保存备测。制备组织匀浆，以3000r/min离心，上清液经考马斯亮蓝法定量蛋白后，按试剂盒方法测定SOD、GSP-Px的活性及MDA的水平。

统计分析：数据用平均值±标准差，采用SPSS10.0统计软件进行多组间单因素方差分析，组间两两比较采用t检验。

结果：各组对小鼠体内SOD、GSP-Px活性及MDA水平的影响，结果见表1。

表1

**：与老龄对照组比较p<0.01，与蛹虫草组、杜仲雄花组比较p<0.05;

#：与青年对照组比较p<0.05。

由表1可以看出，蛹虫草杜仲雄花组合物组能十分显著提高老龄小鼠血清中SOD活性、提高心脏和肝脏中GSP-Px活性（p<0.01）；也均显著优于蛹虫草组和杜仲雄花组（p<0.05）；并且蛹虫草杜仲雄花混合物组的血清中SOD活性、肝脏中GSP-Px活性显著优于青年对照组，p<0.05。显示出蛹虫草杜仲雄花组合物组良好的抗衰老作用。

实施例10、蛹虫草杜仲雄花组合物的抗疲劳作用

取蛹虫草杜仲雄花的超微粉末组合物，与蛹虫草超微粉末组、杜仲雄花超微粉末组比较，采用小鼠负重游泳时间测定、血清尿素测定、肝糖原含量测定，研究上述各组对小鼠的抗疲劳作用。

实验动物：清洁级昆明种小鼠，体重（20±2）g。

方法：将小鼠随机分为对照组（正常饮食喂饲，不添加喂饲药物粉末）、蛹虫草超微粉末组（正常饮食中添加蛹虫草超微粉0.5g/kg喂饲）、杜仲雄花超微粉末组（正常饮食中添加杜仲雄花超微粉0.5g/kg喂饲）、蛹虫草杜仲雄花的超微粉末组合物组（正常饮食中添加蛹虫草和杜仲雄花的超微粉末组合物0.5g/kg喂饲），均在正常饮食中喂饲各药物粉末，每日一次，连续给药30d,于末次给药40min后，进行各指标测定。

统计方法：采用SPSS11.0统计软件中方差分析方法进行统计，计算均数、标准差、方差齐性检验（F检验）及组间t检验。

（1）负重游泳实验

将小鼠尾部负重5%，置于40×60×36cm水池中游泳，水深30cm,水温25±0.5℃，每池5只小鼠，记录小鼠游泳开始至死亡时间作为小鼠负重游泳时间。

结果：各组对小鼠体力的影响，结果见表2。

表2 蛹虫草杜仲雄花组合物对小鼠负重游泳时间的影响

组别	游泳时间（min）
		对照组	8.09±1.04
蛹虫草超微粉末组	9.85±1.49
		杜仲雄花超微粉末组	10.26±1.75
蛹虫草杜仲雄花的超微粉末组合物组	14.13±1.39 **，#

**：与对照组比较p<0.01，#：与蛹虫草组、杜仲雄花组比较p<0.05。

由表2可以看出，相对于对照组，具有十分显著的差异（p<0.01），相对于蛹虫草组和杜仲雄花组，也具有统计学差异（p<0.05），表明蛹虫草杜仲雄花组合物能显著延长小鼠负重游泳时间。

（2）血清尿素测定

游泳条件为水池40×60×36cm，水深30cm,水温30±0.5℃，每池10只小鼠，小鼠不负重游泳90min后摘眼球取血，用全自动生化分析仪测定血清尿素含量。

结果：各组对小鼠血清尿素的影响，结果见表3。

表3 蛹虫草杜仲雄花组合物对小鼠血清尿素的影响

组别	血清尿素（mmol/L）
		对照组	9.72±1.12
蛹虫草超微粉末组	10.12±1.26
		杜仲雄花超微粉末组	10.09±1.37
蛹虫草杜仲雄花的超微粉末组合物组	8.09±1.15 *

*：与对照组比较p<0.05，与蛹虫草组、杜仲雄花组比较p<0.05。

由表3可以看出，蛹虫草杜仲雄花的超微粉末组合物能显著降低小鼠运动后的血清尿素水平（p<0.05），显示出缓解疲劳作用。

（3）肝糖原测定

颈椎脱臼法处死小鼠，取肝脏，匀浆，用蒽酮法测定肝糖原含量。

结果：各组对小鼠肝糖原的影响，结果见表4。

表4 蛹虫草杜仲雄花组合物对小鼠肝糖原的影响

组别	肝糖原（mg/100g肝组织）
		对照组	3659.7±486.2
蛹虫草超微粉末组	4865.4±502.8 #
		杜仲雄花超微粉末组	4797.6±492.5 #
蛹虫草杜仲雄花的超微粉末组合物组	5329.2±518.6 **

**：与对照组比较p<0.01，与蛹虫草组、杜仲雄花组比较p<0.05;

#：与对照组比较p<0.05。

由表4可以看出，蛹虫草杜仲雄花的超微粉末组合物能显著增加小鼠肝糖原的储备，与对照组比较，差异十分显著（p<0.01），与蛹虫草组、杜仲雄花组比较，具有显著差异（p<0.05）；显示出良好的抗疲劳作用。

实施例11、蛹虫草杜仲雄花组合物的调节免疫功能

取蛹虫草和杜仲雄花的超微粉末组合物，与蛹虫草超微粉末组、杜仲雄花超微粉末组比较，通过测定小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞的吞噬功能，来评价蛹虫草杜仲雄花组合物的调节免疫功能。

实验动物：雌性清洁级ICR小鼠，体重18～22g。

方法：分为对照组（正常饮食喂饲，不添加喂饲药物粉末）、蛹虫草超微粉末组（正常饮食中添加蛹虫草超微粉0.7g/kg喂饲）、杜仲雄花超微粉末组（正常饮食中添加杜仲雄花超微粉0.7g/kg喂饲）、蛹虫草杜仲雄花的超微粉末组合物组（正常饮食中添加蛹虫草和杜仲雄花的超微粉末组合物0.7g/kg喂饲）。

（1）细胞免疫功能测定

采用二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应试验法（耳肿胀法），于饲养的第25天将小鼠腹部皮肤用硫化钡脱毛3×3cm，用二硝基氟苯溶液50µL均匀涂抹致敏，继续饲养5天后用二硝基氟苯溶液10µL均匀涂抹于小鼠右耳两面进行攻击，攻击后24h颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8mm的耳片称重。

动物处死前内眦静脉采血，血清冷冻保存备用；处死后取胸腺、肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，分别称重，并取部分肝脏样品，按重量体积比加生理盐水制备成10％的组织匀浆，离心10min，取组织匀浆上清液，采用白细胞介素-6放射免疫分析药盒测定白介素-6(IL-6)含量。

结果：各组对小鼠细胞免疫的影响，结果见表5。

表5 蛹虫草杜仲雄花组合物对细胞免疫数据测定结果

**：与对照组比较p<0.01；

#：与蛹虫草组、杜仲雄花组比较p<0.05。

由表5可以看出，相对于对照组，耳片重量差和白介素-6含量均具有十分显著的差异（p<0.01），相对于蛹虫草组和杜仲雄花组，也具有统计学差异（p<0.05），表明蛹虫草杜仲雄花组合物能显著增强小鼠的细胞免疫。

（2）体液免疫功能测定

采用血清溶血素实验(血凝法)测定。于饲养的第25天，每只小鼠腹腔注射0.2mL2%(V/V )的绵羊红细胞(SRBC)悬液进行免疫，继续饲养5d后摘除眼球取血于离心管内，放置1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，270g离心10min，收集血清。用生理盐水将血清分别稀释不同倍数，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝试验板内，混匀，于37℃孵育3h，显微镜观察血球凝集程度，计算抗体积数。

结果：各组对小鼠体液免疫的影响，结果见表6。

表6 蛹虫草杜仲雄花组合物对抗体积数测定结果

**：与对照组比较p<0.01；

#：与蛹虫草组、杜仲雄花组比较p<0.05。

由表6可以看出，相对于对照组，抗体积数具有十分显著的差异（p<0.01），相对于蛹虫草组和杜仲雄花组，也具有统计学差异（p<0.05），表明蛹虫草杜仲雄花组合物能显著增强小鼠的体液免疫。

（3）单核-巨噬细胞的吞噬功能测定

采用小鼠碳廓清实验法测定。饲养的第30天，小鼠按每1Og体重0.1mL尾静脉注射稀释4倍的印度墨汁,注入墨汁后立即计时,并于2min、10min时分别从内眦静脉取血20µL，加到2 mL0.1%Na2CO3溶液中，在600nm波长处测定吸光度，以0.1％Na2CO3溶液作空白。小鼠处死后取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，称重。按公式计算吞噬指数。

结果：各组对小鼠单核-巨噬细胞的吞噬功能的影响，结果见表7。

表7 蛹虫草杜仲雄花组合物对单核-巨噬细胞的吞噬功能的测定结果

*：与对照组比较，p<0.05。

由表6可以看出，相对于对照组，单核-巨噬细胞的吞噬功能具有显著的差异（p<0.05），表明蛹虫草杜仲雄花组合物能显著增强小鼠的单核-巨噬细胞的吞噬功能。

实施例12、蛹虫草杜仲雄花组合物的脑保护作用

以慢性应激刺激诱发小鼠脑损伤为模型研究蛹虫草杜仲雄花组合物对小鼠旷场试验行为学及脑组织过氧化的改善作用。

动物及分组：雄性昆明种小鼠，体重20～25g,实验前小鼠自由饮食一周，适应环境。实验室将小鼠随机分为：正常组（正常饮食喂饲，不添加喂饲药物粉末及灌胃）、模型组（小鼠造模成功后，正常饮食喂饲，不添加喂饲药物粉末及灌胃）、蛹虫草超微粉末组（蛹虫草超微粉0.2g/kg灌胃）、杜仲雄花超微粉末组（杜仲雄花超微粉0.2g/kg灌胃）、蛹虫草杜仲雄花的超微粉末组合物组（蛹虫草和杜仲雄花的超微粉末组合物0.2g/kg灌胃）。

模型制备：小鼠自由饮食一周后，除正常组外，其它各组每天均接受一种刺激以复制慢性应激小鼠模型，刺激包括：电击足底、冰水游泳、热应激、高速水平摇晃、夹尾、禁水、禁食和昼夜颠倒；相同刺激因子不得连续出现，持续接受35天。在造模第3周开始灌胃给药，给药时间为每日9:00。除正常对照组外，其余各组连续灌胃给药3周，每天于应激刺激前1h给药。

统计方法：采用SPSS13.0统计软件中方差分析方法进行统计，计算均数、标准差、方差齐性检验（F检验），组间比较采用one-way ANOVA分析。

（1）小鼠旷场实验

采用金属敞箱（50×50×50cm），周壁及箱底均为黑色，底面划分为面积相等的25个方格（10×10cm），观察5min内小鼠的活动情况，包括自主跨格数（方格间穿行次数）、直立次数（两前肢离地1cm以上的次数）。

蛹虫草杜仲雄花组合物对小鼠旷场实验行为学的影响结果见表8。

表8 蛹虫草杜仲雄花组合物对小鼠旷场实验行为学的影响

**：与模型组比较，p<0.001；#:与蛹虫草组、杜仲雄花组比较，p<0.05。

结果：表8数据显示，与正常组相比，模型组小鼠自主跨格数和直立次数显著减少，与模型组相比，蛹虫草杜仲雄花组合物组的小鼠自主跨格数和直立次非常数显著升高（p<0.001），并且蛹虫草杜仲雄花组合物组的小鼠自主跨格数和直立次数显著高于蛹虫草组和杜仲雄花组（p<0.05）。

在慢性应激状态下，机体代谢异常产生大量的自由基，过量的自由基与核酸、蛋白质及脂肪等发生反应，生成过氧化脂质，造成神经细胞损伤，引起神经细胞功能和形态的变化，从而诱发以抑郁症为代表的多种精神障碍性疾病。旷场实验行为学显示出蛹虫草杜仲雄花组合物对慢性应激状态下神经功能和精神状态的显著保护作用。

（2）对小鼠脑组织GSH、MDA含量及SOD活性的影响

小鼠旷场实验结束后，将各组小鼠断头取脑组织，匀浆后用于测定GSH、MDA、含量及SOD活性，严格按照试剂盒规定的方法测定吸收度，按公式换算成SOD的活性以及GSH、MDA的浓度。

蛹虫草杜仲雄花组合物对小鼠脑组织GSH、MDA含量及SOD活性的影响结果见表9。

表9 蛹虫草杜仲雄花组合物对小对小鼠脑组织GSH、MDA含量及SOD活性的影响

**：与模型组比较，p<0.001；#:与蛹虫草组、杜仲雄花组比较，p<0.01。

结果：与正常组相比，模型组小鼠脑组织GSH含量、SOD活性显著降低，MDA含量显著升高；与模型组相比，蛹虫草杜仲雄花组合物组小鼠脑组织GSH含量、SOD活性有非常显著升高（p<0.001），MDA含量有非常显著降低（p<0.001），并且，蛹虫草杜仲雄花组合物组的SOD活性显著高于蛹虫草组（p<0.01）和杜仲雄花组（p<0.01）。表现出蛹虫草杜仲雄花组合物对脑损伤具有优异的保护作用。

根据疾病损伤的自由基理论，蛹虫草杜仲雄花组合物同样可以治疗或预防心脑血管疾病的药物，以及在制备降低发生心肌梗死、脑卒中或心血管疾病导致的风险的药物中的应用。

Claims

1.一种蛹虫草杜仲雄花片，其处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草 40%，

杜仲雄花 26%，

木糖醇 30%，

羧甲基纤维素钠 3%，

天然香料 0.5%，

硬脂酸镁 0.5%；

其制备方法包括：将蛹虫草、杜仲雄花、木糖醇、羧甲基纤维素钠分别采用低温气流粉碎技术粉碎达1000目，等量递增混合均匀，将天然香料溶解于纯化水，湿法制粒，干燥,整粒后加入硬脂酸镁混匀,压片，即得。

2.一种蛹虫草杜仲雄花提取物片，其处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草提取物 40%，

杜仲雄花提取物 40%，

微晶纤维素 10%，

预胶化淀粉 8%，

交联羧甲基纤维素钠 1%，

硬脂酸镁 1%；

其制备方法包括：将蛹虫草提取物、杜仲雄花提取物、微晶纤维素、预胶化淀粉、羧甲基纤维素钠分别采用低温气流粉碎技术粉碎达1000目，等量递增混合均匀，用乙醇溶液湿法制粒，干燥,整粒后加入硬脂酸镁混匀,压片，即得；

3.一种蛹虫草杜仲雄花双层片，其处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草 40%，

杜仲雄花 26%，

木糖醇 30%，

羧甲基纤维素钠 3%，

天然香料 0.5%，

硬脂酸镁 0.5%；

其制备方法包括：将蛹虫草、杜仲雄花、木糖醇、羧甲基纤维素钠分别采用低温气流粉碎技术粉碎达1000目；另将蛹虫草、10%的木糖醇、1%的羧甲基纤维素钠等量递增混合均匀，将天然香料溶解于纯化水，湿法制粒，干燥,整粒后加入0.25%硬脂酸镁混匀，待用；另将杜仲雄花、20%的木糖醇、2%的羧甲基纤维素钠等量递增混合均匀，湿法制粒，干燥,整粒后加入0.25%硬脂酸镁混匀；采用双层片压片机，将第一层物料填充、定量、预压,第二层物料填充、定量、主压、出片等工序压制而成，即得。

4.一种蛹虫草杜仲雄花纯粉剂，其处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草 55%

杜仲雄花 45%

其制备方法包括：将蛹虫草、杜仲雄花分别采用低温气流粉碎技术粉碎达1000目，混合均匀，真空干燥至水分含量小于5%,灌装于玻璃瓶中，即得。

5.一种蛹虫草杜仲雄花胶囊剂，其处方量以重量百分比计，含有：

蛹虫草 55%

杜仲雄花 44.5%

硬脂酸镁 0.5%

其制备方法包括：将蛹虫草、杜仲雄花分别采用低温气流粉碎技术粉碎达1000目，混合均匀，以75%乙醇水溶液湿法制软材,30目筛制粒,烘干,整粒,加入硬脂酸镁,混匀,将所得颗粒灌装至空心胶囊,即得。