CN106135006A - 一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立 - Google Patents

一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立，目前棕榈树树的繁殖以野生自然繁殖为主，织培养快繁方式繁殖育苗鲜见报道。利用种子繁殖实生苗不利于保持优良母树含油率高等优良性状。为了满足能源林造林对棕榈树树苗的巨大需求，本发明以棕榈树树带腋芽茎段为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了棕榈树树离体再植株，建立棕榈树树组织培养快速繁殖技术体系，对促进生物质能源产业快速发展具有重要意义。

Description

一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立
技术领域
本发明涉及到棕榈树繁殖技术领域，尤其是一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立。
背景技术
棕榈树又名拼榈，树高2丈，叶大而圆，上耸，四散开裂，扰如车轮，积聚于树梢，茎呈三枝，四季不调，六、七月开黄白花，八、九月结果实，果实作房如鱼，子呈黑色，棕榈树树皮很坚硬，根部有皮重叠而裹，每皮一匝为一节，三旬采一次，皮又向一长，九、十月采其皮用。一年剥皮二三次，否则树会死。性味：味苦、涩，性平，无毒。主治：涩肠，止泻痢，肠风和白带过多，另可养血。因此,开发和利用优质棕榈树,发展棕榈树能源林产业将是我国生物质能源产业发展进程中的又一新亮点，对构筑我国生物质能源产业的发展格局和促进生物质能源产业快速发展、壮大具有重要意义。目前棕榈树的繁殖以野生自然繁殖为主，织培养快繁方式繁殖育苗鲜见报道。棕榈树是常异花授粉植物,野生实生苗的差异性很大,利用种子繁殖实生苗不利于保持优良母树含油率高等优良性状。棕榈树能源林的建立需要大量种苗,迅速经济地繁殖大量的棕榈树优质种苗成为当前亟待解决的问题。而本发明以棕榈树带腋芽茎段为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了棕榈树离体再植株，建立棕榈树组织培养快速繁殖技术体系，能满足能源林造林对棕榈树苗的巨大需求，同时对促进生物质能源产业快速发展具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立，本发明以棕榈树带腋芽茎段为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了棕榈树离体再植株，建立棕榈树组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的技术解决方案是这样的，一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立，其特征在于包括以下步骤：
步骤（1）外植体采集及消毒：取材前一天下午喷施抗生素溶液，混合均匀喷施在棕榈树的叶子,第二天的下午,选取健壮,无病虫害的植株取材,取材时在幼嫩茎尖先用75%酒精擦洗表面后取下茎尖6个未萌动的腋芽立刻放在含6%抗坏血酸溶液的烧杯里,带回实验室,在流动水下冲洗 5h，用软毛刷7%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗69min,于超净工作台中以9%次氯酸钠溶液浸泡18s，无菌水冲洗6次，再用0.8%升汞溶液消毒18min，无菌水冲洗8次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用;
步骤（2）诱导培养：将经步骤（1）处理后的嫩枝剪成约4cm带腋芽的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养,接种后置于每天光照16小时，光照强度为3500lx，置于培养温度为24℃，空气相对湿度为75%%的条件下培养33天后统计诱导情况;
步骤（3）继代培养：将步骤（2）诱导培养得到丛生芽接种到继代培养基进行丛生芽增殖培养,接种后每天光照16小时，光照强度为3500lx，置于培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养33天后统计发芽数;
步骤（4）生根培养：切取步骤（3）增殖中获得高4cm以上的植株并接种至生根培养基中进行诱导生根,接种后每天光照16小时，光照强度为3500lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养33天后统计生根情况;
步骤（5）炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下 6天后，打开瓶盖 4天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩＝2:2的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗,置于温度控制在 14℃，湿度应保持在 75％左右的大棚内，移栽33天后统计成活率。
步骤（1）所述的抗生素溶液是指由四环素76mg/L+庆大霉素52mg/L+利福平6mg/L+多菌灵6g/L组成的混合液。
步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+1.3mg/LNAA+2.3mg/L ZT+9mg/L 氯化胆碱+3.1g/L AC+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（3）所述的继代培养基为：MS+0.13mg/LTDZ+1.3mg/LIBA+3.5mg/L 6-BA+32g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+3.5mg/LIBA+1.3mg/L IAA+33g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
与现有技术相比本发明的优点是：棕榈树为大戟科棕榈属木本油料植物，其成熟种子胚中的油脂,可用作工业油源和动力油源等,是一种优质的可再生能源。作为一种可再生能源植物，棕榈树得到了广泛的重视。棕榈树能源林的建立需要大量种苗,迅速经济地繁殖大量的棕榈树优质种苗成为当前亟待解决的问题。目前棕榈树的繁殖以野生自然繁殖为主，织培养快繁方式繁殖育苗鲜见报道。棕榈树是常异花授粉植物,野生实生苗的差异性很大,利用种子繁殖实生苗不利于保持优良母树含油率高等优良性状。为了满足能源林造林对棕榈树苗的巨大需求，本发明以棕榈树带腋芽茎段为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽等过程获得了棕榈树离体再植株，建立棕榈树组织培养快速繁殖技术体系，对促进生物质能源产业快速发展具有重要意义。
具体实施方式
下面实施例是对本发明的进一步说明。
实施例1
（1）外植体采集及消毒：取材前一天下午喷施由四环素75mg/L+庆大霉素50mg/L+利福平5mg/L+多菌灵5g/L组成的混合液溶液，混合均匀喷施在棕榈树的叶子正反面。第二天的下午,选取健壮,无病虫害的植株取材。取材时在幼嫩茎尖先用75%酒精擦洗表面后取下茎尖5个未萌动的腋芽立刻放在含3%抗坏血酸溶液的烧杯里,带回实验室。在流水下冲洗 4h，用软毛刷5%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗 70min。于超净工作台中以13%次氯酸钠溶液浸泡48s，无菌水冲洗5次，再用0.3%升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用。
（2）诱导培养：将经步骤（1）处理后的嫩枝剪成约4cm带腋芽的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照15小时，光照强度为2500lx，培养温度为25℃，空气相对湿度为75%的条件下培养35天后诱导率为90%。所述的诱导培养基为：MS+0.6mg/LNAA+6.0mg/L ZT+4mg/L 氯化胆碱+2.5g/L AC+ 28g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.6。
（3）继代培养：将步骤（2）诱导培养得到丛生芽接种到继代培养基进行丛生芽增殖培养。接种后置于每天光照15小时，光照强度为2500lx，培养温度为28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养35天后增殖系数为5.0。所述的继代培养基为：MS+0.08mg/L TDZ+0.4mg/LIBA+2.5mg/L 6-BA+21g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.6。
（4）生根培养：切取步骤（3）增殖中获得高4cm以上的植株并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后每天光照15小时，光照强度为2500lx，培养温度为26℃，空气相对湿度为75%的条件下培养35天生根率为90%。所述的生根培养基为：1/2MS+2.5mg/LIBA+0.8mg/LIAA+21g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.6。
（5）炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下 6天后，打开瓶盖 4天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩＝3:1的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗。温度控制在14℃，湿度应保持在 75％左右的大棚内，移栽33天后成活率90%。
实施例2
（1）外植体采集及消毒：取材前一天下午喷施由四环素76mg/L+庆大霉素51mg/L+利福平6mg/L+多菌灵8g/L组成的混合液溶液，混合均匀喷施在棕榈树的叶子底面。第二天的下午,选取健壮,无病虫害的植株取材。取材时在幼嫩茎尖先用75%酒精擦洗表面后取下茎尖6个未萌动的腋芽立刻放在含1%抗坏血酸溶液的烧杯里,带回实验室。在流水下冲洗 5h，用软毛刷5%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗 93min。于超净工作台中以14%次氯酸钠溶液浸泡50s，无菌水冲洗5次，再用0.1%升汞溶液消毒10min，无菌水冲洗6次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用。
（2）诱导培养：将经步骤（1）处理后的嫩枝剪成约4cm带腋芽的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照17小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为26℃，空气相对湿度为75%的条件下培养33天后诱导率为90%。所述的诱导培养基为：MS+0.8mg/LNAA+7.0mg/L ZT+6mg/L 氯化胆碱+2.0g/L AC+ 33g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.8。
（3）继代培养：将步骤（2）诱导培养得到丛生芽接种到继代培养基进行丛生芽增殖培养。接种后置于每天光照15小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为26℃，空气相对湿度为75%的条件下培养33天后增殖系数为5.5。所述的继代培养基为：MS+0.3mg/LTDZ+0.7mg/LIBA+3.5mg/L 6-BA+26g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。
（4）生根培养：切取步骤（3）增殖中获得高4cm以上的植株并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后置于每天光照15小时，光照强度为3500lx，置于培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养33天生根率为92%。所述的生根培养基为：1/2MS+5.0mg/LIBA+0.9mg/LIAA+21g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。
（5）炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下 6天后，打开瓶盖 5天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩＝2:2的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗。置于温度控制在 14℃，湿度应保持在 75％左右的大棚内，移栽35天后成活率94%。

Claims (5)

1.一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立，其特征在于包括以下步骤：
步骤（1）外植体采集及消毒：取材前一天下午喷施抗生素溶液，混合均匀喷施在棕榈树的叶子,第二天的下午,选取健壮,无病虫害的植株取材,取材时在幼嫩茎尖先用75%酒精擦洗表面后取下茎尖6个未萌动的腋芽立刻放在含6%抗坏血酸溶液的烧杯里,带回实验室,在流动水下冲洗 5h，用软毛刷7%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗69min,于超净工作台中以9%次氯酸钠溶液浸泡18s，无菌水冲洗6次，再用0.8%升汞溶液消毒18min，无菌水冲洗8次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用;
步骤（2）诱导培养：将经步骤（1）处理后的嫩枝剪成约4cm带腋芽的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养,接种后置于每天光照16小时，光照强度为3500lx，置于培养温度为24℃，空气相对湿度为75%%的条件下培养33天后统计诱导情况;
步骤（3）继代培养：将步骤（2）诱导培养得到丛生芽接种到继代培养基进行丛生芽增殖培养,接种后每天光照16小时，光照强度为3500lx，置于培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养33天后统计发芽数;
步骤（4）生根培养：切取步骤（3）增殖中获得高4cm以上的植株并接种至生根培养基中进行诱导生根,接种后每天光照16小时，光照强度为3500lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养33天后统计生根情况;
步骤（5）炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下 6天后，打开瓶盖 4天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠岩＝2:2的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗,置于温度控制在 14℃，湿度应保持在 75％左右的大棚内，移栽33天后统计成活率。
2.根据权利要求1所述的一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立，其特征在于步骤（1）所述的抗生素溶液是指由四环素76mg/L+庆大霉素52mg/L+利福平6mg/L+多菌灵6g/L组成的混合液。
3.根据权利要求1所述的一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+1.3mg/LNAA+2.3mg/L ZT+9mg/L 氯化胆碱+3.1g/L AC+31g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
4.根据权利要求1所述的一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立，其特征在于步骤（3）所述的继代培养基为：MS+0.13mg/LTDZ+1.3mg/LIBA+3.5mg/L 6-BA+32g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
5.根据权利要求1所述的一种棕榈树组织培养快繁技术体系的建立，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+3.5mg/LIBA+1.3mg/L IAA+33g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.9。
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