CN106110379A - 一种胶原蛋白海绵的制备方法 - Google Patents

一种胶原蛋白海绵的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括以下步骤：S1：鱼皮的前处理，将鱼皮的鱼鳞和鱼肉除净后一次进行水淋洗，切成，双蒸水浸泡，氯化钠溶液浸泡和双蒸水冲洗；S2：胶原蛋白的提取，将处理好的鱼皮浸泡在胶原蛋白酶溶液中，再经离心，过滤，并合并滤液，即得胶原蛋白溶液；S3：向胶原蛋白溶液中加入饱和的氯化钠溶液进行盐析，并将离心出的沉淀进行透析，即得胶原蛋白凝胶；S4：将胶原蛋白凝胶置于冻干机中，进行预冻，抽真空，解冻，再进行灭菌即得胶原蛋白海绵。本发明提出的制备方法，过程简单，材料易得，设备要求低，胶原蛋白的提取效率高，有效资源浪费少，生产成本低，且冻干操作的温度易达到，冻干效果好。

Description

一种胶原蛋白海绵的制备方法
技术领域
本发明涉及生物医学材料技术领域，尤其涉及一种胶原蛋白海绵的制备方法。
背景技术
胶原蛋白是人体的一种非常重要的蛋白质，主要存在于结缔组织中。它有很强的伸张能力，是韧带和肌腱的主要成份，胶原蛋白也是细胞外基质的主要组成成分。胶原蛋白海绵是主要以胶原蛋白为主的一类生物医用材料，具有止血、修复和填充的作用，如今被广泛应用于手术中。由于胶原蛋白的提取过程较复杂，故胶原蛋白海绵的成本较高，而且胶原蛋白在提取过程中的提取利用率普遍较低，使得许多胶原蛋白损失，造成浪费。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种胶原蛋白海绵的制备方法。
一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括以下步骤：
S1：鱼皮的前处理，将鱼皮的鱼鳞和鱼肉除净，并用水淋洗3～5min，再将鱼皮切成块，浸泡在双蒸水中2min，重复浸泡操作3次，最后使用氯化钠溶液浸泡10～15min后用双蒸水冲洗干净，备用；
S2：胶原蛋白的提取，将胶原蛋白酶溶液的pH值调节为6～7，并将上述处理好的鱼皮浸泡在胶原蛋白酶溶液中8～10小时，将浸泡液进行离心，离心后上清液置于反应器中，下部沉淀进行过滤，并将续滤液与上清液合并，即得胶原蛋白溶液；
S3：向胶原蛋白溶液中加入饱和的氯化钠溶液进行盐析，并将沉淀在高速离心机中进行离心，并将沉淀置于透析袋中进行透析，即得胶原蛋白凝胶；
S4：将胶原蛋白凝胶置于冻干机中，并将温度降低至-30～-40℃，进行预冻，然后开始抽真空，抽真空后迅速将温度升至5～15℃进行解冻2～3小时，将剩余的水分除去，再进行灭菌即得胶原蛋白海绵。
优选的，所述鱼皮为罗非鱼鱼皮、鳕鱼鱼皮和黄花鱼鱼皮中的一种。
优选的，所述双蒸水在使用前进行高温蒸汽灭菌处理，并放冷至室温。
优选的，所述S1步骤中的氯化钠溶液中氯化钠的浓度为0.8%～1.0%。
优选的，所述胶原蛋白酶溶液的浓度为0.1～0.4mg/ml。
优选的，所述S3步骤中的离心速度为10000～14000r/min，离心时间为25～35min。
本发明提出的一种胶原蛋白海绵的制备方法，制备过程简单，使用材料简单易得，设备要求低，且在胶原蛋白提取过程中采用离心、过滤双重处理，提高胶原蛋白溶液的提取率高，有效资源浪费少，降低生产成本，而且冻干操作所需的温度易达到，冻干效果好。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
实施例一
本发明提出的一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括以下步骤：
S1：鱼皮的前处理，将罗非鱼鱼皮的鱼鳞和鱼肉除净，并用水淋洗4min，再将鱼皮切成块，浸泡在高温蒸汽灭菌后的双蒸水中2min，重复浸泡操作3次，最后使用0.9%氯化钠溶液浸泡15min后用高温蒸汽灭菌后的双蒸水冲洗干净，备用；
S2：胶原蛋白的提取，将浓度为0.3mg/ml的胶原蛋白酶溶液的pH值调节为6，并将上述处理好的鱼皮浸泡在胶原蛋白酶溶液中10小时，将浸泡液进行离心，离心后上清液置于反应器中，下部沉淀进行过滤，并将续滤液与上清液合并，即得胶原蛋白溶液；
S3：向胶原蛋白溶液中加入饱和的氯化钠溶液进行盐析，并将沉淀在高速离心机中进行离心，离心速度为12000r/min，离心时间为25min，并将沉淀置于透析袋中进行透析，即得胶原蛋白凝胶；
S4：将胶原蛋白凝胶置于冻干机中，并将温度降低至-35℃，进行预冻，然后开始抽真空，抽真空后迅速将温度升至10℃进行解冻2小时，将剩余的水分除去，再进行灭菌即得胶原蛋白海绵。
实施例二
本发明提出的一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括以下步骤：
S1：鱼皮的前处理，将鳕鱼鱼皮的鱼鳞和鱼肉除净，并用水淋洗5min，再将鱼皮切成块，浸泡在高温蒸汽灭菌后的双蒸水中2min，重复浸泡操作3次，最后使用0.8%氯化钠溶液浸泡15min后用高温蒸汽灭菌后的双蒸水冲洗干净，备用；
S2：胶原蛋白的提取，将浓度为0.1mg/ml的胶原蛋白酶溶液的pH值调节为7，并将上述处理好的鱼皮浸泡在胶原蛋白酶溶液中10小时，将浸泡液进行离心，离心后上清液置于反应器中，下部沉淀进行过滤，并将续滤液与上清液合并，即得胶原蛋白溶液；
S3：向胶原蛋白溶液中加入饱和的氯化钠溶液进行盐析，并将沉淀在高速离心机中进行离心，离心速度为14000r/min，离心时间为30min，并将沉淀置于透析袋中进行透析，即得胶原蛋白凝胶；
S4：将胶原蛋白凝胶置于冻干机中，并将温度降低至-40℃，进行预冻，然后开始抽真空，抽真空后迅速将温度升至15℃进行解冻3小时，将剩余的水分除去，再进行灭菌即得胶原蛋白海绵。
实施例三
本发明提出的一种胶原蛋白海绵的制备方法，包括以下步骤：
S1：鱼皮的前处理，将黄花鱼鱼皮的鱼鳞和鱼肉除净，并用水淋洗3min，再将鱼皮切成块，浸泡在高温蒸汽灭菌后的双蒸水中2min，重复浸泡操作3次，最后使用1.0%氯化钠溶液浸泡10min后用高温蒸汽灭菌后的双蒸水冲洗干净，备用；
S2：胶原蛋白的提取，将浓度为0.4mg/ml的胶原蛋白酶溶液的pH值调节为7，并将上述处理好的鱼皮浸泡在胶原蛋白酶溶液中8小时，将浸泡液进行离心，离心后上清液置于反应器中，下部沉淀进行过滤，并将续滤液与上清液合并，即得胶原蛋白溶液；
S3：向胶原蛋白溶液中加入饱和的氯化钠溶液进行盐析，并将沉淀在高速离心机中进行离心，离心速度为10000r/min，离心时间为35min，并将沉淀置于透析袋中进行透析，即得胶原蛋白凝胶；
S4：将胶原蛋白凝胶置于冻干机中，并将温度降低至-30℃，进行预冻，然后开始抽真空，抽真空后迅速将温度升至5℃进行解冻3小时，将剩余的水分除去，再进行灭菌即得胶原蛋白海绵。
本发明提出的一种胶原蛋白海绵的制备方法，制备过程简单，使用材料简单易得，设备要求低，且在胶原蛋白提取过程中采用离心、过滤双重处理，提高胶原蛋白溶液的提取率高，有效资源浪费少，降低生产成本，而且冻干操作所需的温度易达到，冻干效果好。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：鱼皮的前处理，将鱼皮的鱼鳞和鱼肉除净，并用水淋洗3～5min，再将鱼皮切成块，浸泡在双蒸水中2min，重复浸泡操作3次，最后使用氯化钠溶液浸泡10～15min后用双蒸水冲洗干净，备用；
S2：胶原蛋白的提取，将胶原蛋白酶溶液的pH值调节为6～7，并将上述处理好的鱼皮浸泡在胶原蛋白酶溶液中8～10小时，将浸泡液进行离心，离心后上清液置于反应器中，下部沉淀进行过滤，并将续滤液与上清液合并，即得胶原蛋白溶液；
S3：向胶原蛋白溶液中加入饱和的氯化钠溶液进行盐析，并将沉淀在高速离心机中进行离心，并将沉淀置于透析袋中进行透析，即得胶原蛋白凝胶；
S4：将胶原蛋白凝胶置于冻干机中，并将温度降低至-30～-40℃，进行预冻，然后开始抽真空，抽真空后迅速将温度升至5～15℃进行解冻2～3小时，将剩余的水分除去，再进行灭菌即得胶原蛋白海绵。
2.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，所述鱼皮为罗非鱼鱼皮、鳕鱼鱼皮和黄花鱼鱼皮中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，所述双蒸水在使用前进行高温蒸汽灭菌处理，并放冷至室温。
4.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，所述S1步骤中的氯化钠溶液中氯化钠的浓度为0.8%～1.0%。
5.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，所述胶原蛋白酶溶液的浓度为0.1～0.4mg/ml。
6.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于，所述S3步骤中的离心速度为10000～14000r/min，离心时间为25～35min。
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