CN106103696B - 新颖的拟干酪乳杆菌菌株 - Google Patents

新颖的拟干酪乳杆菌菌株 Download PDF

Info

Publication number
CN106103696B
CN106103696B CN201580014612.9A CN201580014612A CN106103696B CN 106103696 B CN106103696 B CN 106103696B CN 201580014612 A CN201580014612 A CN 201580014612A CN 106103696 B CN106103696 B CN 106103696B
Authority
CN
China
Prior art keywords
activity
present
microorganism
promoting
liver
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201580014612.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106103696A (zh
Inventor
池永武
野田恒行
田尻义人
野口洋树
上田敦史
甲田哲之
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Otsuka Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Publication of CN106103696A publication Critical patent/CN106103696A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106103696B publication Critical patent/CN106103696B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/165—Paracasei
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明的主要目的在于提供一种有效手段，用以促进生物体中(特别是人类体内)的多胺合成。披露了一种具有促进生物体中多胺生产活性的拟干酪乳杆菌。

Description

新颖的拟干酪乳杆菌菌株
技术领域
本发明涉及具有促进生物体中多胺生产活性的新颖的拟干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)菌株(菌株WON0604：FERM BP-11468)，连同其 应用以及相关技术。
背景技术
多胺是具有两个或更多个伯氨基团的脂族烃的通用名称。多胺的典型实 例包括腐胺、亚精胺、精胺等。多胺在所有生物体的细胞内进行合成，并且 参与细胞分化或细胞增殖。除这些活性之外，最近有报道称多胺具有各种有 益的生理活性，包括：抗衰老作用(非专利文献1)、延迟动脉硬化进展的活 性(非专利文献2)、抑制急性及慢性炎症的活性(非专利文献3)、降低中性 脂肪的活性、缓解胰岛素抵抗性的活性、抗肥胖活性、降低胆固醇水平的活 性、提高基础代谢的活性(非专利文献4)、以及抗过敏活性(非专利文献 5)。
所有动物(包括人类)中均会发生多胺生物合成，但是，这种合成能力 会随着老化而降低。因此，为了一生都能享受到多胺所带来的有益生理活 性，有关外部给予或摄取多胺、或者活化生物体内多胺合成能力的探讨一直 在进行着。
迄今，已经提出若干种含有多胺的食物和饮品。例如，专利文献1披露 了含有从各种植物源/动物源的原料中提取的多胺的食物和饮品。预期这类食 物和饮品能促进生物体(特别是人类)中的多胺合成，并且由此提供前述的 各种有益的生理活性，如抗衰老作用、延迟动脉硬化进展的活性、抑制急性 及慢性炎症的活性、降低中性脂肪的活性、缓解胰岛素抵抗性的活性、抗肥 胖活性、降低胆固醇水平的活性、提高基础代谢的活性、或抗过敏活性。此 外，预期这类食物和饮品能够发挥如下作用，例如，对与上述生理活性相关 的生物标志等的改善、维持或体内平衡、或者对疾病进展的预防。
引用列表
专利文献
专利文献1：JP 2010-263816A
非专利文献
非专利文献1：艾森伯格(Eisenberg)T.等人，自然细胞生物学(Nat Cell Biol)2009；11(11):1305-1314
非专利文献2：索达(Soda)K.，医学假说(Med.Hypotheses)，2010；75(3): 299-301
非专利文献3：拉吉谢蒂(Lagishetty)C.V.等人，印度药理学杂志(Indian J.Pharmacol.)2008；40(3):121-125
非专利文献4：科波宁(Koponen)T.等人，氨基酸(Amino Acids)2012；42 (2-3):427-40。
非专利文献5：皮埃伦(Peulen)O.等人，公共健康营养(Public Health Nutr.)1998；1(3):181-184
发明概述
技术问题
本发明所要达到的目的是提供一种有效手段，用以促进生物体(特别是 人类生物体内)内的多胺合成。
问题的解决方案
为了达到上述目的，本发明的诸位发明人发现：在属于拟干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)的微生物之中，存在能够促进人类或动物生物体内 多胺生产的微生物。本发明的诸位发明人发现：这种微生物在小肠中具有促 进多胺生产的活性，连同降低肝脏中性脂肪的活性和/或促进能量代谢的活 性。
本发明的代表性实例在以下进行详述。
项目1.
拟干酪乳杆菌菌株WON0604(FERM BP-11468)。
项目2.
根据项目1所述的拟干酪乳杆菌菌株WON0604，其进一步具有降低肝脏中性 脂肪的活性。
项目3.
根据项目1或2所述的拟干酪乳杆菌菌株WON0604，其进一步具有促进能量 代谢的活性。
项目4.
一种组合物，该组合物中已添加有根据项目1至3中任一项所述的拟干酪乳 杆菌菌株WON0604。
项目5.
根据项目4所述的组合物，其中该组合物是多胺生产促进剂。
项目6.
一种试剂，该试剂用于预防或治疗选自下组的至少一种疾病，该组由以下各 项组成：脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、以及肝硬变，该试剂包含根据项目2 所述的拟干酪乳杆菌。
项目7.
一种用于降低肝脏中性脂肪的试剂，该试剂包含根据项目2所述的拟干酪乳 杆菌。
项目8.
一种用于促进需要多胺生产增强的人类中多胺生产的方法，该方法包括向该 人类给予根据项目1至3中任一项所述的拟干酪乳杆菌菌株WON0604。
项目9.
一种用于治疗或缓解脂肪肝患者的方法，该方法包括向该脂肪肝患者给予根 据项目2所述的拟干酪乳杆菌菌株WON0604。
项目10.
根据项目2所述的拟干酪乳杆菌用于生产预防和/或治疗脂肪肝的试剂的用 途。
发明的有益效果
本发明的拟干酪乳杆菌菌株WON0604(FERM BP-11468；该菌株在下 文中也可称为“本发明的微生物”)具有促进人类或其他动物的生物体内多胺 生产的活性。在本发明中，该活性被称为“促进多胺生产的活性”。通过利用 本发明的微生物(例如，经由摄取或给药)，有可能促进人类或动物生物体内 的多胺生产。因此，本发明能够有效地使人类或动物享受到多胺所带来的有 益生理活性(例如，抗衰老作用、延迟动脉硬化进展的活性、抑制急性及慢 性炎症的活性、降低中性脂肪的活性、缓解胰岛素抵抗性的活性、抗肥胖活 性、降低胆固醇水平的活性、提高基础代谢的活性、抗过敏活性、和/或免疫 刺激活性等)。
此外，本发明的微生物具有降低肝脏中性脂肪的活性。因此，通过利用 本发明的微生物，有可能降低肝脏中性脂肪水平(例如，肝脏中累积的中性 脂肪的量)。本发明的微生物对于维持或改善肝脏脂质代谢、或者预防或治疗 脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、和/或肝硬变是有效的。此外，预期 本发明的微生物具有预防这些疾病发展成肝癌的作用、或者具有预防心血管 疾病发展的作用。
本发明的微生物具有促进生物体中能量代谢的活性。因此，利用本发明 的微生物对于维持人类或动物的健康是有用的，包括抑制体重增加、抑制肥 胖、降低体脂肪、降低内脏脂肪、和/或预防代谢性综合征。此外，预期本发 明的微生物具有改善或维持与上述生理活性相关的生物标志的作用。
此外，由于本发明的微生物属于已经应用于食品领域中的拟干酪乳杆 菌，因此相信本发明的微生物作为食品组合物的添加剂是足够安全的。因此 很明显地，本发明的微生物适用于人类或其他动物的食物和饮品和/或药物制 剂的领域中。
实施方案的说明
1.微生物
1-1.促进多胺生产的活性
本发明的微生物具有促进多胺生产的活性。如上所述，“促进多胺生产 的活性”是促进人类或其他动物的生物体内多胺生产的作用。
在本发明中使用的“多胺”一般是具有两个或更多个伯氨基团的脂族烃 的统称，其是被认为是多胺的一种物质。多胺的实例包括腐胺、亚精胺以及 精胺。本发明的微生物的促进多胺生产的活性促进至少一种或两种、更优选 地是所有种类的多胺的生产。其中多胺生产(即，生物体内的多胺合成)通 过本发明的微生物得到促进的细胞、组织、及器官不受具体的限制。器官的 实例包括口腔、食道、胃、十二指肠、盲肠、小肠、以及大肠，这些器官是 是经口服给予微生物能够直接发挥效应的器官。特别优选的是小肠。
可以利用已知的分析技术来测定本发明的微生物促进多胺生产的活性。 具体地说，可以利用模式动物(例如，小鼠)以如下方式来测定本发明的微 生物的促进多胺生产的活性。更确切地说，用本发明的微生物喂食小鼠一段 时期之后，将它们的内脏组织分离，并测定这些组织中的多胺量。此外，将 所测定的多胺量与分离自未用本发明的微生物喂食的小鼠的内脏组织中的多 胺量进行比较，由此测定因本发明的微生物所导致的相对增加。在该测量 中，用于多胺量测定的样本不受具体的限制。然而，优选的是测定小肠组织 及盲肠内容物中的多胺量并进行比较。例如，当测定值揭示小肠中多胺量增 加而盲肠内容物中多胺量未增加时，可以判定该微生物具有促进生物体内多 胺生产的作用。
优选的是，相比于给予之前的多胺量，向人类或其他动物给予本发明的 微生物之后，生物体中多胺量增加了1.1至1.5倍。例如，这是因为通过抑制 生物体中过量脂质积聚或促进脂质代谢而得到的减少肝脏中性脂肪增加的作 用。
1-2.真菌学特征
本发明的微生物属于拟干酪乳杆菌。下表1中示出了这种微生物的优选 真菌学性质。
表1
Figure BDA0001115921300000061
Figure BDA0001115921300000071
1-3.关于菌落形成的特征
在将本发明的微生物在具有下述组成的琼脂培养基(乳酸杆菌MRS琼 脂(Lactobacilli MRS Agar)#288210)上，以37℃在厌氧条件下进行培养持 续16小时的情况下，该微生物优选地是形成具有以下特征的菌落。
·培养基组成(pH 6.5±0.2)
Figure BDA0001115921300000072
·菌落形态
直径：1至2mm
颜色：白色
形状：圆形
高度状态：凸状
缘：全缘
表面形态：光滑
透明度：半透明
黏性：酪状
1-4.关于烃同化的特征
本发明的微生物的烃同化优选地如在下表2中所示。
表2
Figure BDA0001115921300000091
表中“+”表示阳性，而“-”表示阴性。
1-5.降低肝脏中性脂肪的活性
当本发明的微生物被人类或其他动物摄取或向其给予时，其优选地具有 降低肝脏中性脂肪的活性。中性脂肪不受具体的限制，但通常是甘油三酸 酯。由于本发明的微生物的降低肝脏中性脂肪的活性能够减少肝脏中已经累 积的中性脂肪量，本发明的微生物有用于，例如，治疗或者缓解患有脂肪肝 的人类、连同预防有患脂肪肝风险的人类发展成脂肪肝、或者维持健康。此 外，本发明的微生物还有用于预防由于肝脏中性脂肪累积发展成NASH、肝 硬变、肝癌和/或心脏病。
可以利用已知的分析技术来测定本发明的微生物降低肝脏中性脂肪的活 性。具体地说，可以利用模式动物(例如，小鼠)根据下述程序来测定本发 明的降低肝脏中性脂肪的活性。用本发明的微生物喂食小鼠一段时期；之 后，将它们的肝脏分离，并且按照福尔奇(Folch)等人的方法(生物化学杂 志(J.Biol.Chem.)1957；226(1):497-509)来提取中性脂肪。使用从商业供 应商处获得的试剂盒对中性脂肪的量进行测定。以同样的程序，对分离自未 用本发明的微生物喂食的小鼠的肝脏中的中性脂肪量进行测定。然后，将用 本发明的微生物喂食的小鼠的中性脂肪量与未用本发明的微生物喂食的小鼠 的中性脂肪量进行比较，由此测定降低肝脏中性脂肪的活性。
1-6.促进能量代谢的活性
当本发明的微生物被人类或其他动物摄取或向其给予时，其优选地具有 促进生物体内能量代谢的活性。更确切地说，本发明的微生物具有促进肠内 组织(特别是小肠组织内)和/或肝脏中的能量代谢的作用。通过利用本发明 的微生物，有可能改善需要能量代谢促进的人类或其他动物的体质、或者缓 解其代谢性综合征和/或肥胖症等。
如实例中所示，可以通过测量编码与能量代谢相关的酶的mRNA表达量 的变化来确认本发明的微生物的促进能量代谢的活性(近藤(Kondo)等人， 美国生理学会杂志：内分泌学与新陈代谢(Am.J.Physiol.Endocrinol Metab)，291,E1092-E1099,2006)。此外，可以通过人类或其他动物在摄取本 发明的微生物前后的热量测量(佐佐木(Sasaki)，使用间接测热法测量静息 时能量消耗量及底物消耗量(Measurement of resting energyexpenditure and substrates expenditure using Indirect Calorimetry)，24,5,1021-1025；凯亚拉 (Kaiyala)等人，比较生物化学及生理学(Comparative Biochemistry andPhysiology)，A部分158,252-264,2011)、测量氧摄取量与二氧化碳排出量 (克劳斯(Klaus)等人，国际肥胖学杂志(International Journal of Obesity)， 29,615-623,2005)、和/或测量与代谢相关的酶的活性来确认本发明的微生物 的促进能量代谢的活性。
1-7.其他活性
除了上述活性之外，优选地，本发明的微生物还具有降低血糖水平的活 性、降低血液中性脂肪水平的活性、降低血液内毒素水平的活性、降低选择 性饱和脂肪酸的活性、促进小肠及肝脏中脂肪酸β氧化作用的活性、和/或者 促进小肠中TLR-2m RNA表达的活性等。因此，本发明的微生物基于其降低 血糖水平的活性有用于治疗糖尿病患者，并且基于其降低血液内毒素水平的 活性还有用于治疗败血症。此外，促进小肠及肝脏中脂肪酸β氧化作用的活 性有益于上述的能量代谢促进。此外，由于小肠中的TLR-2m RNA表达增加 了小肠粘膜的屏障功能，并且由此带来了免疫刺激活性(卡里奥(Cario)等 人，胃肠病学(Gastroenterology)，132,4,1359-1374,2007)，因此预期了对于 炎症性肠病、细菌感染、病毒感染、内毒素血症、心脏病、动脉粥状硬化、 食物过敏、特异性皮炎等的预防或治疗的效果。
1-8.代表性菌株
本发明的代表性微生物是菌株WON0604。该菌株是于2012年2月20 日国际保藏于日本国家高级产业科学技术研究院(National Institute of Advanced IndustrialScience and Technology)国际专利生物保藏中心 (International Patent OrganismDepositary)(日本，茨城县305-8566，筑波 市，东村1-1-1，中心6号(Central 6,1-1-1Higashi,Tsukuba,Ibaraki 305-8566 Japan))中，其登录号是FERM BP-11468。菌株WON0604满足上述1-1至 1-7的所有特征。再者，日本国家高级产业科学技术研究院中的国际专利生物 保藏中心于2012年4月与独立行政法人日本国家技术与评价研究所(Incorporated Administrative Agency National Institute of Technology andEvaluation)(NITE)中的国际专利生物保藏中心进行了整合，并且由日本国 家技术与评价研究所的生物资源中心(NITE-IPOD)中的国际专利生物保藏 中心接管他们关于专利生物保藏中心的职责(日本，千叶县292-0818，木更 津市，佐藤镰足，120 2-5-8号室(Room 1202-5-8Kazusa-Kamatari,Kisarazu- city,Chiba 292-0818JAPAN))。
优选地，本发明的微生物处于分离的状态。此外，在确保了上述促进多 胺生产的活性、降低肝脏中性脂肪的活性以及促进能量代谢的活性的情况 下，本发明的微生物可以是活细胞或死细胞，并且可以处于纯化细胞、粗纯 化细胞、与未纯化的培养基混合的细胞、或细胞提取物的状态。优选地，本 发明的微生物是活细胞，因为活细胞在生物体内持续且有效地展示出促进多 胺生产的活性。此外，通过将常用的冷冻干燥防腐剂添加至活细胞中以冷冻 干燥这些细胞，并且将所得冷冻干燥的细胞在冰箱或冷冻机中进行保存，使 得可能长期保存活细胞。在一个实施例中，本发明的微生物处于冷冻干燥的 状态。
1-9.用于获得本发明的微生物的方法
从中分离本发明的微生物的来源不受具体的限制。例如，可以从已知其 中含有拟干酪乳杆菌的食物(例如，各种日本泡菜(Japanese pickles)、韩国 泡菜(Koreanpickles)、牛乳及乳酪等)中分离本发明的微生物。由于使用鲫 鱼寿司作为来源对拟干酪乳杆菌菌株WON0604(即本发明的微生物)进行分 离，本发明的微生物是，例如，使用鲫鱼寿司作为来源分离的。鲫鱼寿司是 指一种使在日本的琵琶湖周边生产的稻与鱼乳酸发酵后生产的食物。来自鲫 鱼寿司的乳酸细菌的分离可以例如根据图达(Tuda)等人(食品科学与技术 研究(Food Sci.Technol.Res.)，18(1),77-82,2012)所披露的方法来进行。
可以利用上述促进多胺生产的活性、降低肝脏中性脂肪的活性以及促进 能量代谢的活性作为指标，通过已知的筛选方法来进行本发明的微生物的分 离。例如，可以通过以下方式对本发明的微生物进行分离：(1)确认被用作 来源的食物等是否存在促进多胺生产的活性、(2)用适当的缓冲溶液来稀释 已确认具有促进多胺生产的活性的来源，将经过稀释的来源施用于琼脂培养 基上以将细胞培养形成菌落、(3)在所形成的菌落之中鉴定具有促进多胺生 产的活性的一个菌落或多个菌落、以及(4)从该菌落中提取16Sr DNA，由 此确定其序列，并且由此判断该来源是否属于拟干酪乳杆菌。
2.组合物
本发明的组合物是已添加有本发明所述微生物的组合物。在本发明的微 生物的促进多胺生产的活性、以及优选地降低肝脏中性脂肪的活性和促进能 量代谢的活性不受抑制的情况下，组合物的种类及形态不受具体的限制。然 而，考虑到使这些功能在动物内(特别是人类生物体内)发挥令人希望的作 用，该组合物优选地是食物或饮料组合物、或药物组合物。
通过添加本发明的微生物，本发明的组合物具有促进多胺生产的活性、 降低肝脏中性脂肪的活性、和/或促进能量代谢的活性。因此，在一个优选实 施例中，有可能将本发明的组合物用作多胺生产促进剂、肝脏中性脂肪降低 剂和/或能量代谢促进剂。尽管上述多胺生产促进剂等可以呈组合物的形态， 但其也可以仅由本发明的微生物构成。
在本发明的微生物的促进多胺生产的活性等不受干扰的情况下，本发明 的组合物可以根据其形态和目的包含其他任意成分。例如，考虑到维持本发 明的微生物的生长，本发明的组合物优选地包含例如适用于本发明的微生物 生长的营养物组合物，如脱脂乳、糊精等。
在本发明所述微生物的促进多胺生产的活性等在动物内(特别是人类生 物体内)得到发挥的情况下，添加至本发明组合物中的微生物的量不受具体 的限制并且可以进行适宜地设定。例如，以活细胞为基础，本发明的组合物 可以含有约1.0×104至1.0×1016CFU/g组合物、优选地1.0×106至1.0×1014 CFU/g组合物，更优选地1.0×108至1.0×1012CFU/g组合物的量的微生物。
添加有本发明所述微生物的食物或饮料组合物的种类或形态不受具体的 限制，并且除了一般性食物及饮品之外，实例包括各种功能性食品(例如， 特殊保健用途的食品、食品强化剂、补充剂、病患用食品、以及保健食品)。 通过将本发明的微生物添加至这类食品中，有可能进一步提高促进多胺生产 的活性等，并由此提供改进的食物或饮料组合物，该组合物能更有效地促进 生物体内的多胺生产。还可以将这种改进的食物或饮料组合物用于生物体内 的稳态控制。
当本发明的组合物是食物或饮料组合物时，在本发明的微生物的促进多 胺生产的活性等不受抑制的情况下，该组合物的形态不受具体的限制。食物 组合物的实例包括：颗粒、细颗粒、粉末、胶囊、片剂、口香糖、胶冻剂、 橡皮糖、条(bar)、片(chips)、薄片(flake)及其他一般性食物。一般性食 物的实例包括：巧克力、饼干、糖果、曲奇饼、片剂糖果、冰淇淋、冰冻果 子露(sherbet)、乌冬(小麦)面、荞麦(soba或buckwheat)面、意大利面、以及日本(细小麦(thin wheat))拉面。饮品组合物的实例包括各种饮 品，如固体饮品、软饮品、乳饮料、营养性饮料、碳酸饮品、以及胶冻饮品 (jelly drink)。功能性食品的形态的实例包括：粉末、颗粒、胶囊、糖浆、片 剂、糖衣片剂、以及舌下片剂。
用于将本发明的微生物添加至食物或饮料组合物中的手段不受具体的限 制。例如，可以在食物或饮料组合物的制造过程中、加工过程中或最终步骤 中，以添加、混和、浸润等方式来将本发明的微生物添加至食物或饮料组合 物中。此外，可以在摄入食物和饮品的时候以粉末、颗粒、胶囊、糖浆、片 剂等形式来添加本发明的微生物。
当本发明所述组合物是药物组合物时，有可能通过将本发明的微生物与 药学上可接受的载体进行混合来生产各种药物形式。在本发明的微生物的促 进多胺生产的活性等不受抑制的情况下，药学上可接受的载体不受具体的限 制。医学领域中常用的、药学上可接受的载体的实例包括各种填充剂、增容 剂、粘合剂、保湿剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、以及稀释剂。添加有 本发明所述微生物的药物组合物的形态不受具体的限制。形态的实例包括： 片剂、丸剂、粉剂、液剂、悬浮剂、乳剂、颗粒剂、以及胶囊剂。药物形式 优选地是适用于口服给药的形式。
通过包含本发明的微生物，本发明的药物组合物展示出促进多胺生产的 活性，以及优选地，降低肝脏中性脂肪的活性和促进能量代谢的活性。因 此，可以将本发明的药物组合物用作用于促进生物体内多胺生产的药物组合 物、用于降低肝脏中性脂肪的药物组合物、和/或用于促进能量代谢的药物组 合物。此外，基于本发明所述微生物的降低肝脏中性脂肪的活性，可以将本 发明的药物组合物用作用于预防或治疗脂肪肝的药物组合物、用于预防 NASH、肝硬变和/或肝癌的进展或者对其进行治疗的药物组合物。此外，基 于本发明所述微生物的促进能量代谢的活性，可以将本发明的药物组合物用 作用于预防或治疗代谢性综合征的药物组合物。
添加至本发明所述药物组合物中的本发明所述微生物的量与上述针对一 般组合物所定义的量类似。本发明所述药物组合物的剂量可以根据摄取该组 合物的人类或动物的症状、年龄、体重等来适宜地设定。
在本发明所述微生物的促进多胺生产的活性等在体内得到发挥的情况 下，本发明所述药物组合物的剂型不受具体的限制。然而，剂型优选地是口 服给药。
3.治疗及缓解方法
本发明的微生物具有促进动物(特别是人类)生物体内多胺生产的活 性。已知多胺具有抗衰老作用、延迟动脉硬化进展的活性、抑制急性及慢性 炎症的活性、降低中性脂肪的活性、缓解胰岛素抵抗性的活性、抗肥胖活 性、降低胆固醇水平的活性、提高基础代谢的活性、抗过敏活性、免疫刺激 活性等。因此，可以提供利用这些活性以预防、治疗或缓解各种疾病的方 法，该方法包括给予本发明的微生物。此外，在一个优选实施例中，本发明的微生物具有降低肝脏中性脂肪的活性。因此，通过将本发明的微生物给予 至需要降低肝脏中性脂肪的人类或动物，有可能降低肝脏中性脂肪。此外， 在一个优选实施例中，本发明具有促进生物体中能量代谢的活性。因此，通 过将本发明的微生物给予至需要促进能量代谢的人类或动物，有可能抑制体 重增加、抑制肥胖、降低体脂肪、降低内脏脂肪、并且预防、缓解或治疗代 谢性综合征。
为了进行上述方法，本发明所述微生物的剂量、或添加有本发明所述微 生物的本发明所述药物组合物的剂量可以根据患者的症状等来适宜地设定。 例如，剂量是1.0×105至1.0×1015CFU/kg/天。
实例
实例1
微生物的分离
将0.8至1.0g的经均匀化的鲫鱼寿司置于15ml离心管中，并且添加十 倍量的生理盐溶液并搅拌。将1ml的经搅拌的悬浮液去除，并与9ml的生理 盐溶液一起置于15ml离心管中，然后进行逐级稀释。从各稀释液获取100 μl，接种至MRS琼脂培养基，并在37℃下于厌氧条件下培养持续24小时。 在培养之后，将细胞纯化至成为单菌落。这些操作以无菌处理进行。
分离的菌株WON0604被保藏于日本国家高级产业科学技术研究院国际 专利生物保藏中心(日本，茨城县305-8566，筑波市，东村1-1-1)中，其登 录号是FERM BP-11468。
实例2
促进多胺生产的活性
使4周龄的KK-Ay小鼠(II型糖尿病模式、雄性)禁食持续16小时，并且从尾静脉中的单条毛细血管中抽血(约75μl)。通过离心(12,000rpm (15,000×g)×5分钟)来制备血浆，并且测定血糖浓度以及血液中性脂肪浓 度。通过利用SAS软件(R9.1，日本SAS学会(SASInstitute Japan))的分 层随机抽样法，以消除体重(分组前一天)及血糖浓度偏差的方式将未见异 常的健康状态小鼠分为对照组与试验组。持续28天，用对照食物(AIN- 93G)自由喂食对照组，而用以1.0×109CFU/天(活细胞)的比例与菌株 WON0604混合的试验食物自由喂食试验组。其后，对盲肠和小肠组织进行解 剖，并且测定盲肠内容物及小肠组织中的多胺浓度。表3示出了将对照组的 多胺浓度假设为1，各个试验组与其的相对值。对于盲肠内容物及小肠组织二 者，n＝3。通过使用邻苯二甲醛的柱上衍生化(on-columnderivatization)方 法来测定盲肠内容物的多胺浓度。使用CE-TOFMS系统(安捷伦科技公司 (Agilent Technologies))来测定小肠组织内的多胺浓度。根据韦氏t检验 (Welch’st-test)进行显著性检验。
表3
小肠中的多胺量
Figure BDA0001115921300000171
*P<0.01
表4
盲肠中的多胺量
Figure BDA0001115921300000172
如表4所示，盲肠内的多胺浓度并未因摄取菌株WON0604而增加。相 比之下，如表3所示，小肠内的腐胺有显著地增加，且小肠内的亚精胺和精 胺也有增加的倾向。因此，结果揭示了小肠内的多胺会因菌株WON0604的 摄取而增加。由此阐明了本发明的微生物本身具有促进小肠中多胺合成能力 的作用(即，促进多胺合成的活性)。
实例3
促进能量代谢的活性
类似于实例2，将4周龄的KK-Ay小鼠(II型糖尿病模式、雄性)分为 对照组与试验组；持续28天，用对照食物(AIN-93G)自由喂食对照组，而 用以1.0×109CFU/天(活细胞)的比例与菌株WON0604混合的试验食物自 由喂食试验组。其后，测定肝脏及小肠中与能量代谢相关的各种酶的mRNA 表达水平。使用
Figure BDA0001115921300000181
试剂盒(Ambion)进行mRNA提取和纯化。表5 示出了结果，即将对照组的值假设为1，试验食物组与其的相对值。在本测试 中，n＝13，并且使用平均值来计算相对值。
表5
Figure BDA0001115921300000182
*P<0.05
表6
Figure BDA0001115921300000183
*P<0.05
表5及表6中所示的结果证实了肝脏及小肠中Acox1、Ucp2及Acot2的 mRNA表达量因摄取本发明的微生物而增加。近藤(Kondo)等人已经报道 了这些基因的表达与能量代谢促进的相关性(近藤(Kondo)H等人，美国 生理学会杂志：内分泌学与新陈代谢(Am JPhysiol.Endocrinol Metab)，2006； 291(5):E1092-9)。这些结果证实了除促进多胺生产的作用之外，通过摄取本 发明的微生物，促进肝脏及小肠中能量代谢的可能性也得以证实。
实例4
降低肝脏中性脂肪的活性
类似于实例2，将4周龄的KK-Ay小鼠(II型糖尿病模式、雄性)分为 对照组与试验组；用对照食物(AIN-93G)自由喂食对照组持续28天，而用 以1.0×109CFU/天(活细胞)的比例与含有菌株WON0604、菌株 WON1052、菌株WON1081、或菌株WON1033的3％试验食物混合的试验食 物自由喂食各个试验组持续28天。通过在体外试验中选择对胃酸及胆汁酸有 耐受性的菌株来获得除菌株WON0604以外的这些乳酸细菌菌株，并且然后 通过使用KK-Ay小鼠的探索性动物试验来进一步选择关于血液中性脂肪及肝 脏中性脂肪具有潜在有效性的菌株。其后，在禁食条件下从各只小鼠中摘除 肝脏。称量肝脏左叶的外侧区域，并且使用福尔奇(Folch)等人的方法(福 尔奇(Folch)J.等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)1957；226(1):497- 509)来提取脂质部分，并使用异丙醇使其溶解；之后，使用从商业供应商处 获得的测定试剂盒对中性脂肪浓度进行测定(甘油三酸酯E-Test Wako；日本 和光化学工业有限公司(Wako Pure Chemical Industries,Ltd.))。表7示出了 测定结果的平均值。每个试验组有八只小鼠。根据t检验进行显著性检验。
如表7所示，与具有显著差异的对照组相比较，只有喂食了菌株 WON0604的小鼠的肝脏TG浓度才会降低；并且在喂食了除菌株WON0604 以外的乳酸细菌的比较试验组中未观察到降低肝脏TG浓度的活性。因而， 这些结果证实了除促进多胺生产的作用之外，本发明的微生物降低肝脏中性 脂肪的活性的可能性。
表7
Figure BDA0001115921300000201
*P<0.05
登录号
FERM BP-11468

Claims (2)

1.一种拟干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)WON0604菌株，其保藏编号为：FERMBP-11468。
2.一种组合物，该组合物中已添加有根据权利要求1所述的拟干酪乳杆菌WON0604菌株。
CN201580014612.9A 2014-03-24 2015-03-23 新颖的拟干酪乳杆菌菌株 Active CN106103696B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2014060010 2014-03-24
JP2014-060010 2014-03-24
PCT/JP2015/058750 WO2015146916A1 (ja) 2014-03-24 2015-03-23 新規ラクトバチラス・パラカゼイ株

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106103696A CN106103696A (zh) 2016-11-09
CN106103696B true CN106103696B (zh) 2020-01-17

Family

ID=54195429

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580014612.9A Active CN106103696B (zh) 2014-03-24 2015-03-23 新颖的拟干酪乳杆菌菌株

Country Status (10)

Country Link
US (2) US20170137902A1 (zh)
EP (1) EP3135753B1 (zh)
JP (1) JP6479768B2 (zh)
KR (1) KR102240196B1 (zh)
CN (1) CN106103696B (zh)
ES (1) ES2768960T3 (zh)
PH (1) PH12016501777A1 (zh)
SG (1) SG11201607557WA (zh)
TW (1) TWI673057B (zh)
WO (1) WO2015146916A1 (zh)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6785141B2 (ja) * 2016-12-09 2020-11-18 サントリーホールディングス株式会社 基礎代謝亢進剤
TWI645854B (zh) * 2017-03-20 2019-01-01 大江生醫股份有限公司 胚芽乳酸桿菌tci378及其於減脂及改善腸胃功能之應用
TWI651412B (zh) * 2017-11-01 2019-02-21 葡萄王生技股份有限公司 用於改善代謝症候群的新穎副乾酪乳桿菌gks6、其培養基、培養方法、用途、醫藥組合物及可食用組合物
WO2019134690A1 (en) * 2018-01-05 2019-07-11 Bened Biomedical Co., Ltd. A novel lactic acid bacteria and its applications
JP7206623B2 (ja) * 2018-04-23 2023-01-18 キリンホールディングス株式会社 糖代謝異常の予防および改善用組成物
TWI739078B (zh) * 2018-04-25 2021-09-11 日商曾根農場股份有限公司 脂肪累積抑制用組成物
WO2019216662A1 (ko) 2018-05-09 2019-11-14 주식회사 고바이오랩 락토바실러스 파라카제이 균주 및 그 용도
CN108813262A (zh) * 2018-07-02 2018-11-16 杭州相生相成科技有限公司 一种含dha藻油的复合益生菌固体饮料
JP2021020944A (ja) * 2020-10-26 2021-02-18 サントリーホールディングス株式会社 基礎代謝亢進剤
CN116286537B (zh) * 2023-03-31 2024-05-24 天津小薇生物科技有限公司 具有辅助减肥作用的副干酪乳杆菌gf045及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007189973A (ja) * 2006-01-20 2007-08-02 Nissin Food Prod Co Ltd 血中コレステロール低減作用を有する新規乳酸菌
WO2009138092A1 (en) * 2008-05-13 2009-11-19 OÜ Tervisliku Piima Biotehnoloogiate Arenduskeskus Isolated lactobacillus plantarum strain inducia dsm 21379 as probiotic that enhances natural immunity and food products and medicinal preparations comprising it

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005102559A (ja) * 2003-09-29 2005-04-21 Domer Inc 新菌株及び該菌株によるγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）の大量生産方法
JP2009102270A (ja) * 2007-10-24 2009-05-14 Tsujido Kagaku Kk 脂肪代謝抑制剤
DK2123168T3 (da) * 2008-05-16 2012-04-10 Nestec Sa Lactobacillus paracasei og vægtkontrol
WO2010103132A1 (es) * 2009-03-10 2010-09-16 Hero España, S.A. Aislamiento, identificación y caracterización de cepas con actividad probiótica a partir de heces de lactantes alimentados exclusivamente con leche materna
JP5620650B2 (ja) 2009-05-13 2014-11-05 株式会社ロッテ ポリアミンを含有する飲食品の製造方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007189973A (ja) * 2006-01-20 2007-08-02 Nissin Food Prod Co Ltd 血中コレステロール低減作用を有する新規乳酸菌
WO2009138092A1 (en) * 2008-05-13 2009-11-19 OÜ Tervisliku Piima Biotehnoloogiate Arenduskeskus Isolated lactobacillus plantarum strain inducia dsm 21379 as probiotic that enhances natural immunity and food products and medicinal preparations comprising it

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Hypocaloric diet supplemented with probiotic cheese improves body mass index and blood pressure indices of obese hypertensive patients-a randomized double-blind placebo-controlled pilot study;Sharafedtinov K.K.等;《Nutr J.》;20131231;第12卷;1-11 *
Hypocholesterolemic activity in lactic acid bacteria isolated from Funazushi;Yukimasa TANAKA等;《Nippon Shokuhin Kagaku Kogaku Kaishi》;20091231;第56卷;177-183 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN106103696A (zh) 2016-11-09
US20190055613A1 (en) 2019-02-21
TWI673057B (zh) 2019-10-01
US20170137902A1 (en) 2017-05-18
EP3135753A4 (en) 2017-11-01
JPWO2015146916A1 (ja) 2017-04-13
PH12016501777A1 (en) 2017-02-06
TW201542216A (zh) 2015-11-16
EP3135753B1 (en) 2019-12-25
ES2768960T3 (es) 2020-06-24
JP6479768B2 (ja) 2019-03-06
SG11201607557WA (en) 2016-10-28
EP3135753A1 (en) 2017-03-01
KR20160132050A (ko) 2016-11-16
KR102240196B1 (ko) 2021-04-15
WO2015146916A1 (ja) 2015-10-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106103696B (zh) 新颖的拟干酪乳杆菌菌株
CN107075455B (zh) 具有抗炎症及代谢疾病改善功效的植物乳杆菌hac01菌株及其用途
DK2478910T3 (en) ANTI-ADIPOSITY AGENT, ANTI-ADIPOSITA NUTRITION OR DRINK, GLUCOSE TOLERANCE EFFECTIVE AGENT, AND NUTRITION OR DRINK FOR IMPROVING GLUCOSE TOLERANCE
WO2019112054A1 (ja) 新規ビフィドバクテリウム属細菌及び当該細菌を含む組成物
EP1923065A1 (en) Cholesterol absorption inhibitor
JP6649539B1 (ja) 脂肪蓄積抑制用組成物
CA3086031C (en) Composition for contact dermatitis
KR20130048946A (ko) 락토바실러스 루테리 ｃｓ132 또는 이의 배양물을 포함하는 항암용 조성물
CN106661542B (zh) 新型乳酸菌和包含所述乳酸菌的组合物
JP2018083761A (ja) 筋肉の分解抑制剤
US20210244777A1 (en) Novel bifidobacterium bacteria and composition including novel bifidobacterium bacteria
CN111065274A (zh) 用于促进血液中的氨基酸浓度提高的发酵乳
TW201609120A (zh) 含乳酸菌之腸道屏障功能促進劑
KR20180122380A (ko) 피칼리박테리움속 세균증식제
EP2746398A1 (en) Process for producing conjugated linolenic acid from linolenic acid employing Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, or Lactobacillus oris strains.
TW201945016A (zh) 第i型過敏用組成物
WO2022085456A1 (ja) 炎症性腸疾患用組成物
KR20240040823A (ko) 비타민 b12를 생성하는 리모시락토바실러스 퍼멘텀 pl9261과 이를 유효성분으로 함유하는 비타민 b12 결핍증 예방 및 개선용 조성물
WO2011025019A1 (ja) チオレドキシン誘導活性を有する乳酸菌ならびにチオレドキシンを介する生体傷害の予防および／または改善用の飲食品および医薬品
JP2010195700A (ja) 経口摂取用組成物

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant