CN106092920A - 一种测定血管紧张素转化酶的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定血管紧张素转化酶的试剂盒及其制备方法，该试剂盒由试剂R单液体组分组成，包括的成分及相应含量为：试剂R：缓冲液50~150 mmol/L、FAPGG 0.1~2.0 mmol/L、氯化钠150~450 mmol/L，其溶剂为纯化水，制备方法和使用方法为：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的血管紧张素转化酶的浓度。本发明具有操作方便、准确性高等优点。
Description
技术领域
本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定血管紧张素转化酶的试剂盒及其制备方法。
背景技术
血管紧张素转化酶，简称ACE，是一种膜结合糖蛋白分子量为150000含锌，属二肽羧肽酶，能使血管紧张素Ⅰ肽链C 末端的组氨酸和亮氨酸残基水解形成具有增压作用的血管紧张素Ⅱ，后者通过与血管气管平滑肌作用引起血管支气管收缩。
血管紧张素转化酶（ACE） 也具有降血压作用，并参与缓激肽P 物质等多肽性炎性物质的灭活，血管紧张素转化酶（ACE）还能直接作用于肾上腺皮质促进醛固酮分泌，因此，血管紧张素转化酶（ACE）是肾素血管紧张素醛固酮系统以及缓激肽系统的重要调节因素，影响人体多种生理机能，血管紧张素转化酶（ACE）分布于全身各组织以肺、副睾、睾丸最高，其次为十二指肠、胰、卵巢主动脉。甲状腺、脾、肾与肝的含量甚微，此外，巨噬细胞，单核细胞，人胎膜、胎盘、羊水和脐静脉血也含此酶。
各组织血管紧张素转化酶（ACE）主要定位于毛细血管内皮细胞，由于肺组织具有丰富的血管床且肺毛细血管床内皮细胞所含的血管紧张素转化酶（ACE） 位于细胞外，促使血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ的作用强，且肺循环是体内唯一不使血管紧张素Ⅱ灭活的血管床，肺循环流出的血液中血管紧张素Ⅱ的含量最高一般认为血管内皮细胞的ACE 与胞膜密切结合几乎不释放ACE， 而巨噬细胞和单核细胞产生的ACE 大部分释放入血，故当ACE 升高时应考虑为巨噬细胞、单核细胞系统的分泌亢进。
目前主要采用放射性同位素法、荧光测定法、分光光度法等对血管紧张素转化酶进行测定，但是放射性同位素法、荧光测定法对环境均会造成污染，分光光度法操作繁琐，耗时长，不能应用于临床日常的大规模的标本的检测，而且准确度不好。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的技术存在放射性污染、操作复杂、稳定性不佳以及准确度低的缺陷，而提供一种测定血管紧张素转化酶的试剂盒及其制备方法。
本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：本发明公开了一种测定血管紧张素转化酶的试剂盒，该试剂盒由试剂R单液体组分组成，包括的成分及相应含量为：
试剂R：
缓冲液 50~150 mmol/L
FAPGG 0.1~2.0 mmol/L
氯化钠 150~450 mmol/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，本发明公开了一种测定血管紧张素转化酶的试剂盒，该试剂盒由试剂R单液体组分组成，包括的成分及相应含量为：
试剂R：
缓冲液 100 mmol/L
FAPGG 1.0 mmol/L
氯化钠 300 mmol/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，所述的试剂R中，所述的缓冲液采用磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、1，4-哌嗪二乙磺酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪丙磺酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、3-吗啉丙磺酸缓冲液、3-（N-吗啉基）-2-羟丙基磺酸缓冲液、2-吗啉乙磺酸缓冲液、磷酸二氢钠缓冲液中的一种或多种的组合。
作为优选，所述的试剂R中，所述的缓冲液的pH值为6～9。
作为优选，本发明还公开了上述测定血管紧张素转化酶的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R：
缓冲液 50~150 mmol/L
FAPGG 0.1~2.0 mmol/L
氯化钠 150~450 mmol/L
其溶剂为纯化水。
（b）将待测样本与试剂R混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的血管紧张素转化酶的浓度。
本发明的检测原理是：血管紧张素转化酶（ACE）催化苯丙酰胺基双甘肽（FAPGG）水解成苯丙酰胺和双甘肽，在340nm波长下，吸光度呈下降趋势，在一定范围内，吸光度的下降速率与标本中ACE的活性成正比，通过连续检测法检测FAGPP在340nm波长处吸光度下降的速率可计算出ACE的活性。
样本中ACE活性
式中：ΔAU/min 待测样品平均每分钟的吸光度变化值
ΔAB/min 校准液平均每分钟的吸光度变化值
CS 校准液中ACE的浓度
与现有技术相比，本发明具有以下有益优点：本发明所制得的测定血管紧张素转化酶的试剂盒不含有任何放射性成分，不会造成对人体的损害以及对环境的污染，且可应用于全自动生化分析仪，操作方便，另外通过连续检测法检测FAGPP在340nm波长处吸光度下降的速率，而苯丙酰胺基双甘肽（FAPGG）的稳定性比较好，这也就促使整个反应过程稳定性好，因此本发明所制得试剂盒的稳定性较好，因此检测比较灵敏，准确度比较高。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1
本发明的试剂盒包括试剂R单液体组分，其中
试剂R：
1，4-哌嗪二乙磺酸缓冲液 100 mmol/L
FAPGG 1.0 mmol/L
氯化钠 300 mmol/L
其溶剂为纯化水。
实施例2
本发明的试剂盒包括试剂R单液体组分，其中
试剂R：
3-吗啉丙磺酸缓冲液 150 mmol/L
FAPGG 0.1 mmol/L
氯化钠 450 mmol/L
其溶剂为纯化水。
实施例3
试剂盒的制备和使用方法
1、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R：
1，4-哌嗪二乙磺酸缓冲液 100 mmol/L
FAPGG 1.0 mmol/L
氯化钠 300 mmol/L
其溶剂为纯化水。
2、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长340nm、副波长410nm；
（c）反应时间 ：8min，其中，加入试剂 R孵育时间 5min，然后测定读取吸光度 A1，3min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：负反应。
3、检测步骤
（a） 取250ul试剂R与20ul待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min，然后测定读取吸光度A1，3min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1 ；
(c)
根据
样本中ACE活性
计算出样本中的血管紧张素转化酶的浓度。
实施例4
试剂盒的制备和使用方法
1、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R：
3-吗啉丙磺酸缓冲液 150 mmol/L
FAPGG 0.1 mmol/L
氯化钠 450 mmol/L
其溶剂为纯化水。
2、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长340nm、副波长410nm；
（c）反应时间 ：8min，其中，加入试剂 R孵育时间 5min，然后测定读取吸光度 A1，3min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1；
(d) 反应方向：负反应。
3、检测步骤
（a） 取250ul试剂R与20ul待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min，然后测定读取吸光度A1，3min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1 ；
(c)
根据样本中ACE活性
计算出样本中的血管紧张素转化酶的浓度。
表1为实施例1所制得的测定血管紧张素转化酶的试剂盒以及实施例2所制得的测定血管紧张素转化酶的试剂盒分别对质控品1进行测定的结果，其中质控品1中的血管紧张素转化酶的浓度为40U/L，测定结果见表1：
表1
| 第1次（U/L） | 第2次（U/L） | 第3次（U/L） | 均值（U/L） | 偏差（%） | |
| 实施例1 | 39 | 39 | 40 | 39.33 | 1.68 |
| 实施例2 | 40 | 42 | 42 | 41.33 | 3.33 |
由表1可知，本发明所制得的测定血管紧张素转化酶的试剂盒对质控品1的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表2为实施例1所制得的测定血管紧张素转化酶的试剂盒以及实施例2所制得的测定血管紧张素转化酶的试剂盒分别对质控品2进行测定的结果，其中质控品2中的血管紧张素转化酶的浓度为68U/L，测定结果见表2：
表2
| 第1次（U/L） | 第2次（U/L） | 第3次（U/L） | 均值（U/L） | 偏差（%） | |
| 实施例1 | 70 | 69 | 70 | 69.67 | 0.49 |
| 实施例2 | 70 | 71 | 71 | 70.67 | 3.93 |
由表2可知，本发明所制得的测定血管紧张素转化酶的试剂盒对质控品2的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表3为实施例3所制得的测定血管紧张素转化酶的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定以及实施例4所制得的测定血管紧张素转化酶的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定，对所得的结果进行SD和CV的计算，结果如下：
表3
由表3可知本发明所制得的测定血管紧张素转化酶的试剂盒的精密度比较好，而且由表3可知，实施例3为最优的选择。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (5)
1.一种测定血管紧张素转化酶的试剂盒，其特征在于：该试剂盒由试剂R单液体组分组成，包括的成分及相应含量为：
试剂R：
缓冲液 50~150 mmol/L
FAPGG 0.1~2.0 mmol/L
氯化钠 150~450 mmol/L
其溶剂为纯化水。
2.根据权利要求1所述的一种测定血管紧张素转化酶的试剂盒，其特征在于：该试剂盒由试剂R单液体组分组成，包括的成分及相应含量为：
试剂R：
缓冲液 100 mmol/L
FAPGG 1.0 mmol/L
氯化钠 300 mmol/L
其溶剂为纯化水。
3.根据权利要求1或2所述的一种测定血管紧张素转化酶的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R中，所述的缓冲液采用磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、1，4-哌嗪二乙磺酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪丙磺酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、3-吗啉丙磺酸缓冲液、3-（N-吗啉基）-2-羟丙基磺酸缓冲液、2-吗啉乙磺酸缓冲液、磷酸二氢钠缓冲液中的一种或多种的组合。
4.根据权利要求1或2所述的一种测定血管紧张素转化酶的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R中，所述的缓冲液的pH值为6～9。
5.根据权利要求1或2所述的一种测定血管紧张素转化酶的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R：
缓冲液 50~150 mmol/L
FAPGG 0.1~2.0 mmol/L
氯化钠 150~450 mmol/L
其溶剂为纯化水
（b）将待测样本与试剂R混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的血管紧张素转化酶的浓度。
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