CN106053444A - 一种测定特异性生长因子的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定特异性生长因子的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：4‑羟乙基哌嗪丙磺酸2~100mmol/L、磷酸二氢钠50~500mmol/L、乙二胺四乙酸二钠1~20mmol/L、异噻唑啉酮1~10mmol/L，其溶剂为纯化水，试剂R2：茚三酮0.1~4.0mmol/L，异噻唑啉酮1~20mmol/L、甘油300~700mmol/L，其溶剂为纯化水，包括以下步骤：按照组分含量配制好试剂；将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的特异性生长因子的浓度。本发明具有操作方便、准确度高等优点。
Description
技术领域
本发明涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定特异性生长因子的试剂盒及其制备方法。
背景技术
特异性生长因子是恶性肿瘤及其周边毛细血管大量扩增的结果，并随着肿瘤的形成和增长逐渐释放到外周血液，病人血液中存在TSGF，TSGF全称Tumor Supplied Group ofFactors,中文译作恶性肿瘤相关物质群（肿瘤特异性生长因子），对恶性肿瘤血管增生起重要作用，在肿瘤形成早期即明显升高。血清TSGF是一种新的、敏感性和特异性较高的广谱肿瘤标志物，检测方法简便快捷，结果稳定，对恶性肿瘤的初筛、早期辅助诊断、疗效评价和预示肿瘤复发具有重要临床意义和应用价值。
目前市场上检测特异性生长因子的产品种类有限，操作复杂，需对样品进行前处理，耗时长，不能应用于全自动生化分析仪，不能大批量的检测，而且市场上的检测特异性生长因子的产品的测定准确度不高，需要进行改进。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术操作复杂以及测定准确度低的缺陷，而提供一种测定特异性生长因子的试剂盒及其制备方法。
本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：本发明公开了一种测定特异性生长因子的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 2~100mmol/L
磷酸二氢钠 50~500mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 1~20mmol/L
异噻唑啉酮 1~10mmol/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
茚三酮 0.1~4.0mmol/L
异噻唑啉酮 1~20mmol/L
甘油 300~700mmol/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，本发明公开了一种测定特异性生长因子的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 51mmol/L
磷酸二氢钠 275mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 11mmol/L
异噻唑啉酮 6mmol/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
茚三酮 2.1mmol/L
异噻唑啉酮 11mmol/L
甘油 500mmol/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，本发明公开了一种测定特异性生长因子的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 80mmol/L
磷酸二氢钠 55mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 10mmol/L
异噻唑啉酮 6mmol/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
茚三酮 3mmol/L
异噻唑啉酮 10mmol/L
甘油 400mmol/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，本发明公开了一种测定特异性生长因子的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 2mmol/L
磷酸二氢钠 50mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 20mmol/L
异噻唑啉酮 10mmol/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
茚三酮 0.1mmol/L
异噻唑啉酮 15mmol/L
甘油 300mmol/L
其溶剂为纯化水。
作为优选，本发明还公开了上述测定特异性生长因子的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 2~100mmol/L
磷酸二氢钠 50~500mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 1~20mmol/L
异噻唑啉酮 1~10mmol/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
茚三酮 0.1~4.0mmol/L
异噻唑啉酮 1~20mmol/L
甘油 300~700mmol/L
其溶剂为纯化水。
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的特异性生长因子的浓度。
本发明的检测原理是：本试剂通过特定的糖蛋白的代谢产物、带特定的氨基基团的糖脂以及游离的α-氨基酸等物质与样本中的特异性生长因子进行叠加偶联反应，反应剩余的识别物又与试剂中的特定显色剂进行显色反应形成蓝色产物，在波长570nm处测定该显色产物的吸光度值，并通过下述公式换算出样本中TSGF含量。
ΔAU/min 待测样品平均每分钟的吸光度变化值
ΔAB/min 校准液平均每分钟的吸光度变化值
CS 校准液中TSGF的浓度
与现有技术相比，本发明具有以下有益优点：
本发明所述的测定特异性生长因子的试剂盒成本低，检测步骤简单，而且通过添加茚三酮，利用其显色反应原理，使得整个反应颜色变化的更明显，因此更容易被全自动生化分析仪检测到，因此准确度比较高，检测比较灵敏。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步说明，但本发明并不仅限于这些实施例。
实施例1
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 51mmol/L
磷酸二氢钠 275mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 11mmol/L
异噻唑啉酮 6mmol/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
茚三酮 2.1mmol/L
异噻唑啉酮 11mmol/L
甘油 500mmol/L
其溶剂为纯化水。
实施例2
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 80mmol/L
磷酸二氢钠 55mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 10mmol/L
异噻唑啉酮 6mmol/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
茚三酮 3mmol/L
异噻唑啉酮 10mmol/L
甘油 400mmol/L
其溶剂为纯化水。
实施例3
本发明的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 2mmol/L
磷酸二氢钠 50mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 20mmol/L
异噻唑啉酮 10mmol/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
茚三酮 0.1mmol/L
异噻唑啉酮 15mmol/L
甘油 300mmol/L
其溶剂为纯化水。
实施例4
试剂盒的制备和使用方法
1、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 51mmol/L
磷酸二氢钠 275mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 11mmol/L
异噻唑啉酮 6mmol/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
茚三酮 2.1mmol/L
异噻唑啉酮 11mmol/L
甘油 500mmol/L
其溶剂为纯化水。
2、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长546nm、副波长700nm；
（c）反应时间 ：8min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度 A1，3min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应。
3、检测步骤
（a） 取200μl试剂R1与5μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入50μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，3min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 根据
计算出样本中的特异性生长因子的浓度。
实施例5
试剂盒的制备和使用方法
1、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 80mmol/L
磷酸二氢钠 55mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 10mmol/L
异噻唑啉酮 6mmol/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
茚三酮 3mmol/L
异噻唑啉酮 10mmol/L
甘油 400mmol/L
其溶剂为纯化水。
2、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长546nm、副波长700nm；
（c）反应时间 ：8min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度 A1，3min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应。
3、检测步骤
（a） 取200μl试剂R1与5μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入50μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，3min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 根据
计算出样本中的特异性生长因子的浓度。
实施例6
试剂盒的制备和使用方法
1、按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 2mmol/L
磷酸二氢钠 50mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 20mmol/L
异噻唑啉酮 10mmol/L
其溶剂为纯化水。
试剂R2：
茚三酮 0.1mmol/L
异噻唑啉酮 15mmol/L
甘油 300mmol/L
其溶剂为纯化水。
2、全自动生化分析仪参数设置
（a）检测温度：37℃；
（b）检测波长：主波长546nm、副波长700nm；
（c）反应时间 ：8min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度 A1，3分钟后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 反应方向：正反应。
3、检测步骤
（a） 取200μl试剂R1与5μl待测样本混匀；
（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；
（c）加入50μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，3min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1 ；
(d) 根据
计算出样本中的特异性生长因子的浓度。
表1为实施例1所制得的测定特异性生长因子的试剂盒、实施例2所制得的测定特异性生长因子的试剂盒以及实施例3所制得的测定特异性生长因子的试剂盒分别对质控品1进行测定的结果，其中质控品1中的特异性生长因子的浓度为128U/L，测定结果见表1：
表1
| 第1次（U/L） | 第2次（U/L） | 第3次（U/L） | 均值（U/L） | 偏差（%） | |
| 实施例1 | 128 | 130 | 130 | 129.33 | 1.03% |
| 实施例2 | 128 | 129 | 133 | 130 | 1.56% |
| 实施例3 | 129 | 129 | 133 | 130.33 | 1.82% |
由表1可知，本发明所制得的测定特异性生长因子的试剂盒对质控品1的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表2为实施例1所制得的测定特异性生长因子的试剂盒、实施例2所制得的测定特异性生长因子的试剂盒以及实施例3所制得的测定特异性生长因子的试剂盒分别对质控品2进行测定的结果，其中质控品2中的特异性生长因子的浓度为192U/L，测定结果见表2：
表2
| 第1次（U/L） | 第2次（U/L） | 第3次（U/L） | 均值（U/L） | 偏差（%） | |
| 实施例1 | 192 | 190 | 193 | 191.67 | 0.17% |
| 实施例2 | 193 | 191 | 194 | 192.67 | 0.35% |
| 实施例3 | 193 | 192 | 194 | 193 | 0.52% |
由表2可知，本发明所制得的测定特异性生长因子的试剂盒对质控品2的测定结果偏差较小，因此测定准确度高，而且实施例1为最优的选择。
表3为实施例4所制得的测定特异性生长因子的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定、实施例5所制得的测定特异性生长因子的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定以及实施例6所制得的测定特异性生长因子的试剂盒对同一待测样本进行的多次反复测定，对所得的结果进行SD和CV的计算，结果如下：
表3
由表3可知本发明所制得的测定特异性生长因子的试剂盒的精密度比较好，而且由表1可知，实施例4为最优的选择。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (5)
1.一种测定特异性生长因子的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 2~100mmol/L
磷酸二氢钠 50~500mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 1~20mmol/L
异噻唑啉酮 1~10mmol/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
茚三酮 0.1~4.0mmol/L
异噻唑啉酮 1~20mmol/L
甘油 300~700mmol/L
其溶剂为纯化水。
2.根据权利要求1所述的一种测定特异性生长因子的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 51mmol/L
磷酸二氢钠 275mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 11mmol/L
异噻唑啉酮 6mmol/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
茚三酮 2.1mmol/L
异噻唑啉酮 11mmol/L
甘油 500mmol/L
其溶剂为纯化水。
3.根据权利要求1所述的一种测定特异性生长因子的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 80mmol/L
磷酸二氢钠 55mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 10mmol/L
异噻唑啉酮 6mmol/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
茚三酮 3mmol/L
异噻唑啉酮 10mmol/L
甘油 400mmol/L
其溶剂为纯化水。
4.根据权利要求1所述的一种测定特异性生长因子的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 2mmol/L
磷酸二氢钠 50mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 20mmol/L
异噻唑啉酮 10mmol/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
茚三酮 0.1mmol/L
异噻唑啉酮 15mmol/L
甘油 300mmol/L
其溶剂为纯化水。
5.根据权利要求1-4任一所述的一种测定特异性生长因子的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于：包括以下步骤：
（a）按照下列组分含量配制好试剂：
试剂R1：
4-羟乙基哌嗪丙磺酸 2~100mmol/L
磷酸二氢钠 50~500mmol/L
乙二胺四乙酸二钠 1~20mmol/L
异噻唑啉酮 1~10mmol/L
其溶剂为纯化水
试剂R2：
茚三酮 0.1~4.0mmol/L
异噻唑啉酮 1~20mmol/L
甘油 300~700mmol/L
其溶剂为纯化水；
（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；
（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中的特异性生长因子的浓度。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20161026 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |