CN106072662A - 一种河蚬多肽螯合锌的制备方法 - Google Patents
一种河蚬多肽螯合锌的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106072662A CN106072662A CN201610452125.7A CN201610452125A CN106072662A CN 106072662 A CN106072662 A CN 106072662A CN 201610452125 A CN201610452125 A CN 201610452125A CN 106072662 A CN106072662 A CN 106072662A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- corbicula fluminea
- polypeptide
- zinc
- chelate
- corbicula
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000193879 Corbicula fluminea Species 0.000 title claims abstract description 136
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 117
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 112
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 111
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 58
- 239000011701 zinc Substances 0.000 title claims abstract description 55
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 54
- 239000013522 chelant Substances 0.000 title claims abstract description 48
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 11
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 6
- UOFGSWVZMUXXIY-UHFFFAOYSA-N 1,5-Diphenyl-3-thiocarbazone Chemical compound C=1C=CC=CC=1N=NC(=S)NNC1=CC=CC=C1 UOFGSWVZMUXXIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 claims description 5
- 238000005360 mashing Methods 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 4
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000036571 hydration Effects 0.000 claims description 3
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 241000040710 Chela Species 0.000 claims 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 abstract description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 3
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 abstract description 2
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 abstract description 2
- 235000016804 zinc Nutrition 0.000 description 40
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 6
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 6
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- -1 hydroxyl free radical Chemical class 0.000 description 4
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 3
- 229940091251 zinc supplement Drugs 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000640 Fe alloy Inorganic materials 0.000 description 2
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 2
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 2
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 230000014860 sensory perception of taste Effects 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 2
- ONDPHDOFVYQSGI-UHFFFAOYSA-N zinc nitrate Chemical compound [Zn+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ONDPHDOFVYQSGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 2
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000371997 Eriocheir sinensis Species 0.000 description 1
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010070551 Meat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000269799 Perca fluviatilis Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067171 Regurgitation Diseases 0.000 description 1
- WHMDKBIGKVEYHS-IYEMJOQQSA-L Zinc gluconate Chemical compound [Zn+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O WHMDKBIGKVEYHS-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000003518 caustics Substances 0.000 description 1
- 229940038879 chelated zinc Drugs 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000078 claw Anatomy 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229910001448 ferrous ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004698 iron complex Chemical class 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013324 preserved food Nutrition 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 235000019615 sensations Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229920001187 thermosetting polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 229960000306 zinc gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000011478 zinc gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011670 zinc gluconate Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Abstract
本发明公开了一种螯合率高的河蚬多肽螯合锌的制备方法，包括以下步骤：1)制取河蚬匀浆液；2)添加中性蛋白酶，在恒温水浴中酶解；3)酶解后进行灭酶；4)离心处理去除沉淀，所得上清液为河蚬酶解液；5)将河蚬酶解液真空冷冻干燥制得河蚬多肽粉末；6)配置河蚬多肽溶液；7)添加七水合硫酸锌与河蚬多肽溶液(pH值为5.06～6)进行螯合；8)两段式进行螯合反应；9)螯合完毕后进行离心处理；(10)去除上清液，收集沉淀；11)进行真空冷冻干燥，得到河蚬多肽锌螯合物粉末，本发明方法螯合效果好，具有较高螯合率，螯合率达81％以上，河蚬多肽螯合锌后其抗氧化性显著提高，螯合物与多肽相比具有更好的生物活性。
Description
技术领域
本发明涉及一种河蚬多肽螯合锌的制备方法，属于生物制品技术领域。
背景技术
河蚬(Corbicula fluminea)是一种环境适应能力极强的双壳类软体水生生物，遍及全国各地，分布十分广泛，而且资源丰富，产量极高。河蚬通常栖居在咸淡水、淡水水域内，它们的生长速度很快，繁殖能力很强。河蚬的营养价值高，可供食用，是一种药食两用的食品。
河蚬肉中有充足的营养物质，也含有种类齐全的氨基酸，其脂肪品质高，富含EPA和DHA，也含有钙、钠、钾、镁、铁、锌、铜、锰等多种无机盐。其含有的营养成分大都是人体所需要的营养物质，能较好的补充人体所需要的多种营养素，是一种优质食品。
河蚬养殖既可以在大湖泊中放流式增殖，也适合小型池塘的投食式养殖。河蚬的养殖代价小但其产量较高，而且容易捕捞，最重要的是能在短期内取得明显的经济效益。然而就我国目前对河蚬资源的利用情况而言，虽然已经研制开发出了浓缩蚬汁等一系列的高档调味品，但是大多数的河蚬仍以鲜食为主要食用途径，也有一小部分被制成蚬干、咸蚬、罐头等廉价食品，与一些沿海国家如日本、韩国相比，我国的河蚬深加工技术还很落后，没有体现出其应有的经济价值。日、韩等国每年都从我国购买大量的新鲜河蚬，以解酒、护肝之用。所以河蚬具有一定的开发利用潜在价值。
锌是维持机体正常运作所必需的微量元素之一，在人体的多种生理过程中表现出了不可替代的作用，被人们称作“生命之花”、“智力之源”。锌存在于众多的酶系中，是合成和利用蛋白质、碳水化合物等营养素所必需的物质。锌具有改善味觉，促进生长发育的作用，缺乏时易出现味觉嗅觉差、厌食、生长缓慢与智力发育低于正常等表现。
锌补充剂主要经历以下几个过程：第1代锌制剂是最初的锌补充剂，主要成分是硫酸锌、氯化锌、硝酸锌等无机锌。锌吸收利用率低(仅为7％)。它们易与体内胃酸反应生成氯化锌，这是一种强腐蚀剂，经过强烈地刺激胃肠道之后，容易引起反胃、呕吐等诸多不良反应。现已基本淘汰出市场。第2代锌制剂同属弱酸弱碱盐，主要成分包含葡萄糖酸锌等有机酸锌。锌吸收利用率约14％，与体内胃酸反应仍能生成氯化锌，故而也会引起恶心呕吐等副作用。况且该补充剂锌含量很高，能阻碍钙、铁等其他营养素的吸收。第3代蛋白锌，又称生物锌。蛋白锌吸收率高达90％以上，比普通锌剂高2～3倍，可有效提高对钙、铁等营养元素的吸收率和利用率，而且不会阻碍这些营养素的吸收，从而实现使机体通过饮食来获得所需营养素，这可能是目前国内最好的活性补锌制剂。
螯合是当今世界的一项新兴科技，多肽与锌的螯合是指将锌离子嵌在两个氨基酸分子中间所形成的一种新的结构。两个氨基酸分子分别像螃蟹的两个“蟹钳”，它们挟制着一个锌离子，形成超稳固的螯合状态，然后利用氨基酸通路把锌离子输送到血液中，使机体同时吸收锌和氨基酸，能很大程度上增加其吸收率。
河蚬肉蛋白酶解物中不仅有许多短肽、多肽及氨基酸等营养物质，还能生成少许具备特殊生理功效的生物活性肽，将这些活性肽与无机盐硫酸锌进行螯合，制成的螯合产物，具有深刻的研究意义和广大的市场需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种高螯合率的河蚬多肽螯合锌的制备方法，提高了河蚬多肽螯合锌后的抗氧化性。
为了达到上述技术目的，本发明的技术方案是：
一种河蚬多肽螯合锌的制备方法，其包括以下步骤：
(1)将河蚬肉放入高速组织捣碎机中添加纯净水进行匀浆，即为河蚬匀浆液。
(2)在上述河蚬匀浆液中，以河蚬匀浆液质量为基准，根据酶活添加1.0～2.0％的中性蛋白酶，在恒温水浴中酶解。所述酶解选择在水浴锅内进行，为了提高多肽螯合物的活性，所述酶解在56℃的水浴锅内酶解4h。
(3)酶解后在沸水浴中进行灭酶。作为优选，酶解后在100℃的恒温水浴锅中保温20min进行灭酶。
(4)灭酶后冷却，在高速离心机中离心处理去除沉淀，所得上清液为河蚬酶解液，具体地，以4000r/min的转速进行离心处理30min。
(5)将上述河蚬酶解液真空冷冻干燥10h，制得河蚬多肽粉末。真空冷冻干燥有利于提高多肽和多肽螯合物的活性。
(6)称取河蚬多肽粉末配制成河蚬多肽溶液，所述河蚬多肽溶液浓度优选20mg/mL。
(7)取上述河蚬多肽溶液，按照河蚬多肽与锌离子的质量比为2～2.5:1，优选2.18:1，添加七水合硫酸锌，并保持反应溶液的pH值为5.06～6，优选5.06，采用磁力搅拌器进行螯合。
螯合反应时溶液的pH值选择5.06～6，与河蚬肉匀浆液的自然pH值相当，解决了反应体系呈强酸性时容易破坏河蚬多肽的结构问题，提高螯合率；而且避免了蛋白质达到其等电点(达到其等电点时，溶解度最小，导致体系中多肽浓度降低)，提高螯合率。
河蚬多肽与锌离子的质量比选择2～2.5:1，有利于河蚬多肽锌螯合物合成稳固的环状构造，河蚬多肽锌螯合物合成稳固的环状构造是河蚬多肽锌螯合的关键。在上述质量比下，河蚬多肽锌螯合物合成稳固的环状构造，提高螯合率。
(8)在螯合温度为40～55℃条件下，螯合15～30min，在螯合温度为40～50℃条件下，螯合20～30min。
因为螯合反应是一种放热反应，产生的热量使得体系温度升高，体系温度升高将导致螯合物状态不稳定从而发生分解，降低螯合率。因此，为了提高螯合率，本发明螯合时间分为两段式，确保了螯合的时间，在延长反应时间的基础上，不会使螯合环状结构变得不稳定而导致螯合率降低。
在第一段的螯合时间、温度下，螯合反应持续进行，并产生热量使体系温度升高，此时进入螯合的第二阶段，第二阶段降低螯合温度，但在第一螯合阶段产生热量的基础上，最终的螯合温度并没有达到导致螯合物状态不稳定从而发生分解的温度，从而提高了螯合率。
作为优选，在螯合的第一阶段，螯合温度为52.6℃条件下，螯合30min；在螯合的第二阶段，螯合温度为50℃条件下，螯合30min。
另外，本发明二段式的反应温度，也有利于提高多肽螯合物的活性。
(9)螯合完毕后，在4000r/min进行离心处理20min。
(10)去除上清液，收集沉淀，将沉淀用乙醇洗涤直至双硫腙检测上清液不变色。
(11)进行真空冷冻干燥，得到河蚬多肽锌螯合物粉末。
本发明的酶解温度和螯合温度以及冷冻干燥都有利于提高多肽和多肽螯合物的活性。
本发明方法螯合效果好，具有较高螯合率，螯合率达81％以上，河蚬多肽螯合锌后其抗氧化性相对于螯合前显著提高。而且，随着多肽和多肽锌螯合物质量浓度的增大，螯合物和多肽的抗氧化能力均逐渐增强，且表现为一定的线性关系。同时，多肽锌螯合物清除羟自由基的能力略高于河蚬多肽清除羟自由基的能力。多肽锌螯合物清除DPPH的能力与河蚬多肽相比显著提高。多肽锌螯合物与多肽相比具有更好的生物活性。
附图说明
图1为河蚬多肽的红外光谱。
图2河蚬多肽-Zn2+螯合物的红外光谱。
图3河蚬多肽螯合前后对羟自由基的清除效果。
图4河蚬多肽螯合前后对DPPH的清除效果。
具体实施方式
实施例1
(1)取袋装的冷冻河蚬肉，于常温的流水下解冻。将解冻后的河蚬肉洗去泥沙等杂质，挤干称量。将河蚬肉放入高速组织捣碎机中添加纯净水进行匀浆，即为河蚬匀浆液。
(2)在上述河蚬匀浆液中，以河蚬匀浆液质量为基准，根据酶活添加2.0％的中性蛋白酶，56℃的水浴锅内酶解4h。
(3)酶解后在100℃的恒温水浴锅中保温20min进行灭酶。
(4)灭酶后冷却，在高速离心机中以4000r/min的转速进行离心处理30min去除沉淀，所得上清液为河蚬酶解液。
(5)将上述河蚬酶解液真空冷冻干燥10h，制得河蚬多肽粉末。
(6)称取河蚬多肽粉末配制成河蚬多肽溶液，所述河蚬多肽溶液浓度为20mg/mL。
(7)取上述河蚬多肽溶液，按照河蚬多肽与锌离子的质量比为2.18:1添加七水合硫酸锌，并保持河蚬多肽溶液的pH值为5.06，采用磁力搅拌器进行螯合。
(8)在螯合温度为52.6℃条件下，螯合30min，在螯合温度为50℃条件下，螯合30min。
(9)螯合完毕后，在4000r/min进行离心处理20min。
(10)去除上清液，收集沉淀，将沉淀用乙醇洗涤直至双硫腙检测上清液不变色。
(11)进行真空冷冻干燥，得到河蚬多肽锌螯合物粉末，经测定螯合率为83.39％。
实施例2
(1)取袋装的冷冻河蚬肉，于常温的流水下解冻。将解冻后的河蚬肉洗去泥沙等杂质，挤干称量。将河蚬肉放入高速组织捣碎机中添加纯净水进行匀浆，即为河蚬匀浆液。
(2)在上述河蚬匀浆液中，以河蚬匀浆液质量为基准，根据酶活添加1.0％的中性蛋白酶，56℃的水浴锅内酶解4h。
(3)酶解后在100℃的恒温水浴锅中保温20min进行灭酶。
(4)灭酶后冷却，在高速离心机中以4000r/min的转速进行离心处理30min去除沉淀，所得上清液为河蚬酶解液。
(5)将上述河蚬酶解液真空冷冻干燥10h，制得河蚬多肽粉末。
(6)称取河蚬多肽粉末配制成河蚬多肽溶液，所述河蚬多肽溶液浓度为20mg/mL。
(7)取上述河蚬多肽溶液，按照河蚬多肽与锌离子的质量比为2.5:1添加七水合硫酸锌，并保持河蚬多肽溶液的pH值为6，采用磁力搅拌器进行螯合。
(8)在螯合温度为55℃条件下，螯合25min，在螯合温度为40℃条件下，螯合30min。
(9)螯合完毕后，在4000r/min进行离心处理20min。
(10)去除上清液，收集沉淀，将沉淀用乙醇洗涤直至双硫腙检测上清液不变色。
(11)进行真空冷冻干燥，得到河蚬多肽锌螯合物粉末，经测定螯合率为81.78％。
实施例3
(1)取袋装的冷冻河蚬肉，于常温的流水下解冻。将解冻后的河蚬肉洗去泥沙等杂质，挤干称量。将河蚬肉放入高速组织捣碎机中添加纯净水进行匀浆，即为河蚬匀浆液。
(2)在上述河蚬匀浆液中，以河蚬匀浆液质量为基准，根据酶活添加1.0％的中性蛋白酶，56℃的水浴锅内酶解4h。
(3)酶解后在100℃的恒温水浴锅中保温20min进行灭酶。
(4)灭酶后冷却，在高速离心机中以4000r/min的转速进行离心处理30min去除沉淀，所得上清液为河蚬酶解液。
(5)将上述河蚬酶解液真空冷冻干燥10h，制得河蚬多肽粉末。
(6)称取河蚬多肽粉末配制成河蚬多肽溶液，所述河蚬多肽溶液浓度为20mg/mL。
(7)取上述河蚬多肽溶液，按照河蚬多肽与锌离子的质量比为2:1添加七水合硫酸锌，并保持河蚬多肽溶液的pH值为5.9，采用磁力搅拌器进行螯合。
(8)在螯合温度为40℃条件下，螯合15min，在螯合温度为50℃条件下，螯合30min。
(9)螯合完毕后，在4000r/min进行离心处理20min。
(10)去除上清液，收集沉淀，将沉淀用乙醇洗涤直至双硫腙检测上清液不变色。
(11)进行真空冷冻干燥，得到河蚬多肽锌螯合物粉末，经测定螯合率为81.1％。
河蚬多肽及肽锌螯合物红外光谱比较及抗氧化活性分析：
由图1、图2所示，河蚬多肽与Zn2+螯合后，各主要基团的吸收峰表现出一定程度的改变。河蚬多肽在3419.32cm-1处有一较大的吸收峰，这可能是由N-H键的伸缩振动所产生的，当Zn2+螯合在河蚬多肽上后，该峰移动到3441.13cm-1，波数增加21.81cm-1，是发生螯合的特征峰，可见，多肽中的氨基与Zn2+发生了螯合反应。C＝O键的伸缩振动于1650cm-1处附近有较强吸收峰，多肽与Zn2+螯合后移至1635.95cm-1处，可能是河蚬多肽中的COO－参加了锌离子的配位反应。螯合环的产生致使螯合离子与非螯合离子相比在溶液中拥有更低的解离度，因此螯合物与多肽相比具有更好的生物活性。
将多肽和多肽锌螯合物配成浓度分别为1、2、3、4、5mg/mL的溶液，测定其抗氧化性能：
邻二氮菲是一种常用的氧化还原指示剂，可与二价铁离子发生络合反应，生成的络合物在536nm处呈现最大的吸收峰，其颜色的区别可灵敏地体现出溶液氧化还原程度的不同。由Fenton反应生成的·OH，可使邻二氮菲亚铁络合物溶液被氧化为邻二氮菲高铁络合物溶液，导致其536nm处的最大吸收峰消失。如果此时反应体系中存在能去除·OH的物质，则该物质将全体或大部分的去除由Fenton反应生成的·OH，从而也会减少邻二氮菲亚铁络合物遭受的损害。因此可推算反应体系中羟自由基的清除能力。图3表明，河蚬多肽和多肽锌螯合物都有清除羟自由基的作用。伴随多肽和多肽锌螯合物浓度的增大，羟自由基清除率缓慢升高，这表明体系的抗氧化作用逐步增强。同时，由图3可以看出多肽锌螯合物的羟自由基清除率明显高于未螯合的河蚬多肽，这表明河蚬多肽与锌螯合后有利于提高河蚬多肽的抗氧化能力。
DPPH是一类相对稳固的以氮为中心的自由基，将其溶解于乙醇溶液，乙醇溶液呈现为深紫色，在517nm处有一最大吸收峰。将自由基清除剂加入DPPH·溶液后，DPPH·的单电子经配对，反应溶液的紫色发生变化，渐渐变浅，517nm处的吸光值降低，而且颜色变化的幅度与配电子数成一定的比例关系。因此，可由吸光度的差值来衡量自由基被清除的能力。图4表明，河蚬多肽和多肽锌螯合文物都有清除DPPH自由基的作用。随着浓度的增大，多肽和多肽锌螯合物对DPPH自由基的清除率缓慢升高，这表明体系的抗氧化作用逐步增强。同时，由图4可以看出多肽锌螯合物对DPPH自由基的清除率明显高于未螯合的河蚬多肽，这表明多肽与锌螯合后有利于提高河蚬多肽的抗氧化能力。
上述实施例不以任何方式限制本发明，凡是采用等同替换或等效变换的方式获得的技术方案均落在本发明的保护范围内。
Claims (8)
1.一种河蚬多肽螯合锌的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将河蚬肉放入高速组织捣碎机中添加纯净水进行匀浆，即为河蚬匀浆液；
(2)在上述河蚬匀浆液中，以河蚬匀浆液质量为基准，根据酶活添加1.0～2.0％的中性蛋白酶，在恒温水浴中酶解；
(3)酶解后在沸水浴中进行灭酶；
(4)灭酶后冷却，在高速离心机中离心处理去除沉淀，所得上清液为河蚬酶解液；
(5)将上述河蚬酶解液真空冷冻干燥10h，制得河蚬多肽粉末；
(6)称取河蚬多肽粉末配置河蚬多肽溶液；
(7)取上述河蚬多肽溶液，按照河蚬多肽与锌离子的质量比为2～2.5:1添加七水合硫酸锌，并保持反应溶液的pH值为5.06～6，采用磁力搅拌器进行螯合；
(8)在螯合温度为40～55℃条件下，螯合15～30min，在螯合温度为40～50℃条件下，螯合20～30min；
(9)螯合完毕后进行离心处理；
(10)去除上清液，收集沉淀，将沉淀用乙醇洗涤直至双硫腙检测上清液不变色；
(11)进行真空冷冻干燥，得到河蚬多肽锌螯合物粉末。
2.根据权利要求1所述的一种河蚬多肽螯合锌的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中，在56℃的水浴锅内酶解4h。
3.根据权利要求1所述的一种河蚬多肽螯合锌的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中，酶解后在100℃的恒温水浴锅中保温20min进行灭酶。
4.根据权利要求1所述的一种河蚬多肽螯合锌的制备方法，其特征在于所述步骤(4)中，以4000r/min的转速进行离心处理30min。
5.根据权利要求1所述的一种河蚬多肽螯合锌的制备方法，其特征在于所述步骤(6)中，所述河蚬多肽溶液浓度为20mg/mL。
6.根据权利要求1所述的一种河蚬多肽螯合锌的制备方法，其特征在于所述步骤(7)中，所述螯合反应溶液的pH值为5.06，河蚬多肽与锌离子的质量比为2.18:1。
7.根据权利要求1所述的一种河蚬多肽螯合锌的制备方法，其特征在于所述步骤(8)中，在螯合温度为52.6℃条件下，螯合30min，在螯合温度为50℃条件下，螯合30min。
8.根据权利要求1所述的一种河蚬多肽螯合锌的制备方法，其特征在于所述步骤(9)中，在4000r/min进行离心处理20min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610452125.7A CN106072662B (zh) | 2016-06-21 | 2016-06-21 | 一种河蚬多肽螯合锌的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610452125.7A CN106072662B (zh) | 2016-06-21 | 2016-06-21 | 一种河蚬多肽螯合锌的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106072662A true CN106072662A (zh) | 2016-11-09 |
| CN106072662B CN106072662B (zh) | 2019-11-19 |
Family
ID=57238324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610452125.7A Active CN106072662B (zh) | 2016-06-21 | 2016-06-21 | 一种河蚬多肽螯合锌的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106072662B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111329070A (zh) * | 2020-03-06 | 2020-06-26 | 常熟理工学院 | 河蚬抗氧化肽锌制剂口服液 |
| CN112220049A (zh) * | 2020-10-23 | 2021-01-15 | 黑龙江省野生动物研究所 | 蚯蚓蛋白肽锌螯合物 |
| CN113308508A (zh) * | 2021-05-19 | 2021-08-27 | 宿迁泰进食品有限公司 | 一种河蚬汁抗氧化肽的制备方法 |
| CN114538994A (zh) * | 2022-01-14 | 2022-05-27 | 宁夏天鑫源生物科技有限公司 | 一种枸杞用黄腐酸硒叶面肥水溶液的制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101283805A (zh) * | 2008-05-22 | 2008-10-15 | 广州大学 | 一种锌-多肽配合物及其制备方法和应用 |
| CN105349601A (zh) * | 2015-11-17 | 2016-02-24 | 常熟理工学院 | 一种具有抗菌活性的水蛭多肽锌螯合物的制备方法 |
-
2016
- 2016-06-21 CN CN201610452125.7A patent/CN106072662B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101283805A (zh) * | 2008-05-22 | 2008-10-15 | 广州大学 | 一种锌-多肽配合物及其制备方法和应用 |
| CN105349601A (zh) * | 2015-11-17 | 2016-02-24 | 常熟理工学院 | 一种具有抗菌活性的水蛭多肽锌螯合物的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 刘晶晶，等: "河蚬抗氧化肽抗氧化稳定性研究", 《食品工业科技》 * |
| 刘艳等: "牡蛎肽锌螯合物的制备工艺研究", 《食品工业科技》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111329070A (zh) * | 2020-03-06 | 2020-06-26 | 常熟理工学院 | 河蚬抗氧化肽锌制剂口服液 |
| CN112220049A (zh) * | 2020-10-23 | 2021-01-15 | 黑龙江省野生动物研究所 | 蚯蚓蛋白肽锌螯合物 |
| CN113308508A (zh) * | 2021-05-19 | 2021-08-27 | 宿迁泰进食品有限公司 | 一种河蚬汁抗氧化肽的制备方法 |
| CN114538994A (zh) * | 2022-01-14 | 2022-05-27 | 宁夏天鑫源生物科技有限公司 | 一种枸杞用黄腐酸硒叶面肥水溶液的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106072662B (zh) | 2019-11-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106072662B (zh) | 一种河蚬多肽螯合锌的制备方法 | |
| CN103315126B (zh) | 一种低分子量鱼水解蛋白粉的制备方法 | |
| CN102251006B (zh) | 一种东海乌参胶原蛋白的制造方法 | |
| US4103003A (en) | Composition for improving biologic development | |
| CN105230783A (zh) | 一种鱼骨发酵乳及其制备方法 | |
| CN105725088A (zh) | 高氨基酸及高血红素的鹅血制品及制作方法 | |
| CN106854232B (zh) | 一种骨髓蛋白质的制备方法及其应用 | |
| CN104095242B (zh) | 一种复合锌硒多肽化合物及其制备方法 | |
| CN107935683A (zh) | 一种基于蚯蚓酶解复合氨基酸螯合的液态肥料的生产方法 | |
| CN109776694B (zh) | 褐藻多糖铜、铁、锌三联螯合物的制备方法及其应用 | |
| CN107912768B (zh) | 一种驴胎盘提取物及其制备方法 | |
| CN102406103A (zh) | 虾肉品质改良剂及其制备方法和应用 | |
| KR100601566B1 (ko) | 해조류 가공식품의 제조방법 | |
| CN101711568A (zh) | 海鲜调味品及其制备方法 | |
| CN1597626A (zh) | 鱼蛋白生物肽肥料的制备方法 | |
| CN105077132A (zh) | 一种低值鱼制备海鲜调味料的方法 | |
| CN108103132A (zh) | 一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法 | |
| CN103960646B (zh) | 一种梅子酱及其制作方法 | |
| CN1907136B (zh) | 植物保健乳及其加工方法 | |
| CN103086793A (zh) | 一种氨基酸生物水溶肥料及其制备方法 | |
| CN108065043A (zh) | 一种小分子肽鱼粉及其制备方法和应用 | |
| CN101591692A (zh) | 一种鸭血球活性小肽的生产方法 | |
| CN108208305A (zh) | 利用海参活性多肽制备复配物的方法 | |
| CN107822004A (zh) | 一种提高鱼糜凝胶强度的方法 | |
| CN107232414A (zh) | 一种乳仔猪饲料的复合添加剂和制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210727 Address after: 215555 Changshu Longliqi bio Industrial Park, Suzhou, Jiangsu Patentee after: JIANGSU LONGRICH BIOTECH Co.,Ltd. Address before: 215500 Changshou City South Three Ring Road No. 99, Suzhou, Jiangsu Patentee before: CHANGSHU INSTITUTE OF TECHNOLOGY |