CN108103132A - 一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及水产品加工技术领域，具体涉及一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法。包括下述步骤：（1）预处理：将新鲜鱿鱼经处理后得到肉浆；（2）将肉浆中加入纯净水，每千克肉浆中加入2‑3L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，（3）采用复合蛋白酶进行酶解，（4）超滤分离，将酶灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；（5）Sephadex G‑25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G‑25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到鱿鱼蛋白小肽。该方法对酶解液采用超滤截留后，分子量10000以下的组分收率提高，从而在一定程度上提高了蛋白小肽的产量。

Description

一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法
技术领域
本发明涉及水产品加工技术领域，具体涉及一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法。
背景技术
鱿鱼，也称柔鱼、枪乌贼，是软体动物门头足纲鞘亚纲十腕总目管鱿目开眼亚目的动物。体圆锥形，体色苍白，有淡褐色斑，头大，前方生有触足10条，尾端的肉鳍呈三角形，常成群游弋于深约20米的海洋中。目前市场看到的鱿鱼有两种：一种是躯干部较肥大的鱿鱼，它的名称叫“枪乌贼”；一种是躯干部细长的鱿鱼，它的名称叫“柔鱼”，小的柔鱼俗名叫“小管仔”。鱿鱼是可以食用的，我们经常见到铁板鱿鱼，而且味道鲜美，是一种非常可口的美味。
鱿鱼和墨鱼、章鱼等软体腕足类海产品在营养功用方面基本相同，都是富含蛋白质、钙、磷、铁、钾等，并含有十分丰富的诸如硒、碘、锰、铜等微量元素的食物。
小肽又叫纳米胶原蛋白（Nano Oligopeptide Collagen，简写OCO，即纳米活性寡肽胶原，或简称纳米胶原），也称寡肽、微肽、短肽。小肽一般是指由2－3个氨基酸组成的寡肽，平均分子量约300道尔顿。蛋白质（胶原蛋白）在消化道中的消化终产物往往大部分是小肽而非游离氨基酸，小肽能完整地被吸收并以二、三肽形式进入血液循环，小肽在蛋白质营养中有着重要的作用。
目前通常采用的是酶解的方法制备，在该制备过程中，酶解液中小分子量的多肽含量比例较低，而小分子量的多肽恰恰是抗氧化活性较好的有效成分，这些问题限制了抗氧化活性最好的蛋白小肽的产量。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述问题，提供一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法。
为了达到上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法，包括下述步骤：
（1）预处理：将新鲜鱿鱼经处理后得到肉浆；
（2）将肉浆中加入纯净水，每千克肉浆中加入2-3L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为8-9，超声波处理20-40min，调节至pH为7-7.5；
（3）采用复合蛋白酶进行酶解，并在其中加入维生素C，加入量为肉浆的0.3-0.5%；反应20-30min后，调节pH为8-8.5；
（4）超滤分离，将酶灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到鱿鱼蛋白小肽。
优选的，所述步骤（3）具体为：在步骤（2）的中产产物中加入复合蛋白酶，每克鱿鱼肉的复合蛋白酶加入量为1000-1300U，在58-63℃下反应2.5-3小时。
优选的，所述步骤（4）中将酶解液在110℃下灭活。
优选的，所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶。
优选的，所述步骤（2）中的作用温度50-55℃，功率为200-350W。
本发明与现有技术相比，有益效果是：对酶解液采用超滤截留后，分子量10000以下的组分收率提高，从而在一定程度上提高了蛋白小肽的产量。
附图说明
图1是本发明的酶解液中分子量小于10000组分的收率对比图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步描述说明。
如果无特殊说明，本发明的实施例中所采用的原料均为本领域常用的原料，实施例中所采用的方法，均为本领域的常规方法。
实施例1：
一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法，包括下述步骤：
（1）预处理：将新鲜鱿鱼经处理后得到肉浆；
（2）将肉浆中加入纯净水，每千克肉浆中加入3L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为8，超声波处理20min，作用温度50-55℃，功率为350W，调节至pH为7，
（3）采用复合蛋白酶进行酶解，并在其中加入维生素C，加入量为肉浆的0.5%；反应20min后，调节pH为8.5；复合蛋白酶，每克鱿鱼肉的复合蛋白酶加入量为1000U，在58-63℃下反应3小时，复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶，二者比例为1:1.5；
（4）超滤分离，将酶解液在110℃下灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到鱿鱼蛋白小肽。
实施例2：
一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法，包括下述步骤：
（1）预处理：将新鲜鱿鱼经处理后得到肉浆；
（2）将肉浆中加入纯净水，每千克肉浆中加入2L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为9，超声波处理40min，作用温度50-55℃，功率为200W；调节至pH为7.5；
（3）采用复合蛋白酶进行酶解，并在其中加入维生素C，加入量为肉浆的0.3%；反应30min后，调节pH为8；复合蛋白酶，每克鱿鱼肉的复合蛋白酶加入量为1300U，在58-63℃下反应2.5小时，复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶，二者比例为1:1.5；
（4）超滤分离，将酶解液在110℃下灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到鱿鱼蛋白小肽。
对比例
一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法，包括下述步骤：
（1）预处理：将新鲜鱿鱼经处理后得到肉浆；
（2）将肉浆中加入纯净水，每千克肉浆中加入2-3L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为8-9，超声波处理20-40min；作用温度50-55℃，功率为200-350W；
（3）采用复合蛋白酶进行酶解，复合蛋白酶，每克鱿鱼肉的复合蛋白酶加入量为1300U，在58-63℃下反应2.5-3小时，复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶，二者比例为1:1.5；
（4）超滤分离，将酶解液在110℃下灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到鱿鱼蛋白小肽。
将实施例1和实施例2的产品和对比例中进行对比，结果如下：
图1是实施例1、2和对比里的分子量小于10000的组分的收率；
由图1可知，本发明改进后的方法对于分子量小于10000的组分收率明显提高，从而为提高蛋白小肽的产率提供了基础。

Claims (5)

1.一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
（1）预处理：将新鲜鱿鱼经处理后得到肉浆；
（2）将肉浆中加入纯净水，每千克肉浆中加入2-3L纯净水，继续绞碎并搅拌均匀，调节pH为8-9，超声波处理20-40min，调节至pH为7-7.5；
（3）采用复合蛋白酶进行酶解，并在其中加入维生素C，加入量为肉浆的0.3-0.5%；反应20-30min后，调节pH为8-8.5；
（4）超滤分离，将酶灭活，采用截流分子量为10000的超滤膜进行分离；
（5）Sephadex G-25凝胶柱层析分离，筛选出抗氧化活性最强的峰的产物；
（6）反向高效液相色谱分离纯化，对Sephadex G-25凝胶筛选出的抗氧化活性最强的产物进行反向高效液相色谱分离纯化，得到鱿鱼蛋白小肽。
2.根据权利要求1所述的一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）具体为：在步骤（2）的中产产物中加入复合蛋白酶，每克鱿鱼肉的复合蛋白酶加入量为1000-1300U，在58-63℃下反应2.5-3小时。
3.根据权利要求1所述的一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中将酶解液在110℃下灭活。
4.根据权利要求1所述的一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法，其特征在于，所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶。
5.根据权利要求1所述的一种鱿鱼蛋白小肽的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的作用温度50-55℃，功率为200-350W。
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