CN107319401A - 鳕鱼活性提取物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开鳕鱼活性提取物的制备方法，该制备方法包括：β‑环糊精脱腥处理；胰蛋白酶与中性蛋白酶酶解；活性炭脱苦；凝胶层析分离。有益效果为：本发明鳕鱼活性提取物能够很好地预防和抑制高血压，改善血管的功能，增加内脏器官的供血量和身体机能，且只对高血压患者有降压作用，对正常人血压没有影响，作用时间也较长；产品安全性高，对人体无伤害，效果温和、持久，无副作用，无腥苦味，易于被消费者接受；原料来源于鳕鱼下脚料，解决了鳕鱼下脚料污染环境的问题，提高鳕鱼的附加值，减少环境污染，加工制备方法简单，易于扩大生产。
Description
技术领域
本发明涉及鱼类产品深加工技术领域，尤其是涉及鳕鱼活性提取物的制备方法。
背景技术
鳕鱼，拉丁名为Gadus macrocephalus，在生物学分类中，鳕鱼属于动物界，动物门，辐鳍鱼纲，鳕形目，鳕科，鳕属。鳕鱼属冷水性底层鱼类，为北方沿海出产的海洋经济鱼类之一。世界上不少国家 把鳕鱼作为主要食用鱼类。在北欧，鳕鱼被称为“餐桌上的营养师”，葡萄牙人就更直接把它 称为“液体黄金”，可见它的营养价值之高。鳕鱼的肉质厚实、刺少、味道鲜美，营养专家指 出，鳕鱼每百克肉含蛋白质 16.5 克、脂肪 0.4 克，几乎等于鲨鱼肉。其肉质白细鲜嫩，清口 不腻，具有高营养、低胆固醇、易于被人体吸收等优点，是老少皆宜的营养食品。鳕鱼鱼脂中 含有球蛋白、白蛋白及磷的核蛋白，还含有儿童发育所必需的各种氨基酸，其比值和儿童的 需要量非常相近，又容易被人消化吸收，还含有不饱和脂肪酸和钙、磷、铁、 B 族维生素等。然而，鳕鱼加工后存在大量的边角料碎肉，如果不进行有效处理，不仅会造成环境的污染，而且会浪费大量的资源。如能充分利用这些成分，不仅可提高鳕鱼加工的附加值，同时可减少环境污染，获得良好的经济效益与社会效益。
鱼类活性提取物是从鱼中提取的一类纯天然营养物质，相对分子质量较小，容易被吸收，且吸收效率非常高，一方面提供人体生长发育所需的营养物质，另一方面对人体生命活动发挥着极其重要的作用，作为高档营养食品、特殊医学用途配方食品和保健食品基料，市场前景非常广阔。目前，中国鳕鱼加工水平较低，多以初加工形式输出给日本，下脚料作为加工的副产物大多被废弃，若能从将鳕鱼下脚料提取出活性物质并且分离纯化，不仅能开发新型的具有生物活性的产品，还能提高鳕鱼皮的利用效率。
现有技术如授权公告号为CN 104152518 B的中国发明专利，公开了一种肝病辅食型鳕鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，该制备方法包括以下步骤：鳕鱼皮预处理；酶解反应：加入胰蛋白酶酶解反应；超滤得GM2组分；DEAE-Sepharose FF离子交换层析分离得到GM2-2组分；Sephadex G-25层析分离得GM2-2-3组分，冷冻干燥后得到肝病辅食型胶原蛋白肽。该制备方法简单易行，生产成本低，可以显著提高水产加工副产品的价值，避免浪费的同时还保护了环境，但鳕鱼皮量少，不能大规模生产，且鳕鱼皮胶原蛋白肽产品稍有苦味。
发明内容
本发明的目的在于提供一种降血压效果好，效果温和、持久，安全无毒副作用，无腥苦味，加工制备方法简单的鳕鱼活性提取物的复配物及其制备方法。
本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：鳕鱼活性提取物的制备方法，包括脱腥处理、复合酶的酶解、脱苦、凝胶层析分离，具体操作步骤为：
脱腥处理：将鳕鱼下脚料添加占鱼肉质量1~2% (w/w)的β-环糊精，浸渍80~100 min，除去鳕鱼的腥味，然后用绞肉机搅碎得鳕鱼糜，β-环糊精是环状低聚葡萄糖，存在1个立体的疏水空腔，依据分子大小的匹配，以及范德华、疏水作用力与客体分子形成包合物，从而达到脱腥的目的，且不影响鳕鱼肉的品质；
复合酶的酶解：以鳕鱼糜与水的比例为1:8~10加入去离子水，混匀，调节pH至6~7，按1000~1300U/g 鱼糜的量加入复合蛋白酶，复合蛋白酶为胰蛋白酶与中性蛋白酶，其质量比为2~3:1，在40~50℃下酶解3~5h，灭酶，酶解产物含有一种ACE 抑制肽，其氨基酸序列为HSHACASCYCRCLRCRVLHPGCVNCYRCSR，能够很好地阻止血管紧张素转化酶的催化反应，预防和抑制高血压，同时增加舒缓肽和脑啡肽的水平，大大的降低了患有高血压的风险，改善血管的功能，增加内脏器官的供血量和身体机能，且该肽只对高血压患者有降压作用，对正常人血压没有影响，作用时间也较长；
脱苦：酶解液中加入0.8~1.2wt%的活性炭，在35~45℃下脱苦50~70min，然后在进口温度170~190℃、出口温度60~80℃条件下喷雾干燥，活性炭是一种多孔性含碳物质，具有很强的吸附能力，可根据蛋白水解液中不同多肽成分的疏水性不同，将其中的疏水性高的多肽予以选择性的去除，该脱苦方法操作简单、有效、成本低；
凝胶层析分离：填装经过预处理的凝胶到充满去离子水的层析柱中，用去离子水2~4mL/min 流速平衡2~3倍层析柱的体积，将脱苦后的样品配成15~25g/L的样品溶液，用0.4~0.5μm的滤膜过滤，即得鳕鱼活性提取物，该提取物能够很好地阻止血管紧张素转化酶的催化反应，预防和抑制高血压，安全性高，对人体无伤害，效果温和、持久，无副作用，解决了鳕鱼下脚料污染环境的问题，提高鳕鱼的附加值，减少环境污染。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）本发明鳕鱼活性提取物能够很好地预防和抑制高血压，改善血管的功能，增加内脏器官的供血量和身体机能，且只对高血压患者有降压作用，对正常人血压没有影响，作用时间也较长；2）产品安全性高，对人体无伤害，效果温和、持久，无副作用，无腥苦味，易于被消费者接受；3）原料来源于鳕鱼下脚料，解决了鳕鱼下脚料污染环境的问题，提高鳕鱼的附加值，减少环境污染，加工制备方法简单，易于扩大生产。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
鳕鱼活性提取物的制备方法，包括脱腥处理、复合酶的酶解、脱苦、凝胶层析分离，具体操作步骤为：
1）脱腥处理：将鳕鱼下脚料添加占鱼肉质量1.2% (w/w)的β-环糊精，浸渍85min，除去鳕鱼的腥味，然后用绞肉机搅碎得鳕鱼糜，β-环糊精是环状低聚葡萄糖，存在1个立体的疏水空腔，依据分子大小的匹配，以及范德华、疏水作用力与客体分子形成包合物，从而达到脱腥的目的，且不影响鳕鱼肉的品质；
2）复合酶的酶解：以鳕鱼糜与水的比例为1:8加入去离子水，混匀，调节pH至6.5，按1200U/g 鱼糜的量加入复合蛋白酶，复合蛋白酶为胰蛋白酶与中性蛋白酶，其质量比为2:1，在50℃下酶解4h，灭酶，酶解产物含有一种ACE 抑制肽，其氨基酸序列为HSHACASCYCRCLRCRVLHPGCVNCYRCSR，能够很好地阻止血管紧张素转化酶的催化反应，预防和抑制高血压，同时增加舒缓肽和脑啡肽的水平，大大的降低了患有高血压的风险，改善血管的功能，增加内脏器官的供血量和身体机能，且该肽只对高血压患者有降压作用，对正常人血压没有影响，作用时间也较长；
3）脱苦：酶解液中加入1wt%的活性炭，在40℃下脱苦60min，然后在进口温度180℃、出口温度70℃条件下喷雾干燥，活性炭是一种多孔性含碳物质，具有很强的吸附能力，可根据蛋白水解液中不同多肽成分的疏水性不同，将其中的疏水性高的多肽予以选择性的去除，该脱苦方法操作简单、有效、成本低；
4）凝胶层析分离：填装经过预处理的凝胶到充满去离子水的层析柱中，用去离子水2.5mL/min 流速平衡2倍层析柱的体积，将脱苦后的样品配成18g/L的样品溶液，用0.42μm的滤膜过滤，即得鳕鱼活性提取物，该提取物能够很好地阻止血管紧张素转化酶的催化反应，预防和抑制高血压，安全性高，对人体无伤害，效果温和、持久，无副作用，解决了鳕鱼下脚料污染环境的问题，提高鳕鱼的附加值，减少环境污染。
实施例2：
鳕鱼活性提取物的制备方法，包括脱腥处理、复合酶的酶解、脱苦、凝胶层析分离，具体操作步骤为：
1）脱腥处理：将鳕鱼下脚料添加占鱼肉质量2% (w/w)的β-环糊精，浸渍90 min，除去鳕鱼的腥味，然后用绞肉机搅碎得鳕鱼糜，β-环糊精是环状低聚葡萄糖，存在1个立体的疏水空腔，依据分子大小的匹配，以及范德华、疏水作用力与客体分子形成包合物，从而达到脱腥的目的，且不影响鳕鱼肉的品质；
2）复合酶的酶解：以鳕鱼糜与水的比例为1:9加入去离子水，混匀，调节pH至7，按1300U/g鱼糜的量加入复合蛋白酶，复合蛋白酶为胰蛋白酶与中性蛋白酶，其质量比为2.7:1，在47℃下酶解4.5h，灭酶，酶解产物含有一种ACE 抑制肽，其氨基酸序列为HSHACASCYCRCLRCRVLHPGCVNCYRCSR，能够很好地阻止血管紧张素转化酶的催化反应，预防和抑制高血压，同时增加舒缓肽和脑啡肽的水平，大大的降低了患有高血压的风险，改善血管的功能，增加内脏器官的供血量和身体机能，且该肽只对高血压患者有降压作用，对正常人血压没有影响，作用时间也较长；
3）脱苦：酶解液中加入0.9wt%的活性炭，在42℃下脱苦65min，然后在进口温度175℃、出口温度75℃条件下喷雾干燥，活性炭是一种多孔性含碳物质，具有很强的吸附能力，可根据蛋白水解液中不同多肽成分的疏水性不同，将其中的疏水性高的多肽予以选择性的去除，该脱苦方法操作简单、有效、成本低；
4）凝胶层析分离：填装经过预处理的凝胶到充满去离子水的层析柱中，用去离子水4mL/min流速平衡2倍层析柱的体积，将脱苦后的样品配成25g/L的样品溶液，用0.4~0.5μm的滤膜过滤，即得鳕鱼活性提取物，该提取物能够很好地阻止血管紧张素转化酶的催化反应，预防和抑制高血压，安全性高，对人体无伤害，效果温和、持久，无副作用，解决了鳕鱼下脚料污染环境的问题，提高鳕鱼的附加值，减少环境污染。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 新昌县瑞天食品科技有限公司
<120> 鳕鱼活性提取物的制备方法
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
His Ser His Ala Cys Ala Ser Cys Tyr Cys Arg Cys Leu Arg Cys Arg
1 5 10 15
Val Leu His Pro Gly Cys Val Asn Cys Tyr Arg Cys Ser Arg
20 25 30
Claims (10)
1.鳕鱼活性提取物的制备方法，包括脱腥处理、复合酶的酶解、脱苦、凝胶层析分离，其特征在于：所述的复合酶的酶解步骤为：鳕鱼糜中加入去离子水，混匀，调节pH，加入复合蛋白酶酶解，灭酶。
2.根据权利要求1所述的鳕鱼活性提取物的制备方法，其特征在于：所述的复合酶的酶解步骤中鳕鱼糜与水的比例为1:8~10。
3.根据权利要求1所述的鳕鱼活性提取物的制备方法，其特征在于：所述的复合酶的酶解步骤中酶解产物含有一种ACE抑制肽，其氨基酸序列为HSHACASCYCRCLRCRVLHPGCVNCYRCSR。
4.根据权利要求1所述的鳕鱼活性提取物的制备方法，其特征在于：所述的复合酶的酶解步骤中复合蛋白酶的添加量为1000~1300U/g，复合蛋白酶为胰蛋白酶与中性蛋白酶，其质量比为2~3:1。
5.根据权利要求1所述的鳕鱼活性提取物的制备方法，其特征在于：所述的复合酶的酶解步骤中酶解pH为6~7，温度为40~50℃，时间为3~5h。
6.根据权利要求1所述的鳕鱼活性提取物的制备方法，其特征在于：所述的脱腥处理步骤中β-环糊精的添加量占鱼肉质量的1~2%。
7.根据权利要求1所述的鳕鱼活性提取物的制备方法，其特征在于：所述的脱苦步骤中活性炭的添加量为0.8~1.2wt%，脱苦温度为35~45℃，时间为50~70min。
8.根据权利要求1所述的鳕鱼活性提取物的制备方法，其特征在于：所述的脱苦步骤中喷雾干燥的进口温度为170~190℃，出口温度为60~80℃。
9.根据权利要求1所述的鳕鱼活性提取物的制备方法，其特征在于：所述的凝胶层析分离步骤为：填装经过预处理的凝胶到充满去离子水的层析柱中，用去离子水2~4mL/min流速平衡2~3倍层析柱的体积，将脱苦后的样品配成15~25g/L的溶液，过滤。
10.根据权利要求9所述的鳕鱼活性提取物的制备方法，其特征在于：所述的凝胶层析分离步骤中滤膜为0.4~0.5μm。
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| CN113215213A (zh) * | 2021-04-27 | 2021-08-06 | 北京养淬堂生物科学技术研究院有限公司 | 一种有效提升小分子肽功能活性的制备工艺 |
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